清开灵有效组分对体外缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的:建立脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注损伤模型,研究细胞生存活性和NO含量的变化,探讨清开灵有效组分的保护作用。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,MTT法测定细胞生存活性变化并结合硝酸酶还原法测定细胞上清NO含量。结果:模型组细胞OD值明显低于正常组,NO含量明显升高(P<0.01);清开灵各组分都显著降低上清中NO含量,而且胆酸、黄芩苷、栀子苷(12.5μg.mL-1)组和新清开灵注射液(0.03%)明显增高OD值(P<0.05)。结论:清开灵有效组分通过提高细胞生存活性、减少NO分泌而保护体外缺血再灌注损伤的脑微血管内皮细胞。     

清开灵、复方丹参、黄芪3种注射液对大鼠脑微血管内皮细胞凋亡影响的比较研究

清开灵注射液(以下简称清开灵)、复方丹参注射液(以下简称丹参)、黄芪注射液(以下简称黄芪)均能抗大鼠局灶性脑缺血损伤,并能抑制体外血小板的聚集[1]。脑微血管内皮的损伤是急性脑血管病的重要环节,在脑缺血的发生发展中起着重要作用。本研究通过3种方剂对大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)缺氧-再给氧所导致细胞凋亡影响的研究,探讨它们抗脑缺血的机制。1材料1.1动物W istar雄性大鼠,体重100 g,北京维通利华实验动物技术有限公司,     

清开灵对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤MLCK基因转录的影响

目的:研究清开灵对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤MLCK基因转录的影响。方法:细胞分为正常对照组(有糖Earle液)、模型组(缺氧缺糖模拟缺血:无糖Earle液,37℃,5%CO2,1%O2培养24 h)、清开灵低、中、高浓度组(缺氧缺塘+清开灵1%、2%、4%),在37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后经MTT比色法检测细胞活力、荧光定时定量PCR检测MLCK基因转录。结果:缺氧缺糖24 h后微血管内皮细胞活性降低(P<0.05)、MLCK基因转录被抑制(P<0.05);清开灵1%、2%、4%组均抑制了缺糖缺氧条件下微血管内皮细胞活性的降低(P<0.05),清开灵4%组降低MLCK的表达(P<0.05)。结论:缺糖缺氧条件下微血管内皮细胞活性降低。清开灵通过抑制MLCK的表达,恢复BBB的部分屏障功能。     

脑泰通颗粒对痰瘀型脑缺血大鼠血清TXB2和6-keto-PGF1α再灌注的影响

目的研究脑泰通颗粒对痰瘀型脑缺血大鼠血清TXB2和6-keto-PGF1α含量的影响。方法对痰瘀型大鼠模型完成缺血手术并再灌注2 h后迅速断头,立即收集动脉血,离心取血清来测定TXB2和6-keto-PGF1α含量。结果脑泰通颗粒能显著降低大鼠血清TXB2和升高血清6-keto-PGF1α含量,脑泰通颗粒中、高剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01 orP<0.05)。结论脑泰通颗粒能降低大鼠血清TXB2和升高血清6-keto-PGF1α含量,这种效应能抑制血小板聚集和血管收缩,改善血液循环,使血管舒张,脑血流量增加,促进侧支循环,减轻了脑梗死时脑组织的损伤程度及脑梗死后的致残度,对脑缺血损伤具有一定的保护作用。     

清开灵注射液对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧模型紧密连接蛋白claudin-5的影响

目的 观察缺氧对脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5 表达的影响及清开灵的干预作用.方法 体外培养Balb/c 小鼠脑微血管内皮细胞,分为正常组、模型组和清开灵小中大剂量组,采用氧糖剥夺24 h 模拟缺血损伤,荧光定量PCR 法检测Claudin-5mRNA 的转录水平,western blot 法检测蛋白表达.结果 缺氧损伤后,Claudin 5mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P 〈0.05）;与模型组比较,清开灵小、中、大各剂量组都有改善趋势,其中小、大剂量对基因转录水平提高明显,中剂量对蛋白表达的增强更显著,具有统计学意义（P 〈0.05）.结论 清开灵通过调节紧密连接蛋白claudin-5 表达,改善血脑屏障通透性从而阻抑脑缺血反应过程.     

