诺西肽抗乙肝病毒体外实验研究

以ＨｅｐＧ２．２．２．１５细胞株为模型，以其分泌的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ及细胞存活率为观察指标，综合评价了诺西肽体外抗ＨＢＶ效果。结果表明：诺西肽对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的５０％抑制浓度ＩＣ５０分别为＜１２．５和４１．６μｇ／ｍｌ，治疗指数（ＴＩ）分别为＞１６和＞４．８。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ结果显示，诺西肽在１２．５μｇ／ｍｌ浓度下对细胞内ＨＢＶＤＮＡ的抑制率为２６．４％。     

苦味叶下珠抗乙型肝炎病毒的研究

利用我国长江流域产天然植物苦味叶下珠全草进行体外，２．２．１５细胞、慢性乙型肝炎炎患者体内三方面抗乙肝病毒的作用研究，将该药水及其无水乙醇提取物，分别在体外与ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ阳性血清在不同浓度、温度、时间作用后，用ＥＬＩＳＡ药盒检测ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ滴度改变，计算抑制率，结果分别为４７．６２％和４９．０９％。该药水提取物可抑制ＨＢＶ－ＤＮＡ转染的２．２．１５细胞，在培养液中对ＨＢｓＡｇ，     

利用2.2.1.5细胞株筛选中草药抗HBV活性的实验研究

为建立体外抗ＨＢＶ 药物筛选的技术,应用乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ 转染细胞株２－２－１－５ 细胞培养上清中ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｅＡｇ 滴度作为药物抗ＨＢＶ 效果的评价指标,对４ 种中药制剂的抗ＨＢＶ 作用进行了评价。同时,应用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ） 比色分析法检测药物的细胞毒性。结果显示,从中草药中挖掘抗ＨＢＶ 的药物具有较大的潜力,而将ＨＢＶ ＤＮＡ 转染细胞株用于抗ＨＢＶ 药物体外筛选,是一个简单易行的方法。     

更昔洛韦的体外抗乙肝病毒活性

目的：评价更昔洛韦（ＧＣＶ）体外抗乙肝病毒（ＨＢＶ）活性。方法：应用ＨＢＶ ＤＮＡ转染的人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２２．２．１５）,进行ＧＣＶ体外抗ＨＢＶ活性的研究。结果：ＧＣＶ能明显减少ＨｅｐＧ２２．２．１５细胞培养上清液中ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ的产生。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法分析：ＧＣＶ能显著抑制ＨＢＶ复制中间体（包括共价闭合环状态ＤＮＡ）,而同时该药物对细胞形态、细胞计数及总细胞ＤＮＡ无明显的     

聚合酶链反应检测HBVM阳性血清中HBV DNA的临床意义

应用聚合链反应对１４０例乙型肝炎病毒感染标志（ＨＢＶ Ｍ）阳性的慢性肼病患者血清中ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。结果发现：１．ＨＢＶ ＤＮＡ总阳性率为７２．８６％；ＢＨｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性纺分别为７６．５６％、９６．１５％和７４．４２％；ＨＢｓＡｇ阴性血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率为３３．３３％，ＨＢｅＡｇ阴性血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５９．０９％。２．各ＨＢＶ感染模式中，Ｈ     

对HBVHBeAg/HBeAb血清的探讨

对１０１例ＨＢＶ血清中ＨＢＶＤＮＡ进行检测，发现４５例ＨＢｅＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｂ（－）血清检出８８．８８％ＨＢＶＤＮＡ（＋），５６例ＨＢｅＡｂ（－）／ＨＢｅＡｂ（＋）血清检出４６．４２％ＨＢＶＤＮＡ（＋），ＨＢｅＡｇ／ＨＢｅＡｂ与ＨＢＶＤＮＡ关系显著性检验，差别无显著性（χ２＝１．１６，Ｐ＞０．０５），ＨＢｓＡｇ滴度与ＨＢｅＡｇ检出无相关性（ｒ＝０，Ｐ＞０．０５）。     

乙型和丙型肝炎病毒双重感染肝组织病毒标志物的检测

为观察乙型肝炎和丙型肝炎双重感染的尸体肝组织中两种病毒核酸及抗原的分布，对１５例ＨＢＶ与ＨＣＶ双重感染的尸检肝组织用免疫组织化学法检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＣＡｇ，Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的探针原位杂交法分别检测ＨＢＶ ＤＮＡ和ＨＣＶ ＲＮＡ。结果：ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＣＡｇ和ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性数分别为１２／１５（８０．０％）、１０／１５（６６．７％）、９／１５（６０     

