参附注射液对体外缺氧复氧心肌细胞的影响

目的 观察参附注射液对体外缺氧复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3蛋白的影响,探讨其对缺氧复氧损伤心肌细胞保护作用机制.方法 在协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室进行以下实验:取出生1～2 d SD乳鼠,采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型.将培养的心肌细胞随机分为四组:(1)正常对照组(Con组)37℃、5%CO<,2>孵箱中持续孵育20 h,未经缺氧复氧处理;(2)缺氧复氧组(H/R组) 给予培养的心肌细胞单纯缺氧4 h,复氧16 h;(3)低剂量参附注射液组(L-SFI组)在缺氧前30min加入终质量浓度为50μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组;(4)高剂量参附注射液组(H-SFI组)在缺氧前30 min加入终质量浓度为100μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组.采用异硫氰酸荧光素(FTI℃)标记的Annexin V(Annexin V-FITC)及碘化丙锭(PI)双染流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用增强化学发光免疫印记技术(ECZ-Western blot)检测心肌细胞Bcl-2,Caspase-3蛋白水平.采用SPSS11.5统计软件进行分析,均数计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.结果 与Con组比较,H/R组细胞凋亡的各个阶段的凋亡率显著增加(P<0.01);与H/R组比较,L-SFI组和H-SFI组凋亡率明显下降(P<0.01).免疫印迹检测结果显示,与Con组比较,H/R组Bcl-2蛋白表达水平显著降低,出现Caspase-3相对分子质量17 000的裂解片断;与H/R组比较,不同浓度的参附注射液组Bcl-2蛋白的表达明显升高,伴随Caspase-3相对分子质量17 000片断的表达减少.结论 参附注射液可以减少缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Caspase-3蛋白的激活,发挥其抗凋亡的作用.     

类泛素蛋白FAT10通过Nrf2/HO-1通路对心肌细胞缺血缺氧修复损伤的保护作用

目的 探讨类泛素蛋白人类白细胞抗原F介导转录因子10(FAT10)在心肌细胞缺氧修复损伤中的作用及机制。方法 采用H9C2大鼠心肌细胞构建缺氧复氧模型,将心肌细胞分为对照组、缺氧4 h组、复氧2 h组及复氧4 h组。采用细胞活力检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性,采用Annexin V-FITC/PI法检测心肌细胞凋亡,采用微量酶标法检测乳酸脱氢酶（LDH）。将阴性对照RNA序列（si-CON）和FAT10沉默序列转入心肌细胞,将细胞分为对照组、缺氧4 h+si-CON组、缺氧4 h+siRNA组、复氧4 h+si-CON组、复氧4 h+siRNA组。Western-blot检测细胞FAT10、Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果 随复氧时间延长,心肌细胞存活率下降,心肌细胞损伤加重,细胞凋亡率升高,在复氧4 h后最低。复氧4 h组细胞存活率低于对照组,而LDH水平及细胞凋亡率高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。FAT10蛋白表达水平：复氧4 h+siRNA组<缺氧4 h+siRNA组<缺氧4 h+si-CON组,差异均有统计学意义（P<0.05）...     

参附注射液对缺氧/复氧损伤心肌核因子-κB及肿瘤坏死因子-α、白介素-6的影响

目的探讨参附注射液对培养乳鼠心肌细胞缺氧,复氧损伤的保护作用及作用机制。方法采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为四组：正常对照组(Ⅰ)、缺氧/复氧损伤模型组(Ⅱ)、缺氧/复氧 低剂量参附注射液组(Ⅲ)、缺氧/复氧 高剂量参附注射液组(Ⅳ)。分别用2,4二硝基苯肼显色法检测上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,酶联免疫吸附试验测定上清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)蛋白含量,Western Blot法测定NF-κB活性变化。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ组缺氧/复氧后上清中LDH活性、TNF-α、IL-6浓度及细胞NF-κB活性显著上升(P＜0．01)。Ⅲ、Ⅳ组分别与Ⅱ组比较,上述指标均明显降低(P＜0．01)。结论参附注射液对心肌细胞缺氧,复氧损伤具有明显的保护作用,其作用途径可能与抑制NF-κB活性降低其调控的促炎细胞因子的表达有关。     

