二甲双胍逆转人卵巢癌细胞株对顺铂耐药的实验研究

目的 探讨二甲双胍对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3／DDP的耐药逆转作用及机制。方法 将人卵巢癌细胞株SKOV3细胞设为亲本组,耐顺铂细胞株SKOV3／DDP细胞分为空白对照组、顺铂组、二甲双胍组和联合用药组（顺铂+二甲双胍组）;采用CCK-8法检测不同浓度二甲双胍对SKOV3／DDP细胞的作用,RT-PCR和Western blotting检测各组细胞中内质网应激相关蛋白的表达。结果 不同浓度二甲双胍作用24h后,对SKOV3细胞和SKOV3／DDP细胞均有抑制作用,且呈浓度依赖性（P＜0.05）;当二甲双胍＞5 mmol／L时,其对SKOV3／DDP细胞的增殖抑制率高于SKOV3细胞（P＜0.05）。顺铂对SKOV3细胞和SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为15.25 μg／ml和118.68 μg／ml,SKOV3／DDP的耐药倍数为7.78。联合用药组SKOV3／DDP细胞IC50为 73.45 μg／ml,耐药倍数为4.81。二甲双胍对SKOV3／DDP细胞对顺铂耐药性的逆转倍数为1.62。亲本组中GRP78 mRNA和蛋白的相对表达水平分别为0.38±0.02和0.24±0.04;顺铂组、二甲双胍组和联合用药组的GRP78 mRNA的相对表达水平分别为0.93±0.02、0.68±0.02、0.49±0.07,与空白对照组的0.83±0.04比较,联合用药组明显降低,其次为二甲双胍组,顺铂组升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;GRP78蛋白在各组中表达与其mRNA表达趋势一致,差异均有统计学意义（P＜0.05）。顺铂组、二甲双胍组、联合用药组CHOP蛋白的表达量分别为0.42±0.03、0.69±0.03、0.84±0.01,均高于空白对照组的0.39±0.05,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 二甲双胍对人卵巢癌顺铂耐药细胞的耐药性有调节作用,其可能作用机制为通过降低GRP78表达,提高CHOP蛋白表达的内质网应激途径促进细胞凋亡来降低耐药细胞对顺铂的耐药性。     

雷帕霉素增强卵巢癌细胞系对顺铂敏感性的机制研究

目的：研究雷帕霉素对卵巢癌细胞系顺铂敏感性的影响,以及PI3K/AKT/mTOR信号通路（简称mTOR信号通路）与卵巢癌细胞系顺铂耐药的相关性;初探雷帕霉素增强卵巢癌细胞系顺铂敏感性的分子机制。方法采用CCK-8法检测卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP的耐药指数（resistance index,RI）、细胞增殖抑制率;采用克隆平板实验观察不同用药方案对卵巢癌顺铂非耐药细胞系及SKOV3细胞系两种细胞系克隆形成的影响;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测两种细胞系的蛋白表达差异。结果①SKOV3/DDP细胞系的RI为6.10,属中度耐药。②在SKOV3细胞系中,顺铂联合雷帕霉素作用24 h、48 h后的细胞增殖抑制率明显高于单用顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.01）,两组间的72 h细胞增殖抑制率无明显的统计学意义（P＞0.05）;顺铂联合雷帕霉素作用于SKOV3/DDP细胞系24 h、48 h、72 h后的细胞增殖抑制率均明显高于单用顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.01）。③雷帕霉素联合顺铂作用于SKOV3细胞系4 h后,其克隆形成抑制率明显高于单用顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.01）。④SKOV3/DDP细胞系比SKOV3细胞系p-mTOR、p-AKT的表达升高,而mTOR、AKT的表达则相似。⑤联合用药组比单用顺铂组的PARP断裂增加。⑥雷帕霉素作用SKOV3细胞系24 h ,BCL2表达下调,LC3B由LC3BⅠ向LC3BⅡ转化增加;在SKOV3/DDP细胞系中未发现这两种作用。结论①在体外培养条件下,雷帕霉素能增强SKOV3及SKOV3/DDP细胞系对顺铂的敏感性。②mTOR信号通路激活可能在卵巢癌细胞系顺铂耐药机制中起重要作用。③雷帕霉素增强SKOV3细胞系对顺铂敏感性的分子机制包括：增强顺铂所致的DNA断裂、下调抗凋亡蛋白BCL2及引起细胞自噬;雷帕霉素增强SKOV3/DDP对顺铂敏感性分子机制可能与增强顺铂所致的DNA断裂有关。     

