利用甲基化芯片及转录组测序方法筛选哈萨克族食管癌DNA异常甲基化谱

目的： 筛选新疆哈萨克族食管鳞癌DNA异常甲基化谱,为深入研究食管癌的发生机制提供线索。方法：采用Illumina Human Methylation 450K甲基化芯片,对6例哈萨克族食管癌组织及其癌旁正常组织进行全基因组甲基化检测,筛选DNA异常甲基化基因;利用Hiseq2000测序平台,对2例哈萨克族食管癌组织及其癌旁正常组织进行RNA水平检测,建立mRNA文库,并与DNA 甲基化结果进行关联分析,筛选DNA异常甲基化谱,同时对这些基因进行生物信息学分析。结果：食管癌组织中含高甲基化基因227个,低甲基化基因6个;癌组织mRNA表达量在0.031 2～8 192,癌旁正常组织在0.031 2～1 024。DNA异常甲基化基因与表达谱关联分析,呈负相关关系(即DNA高甲基化、mRNA低表达,或DNA低甲基化、mRNA高表达)的启动子区域基因共20个,包括启动子区域CpG岛高甲基化且表达下调10个位点、10个基因,低甲基化且表达上调11个位点、10个基因。生物信息学分析表明这些基因参与甲酰四氢叶酸分解代谢及调控细胞增殖等生物学过程,涉及一碳代谢通路及诱导细胞凋亡通路等。结论：初步建立了新疆哈萨克族食管癌DNA 异常甲基化谱,为哈萨克族食管癌的发病机制研究提供了新的思路。     

对顺铂耐药胃癌细胞的DNA甲基化表型标志物初筛

目的:寻找和鉴定对顺铂耐药胃癌细胞的异常甲基化基因。方法:我们拟胃癌细胞和耐药细胞为研究对象,采用DNA甲基化芯片,对比分析两种细胞DNA甲基化表达谱差异,结合甲基化特异性PCR（MS-PCR）技术验证获得的异常甲基化基因。结果:利用DNA甲基化谱芯片对胃癌细胞和耐药细胞两个细胞系的基因组DNA甲基化谱进行分析,发现1 095个甲基化差异位点;并筛选出36个高甲基化,14个低甲基化修饰基因。然后通过MS-PCR方法对这50个基因的甲基化修饰在细胞水平上又进行了验证分析,最终筛选出与甲基化谱芯片结果一致的 14种基因,包括11种高甲基化和3种低甲基化修饰基因。结论:胃癌癌细胞发生顺铂耐药时,细胞基因组存在广泛的DNA甲基化修饰改变。     

抑癌基因甲基化在肾细胞癌研究中的新进展

抑癌基因启动子高度甲基化被认为是除突变和缺失以外的抑癌基因功能失活的关键机制,在肿瘤的发生和发展中起重要作用,已成为目前肿瘤病因学基础研究的热点.肾细胞癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,近年来也有许多文献报道了肾细胞癌中抑癌基因的异常甲基化情况.肾细胞癌临床发病隐匿,出现症状时多为晚期,肾细胞癌相关基因异常甲基化检测有望为肾癌的早期无创诊断提供新的途径.针对肾癌对放、化疗效果均不敏感的特点,改变DNA甲基转移酶活性和抑癌基因甲基化状况可作为肾细胞癌辅助治疗的一种新思路.本文对抑癌基因甲基化与肾细胞癌关系的研究进展作一综述,介绍DNA甲基化在肿瘤发生过程中的作用及机理;总结近7年来肾细胞癌中抑癌基因甲基化的研究情况和肾细胞癌独特的甲基化谱,并着重介绍了新近报道的HOXB13,HAI2/SPINT2,CDH1,CTNNG/JUP四个基因启动子异常甲基化与肾细胞癌的关系;阐述DNA甲基化研究对肾细胞癌的临床意义.     

口腔鳞状细胞癌中TSLC1基因启动子甲基化状态检测的临床意义

目的:探讨肺癌抑癌基因1(TSLC1)在口腔鳞状细胞癌组织中基因启动子甲基化状态及其与临床病理参数的联系.方法:应用甲基化特异性PCR检测TSLC1基因启动子在55例口腔鳞状细胞癌组织及10例正常组织中的甲基化状态并结合临床病理资料进行分析.结果:在癌组织中TSLC1基因甲基化阳性率为76.4％(42/55),正常组织未出现TSLC1基因甲基化.TSLC1基因甲基化与口腔鳞状细胞癌临床分期显著相关(P=0.008).结论:TSLC1基因甲基化与口腔鳞状细胞癌临床分期密切相关,可能是参与口腔鳞状细胞癌发展的重要分子事件.     

