脂联素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞黏附因子mRNA表达的影响

目的 探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVCEs)分泌黏附因子的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、TNF-α刺激组和脂联素干扰组.用PCR方法检测脂联素对人脐静脉内皮细胞VCAM-1,ICAM-1和E-selectin mRNA表达的影响.结果 HUVECs经TNF-α刺激6 h后其VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA表达较对照组相比明显增强(P<0.05);当HUVECs在TNF-α刺激之前首先与不同浓度的脂联素共同孵育一段时间后,其VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA表达与单纯给予TNF-α刺激相比明显减弱(P<0.05),并呈现剂量依赖性.结论 脂联素可以通过抑制血管内皮细胞黏附因子的表达水平来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎,抗动脉粥样硬化的作用.     

高糖环境对培养血管内皮细胞NO、ET-1、MDA和SOD水平的影响

目的通过对不同浓度葡萄糖刺激下人脐静脉内皮细胞条件培养上清中一氧化氮（NO）活力、内皮素（ET）含量、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力的检测，探讨高糖对内皮细胞的影响及与血管收缩因子内皮素、舒张因子一氧化氮、血氧自由基和自由基的清除剂超氧化物歧化酶之间的关系。方法采用硝酸还原酶法测定NO含量，硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量，放射免疫学方法测定ET含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD含量。结果在高糖处理的细胞条件培养上清中SOD、NO活性降低，而MDA及ET含量升高（P〈0．05）。结论高糖可诱导内皮细胞活性氧产生增多，抗氧化酶活性下降，促进内皮细胞释放ET，抑制NO合成。     

脂氧素通过Nrf2信号通路对LPS诱导脐静脉内皮细胞氧化应激的抑制作用

目的研究脂氧素对脂多糖(LPS)刺激的脐静脉内皮细胞引起的氧化应激的抑制作用及其机制。方法以LPS10μg/ml诱导脐静脉内皮细胞氧化应激,以不同浓度脂氧素(lipoxin A4,LXA4)进行干预,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;细胞免疫荧光检测转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)转位变化;RT-PCR检测Nrf2及其下游抗氧化酶mRNA的表达;化学显色法测定脐静脉内皮细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX,GPX)活性。结果细胞内ROS测定显示,脂氧素能够有效地降低脐静脉内皮细胞内由LPS刺激引起的ROS升高;细胞免疫荧光结果显示,LPS组Nrf2主要在胞质中表达。而加入脂氧素干预后胞核可见较强的Nrf2的表达;其中加入200nmol/L脂氧素作用后胞核中的Nrf2的表达明显增强。RT-PCR结果显示,LPS组Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、SOD、GPX mRNA表达水平明显降低,加入脂氧素干预后Nrf2、HO-1、SOD、GPX mRNA表达水平均增加。化学显示法结果显示,LPS组脐静脉内皮细胞的SOD、GSH-PX的活性明显降低,使用100nmol/L和200nmol/L脂氧素干预后均能明显减少细胞的氧化损伤。结论脂氧素通过活化转录因子Nrf2来促进多种抗氧化酶的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤。     

PPAR-γ激活剂对脂联素及脂联素受体的影响

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)是核受体超家族成员之一,通过PPAR-γ激活剂特异激活,促进脂肪细胞分化,增加胰岛素敏感性,在胰岛素抵抗、动脉粥样硬化、糖尿病等代谢性疾病的发生、发展及防治过程中扮演重要角色。脂联素是脂肪细胞分泌的一种细胞因子,通过结合脂联素受体——AdipoR1和AdipoR2发挥抗炎、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化的作用。PPAR-γ激活剂在动物以及人体中可均增加脂联素的水平,并对脂联素复合物、脂联素受体产生影响。通过对PPAR-γ激活剂对脂联素以及脂联素受体可能作用机制的阐述,对于糖尿病和动脉粥样硬化的治疗具有积极的临床意义。     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法体外培养HUVECs,取对数生长期HUVECs细胞接种96孔培养板中,常规培养细胞24 h后,弃掉旧培养基,加入新Ham′s F12k培养基,并分别加入AngⅡ,使其终浓度分别为0μmol.L-1、0.01μmol.L-1、0.1μmol.L-1、1μmol.L-1和10μmol.L-1,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测不同浓度AngⅡ在不同时间点的细胞活性,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果MTT结果:与对照组相比,1μmol.L-1AngⅡ组作用24 h和10μmol.L-1AngⅡ组作用12 h、18 h和24 h的HUVECs的细胞活性均显著下降(P<0.05或P<0.01),并呈现时间依赖性;其余各组差异均无统计学意义(P>0.05)。琼脂糖凝胶电泳结果:10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs呈现明显的"梯状"DNA断裂条带。流式细胞术结果:对照组和10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs细胞凋亡率分别为(1.11±0.54)%和(19.87±3.18)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论10μmol.L-1AngⅡ可通过诱导细胞凋亡引起HUVECs损伤,从而可能在动脉粥样硬化发生发展中发挥作用。     