Ca2+在顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞自噬反应中的作用

背景与目的：Ca2+在维持细胞生物活性方面扮演着很重要的角色,其在细胞内的储存、释放和摄取主要受内质网调节,细胞内Ca2+浓度的稳态是维持细胞生物能量代谢、蛋白质折叠和分泌的基础条件。本研究探讨Ca2+在顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激-自噬反应中的作用机制。方法：取人卵巢癌SKOV3细胞系为研究对象,按以下步骤分组：①探讨顺铂诱导内质网应激与自噬反应,用6μg/mL的顺铂处理SKOV3细胞0、6、12和24 h;②了解顺铂和毒胡萝卜内酯(thapsigargin, TG)诱导内质网应激释放的Ca2+与自噬的关系,分别用TG和顺铂处理SKOV3细胞0、9和12 h;③探究Ca2+对自噬的作用机制,分成对照组、顺铂组、TG组、BAPTA-AM组、顺铂联合BAPTA-AM组和TG联合BAPTA-AM组。用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白GRP78和自噬标志性蛋白LC3蛋白的表达水平;用Fluo-4钙离子荧光探针检测细胞质中的Ca2+浓度变化;间接免疫荧光染色后,用共聚焦显微镜检测LC3蛋白的表达情况。结果：SKOV3细胞经6μg/mL顺铂作用6 h时GRP78灰度值(1.393±0.004)与其对照组(0.679±0.011)相比显著提高(t=113.2,P=0.000),在12 h时LC3灰度值(0.072±0.002)与其对照组(0.038±0.000)相比显著提高(t=25.5,P=0.000)。间接免疫荧光结果显示,顺铂(6μg/mL)组和TG(3μmol/L)组随作用时间的延长,细胞内LC3荧光斑点会逐渐增多,并伴随着细胞质Ca2+浓度上升。后经钙离子络合剂BAPTA-AM干预后,细胞内LC3荧光强度进一步增强。Westren blot结果显示,顺铂组LC3灰度值(0.039±0.000)小于顺铂联合BAPTA-AM组(0.071±0.001),TG组(0.035±0.001)小于TG联合BAPTA-AM组(0.065±0.001),差异有统计学意义(P=0.000)。结论：顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激和自噬的发生,并伴随着细胞质内Ca2+浓度的上升。络合细胞质内Ca2+能增强顺铂诱导的自噬反应。     

Neu RNAi对卵巢癌细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用

目的探讨nenRNAi对卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用,寻找下调基因表达并逆转化疗耐药的方法,为卵巢癌的基因治疗探索新途径。方法应用含有u6启动子的pSilencer 1．0-U6表达载体构建neu基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体（pSilencer—neu）,用脂质体方法将pSilencer—neu转染卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP,另设未转染组及转染pSilencer—control组为对照。显微镜下观察转染前后细胞的变化;用RT—PCR及Western Blot检测neu基因mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;加入顺铂后检测RNAi对SKOV3／DDP顺铂药物敏感性的影响。结果neuRNAi可明显下调卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP中neu的基因表达;使其细胞生长受到抑制,生长速度减慢,生长曲线低平;细胞凋亡增加且细胞周期发生变化,G1／G0期细胞增多,S期细胞则减少;顺铂耐药实验显示,转染RNAi的SKOV3／DDP细胞IC50明显下调,细胞凋亡率显著增加。结论应用RNAi可以部分阻抑neu基因在卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP中的表达,使SKOV3／DDP细胞生长减慢、凋亡增加,而且对顺铂的敏感性增强。     

