人参总皂甙诱导造血生长因子生成的实验研究

为探讨人参“补气生血”的现代生物学机理，采用造血祖细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测等技术，研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子的诱导生成作用。结果表明，经ＴＳＰＧ诱导分别制备的脾细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和骨髓基质细胞的培养上清对髓系造血祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＭＫ）的体外集落增殖均有显著刺激作用。ＴＳＰＧ也能促进脾细胞、成纤维细胞和巨噬细胞分泌ＩＬ－６；刺激脾细胞产生     

人参总皂甙对小鼠红系造血的影响

人参为中医临床补气要药。人参总皂甙（TSPG）为人参主要有效成份。本应用造血细胞体外培养技术，研究其对小鼠红系血发生的影响，结果提示：TSPG能明显刺激小鼠BFU－E和CFU－E的增殖和分化。根据本实验室工作和其它学的工作，我们推测：人参“补气生血”机理可能系直接和／或间接地通过作用于多能造血干细胞、造血祖细胞、造血微环境和内分泌系统，调控造血活动。     

人参皂甙诱导骨髓巨噬细胞表达造血生长因子的研究

目的 探讨人参皂甙对巨噬细胞表达造血生长因子的影响。方法 采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学与核酸原位杂交等技术，研究人参总皂甙(TSPG)对大鼠骨髓巨噬细胞(rBMMφ)和人单核细胞株(THP-1)表达造血生长因子的影响。结果 经TSPG(10～50mg／L)诱导制备的rBMMφ和THP-1的培养上清液可显著提高大鼠和人的CF/U-Mix、CFU-GM和CFU-E的集落产率；经PSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF、IL-3、IL-6的蛋白水平有不同程度提高；经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM—CSF和IL-3的mRNA水平和强度显著提高。结论 TSPG可通过直接和／或间接途径刺激造血诱导微环境的巨噬细胞，从蛋白水平和基因转录水平两级层次上促进造血调控因子(如EPO、GM-CSF、IL-3和IL-6等)的合成和分泌，进而促进造血干／祖细胞的增殖分化，这或许足人参调节血细胞生成的可能途径之一。     

人参总皂甙对造血生长因子产生的影响

本文应用造血祖细胞体外培养术和白细胞介素（ＩＬ）生物活性检测术，观察经人参总皂甙（ＴＳＰＧ）刺激的小鼠脾细胞、腹腔巨噬细胞和成纤维细胞培养上清液的集落刺激因子（ＣＳＦ）、ＩＬ－２和ＩＬ－６生物活性。结果表明：ＴＳＰＧ刺激组的ＣＳＦ和ＩＬ－６活性均显著高于对照组，ＴＳＰＧ刺激的脾细胞培养上清液的ＩＬ－２活性明显高于对照组，而ＴＳＰＧ刺激的巨噬细胞和成纤维细胞培养上清液的ＩＬ－２活性与对照组无显著性差     

人参总皂甙对造血生长因子活性及其mRNA表达的影响

目的　探讨人参“补气生血”的现代生物学机理。　方法　采用核酸分子原位杂交和造血生长因子生物活性检测等技术,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子活性及其ｍ ＲＮＡ表达的影响。　结果　ＴＳＰＧ能显著促进小鼠骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）、腹腔巨噬细胞（ＰＭ）和脾细胞（ＳＰＣ）的粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白细胞介素－６（ＩＬ－６）ｍ ＲＮＡ的表达,经ＴＳＰＧ诱导制备的ＢＭＳＣ、ＰＭ和ＳＰＣ条件培养上清液含有较高的爆式红系集落刺激活性（ＢＰＡ）、粒－巨噬细胞集落刺激活性（ＧＭ－ＣＳＡ）和巨核细胞集落刺激活性（ＭＫ－ＣＳＡ）。　结论　ＴＳＰＧ促进血细胞生成的机理与其诱导造血生长因子的基因表达有密切关系。     

人参总皂甙对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响,探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达早期造血生长因子的影响及其机理。结果：经TSPG诱导制备的胎儿胸腺细胞条件培养液(HTCM)、脾细胞条件培养液(HSCM)对人髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后胎儿胸腺细胞、脾细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论：TSPG可能诱导人淋巴细胞表达早期造血生长因子,从而促进人早期血细胞增殖分化。     