促红细胞生成素对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（EP0）对心肌细胞缺氧／复氧（HR）损伤的保护作用及其机制。方法对乳鼠心肌细胞进行原代分离培养,并缺氧2h,复氧1h,建立HR损伤模型。心肌细胞随机分为四组：正常细胞培养组（空白组）,HR组,HR＋EPO 10U／ml组（EPO组）,HR＋EPO10U／ml＋U0126 10μmol／L组（U0126组）。全自动生化分析仪检测各组细胞培养液LDH活性;MTT法检测心肌细胞活性;TUNEL法：流式细胞仪Annexin—V—FITC法检测凋亡心肌细胞;Westem—blot法测定各组心肌细胞ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白含量。结果EPO显著降低心肌细胞HR损伤后LDH的漏出,增强细胞的活性,减少细胞的凋亡比例,提高ERK。蛋白磷酸化水平;而经过U0126（MAPK的阻滞剂）的处理,心肌细胞LDH外溢量增加,细胞活性显著下降,凋亡细胞的比例明显增加,且ERK1/2蛋白磷酸化水平显著降低。结论EPO对心肌细胞HR损伤有一定的保护作用,其机制与ERK1/2信号通路的激活及抑制心肌细胞凋亡有关。     

参附注射液对离体大鼠缺氧/复氧心肌的保护作用

目的　探讨参附注射液对缺血 /再灌注损伤心肌的保护作用及其机制。方法　采用Langendorlf大鼠离体心脏灌流技术 ,制备心肌缺氧 /复氧损伤模型 ,分别在缺氧前及缺氧后 ,用参附注射液对心肌给予保护 ,利用高效液相色谱仪(HPLC)测定离体大鼠心肌组织中的高能磷酸化合物的含量变化 ,利用H— 6 0 0透射电子显微镜对心肌细胞超微结构进行观察。本实验共分 4组 :正常对照组 ,单纯缺氧 /复氧组 ,参附注射液前、后保护组。结果　①单纯缺氧 /复氧组心肌组织中AMP、ADP、ATP及AN含量均明显低于正常对照组 (P <0 .0 1)。②参附注射液前、后保护组大鼠心肌组织内的AMP、ADP、ATP、AN含量均高于单纯缺氧 /复氧组 (P <0 .0 1) ,且接近正常水平 (P >0 .0 5 )。电镜结果也证明参附注射液对缺氧 /复氧心肌细胞超微结构具有明显的保护作用。结论　参附注射液无论在缺氧前预灌注时及缺氧后再灌注时给予 ,均能通过提高心肌组织中高能磷酸化合物的含量 ,保护心肌细胞超微结构来保护心肌     

色满卡林对培养乳鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用研究

目的观察色满卡林(CRK)对培养的大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为5组:正常对照组:不施加任何处理因素正常培养;H/R组:缺氧2h,复氧30min;CRK各浓度组:分别加入终浓度为2.5、5、10μmol/L的CRK后均即刻缺氧2h、复氧30min。各组细胞采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测培养液中LDH的活性;AV-PI双标记后应用流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率;Western blot方法检测caspase-3蛋白的表达。结果 H/R组培养液中LDH活性、心肌细胞凋亡率较正常对照组明显升高,caspase-3蛋白表达水平上调。CRK各浓度组培养液中LDH活性和心肌细胞凋亡率较H/R组降低,caspase-3蛋白表达水平下调。结论 CRK对缺氧复氧致培养大鼠乳鼠心肌细胞的损伤具有保护作用,其机制可能为CRK维持细胞膜完整性与稳定性,下调caspase-3活性蛋白表达水平,减少心肌细胞凋亡率。     