MT-3基因甲基化对食管鳞状细胞癌发病及预后的影响研究

目的 探讨MT-3基因甲基化对食管鳞状细胞癌发病及预后的影响.方法 选取行食管癌切除手术,术后经病理证实为食管鳞状细胞癌且病理及随访资料完整的110例病例,分别对选取的肿瘤组织、正常组织和转移淋巴结标本蜡块进行常规连续切片、免疫组化染色、提取DNA并扩增DNA样本.应用重亚硫酸钠处理限制性内切图谱分析MT-3甲基化情况,统计分析其与食管鳞状细胞癌患者的分化程度、淋巴结转移数目及生存率的关系.结果 食管鳞状细胞癌组织中的MT-3表达水平高于正常的食管组织,并且在中分化和高分化的食管癌组织中MT-3呈现较明显的高表达,而低分化食管癌组织中MT-3的表达不明显.出现MT-3基因甲基化的患者淋巴结转移数量多于未出现MT-3基因甲基化的患者,并且出现MT-3基因甲基化的患者生存时间和2年生存率均较未出现甲基化的患者差,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 MT-3基因的表达程度和甲基化程度与食管鳞状细胞癌的病情和预后评估密切相关,有望将其作为病情和预后评估的指标之一.     

多个抑癌基因启动子区域CpG 岛异常甲基化与非小细胞肺癌关系及临床意义的研究*

目的:分析多个抑癌基因启动子区域CpG 岛异常甲基化与非小细胞肺癌关系。方法:收集原发性非小细胞肺癌患者肺癌组织与癌旁正常组织,提取DNA并利用甲基化特异PCR（MSP）方法进行抑癌基因甲基化检测,对资料进行Logistic回归分析。结果:对94例肺癌患者资料进行的分析结果表明,91.49% 肺癌患者肺癌组织中抑癌基因发生了甲基化,明显高于相应的癌旁正常组织（40.43%）（P<0.01）。 其中p16INK 4a、DAPK、MGMT、TIMP- 3 和RAR β 基因的甲基化频率分别是41.49% 、50.00% 、17.02% 、24.47% 和68.09% ,比癌旁正常组织高且具有统计学意义。抑癌基因甲基化对肺鳞癌、中央型肺癌和临床Ⅲ期及以上期肺癌的影响相对比较大,并随着甲基化指数的增加而显著增加。吸烟显著增加抑癌基因甲基化,尤其是p16INK 4a和DAPK 基因甲基化,分别是不吸烟者的21.714 倍和15.268 倍（P<0.01）。 而且,吸烟时间或吸烟指数与抑癌基因甲基化之间显示出剂量- 反应关系。结论:吸烟增加抑癌基因甲基化的危险性,肺癌发病与多个抑癌基因甲基化密切相关。      

食管鳞癌中CAV-1基因的表达及甲基化状态

背景与目的：作为重要的表观遗传学现象之一,DNA甲基化对基因表达发挥着重要的调控功能。研究表明肿瘤细胞基因组正常DNA甲基化模式异常改变所导致的肿瘤相关基因功能异常可能参与肿瘤发生与发展。本研究通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中质膜微囊蛋白-1(caveolin-1,CAV-1)基因的表达及甲基化状态,探讨CAV-1基因在食管鳞癌发生及发展中的作用。方法：分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR法、免疫组织化学SP法检测食管癌及相应癌旁正常黏膜组织标本中CAV-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达情况。结果：CAV-1 mRNA在食管癌和癌旁正常组织中的表达量分别为0.86±0.56和0.40±0.36,食管癌组织中CAV-1 mRNA表达量明显高于癌旁正常组织,2者差异有统计学意义(P<0.05)。CAV-1 mRNA表达与患者的淋巴结转移及肿瘤组织学分级有关(P<0.05);食管鳞癌组织中,CAV-1蛋白表达阳性率为66.7%(34/51);显著高于正常食管黏膜组织(15.7%,8/51)(P<0.01)。CAV-1蛋白表达与患者的淋巴结转移有关(P<0.05),而与肿瘤的临床分期和分化程度无关(P>0.05)。51例食管癌组织中1例发生了基因启动子区甲基化,甲基化率为2.0%(1/51);而相应癌旁正常黏膜组织中未发现有该基因的甲基化现象。食管癌组织中该基因的甲基化率与相应癌旁正常组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：CAV-1基因在食管鳞癌组织中mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁正常黏膜组织,该基因的高表达对于肿瘤的发生及淋巴结的转移起到了一定的促进作用;癌及癌旁组织中该基因的表达异常均与该基因的甲基化状态无关。     