咳喘宁胶囊对慢性支气管炎大鼠血浆、肺组织及支气管肺泡灌洗液中血栓素B2及6-酮-前列腺素F1α含量的影响

目的探讨咳喘宁胶囊对实验性慢性支气管炎治疗作用的内在机制.方法采用改良烟熏法复制大鼠慢性支气管炎模型,实验分组为模型组、咳高组、咳低组、桂龙组,并设不加处理的正常对照组.以高、低剂量咳喘宁和桂龙咳喘宁进行干预,用放免法测定各组大鼠血清、肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)中血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的含量.结果模型组大鼠血清、肺组织及BALF中TXB2和6-keto-PGF1α及其比值均较正常组明显升高(P＜0.01);与模型组相比较,咳高组和桂龙组血清、肺组织及BALF中TXB2和6-keto-PGF1α含量及其比值均有明显降低(P＜0.05或P＜0.01),而咳低组无明显差异;咳高组血清、肺组织及BALF中TXB2和6-keto-PGF1α含量显著低于桂龙组(P＜0.05或P＜0.01).结论咳喘宁胶囊可通过降低TXB2和6-keto-PGF1α含量发挥治疗作用.     

心康注射液对心肌缺血模型大鼠PGI2/TXA2平衡和血小板聚集的影响

目的 研究心康注射液连续给药28 d对心肌缺血模型大鼠的治疗作用并探讨其作用机制.方法 采用冠状动脉结扎法制备心肌缺血大鼠模型,观察心康注射液对模型血浆TXB2、6-keto-PGF1α含量和ADP诱导的血小板聚集率的影响.结果 心康注射液能够明显升高心肌缺血模型大鼠血中6-keto-PGF1α量,降低TXB2量;心康注射液能够明显抑制心肌缺血模型大鼠血小板聚集.结论 心康注射液能够通过调节PGI2/TXA2平衡,抑制血小板聚集,发挥抗心肌缺血作用.     

加减枳实大黄汤对MCAO模型大鼠炎性因子及TXB2、6-Keto-PGF1α含量的影响

目的 探讨加减枳实大黄汤抗脑缺血再灌注损伤的作用.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、加减枳实大黄汤低、中、高剂量组,每组10只.建立大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型.灌胃给药1周,观察大鼠神经功能缺损症状,测定各组大鼠血清IL-10、IL-1β和6-keto-PGF1α、TXB2含量.结果 加减枳实大黄...     

新清开灵注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤微血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的:观察培养的大鼠脑缺血再灌注损伤微血管内皮细胞体外黏附分子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的变化,探讨新清开灵注射液阻抑脑缺血炎症反应的作用途径。方法:采用分离脑微血管段并消化的方法体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法(Kreb液,95%N2 5%CO2)模拟缺血再灌注损伤,分别采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法半定量检测黏附分子ICAM-1、VCAM-1的蛋白mRNA表达和mRNA转录水平。结果:与正常组比较,模型组ICAM-1、VCAM-1的蛋白和mRNA表达均明显增高(P<0.05);与模型组比较,清开灵组显著降低其蛋白表达和VCAM-1 mRNA转录水平(P<0.05);新清开灵注射液对ICAM-1和VCAM-1的蛋白和mRNA表达都有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:新清开灵注射液通过干预黏附分子表达而阻抑脑缺血损伤炎症反应。     

缬沙坦联合川芎嗪对血管性痴呆大鼠血浆6-keto-PGF_（1α）和TXB_2含量的影响

目的：检测血管性痴呆（VD）大鼠血浆6-keto-PGF1α和TXB2含量,比较缬沙坦、川芎嗪单独及联合对血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆的改善作用,并分析原因。方法：反复夹闭双侧颈总动脉加硝普钠腹腔注射复制血管性痴呆大鼠模型;Morris水迷宫检测VD大鼠学习记忆力;放射免疫法检测大鼠血浆6-keto-PGF1α和TXB2含量。结果：与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（P〈0.01）,跨越虚拟平台的次数、在平台象限停留的时间及平台象限游程百分比明显减少（P〈0.01）;血浆中6-keto-PGF1α含量降低,TXB2含量明显增加（P〈0.01）。与模型组比较,缬沙坦、川芎嗪单独及联合均可缩短大鼠逃避潜伏期（P〈0.05,0.01）,增加大鼠跨越虚拟平台的次数、在平台象限停留的时间及平台象限游程百分比（P〈0.05）,三用药组间相互比较,以联合用药组效果更为明显（P〈0.05）;缬沙坦、川芎嗪单独及联合均可提高VD大鼠血浆6-keto-PGF1α含量,降低TXB2含量（P〈0.05,0.01）,三用药组间比较,联合用药对TXB2和6-keto-PGF1α的影响较缬沙坦明显,对6-keto-PGF1α的影响较川芎嗪明显（P〈0.05）。结论：缬沙坦、川芎嗪单独及联合均可改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能,以联合用药效果更明显。其原因与其单独或联合用药均可提高VD大鼠血浆6-keto-PGF1α含量,降低TXB2含量,纠正VD大鼠循环血中TXA2/PGI2的平衡失调有关。     