Fas和FasL在Na+/H+交换器-1抑制诱导缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

目的探讨Fas、FasL在Na^＋／H^＋交换器-1（NHE-1）抑制所诱导的缺氧大鼠肺动脉平滑叽细胞（PASMCs）凋亡中的作用。方法将转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMCs置于缺氧条件下（O2的体积分数低下1％）培养。缺氧培养2、6、12、24和48h后用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况；半定量逆转录-聚合酶链反应（sqRT—PCR）疗法检测细胞内fas和fasL mRNA表达变化；免疫细胞化学法检测细胞内Fas和FasL蛋白表达变化。结果转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMCs在缺氧培养时，其细胞凋亡率随缺氧时间的延长而逐渐升高，但细胞内fas、fasL mRNA及Fas、FasL蛋白表达与对照组细胞比较差异均无显著性。结论Fas／FasL死亡通路可能不参与NHE-1抑制而诱导缺氧大鼠PASMCs凋亡的调控。     

药物预适应对各部位心肌细胞缺氧再复氧的保护作用

目的：分析硝酸酯类药物预适应对不同部位的心肌细胞缺氧再复氧的保护作用。 方法：实验于2003-05／2005-09在泰山医学院中心实验室完成。取新生的Wistar大鼠100只，无菌取出心脏，培养不同部位的心肌细胞（心房、左心室、右心室），分为4组：①空白对照组：不作任何处理。②单纯缺氧／再复氧组：在含有体积分数为0．95的N2、0．03的CO2和0．02的O2混合气体的缺氧培养箱内孵育2h，正常培养箱内孵育1h。③L-精氨酸处理＋缺氧／再复氧组：先用10mmol／L L-精氨酸处理细胞2h，然后进行缺氧再复氧。④缺氧预适应组：先将细胞缺氧15min，再复氧15min，循环4次，然后进行缺氧再复氧。观察各组细胞坏死率、细胞凋亡情况、培养液中乳酸脱氢酶浓度及细胞内游离钙离子浓度等。 结果：①单纯缺氧／再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著高于空白对照组（P〈0．01），不同部位间比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②缺氧预适应组、L-精氨酸处理＋缺氧／再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著低于单纯缺氧／再复氧组（P〈0．05）。 结论：L-精氨酸的预适应同经典的缺氧预适应一样，可以对缺氧再复氧损伤产生明显的保护作用，其可能是通过降低心肌细胞内钙离子的浓度来发挥作用的，而不同部位的心肌细胞产生药物预适应的能力无明显差别。     

缺血和缺氧诱导离体SD乳鼠心肌细胞凋亡发生的实验研究

目的：通过建立一种新的离体SD乳鼠心肌细胞的缺氧模型,探讨心肌细胞缺氧、缺血损伤后的心肌细胞凋亡及其时序分布特点。方法：SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为5组：对照组,缺氧12h组（I12h）、缺氧24h组（I24h）,缺氧48h组（I48h）以及缺氧72h组（172h）。应用TUNEL法染色和透射电镜检测心肌细胞凋亡的改变。结果：I12h组心肌细胞中见少量的TUNEL阳性细胞,随缺氧时间的延长,TUNEL阳性细胞数量逐渐增多。I12h组的心肌细胞凋亡指数（AI）与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）,I48h组、I22h组心肌细胞的AI值分别可达（24．4±2．41）％和（45．4±4．22）％。透射电镜观察各分析时相点心肌细胞,凋亡心肌细胞在I24h组出现,L48h组、I72h组最多见。结论：乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,凋亡程度和心肌细胞缺氧时间有关。细胞凋亡在心肌缺血、缺氧心肌细胞死亡中起重要作用。     