应用CpG岛芯片技术分析人肝癌细胞株CpG岛甲基化差异基因

目的 在全基因组水平研究与肝细胞癌发生及转移相关的cpc岛甲基化谱型改变.方法 采用加拿大University Health Network芯片中心的12K人CpG岛芯片,对多系列人肝癌细胞株HepB、HepG2、PLC/RPF/5/RPF/5、SMMC-7721、BEL-7402、MHCC97-H、MHCC97-L、HCCLM3和HCCLM6进行全基因组CpG岛甲基化差异扫描,以Chang's liver细胞株为对照.其中MHCC97系列细胞株(MHCC97-H、HCCLM3、HCCLM6)均以低转移潜能细胞株MHCC97-L作为对照,筛选转移潜能相关差异基因.对数据进行归一化处理及聚类分析,筛选出具有甲基化差异的基因,并随机选取2个基因进行甲基化特异性PCR(MSP)验证.结果 以Cy5/cy3≥2或者≤0.5为差异显著性标准,筛选出9个肝癌细胞株中差异表达趋势一致的CpG岛差异甲摹化位点58个,其上下游肿瘤相关基因66个,包括抑癌基因及其配体基因、凋亡基因及抗凋亡基因、细胞增殖分化基因、细胞周期相关基因、细胞信号通路关键基因等.MHCC97系列高转移潜能细胞株MHCC97-H、HCCLM3和HCCLM6筛选出转移潜能相关CpG岛甲基化差异位点分别为16、13和6个,肿瘤相关基因分别为24、16和6个.MSP验证与芯片结果相符.结论 在肝癌的发生、发展过程中,存在一系列关键基因CpG岛甲基化改变.在肝癌细胞株中,抑癌基因及相关信号通路关键基因可能由于其启动子区CpG岛高甲基化而表达下调,而促癌基因及相关信号通路关键基因可能由于其启动子区CpG岛低甲基化而上调表达.     

抑癌基因促甲状腺激素受体和p16启动子甲基化与甲状腺乳头状癌关系的研究

 目的　研究促甲状腺激素受体（TSHR）和p16抑癌基因在甲状腺乳头状癌的表达及启动子甲基化的情况, 分析两种抑癌基因的甲基化状况与肿瘤发生的关系。方法　对50例甲状腺乳头状癌组织和32例对照组织（20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤）提取RNA后,反转录为cDNA,进行PCR,检测两种抑癌基因mRNA的表达情况,运用甲基化PCR（其中p16使用巢氏甲基化PCR）检测上述组织中两种抑癌基因启动子区甲基化的情况, 对两种抑癌基因甲基化和未甲基化的组织随机进行测序。结果　甲状腺乳头状癌组50例患者中,有34例（68 %）TSHR基因、27例（54 %）的p16 基因启动子发生了甲基化;对照组32例患者中,有7例（21.9 %）TSHR基因、5例（15.6 %）的p16基因启动子发生了甲基化;甲状腺乳头状癌组TSHR基因、p16基因启动子甲基化率均显著高于对照组,差异有统计学意义（χ2=16.61,P < 0.05;χ2＝12.08,P <0.05）。TSHR基因和p16基因mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达量分别为0.41±0.11、0.51±0.17,相应的对照组织的mRNA的表达量分别为0.63±0.08、0.72±0.22,两种基因的mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达明显低于对照组织,差异有统计学意义（t值分别为3.86和3.66,P <0.05）。最终,经DNA 测序证实,两种抑癌基因启动子发生甲基化的其CpG岛的碱基未发生改变,仍为CG;未发生甲基化的,碱基由CG变为TG。结论　两种抑癌基因启动子甲基化与甲状腺乳头状癌的发生和发展均相关。     