清开灵不同组分对大鼠MCAO模型脑组织中肿瘤坏死因子的影响特征

目的：观察清开灵不同组分对MCAO大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNF-R）含量的影响，探讨其抗脑缺血损伤的机制。方法：采用MCAO模型，应用RIA检测脑组织匀浆肿瘤坏死因子-α（TNV-α含量，EISIA检测脑组织sTNF—R含量。结果：缺血24h，胆酸组、栀子苷组、珍珠母组及合方组的脑组织中TNF-α含量显著降低（与模型组比P〈0．05或P〈0．01）。缺血12h，珍珠母组、黄芩苷组和胆酸组脑组织中sTNF-R的含量显著高于模型组（P〈0．05或P〈0．01）；而缺血24h，胆酸组与合方组脑组织中sTNF-R的含量显著低于模型组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：清开灵四种组分及合方可以抑制TNF-α的合成与分泌，对脑缺血后的级联反应具有阻抑作用；而各不同组分对sTNF-R的作用较为复杂，在缺血12h，珍珠母、黄芩苷和胆酸可刺激sTNF-R的合成与分泌，而到缺血后24h，各给药组脑组织中sTNF—R的含量却表现为下降趋势。     

精制清开灵及其组分对中风后大鼠内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的：清开灵是一种治疗脑中风的传统中药复方。精制清开灵是从清开灵衍生出的有效成分复方,既往研究证明,此药具有减轻大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠血管内皮细胞损伤和抑制炎症过程的作用,从而体现出神经保护的效果。而内皮型一氧化氮合酶（eNOS）来源的一氧化氮在脑缺血发作后的病理过程中起到重要的保护作用,是近年药理学研究的热点之一。本实验研究了大鼠持久性局灶性脑缺血72h后精制清开灵及其各组分对抗脑缺血损伤的作用以及它们对eNOS表达的影响。方法：以线栓法复制SD大鼠持久性大脑中动脉栓塞（PMCAO）模型。缺血72h后,取出脑组织做冠状切片,1TrC染色计量梗死程度,并以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆内皮细胞凝血因子Ⅷ相关抗原（血管性假血友病因子,vWF）含量。以免疫组织化学染色方法观察大鼠脑组织eNOS的表达情况。并根据免疫组织化学分析的结果,取缺血侧脑组织以免疫印记法验证精制清开灵及其各组分对eNOS表达水平的影响。结果：PMCAO72h,模型组大鼠eNOS蛋白在缺血半暗带的血管内皮细胞表达增加。与模型组动物相比,精制清开灵及其各组分治疗组动物eNOS蛋白的表达明显增加,而脑梗死范围则显著缩小。结论：持久性局灶性脑缺血后,在缺血半暗带血管内皮细胞表达增加的eNOS可能具有重要的代偿作用。精制清开灵及其各组分能够不同程度地促进缺血后半暗带eNOS的表达,这可能是它们阻抑脑缺血损伤的重要机制之一。     