脂糖舒对糖尿病小鼠组织SOD活性和MDA含量的影响

目的观察脂糖舒对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠组织超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。方法腹腔注射四氧嘧啶制作糖尿病小鼠模型 ,用不同剂量脂糖舒胃饲 ,连续 1 5天。实验分正常组 (未制模鼠 )、生理盐水组 (模型组 )、优降糖组、降糖灵组、消渴丸组和脂糖舒三个等比剂量组 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组 )。测定各组小鼠心、肝、胰和肾组织SOD活性和MDA含量。结果脂糖舒能显著提高糖尿病小鼠心、肝、胰和肾组织SOD活性和降低MDA含量。小剂量脂糖舒 ( 5 g/kg·d- 1)对心、肝和肾组织的作用与实验剂量的优降糖、消渴丸和降糖灵差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,较大剂量 (P≥ 1 0 g/kg·d- 1)时 ,其升高胰SOD活性效力与降糖灵相当 ,强于优降糖、消渴丸和降糖灵。结论脂糖舒有明显抗糖尿病组织过氧化作用     

不同水平糖浓度对人脐静脉内皮细胞SOD、NOS及NO的影响

目的:观察体外培养条件下,不同水平的糖浓度对血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,分对照组、高糖组和糖浓度递增组,使用分光光度比色法检测NOS、NO和SOD的吸光度,计算出活力或含量.结果:与对照组比较,高糖组NOS活力和NO含量增加,SOD活力下降;递增组NOS活力、NO含量增加及SOD活力下降幅度均较高糖组更加明显.结论:递增性高糖较持续的高糖对内皮细胞SOD的抑制作用和NOS、NO的诱导作用明显增强.     

人脐静脉内皮细胞E-选择素分子克隆

为探讨Ｅ－选择素结构与功能的关系。方法：采用人脐静脉内皮细胞,经分离培养及激活后,提取 总 ＢＮＡ,用 Ｍ－ＭＬＶ逆转录酶将其转录成 ｃＤＮＡ第一链,设计引物行ＰＣＲ扩增。结果：其产物经电泳测定为 １．９ ｋｂ的 片段,即Ｅ－选择素ｃＤＮＡ的全长编码区。先将ｃＤＮＡ连接至ＰＵＣ－１８载体并转化至ＪＭ－１０９中,提取质粒ＤＮＡ。再将 Ｅ－选择素酶切为３个片段进行序列测定,显示人脐静脉内皮细胞Ｅ－选择素与文献报道略有差异：即５３位Ｇ→Ａ;６５５ 位Ｔ→Ｃ而导致氨基酸的改变（亮氨酸→脯氨酸）;１９１４－１９１６位缺失ＡＧＣ（丝氨酸）。结论：为进一步研究Ｅ－选择素 结构与功能的关系,制备探针与单克隆抗体打下基础。     

糖尿病视网膜病变患者血清脂联素水平变化及与氧化应激的关系

NDR组血清MDA明显高于对照组(P＜0.01),BDR组血清MDA明显高于NDR组(P＜0.01),PDK组血清MDA明显高于BDR组(P＜0.01).糖尿病视网膜病变患者血清APN与MDA呈明显负相关(γ=-0.568,P＜0.01),与SOD呈明显正相关(γ=0.479,P＜0.01).结论 糖尿病视网膜病变患者血清脂联素水平降低,存在氧化应激,氧化应激与血清脂联素水平降低有关.血清脂联素水平降低,氧化应激在糖尿病视网膜病变的发生发展中发挥重要作用.     