食管鳞癌组织DNA甲基化与肿瘤侵袭相关性的探讨

目的:研究食管鳞癌组织中多基因甲基化状态及其与临床病理特征的相关性.方法:提取76例食管鳞癌患者的新鲜冷冻肿瘤组织及癌旁正常组织,用酚氯仿法抽提组织中的DNA,然后用亚硫酸氢盐进行甲基化处理,最后用Real-time MSP技术分别检测了APC、RARβ2、CDH1、p16INK4a和RASSF1A 5个抑癌基因的甲基化状态,结合临床及病理资料用统计软件SPSS 17.0进行统计学分析.结果:食管癌组织中5个基因DNA甲基化率显著高于癌旁正常组织(P＝0.000).肿瘤组织中5个基因DNA甲基化率与临床病理分期、淋巴结转移及神经脉管浸润均显著相关,P＜0.050,且APC、p16INK4a和RASSF1A甲基化与肿瘤T分期显著相关,P＜0.050,RARβ2及CDH1基因甲基化与肿瘤T分期无显著相关性(P值分别为0.320,0.105).这5个抑癌基因甲基化与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤长度、分化程度、吸烟和饮酒等7项指标无显著相关性.经Logistic分析,家族肿瘤史是肿瘤组织APC基因DNA甲基化的独立相关因素[P=0.036,Exp(B)=34.675,95％CI(1.253～959.844)].结论:食管癌患者肿瘤组织APC、RARβ2、CDH1、p16INK4a和RASSF1A均存在高甲基化现象,肿瘤组织中DNA甲基化与肿瘤侵袭程度显著相关;家族肿瘤史是肿瘤组织APC基因DNA甲基化的独立相关因素.     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

Promoter methylation of heat shock protein B2 in human esophageal squamous cell carcinoma

Hypermethylation of gene promoters and the corresponding loss of gene expression are recognized as a hallmark of human cancer, and DNA methylation has emerged as a promising biomarker for the detection of human esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). To identify novel genes methylated in ESCC, we screened 35 candidate genes identified from an oligonucleotide microarray. Among them, the heat shock protein B2 (HSPB2) was methylated in 95.7% (67/70) of primary ESCCs, whereas no methylation was found in normal esophageal tissues from ESCC patients (0%, 0/20). RT-PCR analysis revealed that HSPB2 expression was silenced or weakly expressed in most ESCC cell lines, and re-activated by the demethylating agent 5-aza-2'-deoxy-cytidine. These results indicate that promoter methylation of HSPB2 is one of the causal factors for loss or down-regulation of HSPB2 expression. mRNA expression of HSPB2 in ESCC tissues was significantly down-regulated compared to normal tissues. Our data suggest that promoter methylation of HSPB2 deserves further attention as a novel molecular biomarker in human ESCC.     

p16, MGMT, RARbeta2, CLDN3, CRBP and MT1G gene methylation in esophageal squamous cell carcinoma and its precursor lesions

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is a common cancer with a very poor prognosis. New methods are needed to screen high-risk populations and identify curable tumors and precursor lesions early. Molecular markers may be useful in such screening efforts. This study was designed to determine the prevalence of p16, MGMT, RARbeta2, CLDN3, CRBP and MT1G gene methylation in patients with ESCC to evaluate the variation of gene methylation across a spectrum of preneoplastic lesions, and assess the feasibility of using gene methylation in a primary screening test utilizing frozen esophageal cells collected by balloon cytology samplers. Samples were obtained from high-risk subjects from north central China. These samples included 11 foci of histologically normal mucosa, 8 foci of low-grade squamous dysplasia, 7 foci of high-grade squamous dysplasia, and 13 foci of ESCC from 6 fully embedded resection specimens; endoscopic biopsies from 6 individuals with no histological evidence of disease; and frozen esophageal balloon samples from 12 asymptomatic subjects. Promoter CpG site-specific hypermethylation status was determined for each gene using real-time methylation-specific PCR (qMS-PCR) based on Taqman chemistry. Of the 6 ESCC patients, 5 showed methylation of at least one gene. For most genes, methylation occurred with increasing frequency during neoplastic progression, with the largest increase found between low- and high-grade dysplasia. There was considerable variation in methylation patterns among different foci of the same histological grade, even within individual patients, but 16/20 (80%) of high-grade dysplastic and cancer foci had >or= 2 methylated genes, while 17/19 (89%) of normal and low-grade dysplastic foci had <2 methylated genes. These genes were rarely methylated in histologically normal mucosa from patients with or without ESCC. Gene methylation was common and easily detectable in the frozen esophageal cells collected by balloon cytology samplers. Our data suggest that methylation of p16, MGMT, RARbeta2, CLDN3, CRBP, and MT1G is common in the esophageal mucosa of patients with ESCC in this high-risk population, and tends to increase in prevalence in foci with increasing histological severity of disease. Methylation data from panels of genes may be able to identify patients with high-grade lesions. Balloon cytology may be able to screen the length of the esophagus effectively for a subset of cells with abnormal methylation, and may be useful in a primary screening test for ESCC and its precursor lesions.     