精制清开灵及其组分对中风后大鼠内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的：清开灵是一种治疗脑中风的传统中药复方。精制清开灵是从清开灵衍生出的有效成分复方,既往研究证明,此药具有减轻大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠血管内皮细胞损伤和抑制炎症过程的作用,从而体现出神经保护的效果。而内皮型一氧化氮合酶（eNOS）来源的一氧化氮在脑缺血发作后的病理过程中起到重要的保护作用,是近年药理学研究的热点之一。本实验研究了大鼠持久性局灶性脑缺血72h后精制清开灵及其各组分对抗脑缺血损伤的作用以及它们对eNOS表达的影响。方法：以线栓法复制SD大鼠持久性大脑中动脉栓塞（PMCAO）模型。缺血72h后,取出脑组织做冠状切片,TTC染色计量梗死程度,并以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆内皮细胞凝血因子Ⅷ相关抗原（血管性假血友病因子,vWF）含量。以免疫组织化学染色方法观察大鼠脑组织eNOS的表达情况。并根据免疫组织化学分析的结果,取缺血侧脑组织以免疫印记法验证精制清开灵及其各组分对eNOS表达水平的影响。结果：PMCAO 72h,模型组大鼠eNOS蛋白在缺血半暗带的血管内皮细胞表达增加。与模型组动物相比,精制清开灵及其各组分治疗组动物eNOS蛋白的表达明显增加,而脑梗死范围则显著缩小。结论：持久性局灶性脑缺血后,在缺血半暗带血管内皮细胞表达增加的eNOS可能具有重要的代偿作用。精制清开灵及其各组分能够不同程度地促进缺血后半暗带eNOS的表达,这可能是它们阻抑脑缺血损伤的重要机制之一。     

清开灵注射液治疗家兔脑血肿的实验研究

为探求清开灵注射液治疗中风的机制。以家兔自体血凝块复制脑出血模型，用干湿比重法及原子吸收分光光度计分别检测脑组织水份与Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋、Ｃａ＾＋、Ｍｇ＾２＋含量并且伊文斯蓝观察血脑屏障通透性变化。脑血肿形成后，脑组织水，Ｎａ＾＋、Ｃａ＾２＋，ＥＢ含量明显增加，，Ｋ＾＋，Ｍｇ＾２＋降低，并有过度通气的血气值变化，ＥＢ含量的升高，反映出ＢＢＢ受损，通透性增高。清开灵注射液能显著改善血气异常，降低ＢＢＢ     

安宫清开灵注射液对自发性高血压大鼠脑出血后炎症反应的影响

目的:观察安宫清开灵注射液对胶原酶诱导的自发性高血压大鼠(SHR)脑出血模型脑组织中多环节炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、ICAM-1和NF-κB表达的影响,探讨安宫清开灵注射液阻抑脑出血后炎症反应的作用环节以及作用效果。方法:成年SHR大鼠,雌雄各半,随机分成正常组、模型组、安宫清开灵低剂量组、安宫清开灵中剂量组、安宫清开灵高剂量组、阳性对照组(清开灵注射液)。基底核注射胶原酶法复制大鼠48h脑出血模型。应用免疫组化法检测脑组织中TNF-α、IL-1β、ICAM-1和NF-κB的表达情况。结果:脑出血48h,大鼠脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1以及NF-κB均有不同程度的表达。安宫清开灵中剂量组均能明显阻抑出血后48h脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1和NF-κB表达的增加;安宫清开灵低剂量组可以明显抑制ICAM-1和NF-κB的表达,而对TNF-α和IL-1β的作用不明显;安宫清开灵高剂量组对TNF-α、IL-1β和ICAM-1表达的具有较强的抑制作用。结论:安宫清开灵注射液对抑制脑出血后炎症因子和黏附分子的表达具有良好的作用,从而能够减轻炎性损伤。其中以中剂量组作用效果尤为突出,对脑出血后48h前炎症因子和黏附分子的表达都有显著的抑制作用,可以在多环节干预炎症反应过程、阻抑脑出血后损伤级联反应从而发挥保护神经元的作用。     

小续命汤有效成分组对局灶性脑缺血大鼠的作用

 目的 评价小续命汤有效成分组对局灶性脑缺血大鼠的保护作用。方法 采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血动物模型。通过神经症状评分和倾斜板实验评价大鼠行为学的改变;TTC染色法观察脑缺血范围;分光光度法测定与脑组织一氧化氮合酶（NOS）活性、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活性。结果 与局灶性脑缺血模型组相比较,小续命汤有效成分组可显著改善神经症状障碍,延长倾斜板停留时间,减少脑梗死体积,改善局灶性脑缺血引起的脑组织中MDA含量升高、SOD活性降低及NOS活性增高,但对GSH-px无显著影响。结论 小续命汤有效成分组对局灶性脑缺血具有保护作用,其作用机制可能与调节脑内氧化-抗氧化平衡及降低iNOS活性有关。     

