骨髓基质饲养层对精原干细胞体外培养的影响

目的以原代培养小鼠骨髓基质细胞为饲养层，探讨精原干细胞能否在该饲养层上生长及生长的影响因素。方法采用原代培养的小鼠骨髓基质细胞，待细胞长成单层后用丝裂霉素C处理并接种生精细胞共培养。结果原代的小鼠培养骨髓基质细胞能很好的维持精原干细胞的非分化性扩增。结论小鼠原代培养的骨髓基质细胞能作为饲养层支持精原干细胞体外非分化性扩增，该细胞有望成为干细胞培养的新的饲养层。     

精原干细胞体外非分化扩增的初步研究

目的探讨精原干细胞体外非分化性扩增的影响因素。方法采用昆明系小白鼠骨髓基质细胞原代培养,待细胞长成单层后经丝裂霉素C处理,作为精原干细胞培养的饲养层,细胞在37℃环境下培养。结果接种后2～4d,精原干细胞数明显增加,细胞单个、成双或成群,非精原干细胞开始出现崩解死亡;接种4～8d,精原干细胞增殖不明显,处于相对静止期;接种10d后,又开始出现明显的分裂增殖,15d已具有精原干细胞特征,继续培养25d,细胞形态未见明显改变,胞质桥仍明显。结论精原干细胞能在37℃环境温度下,在以骨髓基质饲养层上保持良好非分化性扩增。     

华支睾吸虫亚显微结构的研究─V精细胞的分化(摘要)

目的研究华支睾吸虫精子的形成。方法采集自然感染华支睾吸虫的麦穗鱼，人工消化后收集囊蚴，以囊蚴感染家兔，两个月后剖检病兔获取成虫，切取睾丸段做电镜制样，透射电镜观察。结果精原细分布在睾丸被膜下，睾丸深部分布着不同分化阶段的精母细胞、精细胞和精子，一个原细胞经3次有丝分裂进入生长期，形成8个初级精母细胞，细胞间有胞质间桥连接，初级精母细胞经第一次减数分裂形成16个次级精母细胞，次级精母细胞经减数分裂中的第二次分裂形成32个精细胞，精细胞的一端仍与胞质间桥连接另一端游离，排列成玫瑰花状，进行同步发育。结论华支睾吸虫精子的分化分为两个连续的阶段，一。精细胞的分化。二。精子的变形，本文报告为第一阶段。     

华支睾吸虫亚显微结构的研究-V精细胞的分化（摘要）

目的 研究华支睾吸虫精子的形成。方法 采集自然感染华支睾吸虫的麦穗鱼，人工消化后收集囊蚴，以囊蚴感染家免，两个月后剖检病兔获取成虫．切取睾丸段做电镜制样，透射电镜观察。结果 精原细分布在睾丸被膜下，睾丸深部分布着不同分化阶段的精母细胞、精细胞和精于，一个原细胞经3次有丝分裂进入生长期，形成8个初级精母细胞，细胞间有胞质间桥连接，初级精母细胞经第一次减数分裂形成16个次级精母细胞，次级精母细胞经减数分裂中的第二次分裂形成32个精细胞，精细胞的一端仍与胞质间桥连接另一端游离，排列成玫瑰花状．进行同步发育。结论 华支睾吸虫精子的分化分为两个连续的阶段，一，精细胞的分化。二，精子的变形，本报告为第一阶段。     

精原干细胞的增殖与分化

精原干细胞（As精原细胞）是一些独立的细胞。它们既可以自我更新，又可以产生成对的Apr细胞，后者可按照预定的方向继续分化，Apr细胞随后分裂成一系列可再次分裂的Aal细胞。干细胞自我更新与分化的比例受支持细胞产生的胶质细胞系源性神经营养因子的调控，而其受体也在干细胞中表达，在上皮循环形成Aal的过程中，As,Apr和Aal增殖，从上皮循环的第Ⅷ殖起，几乎所有的Aal细胞，少数Apr和极少As细胞分化成A1细胞，这一分化步骤涉及了许多分子，其中包括SCF/c-Kit,DazlRNA结合蛋白，细胞周期蛋白D2和维甲酸，但是精原干细胞的密度缺乏精确的调节，以致一些区域A1形成较多，而另一些区域A1形成较少，通过A2，A3和A4细胞的凋亡可去除过剩的细胞而使精原细胞的密度达到相对平衡，Bcl-2家族的成员Bax和Bcl-XL也在密度调节中起一定作用，一些机制也可以解决干细胞生成过程中不同程度的不足，在细胞严重损失的情况下，干细胞的自我更新优于其分化，并且As,Apr和Aal细胞的增殖期也有所延长，较轻微的缺陷可通过减少A2-A4精原细胞的凋亡来弥补。     