食管鳞癌中GPX3基因的甲基化特征及其临床意义

目的:采用将食管鳞癌组织和癌旁组织相对比,并将食管鳞癌患者的血浆与正常人的血浆相对比的策略,检测GPX3的甲基化状态和频率。结合患者的临床病理特征,分析GPX3基因甲基化在食管鳞癌中的意义。 方法:收集42例食管鳞癌组织标本和相对应的癌旁组织标本,同时收集42例食管鳞癌患者和50例正常人的血浆标本;应用甲基化特异性PCR（MSP）结合琼脂糖凝胶电泳检测GPX3在组织和血浆中的甲基化情况,对比分析。 结果:GPX3在肿瘤组织中的甲基化频率为54.8%,显著高于癌旁组织9.5%（P＜0.001）。GPX3在肿瘤患者血浆中的甲基化频率为40.5%,在正常对照组的血浆中没有检测到甲基化。组织中的甲基化频率在病理分期为T3组和N2组分别显著高于病理分期为T1-T2组和N0-N1组。血浆中的甲基化频率在病理分期T3组明显高于病理分期T1-T2组。结论:GPX3在食管鳞癌组织的甲基化频率高于癌旁组织,在食管鳞癌患者血浆中的甲基化频率显著高于正常人,且临床分期越晚的甲基化频率越高。     

食管鳞癌中DACT2基因表达及甲基化状态研究

[目的]检测食管鳞状细胞癌(ESCC)中DACT2基因表达及启动子区甲基化状态,探讨DACT2基因在食管鳞癌发生发展中的作用.[方法]分别应用逆转录—聚合酶链反应(RTPCR)以及甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理前后的食管癌细胞系(TE1、TE13、T.Tn、Eca109)以及食管鳞癌组织及相应癌旁组织中DACT2 mRNA表达情况及启动子区甲基化状态.[结果]经5-aza-dC处理后4种食管癌细胞系中DACT2基因的表达均增高.4种未经5-aza-dC处理的食管癌细胞系中DACT2基因呈高甲基化状态.应用5-aza-dC处理后,DACT2基因在4种细胞系中均呈非甲基化状态.DACT2基因在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁组织(0.66±0.53 vs 0.95±0.64,t=-2.43,P=0.018),并与淋巴结转移密切相关(t=-2.030,P=0.048).食管鳞癌组织中DACT2基因的启动子区甲基化率显著高于癌旁组织(50.0％ vs 21.1％,x2=9.439,P=0.002),并与TNM分期、组织学分化程度和淋巴结转移密切相关(P均＜0.05).发生DACT2基因甲基化的食管鳞癌组织中DACT2基因的表达量显著低于未发生甲基化的食管鳞癌组织(0.46±0.32 vs 0.78±0.61,t=-2.341,P=0.023).[结论]DA CT2基因在食管鳞癌中的异常低表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一.     