巢式聚合酶链反应在乙肝母婴传播中的应用

应用巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）对７４例ＨＢＶＭ阳性的孕妇外周静脉血及其新生儿脐血进行了ＨＢＶＤＮＡ检测。结果显示双抗原（ＨＢｓＡｇ和ＨｂｅＡｇ）阳性组ＨＢＶＤＮＡ检出率母血为１００％（８／８），脐血为８７．５％（７／８）。单抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性组ＨＢＶＤＮＡ检出率母血为２６．９２％（１４／５２），脐血为１９．２３％（１０／５２）。抗体（抗－ＨＢｃ、抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｅ一项至三项）     

乙肝散治疗慢性乙肝的临床和实验研究

以清热散毒，健脾化湿两法组成纯中药制剂乙肝散，治疗慢性乙型肝炎４０例，并与齐墩果酸片随机对照，结果发现：治疗组病人除临床症状，体征，肝功能以及蛋白代谢等获明显改善外，乙肝散对乙型肝炎病人ＨＢｅＡｇ有较了的转阴作用，与对照组相比有显著差异（Ｐ〈０．０５），体外试验采用由乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ克隆转染人肝细胞（ＨｅＰＧ２）的２．２．１５细胞系，对其进行乙肝炎病毒ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ表达抑制的研     

乙肝病毒标志与肝脏病理变化的关系

为探讨ＨＢｓＡｇ携带者的临床征象、肝功能、ＨＢＶＭ、ＨＢＶ－ＤＮＡ与肝组织病理变化关系，特观察２９６例ＨＢｓＡｇ持续阳性病例，发现ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率呈一致关系，但后者较高；临床征象，肝功能与ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶ－ＤＮＡ检出结果，以及ＨＢｅＡｇ与ＨＢＶ－ＤＮＡ检查结果均与肝组织变化相一致。携带ＨＢｓＡｇ不应等同携带ＨＢＶ，治疗ＨＢｓＡｇ携带者不宜单一追求ＨＢｓＡｇ阴转，理应重视ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶ－ＤＮＡ的阴转，防止进入肝硬变     

亚硒酸钠对乙型肝炎病毒的体外抑制作用

目的探讨亚硒酸钠在体外对乙型肝炎病毒(HBV)蛋白合成、DNA复制的影响及机制。方法将不同浓度的亚硒酸钠作用于HepG2.2.15细胞系,通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和HBV DNA水平来评价HBV复制情况;免疫组织化学检测HepG2.2.15细胞p53蛋白的表达情况。结果亚硒酸钠对HBV复制具有抑制作用,随着亚硒酸钠浓度的升高,对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,但对HBsAg的抑制作用要小于HBeAg。细胞内HBV DNA复制水平也逐渐下降(P<0.01)。p53蛋白的分布也发生了改变。结论亚硒酸钠对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg和HBcAg表达、HBV DNA复制均有抑制作用,作用机制与其干扰p53蛋白的表达有关。     

甘草酸苷与乙型肝炎病毒复制关系的体外研究

目的:研究甘草酸苷在体外试验条件下与乙型肝炎病毒复制的关系。方法:以2·2·15细胞株为试验对象,定量检测加入不同浓度甘草酸苷处理后细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的含量。结果:甘草酸苷浓度分别为800、400、200、100、50μg/ml时,对HBsAg抑制率依次为83·8%、71·0%、62·1%、52·0%、29·7%,表明其可抑制2·2·15细胞分泌HBsAg。结论:甘草酸苷在体外试验中未引起HBV复制活跃。     