单细胞转录组测序技术在人精原干细胞研究中的应用

精原干细胞的自我更新、增殖与分化对于维持精子发生至关重要。然而,调控这一过程的分子机制尚未完全阐明。精原干细胞具有不同细胞亚型,其在精子发生过程中扮演不同角色。单细胞转录组测序技术提供有效的手段,揭示各精原细胞亚型及其转录组水平和生物学功能变化,为精原干细胞的分子机制研究提供新思路。     

血清培养对大鼠精原干细胞生长周期的影响

目的探讨血清培养对大鼠精原干细胞生长周期的影响。方法采用percoll分离及差速贴壁法纯化精原干细胞.抗端粒酶逆转录酶免疫组化进行鉴定，用流式细胞仪对细胞生长周期进行判断。结果在有血清的培养基中培养的精原干细胞，其OD值逐渐升高（P〈0．05）；精原干细胞DNA合成期（S期）含量的增多。结论抗端粒酶逆转录酶免疫组化可作为鉴定精原干细胞提供较为充分的依据；血清能促进精原干细胞的体外增殖。     

精原干细胞在支持细胞饲养层上的长期培养

目的建立体外研究精原干细胞与支持细胞共培养的细胞模型,研究体外精原干细胞在支持细胞层上的增殖特点。方法应用两步酶消化法,分别从14～15d及6d龄雄性昆明小鼠睾丸中分离支持细胞及精原干细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定。将精原干细胞接种在支持细胞层上,观察不同时间点精原干细胞集落形态及数目。结果在支持细胞层上培养24h后,精原干细胞开始增殖分裂,呈双细胞形态;随着培养时间延长,双细胞集落数逐渐减少,而链状细胞集落逐渐增加;培养120h后,链状细胞局部融汇堆积,且细胞集落维持在相对稳定数量。在每4～5d更换培养液的条件下,细胞集落维持稳定状态的平均时间为(51,2±5.8)d。结论精原干细胞在体外支持细胞层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,可用于体外研究生精细胞增殖分化特征、药物或毒物干扰精原干细胞功能实验。     

兔精原干细胞培养及生物学特征的初步研究

目的:建立精原干细胞的培养方法并对培养细胞的生物学特征进行研究.方法:用饲养层和无饲养层两种方法培养幼家兔精原干细胞,在倒置相差显微镜下观察培养细胞的生长和形态变化,并对细胞的糖原、脂质及c-kit受体的细胞化学和免疫细胞化学染色结果进行分析.结果:成功的分离并培养幼家兔精原干细胞.在培养细胞中精原干细胞为主体细胞,并可见少量间质细胞.根据精原干细胞体积大小和形态特点,可分为大、小两种类型.PAS染色,精原干细胞胞质呈阳性反应;免疫细胞化学染色显示,体积较小的精原干细胞c-kit受体呈强阳性反应,体积较大的大精原干细胞呈弱阳性反应;间质细胞PAS染色和c-kit受体染色呈阴性反应,而脂质染色呈强阳性反应.精原干细胞培养无论有无饲养层,均能呈集落状生长,但有饲养层的培养,细胞的生长明显优于无饲养层培养.结论:青春期前的睾丸生精小管是精原干细胞最集中、数量最多,且容易获取分离的部位;精原干细胞的成功培养为今后重建完整的生精细胞系的治疗性移植和对这类定向干细胞的发育及分化潜能的研究提供了细胞模型.     

黄芪注射液对大鼠精原干细胞增殖作用的影响

目的：研究黄芪注射液对体外培养的精原干细胞增殖过程中所起的调控作用;建立完善的精原干细胞体外培养体系,为精原干细胞的体外大量扩增提供技术和方法,为治疗男性不育等提供相关技术.方法：选用9日龄的SD大鼠睾丸,应用不连续Percoll梯度液分离纯化精原干细胞,并应用选择性贴壁法进一步纯化精原干细胞;细胞计数法研究不同浓度（0、5、10、20、50、100 g/L）黄芪注射液对精原干细胞增殖的效应;MTT法研究不同浓度黄芪注射液对精原干细胞增殖的效应.结果：细胞计数法结果显示,与对照组相比,黄芪注射液对精原干细胞有增殖作用（P﹤0.01）.MTT结果也显示实验组比对照组细胞数量均显著增多（P﹤0.01）.结论：黄芪注射液能够促进精原干细胞的增殖.     