鼠骨髓间充质干细胞对缺氧/复氧心肌细胞的影响

目的:观察在体外培养条件下骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对缺氧/复氧新生大鼠心肌细胞的保护作用.方法:无菌条件下分离、培养、传代Wistar大鼠MSC,细胞融合达90%时更换培养基培养24 h,收集细胞培养液作为MSC条件培养基;原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞,先用5% CO2、10% H2、85% N2混合气造成细胞缺氧24 h,再给予95% O2 和 5% CO2混合气复氧2 h,建立缺氧/复氧模型.MSC 处理组于复氧时加入MSC 条件培养基,正常细胞作为对照组,分别于复氧后用MTT法、乳酸脱氢酶(lactated dehydrogenase)法测定各组心肌细胞活性的改变;RT-PCR观察细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果: 与对照组比较,缺氧/复氧组细胞活力显著降低(P ＜ 0.01).与缺氧/复氧组比较,MSC处理组细胞活力明显增加(P ＜ 0.01).缺氧/复氧组抗凋亡基因Bcl-2的表达明显降低,促凋亡基因Bax的表达明显增加,而MSC条件培养基可以减少Bax基因的表达,提高Bcl-2/Bax值,与缺氧/复氧组比较差异具有显著性(P ＜ 0.01).结论:MSC对体外缺氧-复氧诱导的心肌细胞的凋亡有保护作用.     

川芎嗪对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究川芎嗪对培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 将原代培养的SD乳鼠心肌细胞按随机数字表法分为5组,分别为正常组、H/R损伤模型组和H/R+川芎嗪给药组(川芎嗪浓度分别为50、100、150 μg·mL-1),每组10孔.测定各组心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 与H/R损伤模型组相比,川芎嗪给药组可明显提高SOD活性,降低MDA含量、LDH活性,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 川芎嗪对体外培养心肌细胞模拟H/R损伤模型有明显的保护作用,其保护机制可能与川芎嗪抑制自由基生成或清除自由基有关.     

Hypoxia-reoxygenation-induced apoptosis in cultured adult rat myocytes and the protective effect of platelets and transforming growth factor-beta(1).

The outcome of myocardial ischemia-reperfusion has been partially attributed to the degree of apoptosis in cardiomyocytes. Aggregating platelets by release of transforming growth factor-beta(1) (TGF-beta(1)) protect the isolated heart against ischemia-reperfusion injury and preserve myocardial TGF-beta(1) content. To gain more insight into the modulation of hypoxia-reoxygenation-induced injury (apoptosis and necrosis) to myocytes by TGF-beta(1) and aggregating platelets, cultured adult rat myocytes were exposed for 48 or 72 h to hypoxia alone, or to hypoxia followed by 3 h of reoxygenation. Apoptosis in the cells was determined by in situ terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling staining and DNA fragmentation on gel electrophoresis. Hypoxia alone caused a time-dependent increase in myocyte apoptosis (number of apoptotic cells: 19+/-3% at 48 h and 39+/-5% at 72 h compared with 5+/-1% in control cells, based on a 500-cell count). Three hours of reoxygenation after 48 h of hypoxia further increased the number of apoptotic cells (34+/-8 versus 19+/-3% in hypoxia for 48 h), but reoxygenation after 72 h of hypoxia did not additionally increase the number of apoptotic cells, perhaps because of extensive cell necrosis on prolonged hypoxia. Forty-eight hours of hypoxia followed by 3 h of reoxygenation also resulted in a decrease in Bcl-2 and an increase in Fas protein level. Incubation of myocytes with either recombinant TGF-beta(1) (0.5-5 ng/ml) or aggregated platelet supernatant (from 2-3 x10(7) platelets/ml, containing approximately 0.5 ng/ml of TGF-beta(1)) markedly (P<.01) decreased the number of apoptotic cells after hypoxia-reoxygenation. Incubation with TGF-beta(1) also reduced myocyte necrosis as evident from lactate dehydrogenase release and trypan blue dye exclusion. These data demonstrate that hypoxia-reoxygenation results in apoptosis and necrosis in cultured adult rat myocytes; this can be attenuated by TGF-beta(1). Similarity of data with TGF-beta(1) and aggregated platelet supernatant suggests that platelet-mediated cardioprotection during hypoxia-reoxygenation may relate in part to the release of TGF-beta(1).     