鹅绒委陵菜有效部位(总皂苷)的分离与抗鸭乙肝病毒(DHBV-DNA)作用

目的本文采用大孔吸附树脂(D101型)纯化新工艺技术,对来源于西部药用植物鹅绒委陵菜Potentilla ansserina L.的粗提物进行分离纯化 ,获得具有显著抗肝炎病毒与保肝活性的鹅绒委陵菜有效部位-总皂苷类成分.本文作者重点研究了鹅绒委陵菜有效部位总皂苷类成分体内、体外抗乙型肝炎病毒作用.方法建立以HBV转染的人肝癌细胞系(Hep G2)2.2.15细胞系为体外模型;静脉感染鸭血清DHBVDNA呈强阳性的一日龄北京雏鸭为体内模型;分别观察2.2.15细胞含药培养基中HBsAg和HBeAg及给药治疗后鸭血清中DHBVDNA水平.结果体外实验中,8d 时,各剂量组的鹅绒委陵菜有效部位对HBsAg和HBeAg均有抑制作用.中剂量鹅绒委陵菜有效部位对HBsAg和HBeAg有显著抑制作用(P＜0.01 ).体内实验观察,中剂量和小剂量鹅绒委陵菜有效部位对DHBVDNA有明显抑制作用 (P＜0.05,P＜0.01).结论鹅绒委陵菜有效部位对乙型肝炎病毒具有明显抑制作用,同时为鹅绒委陵菜的研究、开发奠定了良好的基础.     

Evaluation of hepatitis B virus replication and proteomic analysis of HepG2.2.15 cell line after cyclosporine A treatment

Aim： The effect of cyclosporine A （CsA） on hepatitis B virus （HBV） replication was investigated, and proteomics expression differentiation after CsA treatment was studied in order to provide clues to explore the effect of CsA on HBV replication. Methods： Methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay was used to evaluate the cytotoxicity of CsA. The HBV replication level in the HBV genomic DNA transfected HepG2.2.15 cell line was determined by an ELISA analysis of hepatitis B surface antigens （HBsAg） and Hepatitis B e antigens （HBeAg） in culture supernatant, while the intracellular HBV DNA replication level was analyzed by slot blot hybridization. Two-dimensional electrophoresis was used to investigate the alteration of protein expression in HepG2.2.15 after CsA treatment in vitro. The differentially-expressed proteins were identified by Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry combined with an online database search. Results： CsA was able to inhibit the expression of HBsAg, HBeAg, and HBV DNA replication in vitro in a dose-dependent manner. A proteomics analysis indicated that the expression of 17 proteins changed significantly in the CsA treatment group compared to the control group. Eleven of the 17 proteins were identified, including the overexpression of eukaryotic translation initiation factors （eIF） 3k, otubain 1, 14.3.3 protein, eIF2-1α, eIF5A, and the tyrosine 3/tryptophan 5-mono-oxygenase activation protein in CsA-treated HepG2.2.15 cells. The downregulation of the ferritin light subunit, erythrocyte cytosolic protein of 51 kDa （ECP-51）, stathmin 1/oncoprotein, adenine phosphoribosyl-transferase, and the position of a tumor protein, translationally- controlled 1, was shifted, suggesting it had undergone posttranslational modifications. Conclusion： Our study identified the inhibitory effect of CsA on HBV replication, and found that a group of proteins may be responsible for this inhibitory effect.     

针对HBVX基因的反义核酸抑制HBV表达的体外研究

目的筛选反义脱氧寡核苷酸 (ASON)抗乙型肝炎病毒 (HBV)的有效靶向位点。方法设计合成针对HBVX翻译起始位点的ASON即序列Ⅰ ,并设非互补序列作对照即序列Ⅱ ,以人肝癌细胞系 (2 .2 .15 )为细胞模型 ,应用ELISA动态观察不同浓度 (1、5、10 μmol/L)ASON一次性用药对HBV基因表达的抑制作用 ,用MTT比色法观察ASON对细胞代谢的影响 ,以苔盼蓝染色计数观察ASON对细胞活性的影响。结果ASON可有效地抑制HBV基因的表达 ,在 1、5、10 μmol/L浓度时对HBsAg的抑制率分别为 6 3%、45 %和 5 7% ,对HBeAg的抑制率分别为 38%、41%和 5 6 % ;而对照序列Ⅱ对HBsAg和HBeAg的抑制率均低于 12 %。MTT法表明ASON对 2 .2 .15细胞代谢无影响(P >0 .0 5 ) ,苔盼蓝染色计数表明ASON对 2 .2 .15细胞活性无影响 (P >0 .0 5 )。结论HBVX翻译起始区是ASON抗HBV复制表达的有效靶向位点     

Protocatechuic aldehyde inhibits hepatitis B virus replication both in vitro and in vivo