小鼠精原干细胞体外培养的研究

目的建立精原干细胞与Sertoli共培养细胞模型,探讨Sertoli支持精原干细胞扩增的可能机制。方法以7—8 d龄小鼠为材料,Percoll密度梯度离心,并将分离后的生精细胞接种至Sertoli饲养层上,37℃下共培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长特点,并对培养15 d的细胞进行苏木精-伊红染色、C-Kit受体检测。结果①增殖细胞的生长特点及形态学特征与文献报道精原干细胞的特征相符合。②苏木精-伊红染色显示培养的生殖细胞大小均匀,核大而圆着色深。C-Kit受体显示细胞膜呈强阳性,背景基质细胞为阴性。这些均符合精原干细胞的生物学特征。结论精原干细胞在未加入细胞因子的Sertoli饲养层中能较长时间生长并分裂增殖。     

GDNF和SCF促进小鼠精原干细胞增殖与分化的研究

目的 探讨小鼠精原干细胞增殖和分化体外控制的可行性.方法 采取7～8日龄雄性小鼠睾丸,分离纯化精原干细胞接种在添加神经营养因子的培养基内进行增殖培养,7 d后更换添加干细胞生长因子的培养基.结果 SSCs接种于Sertoli细胞饲养层上4 d后,出现了增殖现象,可见增殖产生SSCs克隆,AKP染色阳性,β1整合素免疫细胞化学染色阳性,RT-PCR扩增出长度约为120 bp的Oct-4和280 bp的c-kit条带.结论 小鼠精原干细胞在添加50 ng/mL GDNF的培养基内培养7 d后更换添加10 ng/mL SCF的培养基可以实现小鼠SSCs从增殖到分化的转变.     

GDNF干预对化疗致精原干细胞耗竭小鼠生精细胞恢复效果的研究

目的：研究外源胶质细胞源性神经营养因子（ glialcell line - derived neurotrphic factor, GDNF）对化疗致不育小鼠生精细胞的恢复效果,明确GDNF促进在体精原干细胞再生的效果。方法：4周龄雄性C57小鼠腹腔注射白消安（30mg／kg）,注射后4周按601．Lg／kg体重剂量腹腔注射GDNF进行干预,每天一次连续注射7d。在干预后第4周收集睾丸,检测睾丸重量、通过HE染色检测生精小管中生殖细胞恢复情况;通过RT—PCR检测GDNF和SCF基因表达评价GDNF注射对小鼠精原干细胞微环境的影响。结果：在GDNF干预后第4周,睾丸重量明显得到恢复,生精小管中上皮细胞数量明显得到恢复,精原干细胞微环境中再生因子GDNF和分化因子SCF表达水平稳定。结论：GDNF干预可以促进化疗致精原干细胞耗竭小鼠睾丸中生精细胞数量明显恢复,且维持了精原干细胞微环境中再生分化调控的平衡关系。     

骨髓间充质干细胞的生物学特性及其临床应用

自从Friendenstein发现并证实骨髓中存在一种可贴壁生长的纺锤形的成纤维细胞集落形成后，各国研究室对此展开了大量的实验，证实了这些细胞具有高度自我更新和多向分化潜能，可促进造血细胞克隆形成，分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞甚至成肌细胞。直到1991年，Caphan把这些具有一致粘附能力，在体外能高度扩增、并可多向分化的细胞群命名为骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs）。正常人骨髓中间充质干细胞的含量很低（1/10^5单个核细胞），在体外，间充质干细胞具有很强的自我扩增能力，扩增10^7倍后仍保持干细胞特性和正常表型。可以通过体外贴壁培养法分离纯化，分化为基质及多种造血以外的组织，特别是中胚层来源细胞，而且易于外源基因的转染与表达，成为细胞治疗及基因治疗的理想靶细胞。     

辐射诱发小鼠生殖细胞染色体畸变研究(摘要)