人参总皂甙诱导L—细胞产生造血调节因子的实验研究

为探讨中药人参的重要有效成分人参总皂甙（TotalSaponinsofPanaxGinseng，TSPG）调节造血的可能机制，在体外祖细胞培养中以TSPG诱导（LCCMTSPG）或未经诱导（LSCM）的L—细胞条件培养液替代祖细胞生长因子，观察集落产率的变化，并与TSPG和LcCM共同作用（LcLM＋TSPG）后的集落产率作比较。结果如下：LcCMTSPG作用后的CFU－GM（位—单系祖细胞）、BFU－E（早期红系祖细胞）、CFU－E（晚期红系祖细胞）的集落产率分别为24．8±9．01、61．73±11．26、145．93±17．22，与LcCM组（51．85±10．08、33．95±825、108．66±13．56）相比分别为下降（P＜0．05）、提高（P＜0．01）、提高（P＜0．01）。提示TSPG可诱导L—细胞产生选择性作用于粒—单系的造血抑制因子和作用于红系的生长因子。LCCM＋TSPG作用后CFU－GM、BFU－E、CFU－E集落产率分别为74．25±10．67、42．5±9．32、98±10．81，与LcCM组相比分别为提高（P＜0．05）、提高（P＜0.05）、无变化，提示TSPG可能与LcCM中促进CFU－E、BFU—E生长的因子协同作用。该研究表明TSPG可经影响基质细胞产生造血调节因子或与造血调节因子共同调节血细胞发生。     

人参总皂甙诱导淋巴细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达GM-CSF的影响，及其与人粒细胞．巨噬细胞系血细胞发生调控的关系。方法：采用造血祖细胞、胸腺细胞和脾细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒细胞，巨噬细胞系造血祖细胞(CFU-GM)增殖；经TSPG诱导制备的胸腺细胞和脾细胞条件培养液富含GM-CSF样活性；TSPG能显著促进胸腺细胞和脾细胞的GM-CSF蛋白和，mRNA表达。结论TSPG可能通过直接和／或间接途径促进淋巴细胞合成和分泌GM-CSF，进而促进CFU-GM的增殖分化。     

人参总皂甙体外诱导CD34+造血干/祖细胞增殖的作用

目的：探讨人参总皂甙(TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34~ 造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖的作用。方法：收集人脐血细胞,采用Stemsep TM干细胞分选系统分离纯化CD34~ HSC/HPC,经不同剂量TSPG加入不同造血生长因子组合进行培养,检测细胞总数、CD34~ 细胞及集落形成细胞总数(CFCs)的变化。结果：TSPG 10、20、50和70μg/ml均可不同程度地提高细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞扩增倍数,TSPG 50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞分别增至(2470．50±79．96)倍、(53．96±4．29)倍和(21．86士3．09)倍。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34~ 造血干/祖细胞体外增殖。     

人参总皂甙对小鼠造血细胞增殖的影响

应用ＭＴＴ比色分析法证实,人参总皂甙在一定浓度内能促进小鼠骨髓造血细胞的增殖。应用流式细胞术的研究提示,人参总皂甙能促进骨髓造血细胞进入细胞增殖周期。造血祖细胞体外培养的研究表明,人参总皂甙能促进小鼠多种造血祖细胞的集落形成。综述上研究结果提示,人参总皂甙可能通过促进髓造血细胞进入细胞增殖周期以及促进造血祖细胞增殖等途径。刺激血细胞的生成,进而发挥其临床“补气生血”作用。     

Reaction of bone marrow hematopoiesis to the toxic effect of paclitaxel

Intraperitoneal injection of paclitaxel (Mitotax) in a single dose of 40 mg/kg was followed by an increase in the number of mitotic granulocytic and erythroid cells, hypoplasia, and pancytopenia of the bone marrow in CBA/CaLac mice. The test preparation decreased the number of hematopoietic precursor cells for erythropoiesis and granulocytopoiesis, but increased the count of polyploid cells and incidence of structural and genomic abnormalities in bone marrow cells. These changes were reversible. __________ Translated from Byulleten’ Eksperimental’noi Biologii i Meditsiny, Vol. 145, No. 2, pp. 173–177, February, 2008     

小鼠同种异基因骨髓腔内骨髓移植促进早期造血功能重建

目的探讨同种异基因骨髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)对小鼠早期造血功能重建的影响。方法将BALB/c小鼠骨髓单个核细胞(BMNCs)分别用胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(IV)两种方法移植入经致死量60Coγ射线辐照后的60只C57BL/6小鼠。受鼠随机分为3组:骨髓腔内注射高和低剂量组(IBM1和IBM2组)、尾静脉注射组(IV组),每组20只。在骨髓移植后1、3、6和9d分别计数各组受鼠胫骨骨髓腔内有核细胞总数,并用流式细胞术检测供体植入水平(供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞数)。结果于移植后6d,IBM1组和IBM2组注射侧胫骨骨髓腔内有核细胞总数、供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞总数均明显高于IV组(P<0.05或P<0.01?。结论IBM-BMT较IV-BMT更能促进同种异基因骨髓移植后的早期造血功能重建。     

