苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法不同浓度（0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L）的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0μmol/L BaP）升高,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高（P〈0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 更多还原     

硫酸脱氢表雄酮对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响

目的 探讨硫酸脱氢表雄酮（DHEAS）对胰岛β细胞株MIN6葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响。方法 以葡萄糖刺激浓度为2.8 mmol/L和16.7 mmol/L的对数生长期MIN6细胞作为实验对象,分别以1、5、10 μmol/L DHEAS干预10 min和24 h（不同浓度DHEAS组）,以5 μmol/L DHEAS或与10 μmol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486联合干预24 h（DHEAS 和DHEAS+RU486组）,设立空白对照组。ELISA法测定细胞培养上清液中胰岛素分泌量,Real-Time PCR检测细胞胰岛素mRNA表达。结果 干预后10 min和24 h时点,5 μmol/L和10 μmol/L DHEAS 组MIN6细胞培养上清液中的胰岛素分泌量均显著高于空白对照组（P<0.05）;干预后24 h时点,DHEAS+RU486组与DHEAS组MIN6细胞培养上清液中胰岛素分泌量比较差异无统计学意义（P>0.05）,但均显著高于空白对照组（P<0.05）。干预后24 h时点,5 μmol/L和10 μmol/L DHEAS组MIN6细胞胰岛素mRNA表达均显著高于空白对照组（P<0.05）。结论 DHEAS对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌具有促进作用,且其核内信号通路可能不经糖皮质激素受体介导。     

三氧化二砷抑制苯并(a)芘诱导的HeLa细胞细胞色素P450 1A1的表达

目的观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)对苯并(a)芘[B(a)P]诱导的子宫颈癌HeLa细胞的增殖及细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达的影响。方法用7.5μmol/L B(a)P分别与不同浓度的As2O3共同作用于HeLa细胞,MTT法检测As2O3对HeLa细胞增殖的影响,Western blot和实时荧光定量PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法结果显示,随着As2O3浓度增加,各实验组吸光度值逐渐减少,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);As2O3下调B(a)P诱导的HeLa细胞CYP1A1的mRNA和蛋白质的表达,抑制作用显著(P<0.05)。CYP1A1活性检测结果显示,随着As2O3浓度增加,HeLa细胞CYP1A1酶活力逐渐降低,各实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3能抑制B(a)P诱导的HeLa细胞增殖,抑制CYP1A1的表达并降低CYP1A1酶活性且呈现剂量依赖性。     

BaP通过AhR和Nrf2信号通路对HepG2细胞中GSTP1的影响

摘要：目的：探究苯并芘（benzo[a]pyrene,BaP）通过芳香烃受体（aryl hydrocarbon receptor,AhR）和核因子E2相关因子（subcellular localization of nuclear factor?E2-related factor 2,Nrf2）信号通路对HepG2细胞中谷胱甘肽-S-转移酶P1（glutathione S-transferase P1,GSTP1）的影响。方法：将体外培养HepG2细胞分为Control组、BaP（10μmol/L）组、BaP（10μmol/L）+AhR抑制剂（1μmol/L）组和BaP（10μmol/L）+Nrf2抑制剂（1μmol/L）组,BaP组给予10μmol/LBaP培养24小时,抑制剂组给予1μmol/L抑制剂半小时后,加入10μmol/L BaP培养24小时,Western Blot和qPCR实验方法检测各组AhR、Nrf2、细胞色素P450s（cytochrome P450s,CYPs）、血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）及GSTP1基因和蛋白的表达。结果：与Control组相比,BaP组中AhR、Nrf2、GSTP1、CYP1A1及HO-1的mRNA和蛋白表达均升高（P<0.05）;与BaP组相比,BaP+AhR抑制剂组中AhR、GSTP1和CYP1A1的mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）,BaP+Nrf2抑制剂组中Nrf2、GSTP1和HO-1的表达均降低（P<0.05）;与BaP+AhR抑制剂组相比,BaP+Nrf2抑制剂组GSTP1 mRNA和蛋白的表达降低（P<0.05）。结论：BaP通过AhR和Nrf2两条信号通路增加GSTP1的表达,以Nrf2信号通路为主导影响GSTP1的表达。     