Natural compounds provide a large reservoir of potentially active anti-hepatitis B virus (HBV) agents. We examined the direct effects of protocatechuic aldehyde (PA; derived from the Chinese herb, Salvia miltiorrhiza) on HBV replication in HepG2 2.2.15 cell line and duck hepatitis B virus (DHBV) replication in ducklings in vivo. The extracellular HBV DNA, hepatitis B e antigen (HBeAg) and hepatitis B surface antigen (HBsAg) concentrations in cell culture medium were determined by quantitative real-time PCR and ELISA, respectively. DHBV in duck serum was analyzed by dot blot. PA appeared to downregulate the secretion of HBsAg and HBeAg as well as the release of HBV DNA from HepG2 2.2.15 in a dose- and time-dependent manner at concentrations between 24 and 48 microg/mL. PA (25, 50, or 100 mg/kg, intraperitoneally, twice daily) also reduced viremia in DHBV-infected ducks. We provide the first evidence that PA, a novel anti-HBV substance derived from traditional Chinese herb S. miltiorrhiza, can efficiently inhibits HBV replication in HepG2 2.2.15 cell line in vitro and inhibit DHBV replication in ducks in vivo. PA therefore warrants further investigation as a potential therapeutic agent for HBV infections.     

阿地福韦体外抗乙肝病毒的活性

目的：阿地福韦（adefoir dipivoxil,Bis-POM PMEA)是一新的广谱,抗病毒核苷类药物。本实验评价阿地福韦体外抗乙肝病毒（HBV）的活性。方法：应用HBV DNA转染的人肝癌细胞株（Hep G2.2.15),阿地福韦体外抗乙肝病毒（HBV）的活性评价。结果：阿地福韦能显著减少Hep G2.2.15细胞培养上清液中HBsAg,HBV DNA的分泌,Southern印迹法表明：阿地福韦能明显地抑制HBV和制中间体及共价环状闭合DNA。该实验药物浓度对细胞形态,计数及总细胞DNA无明显影响。阿地福韦具有较强的体外抗HBV活性,同时细胞毒性作用不明显。结论：阿地福韦作为新的抗HBV药物,具有其临床应用价值。     

血根碱、白屈菜红碱衍生物的合成与体外抗HBV活性研究

目的合成季铵类苯并菲啶生物碱血根碱(1)和白屈菜红碱(2)的衍生物,评价其体外抗HBV活性,初步探讨抗HBV活性。方法以血根碱和白屈菜红碱为原料,通过结构修饰获得衍生物,采用Hep G2.2.15细胞模型评价衍生物对HBsAg和HBeAg分泌抑制活性和HBV DNA复制的抑制活性。结果血根碱和白屈菜红碱对HBsAg、HBeAg和HBV DNA复制具有较高的抑制活性,但细胞毒性较高。氧化白屈菜红碱(6)对HBV DNA的复制具有一定的抑制作用(IC50=0.75 mmol·L-1),细胞毒性较白屈菜红碱明显降低(CC50>3.0 mmol·L-1)。6-乙氧基二氢血根碱(7)和6-乙氧基二氢白屈菜红碱(8)对HBsAg和HBeAg和HBV DNA复制具有一定的抑制活性。结论季铵类苯并菲啶生物碱具有显著的体外抗HBV活性,烯胺正离子结构单元对化合物的抗HBV活性产生重要的影响。     

氧化苦参碱和拉米夫定体外抗乙肝病毒的比较

目的比较氧化苦参碱(OM)和拉米夫定体外抗乙肝病毒的效果。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法考察OM和拉米夫定对HepG2.2.15生长的抑制作用,ELISA法检测对HepG2.2.15分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用。结果 OM和拉米夫定对HepG2.2.15的半数中毒剂量分别为1 489.1和15.5μg/L。对HBsAg和HBeAg的表达均有剂量和时间依赖的抑制作用。结论 OM治疗乙肝病毒的安全性高于拉米夫定。     

复方茵陈片对乙肝病毒HBsAg和HBeAg表达的影响

目的:研究复方茵陈片对HBsAg和HBeAg表达的抑制作用。方法:分别以不同浓度含药培养基培养2.2.15细胞,运用放射性免疫测定方法检测乙型肝炎表面抗原和e抗原。结果:复方茵陈片药液最大无毒浓度为600 g·mL-1。在此浓度基础上以培养基递减稀释药液,给药组的2.2.15细胞HBsAg和HBeAg cpm值明显低于细胞对照组。结论:复方茵陈片可以抑制HBV的复制和表达。