缺氧缺血肺损伤新生鼠肺组织细胞凋亡及Fas／FasL mRNA的表达和意义

目的：探讨细胞凋亡与缺氧缺血肺损伤发生、发展的关系以及Fas／FasL系统表达的意义。方法：通过复制缺氧、缺氧后吸入纯氧大鼠肺损伤模型,采用TUNEL法、原位杂交检测、SqRT-PCR技术观察肺组织细胞凋亡情况、FasmRNA、FasLmRNA表达强度。结果：缺氧组或缺氧吸入纯氧组在缺氧4h后即可见大鼠肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞出现凋亡现象,并随着时间延长,细胞凋亡指数增高(P=0．003,P=0．005),同时FasmRNA、FasLmRNA表达上调,且缺氧后吸入纯氧组大鼠FasmRNA、FasLmRNA表达较单纯缺氧组明显增强(P<0．05)。结论：细胞凋亡与FasmRNA、FasLmRNA表达的上调可能参与缺氧和缺氧后吸入纯氧时导致的肺损伤。     

黄芩素通过抗氧化及调节细胞内钙离子浓度抑制大鼠缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

背景:黄芩素对缺氧复氧损伤的心血管有保护作,但机制至今不清。目的:探讨中药黄芩素对心肌细胞缺氧/复氧损伤导致心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法:体外培养大鼠乳鼠心肌细胞培养。实验分3组:正常对照组为正常培养的心肌细胞未做处理;缺氧/复氧组为应用缺氧/复氧方法诱导心肌细胞凋亡损伤;黄芩素预处理组为经黄芩素预处理30min后经缺氧/复氧诱导的心肌细胞。通过检测培养基上清液中乳酸脱氢酶活力检测细胞损伤程度及黄芩苷保护作用;应用原位末端标记细胞法标记细胞后,流式细胞检测心肌细胞凋亡率;应用免疫印迹方法检测心肌细胞凋亡蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平;应用Fura-2-AM负载心肌细胞,实时检测心肌细胞内Ca2+浓度变化。结果与结论:与正常对照组相比,缺氧/复氧组上清液乳酸脱氢酶活性、心肌细胞凋亡率、Bax蛋白含量、心肌细胞Ca2+浓度均增加(P<0.05),Bcl-2蛋白含量降低(P<0.05)。与缺氧/复氧组相比,黄芩素预处理组乳酸脱氢酶含量、心肌细胞凋亡率、Bax蛋白含量及心肌细胞Ca2+浓度均降低(P<0.05),Bcl-2蛋白含量增加(P<0.05)。证实黄芩素能抑制缺氧/复氧导致的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与抗氧化与调节心肌细胞内钙离子浓度有关     

Hydrogen sulfide protects cardiomyocytes from myocardial ischemia-reperfusion injury by enhancing phosphorylation of apoptosis repressor with caspase recruitment domain

Hydrogen sulfide (H(2)S) displays an anti-apoptotic activity against myocardial ischemia reperfusion (MIR). Apoptosis repressor with caspase recruitment domain (ARC) is constitutively expressed in the heart and inhibits cell apoptosis when it is phosphorylated. Here, we investigated whether H(2)S could inhibit apoptosis by affecting ARC phosphorylation using cultured rat cardiomyocytes and a rat model of MIR. Primary cardiomyocytes were prepared from hearts of newborn rats and were pre-incubated with NaHS, a donor of H(2)S, for 60 min. Cardiomyocytes were subjected to hypoxia for 4 h, followed by reoxygenation for 2 h. The hypoxia and subsequent reoxygenation (H/R) significantly induced cell apoptosis, increased expression levels of Fas and FasL proteins, enhanced release of cytochrome c from mitochondria, and elevated caspase-3 activity, while H/R reduced ARC phosphorylation and increased the activity of calcineurin that dephosphorylates ARC. Pre-incubation with NaHS significantly attenuated the above effects through promoting ARC phosphorylation by reducing calcineurin activity and by increasing the activity of protein kinase casein kinase II (CK2) that phosphorylates ARC. In fact, TBB, a specific inhibitor of CK2, abolished the effects of NaHS. In rats undergoing MIR, NaHS significantly reduced the myocardial infarct size, cell apoptosis, calcineurin activity, and the expression levels of Fas, FasL and cleaved caspase-3 proteins, while NaHS increased ARC phosphorylation. In contrast, DL-propargylglycine, an inhibitor of cystathionine γ-lyase, the main enzyme for H(2)S production in hearts, showed opposite effects to NaHS. The results indicate that H(2)S inhibits apoptosis of cardiomyocytes induced by MIR through enhancing ARC phosphorylation.     