腹腔热化疗中卵巢癌细胞对顺铂敏感性影响的体外研究

目的:探讨腹腔热疗对卵巢癌细胞顺铂敏感株的化疗增敏作用及对顺铂耐药株的逆转耐药作用,并分析其作用机制,为腹腔热疗增加顺铂化疗敏感性及逆转卵巢癌顺铂耐药提供实验依据。方法:MTT 法研究常温及41℃不同作用时间下温热联合顺铂对卵巢癌细胞敏感株SKOV 3、卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV 3/DDP 的生长抑制作用。Western bloting法检测常温及41℃不同作用时间下ERCC1 基因表达水平。结果:41℃下作用60、90min时对SKOV 3 细胞生长的抑制作用大,差异有显著性,P<0.001。热处理对SKOV 3/DDP 细胞生长有抑制作用,不同时间差异有统计学意义。热疗联合顺铂在常温或41℃下,SKOV 3 细胞对顺铂的敏感性不同,差异有统计学意义（P<0.001）。 且41℃作用90min时敏感性最大（P=0.002）,对顺铂的敏感性提高79.885% 。热处理不同时间,SKOV 3/DDP 细胞对顺铂的敏感性增加,差异有显著性,P<0.001。41℃90min SKOV3/DDP 细胞对顺铂的敏感性提高37.129% 。在SKOV 3 细胞中,ERCC1 表达水平较SKOV 3/DDP 细胞降低,F=32.175,P<0.001。热疗联合顺铂与常温下相比,SKOV 3、SKOV 3/DDP 细胞中ERCC1 基因表达水平差异无统计学意义,F=0.962,P=0.443。结论:热疗对卵巢癌细胞SKOV 3 及其顺铂耐药亚株SKOV 3/DDP 细胞有生长抑制作用;热疗联合顺铂可以增加SKOV 3 细胞对顺铂的敏感性,可以部分逆转SKOV 3/DDP细胞对顺铂的耐药性,且最佳作用时间为41℃90min;ERCC1 表达增加与卵巢癌顺铂耐药有关,但热疗联合顺铂对ERCC1 基因表达水平无明显影响,热疗可能通过其他途径增加肿瘤细胞对顺铂的敏感性。      

Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系

目的:探讨Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系。方法:采用免疫组织化学染色检测了50例骨肉瘤患者的肿瘤组织中Stim1的表达。通过用高浓度的顺铂处理人骨肉瘤细胞系U-2 OS来建立耐药性骨肉瘤细胞（U-2 OS/DDP细胞）。通过RT-PCR和蛋白质印迹检测细胞中Stim1、ATF4、CHOP和GRP78的表达。通过转染人Stim1-siRNA或过表达Stim1的pCDNA3-HA质粒来下调或上调骨肉瘤细胞中Stim1的表达,并检测了细胞的钙离子内流情况。通过CCK-8法检测细胞增殖,通过Annexin V-FITC/PI双重染色法检测细胞凋亡。结果:Stim1的阳性表达与骨肉瘤患者的TNM分期和远处转移有关,Stim1阳性患者中,74.19%（23例）为TNMⅢ期,87.10%（27例）发生远处转移。而Stim1阴性患者中,26.31%（5例）为TNMⅢ期,26.31%（5例）发生远处转移。顺铂耐药的骨肉瘤U-2 OS/DDP细胞中的Stim1 mRNA和蛋白表达水平显著高于非耐药U-2 OS细胞（P＜0.05）。下调Stim1表达明显减少了U-2 OS/DDP细胞中的钙离子内流（P＜0.05）;下调Stim1表达抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡（P＜0.05）。此外,下调Stim1进一步提高了内质网应激分子标志物ATF4、CHOP和GRP78的表达（P＜0.05）。相反,上调Stim1的表达则发挥了相反的作用。结论:Stim1在骨肉瘤患者中高表达并与不良预后有关。Stim1的高表达可增加骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。下调Stim1通过抑制钙离子内流并促进内质网应激诱导的细胞凋亡来降低骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。     