白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制。方法 不同浓度的角质细胞生长因子（KGF）诱导人永生角质形成细胞（HaCaT），显微镜观察及四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测HaCaT细胞增殖。选出最佳浓度作用HaCaT细胞复制银屑病模型，采用不同浓度白藜芦醇作用HaCaT细胞，计算半抑制浓度（IC50），根据IC50选出后续实验白藜芦醇的浓度；将银屑病模型细胞分为阴性对照组（30 μg/L生理盐水），2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇组，阳性对照组（5.0 μg/mL维A酸）及空白对照组（未加任何药物），MTT法检测各组银屑病模型细胞的增殖，流式细胞术检测各组银屑病模型细胞的凋亡率，Western blotting检测各组银屑病模型细胞Caspase-3、p-ERK1/2、p-P38蛋白的表达。结果 不同KGF浓度组HaCaT细胞0 h、12 h、24 h、48 h的OD值比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）；②不同浓度组的OD值有差异（P <0.05），40 ng/mL KGF组的OD值高于其他浓度组；③不同浓度组OD值的变化趋势有差异（P <0.05），40 ng/mL KGF组的OD值从24 h开始明显高于其他浓度组。0 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.0 μmol/L、4.0 μmol/L白藜芦醇作用HaCaT细胞24 h后的OD值比较，差异有统计学意义（P <0.05），白藜芦醇浓度升高OD值降低，白藜芦醇可抑制HaCaT细胞增殖，IC50值约5.3 μmol/L。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞24 h、48 h、72 h的OD值比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）；②各组OD值有差异（P <0.05），③各组OD值的变化趋势有差异（P <0.05），从48 h开始，5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇对银屑病模型细胞具有一定的抑制增殖作用。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞的凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.05），5.0 μmol/L、7.5 μmol/L的白藜芦醇对银屑病模型细胞有促凋亡作用。5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组与阴性对照组和空白对照组比较，Caspase-3蛋白相对表达量升高（P <0.05），p-ERK1/2、p-P38蛋白相对表达量降低（P <0.05）。结论 白藜芦醇可能是通过抑制ERK/MAPK和/或P38/MAPK通路发挥作用进而抑制银屑病细胞增殖并促进其凋亡，具体作用机制还有待更深入研究。     

多囊蛋白1基因对人宫颈癌HeLa细胞的抗凋亡作用

目的：研究多囊蛋白1（PC1）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,为进一步阐明PC1对凋亡的作用提供依据。方法：采用PC1基因重组质粒pEGPF-PC1-5TMC和空白对照质粒pEGFP分别转染HeLa细胞,Western blotting法进行验证。采用MTT法分别检测转染组（转染PC1重组质粒）、空白对照组（转染空白对照质粒pEGFP）和正常对照组（正常HeLa细胞）转染后48和72 h时细胞增殖活性,采用TUNEL法检测转染组和空白对照组细胞凋亡率。结果：转染后48和72 h,与正常对照组比较,转染组细胞增殖活性差异无统计学意义（P>0.05）;与空白对照组比较,转染组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）。转染组细胞凋亡率明显低于空白对照组（P<0.01）。结论：PC1基因对人宫颈癌HeLa细胞有抗凋亡作用。     

淫羊藿苷联合地塞米松对人髓核细胞增殖及分泌表达的影响

目的  探讨淫羊藿苷（ICA）与地塞米松（Dex）联合作用对人髓核细胞（hNPs）增殖及聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、II型胶原蛋白（Col2a）、IL-6、IL-8和基质金属蛋白酶（MMP-13）表达的影响。方法  取生长状态良好的hNPs按不同处理因素分为：control组（只含培养基）、ICA组（20μmol/L ICA）、Dex组（0.2μmol/L Dex）、ICA+Dex组（20μmol/L ICA+0.2μmol/L Dex）、IL-1β组（10 ng/ml IL-1β）、ICA+IL-1β组（20μmol/L ICA+10 ng/ml IL-1β）、Dex+IL-1β组（0.2μmol/L Dex+10 ng/ml IL-1β）、ICA+Dex+IL-1β组（20μmol/L ICA+0.2μmol/L Dex+10 ng/ml IL-1β）,各组作用48 h;CCK-8法检测细胞的增殖;Western blot、RT-PCR以及ELISA检测Aggrecan、Col2a、IL-6、IL-8和MMP-13表达。结果  CCK-8结果显示：与control组比较,低浓度的ICA（≤20μmol/L）和Dex（≤0.2μmol/L）单独作用均提高hNPs存活率但差异无统计学意义（P >0.05）。然而,10μmol/L ICA和0.2μmol/L Dex联合用药对hNPs的存活率大于单独用药（P < 0.05）;Western blot、RT-PCR以及ELISA结果表明：与单独用药组相比,ICA和Dex联合作用促进Aggrecan、Col2a蛋白和mRNA表达（P <0.05）;另外,ICA和Dex联合处理抑制IL-1β诱导的hNPs炎症介质IL-6、IL-8的分泌表达（P <0.05）,同时降低MMP-13蛋白、mRNA水平（P <0.05）。结论  ICA与Dex联合作用对促进hNPs增殖、Aggrecan和Col2a表达有效果;同时抑制IL-1β诱导的hNPs炎症介质IL-6、IL-8和MMP-13的表达,为椎间盘退行性病变的药物治疗提供理论依据。