血液血管细胞生成素对胎儿骨髓造血和内皮干细胞作用的研究

目的研究人血液血管细胞生成素(hemangiopoietin,HAPO)对胎儿骨髓细胞的作用,探讨其生物学特性。方法采用细胞液体培养、半固体培养、MTT方法、免疫荧光标记流式细胞仪测定、免疫组化、显微镜观察照相等方法。结果在液体培养3周的胎儿骨髓单个核细胞中,HAPO组中出现了大量小而圆的早期造血细胞,其中CD34+细胞含量比对照组高20%,对照组CD34+细胞为1.25×105个,而HAPO组CD34+细胞为3.93×106个。取胎儿骨髓悬浮造血细胞进行半固体培养,对照组不能形成CFU-GEMM,而HAPO组形成CFU-GEMM数达到(11.0±2.6)个;HAPO也协同SCF、IL-3、GM-SCF等生长因子促进集落形成,CFU总数是对照组2.6倍,CFU-GEMM数HAPO组是对照组2.1倍。MTT方法发现,HAPO对胎儿骨髓基质细胞也有促增殖作用,HAPO可使基质细胞增长21%;液体培养的胎儿骨髓基质细胞中,有内皮特异性标志的细胞均增高;在甲基纤维素半固体培养中HAPO使胎儿骨髓内皮细胞的集落数增高,并出现条索状排列的集落,有促进血管形成的趋势。进一步证明HAPO可直接促进CD34+KDR+细胞的增殖。结论HAPO对骨髓造血和血管内皮干细胞均有刺激增殖作用。     

C-kit positive porcine bone marrow progenitor cells identified and enriched using recombinant stem cell factor

Porcine haematological studies have been hampered by the lack of monoclonal antibodies against porcine CD34 or CD117 expressed on haematological progenitors. The present report describes the enumeration, phenotyping and isolation of porcine haematopoietic progenitor cells expressing stem cell factor (SCF, c-kit ligand) receptor (c-kit, CD117). Recombinant porcine (rp) SCF and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) were expressed in the mammalian HEK293 cell-based expression system. Both were biologically active and induced the proliferation of the human erythroleukemic cell line TF-1, as well as of porcine bone marrow haematopoietic cells (BMHC), in a concentration-dependent manner. The effect of rpSCF on BMHC proliferation was synergistic with rpGM-CSF. Furthermore, rpSCF had a synergistic effect on the generation of BMHC-derived dendritic cells (DC) induced by GM-CSF and TNF-. RpSCF was expressed with a 6-histidine epitope, permitting both its purification and immunological detection. Binding studies with BMHC demonstrated ligation of SCF to 4–11% of BMHC. These cells represented the SWC3^low/−SWC8⁻ BMHC subset, with characteristics of immature proliferative progenitor BMHC. In contrast, no expression was noted on the SWC3⁺SWC8⁻ monocytic, the SWC3⁺SWC8⁺ granulocytic or the SWC3⁻SWC8⁺ B cell lineage cells. Using magnetic or fluorescence-activated cell sorting, SCF-ligating BMHC were enriched for pluripotent progenitor cells. In this manner, porcine haematological studies can be pursued in a detailed manner not before possible.     

Effect of serotonin on hematopoietic stem cells in bone marrow

Laboratory for Control of Biosynthesis of Animal Tissues, Institute of Biophysics, Siberian Branch, Academy of Sciences of the USSR, Krasnoyarsk. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR Yu. A. Vladimirov.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 112, No. 11, pp. 488–489, November, 1991.     

犬骨髓内皮祖细胞生物学特性及诱导分化

目的:探讨犬骨髓内皮祖细胞(EPCs)随培养时间延长其生物学特性变化及向内皮细胞(ECs)分化能力。方法:免疫微珠分选方法纯化犬骨髓CD14 细胞,EGM-MV2条件培养基培养,于不同时间检测EPCs的生物学特性;将存活至8周的EPCs以分化培养基(M199 20%胎牛血清 VEGF)诱导培养,检测ECs表面标志的表达。结果:早期EPCs为分选后8代之前的EPC,体积略小,类圆形,60%融合时呈串珠样排列,表达CD133、CD14;晚期EPCs由表达VE-cadherin、KDR、CD14的早期EPCs分化而来,形态为多边形,分泌活动明显加强,表达CD133、VE-cadherin、CD14和KDR;诱导分化细胞呈鹅卵石样外观,表达Ⅷ因子、CD31。结论:犬骨髓EPCs随培养时间呈现不同生物学特性,早期EPCs不稳定,晚期EPCs显示出更稳定的生物学特性,能够分化为ECs,是血管组织工程学研究良好的种子细胞。     

Effect of platelet growth factors on proliferation of guinea pig bone marrow and splenic stromal precursor cells and proliferation of cultural descendants from bone marrow precursor cells

Elimination of platelets from guinea pig splenocyte suspension (laking megakaryocytes) with EDTA considerable reduces the efficiency cloning of splenic stromal precursor cells. It means that platelet-derived growth factors are necessary for stromal precursor cells from different organs (bone marrow, thymus, and spleen). The dependence on the platelet growth factors can vary within a wide range in descendants from cultured bone marrow precursor cells (passaged bone marrow fibroblasts at different stages of differentiation.