<正> 本文对C_(57)BL小鼠受0—4 GyX射线照后60天的分化型精原干细胞染色体易位和初级精母细胞终变期——中期Ⅰ的多价体进行了分析。两项指标的畸变量均随剂量增加而升高。以加权法统计拟合为y=a+bD+CD~2的关系式为最优。本实验照后饲养60天,畸变的精原干细胞经过自我复制,非稳定性畸变可能被丢失,而易位这样的稳定性畸变,由于不影响细胞分裂,在细胞分裂过程中形成带有易位的精原干细胞,不     

精原干细胞的研究进展

精原干细胞(sperm atogon ial stem cells)是一群具有高度自我更新能力和多向分化潜能的细胞,它能向子代传递遗传信息,是男性成体内唯一可复制的双倍体细胞。精原干细胞在医学、生物工程学、遗传、转基因研究等方面有着广阔的应用前景。现将近年来精原干细胞的研究成果综述如下     

BrdU标记在大鼠生精细胞体外培养中的应用

目的探讨应用5-溴-2-脱氧尿苷（5-bromo-2-deoxy-uridine，Brdu）标记检测大鼠生精细胞体外的分化、发育情况。方法采用BtdU体内标记生精细胞的DNA，免疫细胞化学法跟踪观察大鼠生精细胞在体外培养中的分化、发育情况。结果培养前在体内标记BrdU的细胞为初级精母细胞。经培养后在BrdU标记的细胞中出现早期精子细胞。结论大鼠生精细胞体外培养过程中，应用BrdU标记能检测生精细胞的分化、发育情况。     

生精细胞凋亡与P53

精子发生始于精原细胞的克隆扩增,经细胞的分化、有丝分裂、减数分裂、变态,最终形成精子.精子发生受到许多因素的调节,其中最主要受激素控制,促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinising hormone,LH)、雄激素等是生精细胞的存活因子[1].细胞内分子对精子发生的调节也不容忽视,如cAMP反应元素调节子(cyclin AMP-responsive element modulator,CREM)在减数分裂后精子细胞中高表达,是一种转录因子,CREM基因突变致精子缺失可引起不育;c-myc基因可促进生精细胞的凋亡.生精细胞的存亡还与周围的支持细胞以及间质细胞所形成的微环境有关[2].各种生长因子对精子发生也有直接或间接的调节作用,如表皮生长因子(epidermalgrowth factor,EGF)、转化生长因子(transforming growth factor,TGF),胰岛素样生长因子( insulin-like growth factor,IGF)等.在精子发生过程中,各级生精细胞都会发生凋亡.在生理条件下,凋亡是机体清除过量或异常生精细胞的一种方式.     

LaZ转基因小鼠腹侧中脑神经干细胞的扩增与诱导分化

目的构建LaZ转基因小鼠腹侧中脑神经干细胞的扩增与诱导分化技术平台,为进行体内移植携带报告基因的神经干细胞研究奠定基础.方法利用无血清培养基,分离并体外培养LaZ转基因胚胎小鼠腹侧中脑神经干细胞,连续稳定传代20代后,以免疫荧光、免疫细胞化学法及组织化学方法检测神经球Nestin和分化后细胞中神经纤维（NF）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、Galc和半乳糖苷酶（X-Gal）的表达.结果从LaZ转基因小鼠腹侧中脑分离的细胞群具有连续形成神经球的能力,其Nestin表达阳性.分化后的细胞可表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原.所有细胞半乳糖苷酶组织化学均为阳性.结论LaZ转基因小鼠腹侧中脑神经干细胞可稳定扩增,具有多向分化潜能,分化后细胞携带LaZ报告基因,可用于进一步的移植实验研究.     

新生大鼠视网膜干细胞分离培养及其生物学特性

目的：探讨新生大鼠视网膜干细胞的分离培养及其生物学特性。方法：采用机械酶-分离法体外扩增培养SD大鼠视网膜干细胞,观测细胞增殖能力,绘制CCK-8检测生长曲线;诱导细胞分化,免疫组织化学检测细胞巢蛋白、溴脱氧尿核苷、微管缔合蛋白-2、神经胶质原纤维酸性蛋白、胸腺糖蛋白1．1的表达。结果：原代视网膜干细胞形成大量的细胞球悬浮生长,传代后的细胞也可以形成细胞球,呈线性生长,巢蛋白和溴脱氧尿核苷表达阳性;诱导分化后的细胞部分原纤维酸性蛋白、微管缔合蛋白-2、胸腺糖蛋白1．1表达阳性。结论：新生SD大鼠视网膜干细胞可在体外分离培养和扩增,表达干细胞特性,并可向视网膜节细胞分化。