CIK细胞联合顺铂对卵巢癌耐药细胞SKOV3/CDDP的杀伤作用

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞联合顺铂对卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/CD-DP小鼠腹腔移植模型的体内外杀伤作用。方法：取正常人的外周血单个核细胞（PBMC）,加入IFN-γ、IL-2、CD3McAb和IL-1,体外诱导成CIK细胞。用MTT法测定CIK细胞、顺铂及两者联合对人卵巢癌细胞株SKOV3/CDDP细胞的杀伤活性。在SCID小鼠腹腔内接种卵巢癌SKOV3/CDDP细胞,观察CIK细胞对荷瘤鼠的体内抑瘤作用,并用RIA法检测各组血清中CA125的含量。结果：顺铂对SKOV3/CDDP细胞的IC50为315.5μg/ml,较其对SKOV3细胞的IC50（85μg/ml）增加了4倍;CIK细胞对SKOV3与SKOV3/CDDP细胞的杀伤活性均在48h最高,且随效靶比的增高而增强,其对SKOV3/CDDP细胞的杀伤活性明显高于SKOV3（P〈0.05）。仅25μg/ml的顺铂即可使效靶比为12.5∶1组中的联合杀伤率比单纯顺铂组增加5.8倍,比单纯加CIK（相同效靶比）细胞杀伤率增加2.3倍,且随效靶细胞比值和顺铂浓度的升高呈依赖性增加。与对照组相比,CIK组与CIK＋顺铂组均能显著抑制癌性结节的生长,抑瘤率达100%,且3组SCID鼠血中CA125值有显著性差异（P〈0.05）。结论：正常人CIK细胞联合顺铂对清除晚期卵巢癌表达耐药蛋白的腹腔种植转移病灶可能会有较好的效果,并有希望成为前景良好的综合治疗方案。     

LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达及与顺铂化疗敏感性的关系

目的:观察长链非编码RNA（LncRNA） ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达水平,探究其与顺铂化疗敏感性的关系。方法:选取2017年01月至2019年01月本院收治的64例卵巢癌患者,卵巢摘除手术中采集卵巢癌组织,另收集因卵巢囊肿需作手术切除但已证实无瘤细胞的正常卵巢组织标本,采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测卵巢癌及正常卵巢组织、顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、卵巢癌细胞（OVCAR5、OVCAR8、SKOV3）及永生化卵巢上皮细胞（IOSE29、IOSE80）中LncRNA ITGA9-AS1表达水平。采用慢病毒介导LncRNA ITGA9-AS1转染并筛选稳定细胞株,MTT法检测过表达LncRNA ITGA9-AS1对SKOV3、SKOV3/DDP增殖的影响及对不同浓度（0、1、2、4、8、16 mg/L）DDP的敏感性。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中LncRNA ITGA9-AS1表达水平降低（P＜0.05）。与IOSE29、IOSE80细胞比较,OVCAR5、OVCAR8、SKOV3及SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）;与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）。与空白对照组及慢病毒对照组比较,慢病毒过表达组SKOV3、SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平升高（P＜0.05）,增殖率降低（P＜0.05）,细胞存活率呈DDP浓度依赖降低（P＜0.05）。结论:LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌组织及癌细胞中低表达,过表达LncRNA ITGA9-AS1可增加卵巢癌SKOV3及卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的顺铂化疗敏感性。     

RIP1蛋白在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的:探讨RIP1对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响。方法:通过实时定量PCR法检测RIP1在卵巢癌组织和癌旁组织中的表达;免疫组化方法分析卵巢癌组织和癌旁组织中RIP1蛋白的表达;实时定量PCR法以及Western blot法检测卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中RIP1的表达;通过在SKOV3卵巢癌细胞中敲除RIP1蛋白及在A2780卵巢癌细胞中过表达RIP1蛋白,采用MTT法检测其增殖能力的改变,并联合克隆形成法考察细胞对顺铂敏感性的变化。结果:相比于癌旁组织以及卵巢上皮细胞,RIP1在人卵巢癌组织和卵巢癌细胞中表达有不同程度升高,其中在SKOV3细胞中升高最为显著（P＜0.01）,在A2780细胞中不显著（P＞0.05）;在SKOV3细胞中敲除RIP1,96 h后细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）;同时,在A2780细胞株中过表达RIP1,72 h后细胞增殖能力明显升高（P＜0.05）。RIP1敲除后,顺铂对SKOV3细胞的杀伤作用明显升高（P＜0.05）,同时顺铂的IC50降低;RIP1过表达后,顺铂对A2780细胞的杀伤作用明显降低（P＜0.05）,同时顺铂的IC50升高。结论:RIP1作为一种癌基因,能够促进肿瘤细胞的增殖,并降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