丹参素对D-半乳糖大鼠脑组织SOD活性和MDA的影响

目的探讨丹参素对D-半乳糖大鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响。方法3月龄SPF级sD雄性大鼠60只，按体重随机分成3组，空白对照组、D-半乳糖模型组和丹参素溶液组。灌胃90d后将大鼠全部处死，观察各组大鼠脑组织SOD活性和MDA含量的区别。结果D-半乳糖模型组大鼠脑组织SOD活性明显低于空白对照组（P〈0．05），MDA含量明显高于空白对照组（P〈0．05）；丹参素溶液组大鼠脑组织SOD活性明显高于D-半乳糖模型组（P〈0．05），MDA含量明显低于D-半乳糖模型组（P〈0．05）。结论丹参素溶液明显提高衰老模型大鼠的SOD活性，降低MDA含量，表明丹参素溶液具有抗衰老作用。     

脂联素和骨关节炎的关系

OA是一种受多因素影响的慢性退行性关节疾病,包括年龄、创伤、性别及肥胖等因素,都是影响其发病的危险因素,其中肥胖长期以来被认为是OA发生发展中一个十分重要的危险因素,以往认为这是因肥胖使负重关节,如膝、髋关节承受更多的机械负荷所致。然而同等体重条件下,不同程度肥胖人群其OA发病率不尽相同。同时,相比正常体重人群,肥胖人群的非负重关节,如手关节、肩关节亦具有更高的OA患病率。另外,研究表明运动干预对患有膝关节OA的患者和大鼠均具有保护作用而非破坏作用。近年研究发现,与肥胖相关的代谢因素,尤其是脂肪因子在OA发病中发挥着重要的作用。脂肪因子是一类主要或部分由脂肪组织合成并分泌的,包括瘦素、内脂素、脂联素、抵抗素及网膜素等,通过自分泌、旁分泌及内分泌途径作用于局部乃至全身系统器官,参与炎症调节、糖脂代谢、骨代谢及能量代谢,从而在与肥胖及炎症相关的疾病,如动脉粥样硬化、糖尿病及OA等疾病中起着不可忽视的调节作用。     

脂联素及其受体研究进展

脂联素（adiponectin）是来源于脂肪组织的脂肪细胞因子之一，具有抗炎、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化和增敏胰岛素的作用。脂联素的这些效应必须通过脂联素受体1（AdipoR1）和AdipoR2的介导。近年的研究发现，AdipoR1在骨骼肌中有丰富表达，AdipoR2主要在肝中表达；AdipoR1和AdipoR2也在人和鼠的胰岛β细胞中表达，其水平与肝中类似，比骨骼肌更高；AdipoR1和AdipoR2也可在单核细胞和巨噬细胞中表达。过氧化物酶体增殖物激活受体-α（PPAR-α）、PPAR-γ和肝X受体（LXR）的激动剂以及生长激素（GH）可影响脂联素受体的表达和调节。     

高糖刺激对大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体表达的影响

目的:观察体外高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体基因及其蛋白表达变化。方法:正常大鼠近端肾小管上皮细胞细胞株(NRK-52E)常规培养于含10%灭活新生胎牛血清的低糖DMEM培养液传代培养,待细胞生长至亚融合状态时,更换为无胎牛血清低糖DMEM培养基培养24h使其同步化,将NRK-52E细胞分为5组:A组为正常对照组,低糖DMEM完全培养液(含D-葡萄糖5.5mmol/L);B组为高糖刺激12h组:高糖DMEM完全培养液(含D-葡萄糖25mmol/L)刺激12h;C组为高糖刺激24h组:高糖DMEM完全培养液刺激24h;D组为高糖刺激48h组:高糖DMEM完全培养液刺激48h;E组为高糖刺激72h组:高糖DMEM完全培养液刺激72h。然后分别提取各组总RNA和总蛋白,分别用RT-PCR检测各组目的基因AdipoR 1/2mRNA的表达,Western印迹法检测各组目的蛋白AdipoR 1/2蛋白的表达。结果:脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(AdipoR2)在NRK-52E细胞中均有表达;在高糖刺激情况下,随着刺激时间的延长,目的基因AdipoR 1/2mRNA的表达均有先增高后降低的趋势,在刺激24h时升高到最高点,和对照组相比有统计学意义(P<0.05);与正常对照组相比,高糖刺激后各时间点AdipoR 1/2蛋白的表达有上升的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NRK-52E细胞AdipoR1/2蛋白的表达不受高糖刺激的影响;高糖影响NRK-52E细胞AdipoR1/2mRNA的表达,并随着刺激时间的延长表现出先增高后降低。高糖通过影响脂联素受体基因的表达从而影响脂联素发挥其生物学作用,以致影响大鼠近端肾小管上皮细胞的功能。     

脂联素的临床应用研究进展

脂肪组织已经不是普通意义上的脂肪仓库,而是一个内分泌器官。脂联素作为脂肪组织特异分泌的一种具有重要功能的脂肪细胞因子,在能量代谢和糖脂代谢中发挥重要的调节作用。脂联素具有广泛的生物功能,与肿瘤方面、骨代谢疾病、慢性阻塞性肺疾病、高血压、房颤、急性坏死性胰腺炎、血液病和冠状动脉粥样硬化心脏病等有一定关联。现就其在临床中的应用进行综述。     

C-反应蛋白对人脂肪细胞脂联素分泌和表达的影响

目的 通过体外培养人脂肪细胞,研究C-反应蛋白对脂肪细胞脂联素蛋白分泌及mRNA基因表达的影响.方法 取女性皮下脂肪组织培养脂肪细胞.用0、10、50 μg/mL的C-反应蛋白刺激脂肪细胞6 h,提取细胞RNA用实时荧光定量RT-PCR技术检测脂联素mRNA表达的变化;收集细胞培养液,运用Western-blot技术检...     