丹参素对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞损伤和内质网应激的改善作用

目的观察丹参素(DLA)通过抑制内质网应激和凋亡对H9C2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后损伤的保护作用。方法将离体培养的H9C2心肌细胞随机分为3组:对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、DLA+H/R组(DLA组)。H/R组先缺氧6h后复氧24h;DLA组于缺氧时给予DLA(10-6M)培养6h,再复氧24h。对照组心肌细胞正常培养至实验结束。ELISA测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和丙二醛(MDA)的含量;Western blot检测细胞中内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Caspase-12、Bax、Bcl-2和SOD的蛋白含量。结果与对照组比较,H/R组细胞LDH、CK-MB和MDA的含量显著升高(P<0.05),GRP78、Caspase-12和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),而Bcl-2和SOD的蛋白含量明显降低(P<0.05);给予DLA可明显改善上述指标的变化。结论H/R可诱导H9C2心肌细胞发生凋亡、氧化应激和内质网应激,引起细胞损伤和凋亡;DLA可以通过抑制凋亡、氧化应激和内质网应激,减少细胞损伤,发挥保护细胞的作用。     

一氧化氮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙的影响

目的研究一氧化氮供体S-亚硝基-已酰青酶胺(SNAP)对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响。方法培养20×5只SD大鼠(1~3)d的心肌细胞,随机分为5组:A组为正常对照组;B组为单纯缺氧/复氧组(A/R缺氧2 h复氧1 h);C组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度分别为0.1 mmol/L,预处理20 min后行A/R;D组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度为1 mmol/L,预处理20 min后行A/R;E组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度为2 mmol/L,预处理20 min后行A/R。与复氧后应用特异性Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,激光共聚焦显微镜检测游离Ca2+浓度。结果与正常组相比,单纯缺氧/复氧组钙浓度明显升高(P<0.01);0.1 mmol/L和1 mmol/L SNAP能明显降低钙超载(与B组相比,P<0.01),2 mmol/L SNAP组加重钙超载(与B组相比,P>0.05)。结论一氧化氮通过降低细胞内钙超载而减轻缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,其作用有浓度依赖性。     

整合素连接激酶对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨高表达整合素连接激酶(ILK)对阿霉素(DOX)诱导心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养乳鼠心肌细胞,分为正常对照组(转染Ad-GFP)、阿霉素损伤组(转染Ad-GFP+DOX)、ILK转染组(转染Ad-ILK+DOX)采用原位末端缺口标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡率;real-time PCR检测心肌细胞Fas、FasL、Bax、Bel-2 mRNA的表达水平。结果与对照组相比,阿霉素损伤组心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Fas、FasL、Bax mRNA的表达水平明显增高(P<0.01),Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0 01);与阿霉素损伤组相比,ILK转染组心肌细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Fas、FasL、Bax mRNA的表达水平明显(均P<0.01),Bcl-2 mRNA的表达明显增加(P<0.05)。结论高表达ILK通过抑制心肌细胞Fas、FasL、Bax mRNA的表达、上调Bcl-2 mRNA的表达而抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。