GDF11对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖能力及顺铂敏感度的影响

目的 研究GDF11（growth differentiation factor 11）过表达对肝细胞癌SMMC-7721细胞体外增殖能力及顺铂敏感度的影响。方法 前期成功构建GDF11过表达的SMMC-7721细胞,同时以空载体感染细胞组及野生型细胞组为对照。CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。CCK-8法检测GDF11过表达对细胞顺铂药物敏感度的影响。结果 Western blot结果验证,已成功构建GDF11过表达的SMMC-7721细胞。GDF11过表达可明显抑制SMMC-7721细胞的体外增殖能力,在96、120及144 h时抑制作用最显著（P<0.05）,且实验组细胞较对照组克隆形成能力明显减弱（P<0.05）。GDF11过表达能够增强肝细胞癌SMMC-7721细胞对顺铂的敏感度,顺铂浓度取20 μg/ml及40 μg/ml时,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 肝细胞癌SMMC-7721细胞过表达GDF11蛋白后,其体外增殖及克隆形成能力明显降低,对化疗药物顺铂的敏感度增强。     

BAG-1蛋白在衣霉素诱导人肺癌A549细胞内质网应激及提高顺铂敏感性中的作用

目的:体外观察低剂量衣霉素对人肺腺癌A549细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的诱导作用,以及此过程中Bcl-2结合抗凋亡基因1(Bcl-2 associated athanogene 1,BAG-1)表达的变化;同时,观察衣霉素作用后A549细胞对顺铂敏感性的变化以及此过程中BAG-1蛋白表达的变化.方法:采用蛋白质印迹法检测低剂量衣霉素作用A549细胞后ERS标志性蛋白GRP78及抗凋亡蛋白BAG-1的表达变化;MTT法测定衣霉素作用后顺铂对A549细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)变化;FCM法检测低剂量衣霉素作用后A549细胞对顺铂的敏感性变化;蛋白质印迹法检测衣霉素作用前后顺铂对A549细胞中BAG-1和procaspase-12蛋白表达的影响.结果:1.25 μg/mL衣霉素作用A549细胞8h后,能诱导细胞发生ERS,即ERS标志性蛋白GRP78表达上调,同时BAG-1蛋白表达也明显上调(P均＜0.05).衣霉素诱导A549细胞ERS能增加细胞对顺铂的敏感性(P＜0.05).细胞发生ERS前,1.25、2.5和5 μg/mL 3个质量浓度的顺铂均上调BAG-1蛋白的表达(P均＜ 0.05),但2.5和5μg/mL顺铂诱导BAG -1蛋白上调量均小于1.25 μg/mL组(P＜0.05);细胞发生ERS后,与单纯ERS未给予顺铂干预的细胞组比,1.25、2.5和5μg/mL 3个质量浓度的顺铂均下调BAG -1蛋白的表达(P均＜0.05),且下调量与顺铂浓度呈正比.2.5和5μg/mL顺铂能通过ERS途径诱导细胞发生凋亡,在此过程中BAG-1和procaspase-12蛋白表达均下调(P均＜0.05).结论:BAG-1蛋白可能是ERS和顺铂诱导肺癌细胞凋亡的一个重要调控因子之一,且ERS凋亡途径可能是顺铂诱导肺癌细胞凋亡的重要途径之一.     

紫杉醇和顺铂对EGFR野生型与突变型肺腺癌细胞的杀伤作用比较及其分子机制

目的 探讨化疗相关基因表达水平与EGFR突变状态的关系及其对化疗疗效的影响。方法 采用MTT法分别检测紫杉醇、顺铂对A549与HCC827细胞的24 h半数抑制浓度（IC50）;比较紫杉醇、顺铂单独及联合作用于A549与HCC827细胞杀伤作用的差异;荧光定量PCR法检测紫杉醇、顺铂作用前后A549与HCC827细胞化疗相关基因（BRCA1、ERCC1、TUBB3）的表达水平。结果 紫杉醇对A549与HCC827细胞24 h的IC50分别为100和70 μg/ml,顺铂对两种细胞的IC50分别为40和50 μg/ml。单独作用时,紫杉醇对HCC827细胞的杀伤作用明显高于A549细胞（P<0.05）;顺铂对A549细胞的杀伤作用明显高于HCC827细胞（P<0.05）;紫杉醇和顺铂联合作用对A549和HCC827细胞的杀伤作用差异无统计学意义（P>0.05）,且均表现为单纯相加作用（Q=1.03, 1.06）。HCC827细胞中BRCA1基因表达明显高于A549细胞（P<0.05）;顺铂作用于A549细胞后,其ERCC1基因表达明显升高（P<0.05）。结论 紫杉醇、顺铂单独作用对EGFR野生型与突变型肺腺癌细胞杀伤作用有明显差异,而两者联合无明显差异,可能与BRCA1基因的表达有关;EGFR野生型比突变型肺腺癌细胞更容易对顺铂出现耐药。     