Ghrelin对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 观察促生长激素释放肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ) 诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 凋亡的影响.方法 将体外培养的HUVECs随机分为6组:正常对照组、Ghrelin组、AngⅡ组、AngⅡ+Ghrelin不同浓度组(Ghrelin 10-8、10-7、10-6mol/L3个浓度组),每组6个复孔,分别用AngⅡ及Ghrelin干预18 h后,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测HUVECs的活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与正常对照组比较,AngⅡ组HUVECs存活率显著降低(P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01);Ghrelin呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的细胞存活率下降及促细胞凋亡;单用Ghrelin对HUVECs无明显影响.结论 Ghrelin可抑制AngⅡ诱导HUVECs 凋亡作用,对内皮细胞具有保护作用.     

脂联素与冠心病

脂联素(adiponectin,APN)是一种专由脂肪细胞分泌的血浆蛋白,其主要是由内脏脂肪组织合成(如大网膜等),而皮下脂肪组织合成相对较少.人APN由244个氨基酸组成,其分子结构可分成3个部分:氨基末端的分泌信号序列,中间的胶原样结构域及羧基末端的球形结构域.其球形结构域的三维结构与TNF-α极其相似,是其发挥功能的主要结构.     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞衰老的诱导作用及对端粒酶活性的影响*

目的观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endo-thelial cell,HUVECs)衰老的诱导作用及对端粒酶活性的影响。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为对照组和AngⅡ诱导组。β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;用聚合酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)检测端粒酶活性。结果与对照组比较,10-6mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(71.10±6.81)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期多停滞于G0/G1期[(84.11±7.92)%],证实细胞衰老;与对照组相比,10-6mol/L AngⅡ诱导组端粒酶活性明显下降(P<0.01)。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与抑制衰老细胞端粒酶活性有关。     

脂联素对人成骨细胞分化的影响

目的:研究脂联素对成骨细胞的分化作用.方法:免疫印迹检测体外培养成骨细胞脂联素受体(adiponectin receptor,AdipoR)表达.用酶联免疫吸附试验检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;用放射免疫测定法测定骨钙素(osteocalcin,OC);并观测脂联素对矿化的影响.用siRNAs抑制AdipoR1表达,观察脂联素对成骨细胞分化作用的变化.结果:检测到成骨细胞AdipoR1蛋白表达.脂联素可提高ALP活性和促进OC分泌,并促进矿化结节形成,此作用可被AdipoR1的siRNAs转染抑制.脂联素作用于成骨细胞可诱导p38和JNK磷酸化,而p38抑制剂SB203580可减轻其对成骨细胞ALP活性的影响.结论:脂联素通过诱导p38信号转导途径诱导人成骨细胞分化.     

异丙酚对肿瘤坏死因子损伤内皮细胞的保护作用

目的 观察肿瘤坏死因子(TNF)对人脐静脉内皮细胞(HUVIC)的损伤作用及不同浓度异内酚对该损伤的保护作用.方法 将原代培养的内皮细胞分为A(正常培养组)、B(TNF损伤组)两组,根据加入异丙酚浓度的不同再将各组分为4个亚组:A1(不加异丙酚)、A2～4(12.5,25,50 μmol/L异丙酚);B1(12 500 mol/LTNF),B2～4(12.5 μmol/L异丙酚 12 500 mol/LTNF,25 μmol/L异丙酚 12 500 mol/LTNF,50μmol/L异丙酚 12 500 mol/LTNF).测定各组超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)及内上素(ET-1)的含量.结果 TNF可降代内皮细胞SOD的活性(P＜0.01),增加MDA,ET-1的含量(P＜0.01);异丙酚可提高TNF损伤组SOD活性,降低MDA及ET-1的含量;异丙酚对正常培养组SOD活性影响不大,高浓度异丙酚可降低MDA及ET-1的含量.结论 异丙酚对TNF损伤的内皮细胞有保护作用,并且当浓度较大时,效果最佳.