长链非编码RNA ZNF667-AS1在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其DNA甲基化状态的研究

 目的 检测长链非编码RNA ZNF667-AS1在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中的表达及甲基化状态。方法 应用qPCR和MSP法检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-Aza-dC处理前后食管癌细胞系（Kyse170、Eca109、TE1和TE13）、ESCC及相应癌旁正常组织中ZNF667-AS1基因的表达,及其CpG岛三个区域的甲基化状态。结果 在5-Aza-dC处理后的四株细胞系中,ZNF667-AS1基因的表达均增高,且其CpG岛三个区域甲基化程度均降低。ZNF667-AS1基因在ESCC组织中的表达显著低于相应癌旁正常组织,且该基因CpG岛远端启动子区及第一外显子区甲基化率在ESCC与相应癌旁正常组织中的差异均具有统计学意义（均P<0.05）。ESCC组织中CpG岛近端启动子区甲基化率显著高于相应癌旁正常组织,并与组织分化程度、TNM分期密切相关,ZNF667-AS1基因CpG岛近端启动子区发生甲基化的ESCC组织中,低表达例数高于高表达例数,差异具有统计学意义。结论 ZNF667-AS1基因在食管癌细胞系和ESCC组织中的低表达与ESCC的发生发展密切相关,且其近端启动子区的高甲基化状态可能是导 致其表达沉默的机制之一。     

Dysregulated expression of HOX and ParaHOX genes in human esophageal squamous cell carcinoma

Homeobox genes function as master regulators in embryonic morphogenesis. We hypothesized that homeobox genes are essential to maintain tissue- or organ-specificity even in adult body and that the dysregulated expression of homeobox genes results in tumor development and progression. To better understand the roles of homeobox genes in development and progression of esophageal cancer, we analyzed the expression patterns of 39 HOX genes and 4 ParaHOX (CDX1, CDX2, CDX4 and PDX1) genes in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and normal esophageal mucosa tissues. A total of 48 primary ESCC tissues and 7 normal esophageal mucosa tissues were resected from patients who underwent radical surgery without any preoperative chemotherapy or radiotherapy. The expression of HOX and ParaHOX genes were analyzed by a quantitative real-time RT-PCR method and immunohistochemistry. The expression levels of 24 HOX genes, CDX1, CDX2 and PDX1 were significantly higher in ESCC compared to normal mucosa (p<0.01, Mann-Whitney U test). The Immunohistochemical study revealed that HOXA5 and D9 proteins were more cytoplasmic in ESCC than normal mucosa cells. Our data indicate that the disordered expression of HOX and ParaHOX genes are involved in the development of ESCC or its malignancy.     

包含氧化还原酶的WW结构域基因甲基化与食管鳞状细胞癌的关系

目的：研究食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）包含氧化还原酶的WW结构域（WW domain containing oxidoreductase,WWOX）基因启动子甲基化及mRNA的表达与ESCC发生发展的关系。方法：采用改进的甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）和RT-PCR技术检测69例ESCC组织及48例相应癌旁正常组织中WWOX基因的DNA甲基化和mRNA表达情况。结果：ESCC组织中WWOX基因启动子的甲基化发生率为26.1%（18/69）,显著高于癌旁正常组织4.2%（2/48）（P=0.002）;Ⅲ、Ⅳ期食管癌患者中WWOX基因甲基化发生率（43.3%,13/30）显著高于Ⅰ、Ⅱ期（12.8%,5/39）（P=0.004）;低分化癌组的甲基化发生率（33.3%,4/12）高于高分化（20.0%,3/15）和中分化组（26.2%,11/42）,但其差异均无统计学意义（P〉0.05）。ESCC组织中WWOX基因mRNA的相对表达量比相应癌旁正常组织低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。ESCC组织中WWOXmRNA的相对表达量与临床病理因素无明显相关关系（P〉0.05）。结论：WWOX基因启动子甲基化可能与ESCC的形成和进展有关。     

食管鳞状细胞癌中Wnt2、β-catenin、c-myc 和cyclinD1的表达及临床意义

 目的研究Wnt2、β-catenin及其下游的靶基因c-myc、cyclinD1在食管鳞癌中的表达情况,以期探讨其在食管鳞癌发生发展中的作用及意义。方法用免疫组织化学SP法检测40例食管鳞癌患者石蜡包埋的癌组织、癌旁组织及正常组织中Wnt2、β-catenin、c-myc、cyclinD1表达情况,分析Wnt2、β-catenin和c-myc、cyclinD1表达之间的相关性及与临床病理特征的关系。结果Wnt2、β-catenin和c-myc、cyclinD1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中表达阳性率逐渐降低,差异有统计学意义（P<0.01）,β-catenin和c-myc与肿瘤浸润和有无淋巴结转移相关（P<0.05）。结论Wnt2β-catenin Tcf4通路在食管鳞状细胞癌发生发展中起重要作用,该通路有可能成为基因治疗的潜在靶点。