核苷酸切除修复交叉互补基因1与卵巢癌顺铂耐药的关系

目的 探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)与卵巢癌顺铂(DDP)耐药的关系.方法 分别应用免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测58例卵巢癌组织和ES-2、SKOV3、COC1、COC1/DDP 4株卵巢癌细胞系中ERCC1基因的表达,分析该基因与DDP化疗耐药的关系,并观察应用RNA干扰技术干扰了ERCC1基因后卵巢癌细胞对DDP敏感性的变化.结果 58例卵巢癌组织中,ERCC1表达阳性者22例,阳性率为37.9%.ERCC1的表达与DDP化疗敏感性有关(P＜0.05),DDP耐药者ERCC1表达的阳性率(57.89%)显著高于敏感者(28.21%,P=0.029).ES-2、SKOV3、COC1、COC1/DDP 4株卵巢癌细胞ERCC1基因的表达与DDP IC50正相关(r=0.932,P＜0.05).RNA干扰ERCC1基因后,ES-2、SKOV3、COC1/DDP细胞对DDP的敏感性分别增加了53.88、5.07、3.75倍.结论 ERCC1基因与卵巢癌DDP耐药有关,RNA干扰ERCC1基因可增强卵巢癌细胞对DDP的敏感性.     

RNA干扰survivin基因对卵巢癌细胞生长凋亡及药物敏感性的影响

目的 探讨下调survivin基因对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的影响.方法 构建survivin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体pSilencer-survivin,用脂质体方法转染SKOV3/DDP细胞株,另设未转染组和转染pSilencer-control组作为对照.显微镜下观察转染前后细胞的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测survivinmRNA及蛋白的表达,二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化.各组细胞加入DDP,检测其对DDP药物敏感性的影响.结果 survivin siRNA可明显下调SKOV3/DDP细胞中survivin mRNA及蛋白表达水平.SKOV3/DDP细胞生长受到明显抑制,生长曲线低平.转染48 h后,转染pSilencer-survivin组细胞凋亡率为19.1%,明显高于末转染组(2.6%)和转染pSilencer-control组(3.5%),G1/G0期细胞所占的比例增高,而G2/M期细胞所占的比例降低.转染pSilencer-survivin组细胞的IC50明显降低,为1.16 μg/mi.结论 survivin siRNA可下调SKOV3/DDP细胞中survivin的表达,使细胞生长减慢,凋亡增加,对DDP的药物敏感性增强.     

hMS H2重组质粒对人卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响

目的：研究hMSH2重组质粒对卵巢癌顺铂敏感性方面的影响。方法：构建重组真核表达质粒pCAN－hMSH2,通过酶切及测序法对重组质粒进行鉴定。采用脂质体转染技术对卵巢癌耐药细胞SKOV3／DDP进行瞬时转染,对照组为未转染细胞和SKOV3敏感细胞;hMSH2在细胞内的表达变化由Western blotting和RT－PCR进行检测;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法对细胞的顺铂敏感性进行检测;耐药细胞的凋亡情况通过Hoechst染色法检测。结果：重组质粒pCAN－hMSH2转染进SKOV3／DDP后,经RT－PCR和Western blotting检测证实转染成功,hMSH2的表达得到增强;MTT结果提示转染后的卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性明显增强;Ho-echst染色发现,转染后耐药细胞的凋亡明显增强。结论：hMSH2基因转染后能提高其在SKOV3／DDP细胞中的表达,增强SKOV3／DDP细胞对顺铂的敏感性,促进在顺铂作用下的凋亡。