清开灵注射液治疗急性脑卒中疗效观察

目的 评价清开灵注射液治疗急性脑卒中的疗效。方法 把急性脑卒中患者88例随机分成清开灵治疗组58例(脑出血20例，脑梗塞38例)、对照组30例(脑出血12例，脑梗塞18例)。在对照组治疗的基础上加用清开灵注射液40ml静脉滴注，每天1～2次，连用14d。分别在治疗前、治疗后14d进行神经功能缺损评分，观察其临床效果。结果 治疗组的显效率、基本痊愈十显效率、总有效率均显著高于对照组。结论 清开灵注射液能提高急性脑卒中的治愈率，降低致残率、死亡率，安全有效，值得推广应用。     

六黄合剂对胰岛素抵抗大鼠血管内皮细胞的影响

目的观察六黄合剂对胰岛素抵抗(IR)大鼠血管内皮细胞的影响,探讨其保护血管内皮的作用机制。方法健康SD大鼠32只,按体质量随机分为正常组、模型组、罗格列酮组和六黄合剂组,每组8只。应用地塞米松诱导IR大鼠模型,造模同时灌胃给药,罗格列酮组和六黄合剂组分别给予罗格列酮3 mg/(kg.d)和六黄合剂6.3 g/(kg.d)干预,正常组和模型组给予等体积蒸馏水,14 d后应用化学比色法测定大鼠脂代谢指标及血清一氧化氮(NO)的水平,应用透射电镜观察胸主动脉内皮细胞超微结构的变化。结果与模型组比较,六黄合剂组血清三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和游离脂肪酸(FFA)水平明显下降(P<0.01),血清总胆固醇(TC)水平下降(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平升高(P>0.05),血清NO水平明显升高(P<0.01)。电镜观察,IR大鼠胸主动脉内皮细胞超微结构发生明显病理改变。六黄合剂干预后,胸主动脉内皮细胞超微结构明显改善。结论六黄合剂能有效调节IR大鼠血脂水平,增加血清NO含量,改善IR早期大动脉内皮细胞的病理损害。     

清开灵注射液加蓝光照射治疗新生儿黄疸疗效观察

目的 观察清开灵注射液加蓝光照射治疗新生儿黄疸的临床疗效.方法 将583例新生儿黄疸的患儿随机分为两组,对照组241例采用蓝光照射治疗,治疗组342例在对照组治疗基础上静脉滴注清开灵注射液,治疗前、后测定患儿总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL);观察患儿黄疸消退时间及患儿治疗过程中出现的症状.结果 治疗组治疗后TBIL、DBIL低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05):治疗组黄疸症状的改善优于对照组(P＝0.0087),治疗时间短于对照组(P=0.0068).结论 清开灵注射液配合蓝光照射治疗新生儿黄疸有效.     

安宫清开灵对自发性高血压大鼠脑出血模型前炎症细胞因子与黏附分子含量的影响

目的：观察安宫清开灵注射液对胶原酶诱导的自发性高血压大鼠（SHR）脑出血模型脑组织中前炎症细胞因子TNF-α、IL-1β以及血清中黏附分子sICAM-1含量的影响，探讨安宫清开灵注射液阻抑脑出血后炎症反应的作用环节以及作用效果。方法：基底核注射胶原酶法复制大鼠脑出血模型：应用放射免疫法检测脑组织匀浆中TNF-α和IL-1β含量的变化，酶联免疫吸附方法检测血清中sICAM-1含量。结果：脑出血48h和7d，大鼠脑组织匀浆中TNF-α和IL-1β的含量以及血清中sICAM-1含量均显著升高；安宫清开灵注射液各剂量组脑内TNF-α和IL-1β的含量以及血清中sICAM-1含量显著低于模型组（P〈0、01或P〈0．05）。结论：安宫清开灵注射液可以显著抑制前炎症细胞因子TNF-α和IL-1β的生成，以脑出血急性期（出血后24h）的抑制作用较突出，也可以阻抑黏附分子sICAM-1的合成与分泌，并随着用药剂量增加而效应增强的剂量依赖关系。可见安宫清开灵注射液对炎症反应的启动具有显著的阻抑作用。