     

紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞生长及其claudin-7表达的影响

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对人宫颈癌HeLa细胞增殖及claudin-7蛋白表达水平的影响.方法 体外培养人宫颈癌 HeLa细胞,采用 MTT法观察不同浓度紫杉醇脂质体（0.01、0.1、1、10、100 μmol/L）对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测HeLa细胞claudin-7蛋白表达水平在不同浓度紫杉醇脂质体作用下的变化.结果 5个浓度的紫杉醇脂质体均能显著抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;Western blot显示HeLa细胞经不同浓度紫杉醇脂质体处理48 h后,随着紫杉醇脂质体浓度的增高,claudin-7蛋白表达逐渐减弱.结论 紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,HeLa细胞claudin-7蛋白的表达在紫杉醇脂质体影响下是下调的.     

人A431皮肤鳞状细胞癌中丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路对P53的调节作用

目的  观察丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（MAPK/ERK）信号通路的活化及抑制对皮肤鳞状细胞癌（SCC）细胞增殖、凋亡情况的影响,探讨MAPK/ERK信号通路与抑癌基因P53在皮肤SCC中的相互作用机制。方法  培养人A431皮肤SCC细胞株,分为低、中、高浓度的MAPK/ERK通路抑制剂（PD98059+DMSO）组及激活剂（IGF+PBS）组、空白对照（DMSO）组。噻唑蓝法检测细胞体外增殖活力,流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡,Western blot检测各组A431细胞中P-ERK、P53蛋白表达。结果  经不同浓度的抑制术PD98059处理A431细胞,细胞增殖受到抑制,呈浓度-效应和时间-效应关系（P <0.05）;经不同浓度的激动剂胰岛素样生长因子（IGF）处理A431细胞,细胞增殖受到促进,呈浓度-效应和时间-效应关系（P < 0.05）。FCM检测结果显示,PD98059作用于A431细胞,细胞凋亡率明显增高,呈浓度-效应关系（P <0.05）;而IGF作用于A431细胞,细胞凋亡率明显降低,呈浓度-效应关系（P <0.05）。Western blot检测结果显示,PD98059处理A431细胞,P-ERK蛋白的表达降低,P53蛋白的表达增强,随着PD98059浓度的增加,P-ERK蛋白明显降低,P53蛋白明显增强（P <0.05）;而IGF处理A431细胞,P-ERK蛋白的表达增强,P53蛋白的表达降低,随着IGF浓度的增加,P-ERK蛋白明显增强,P53蛋白明显降低（P <0.05）;经过Pearson相关性分析,P53与P-ERK的表达呈负相关（P <0.05）。结论  人A431细胞中MAPK/ERK信号通路被IGF激活后,促凋亡因子P53表达降低,细胞增殖能力增强,凋亡能力降低;而该通路受抑制后,促凋亡因子P53表达增高,细胞增殖能力降低、凋亡能力增强。

     

人参皂苷Rg1、甲壳胺和转化生长因子β1人牙周膜细胞增殖和分化功能的作用

目的探讨人参皂苷Rg1、甲壳胺(Chi)和转化生长因子β1(TGF-β1)对原代培养的人牙周膜细胞增殖和分化功能的影响. 方法用原代培养的人牙周膜细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法、酶动力学方法、放射免疫法和流式细胞仪检测人参皂苷Rg1(0.01 μmol/L)、不同浓度Chi(0.05 g/L、 0.1 g/L、 0.2 g/L)、不同浓度TGF-β1(0.5 μg/L、 1 μg/L、 2 μg/L)和单纯DMEM培养液(对照组)对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌和细胞凋亡的影响. 结果①与对照组比较除TGF-β1 (0.5 μg/L、2 μg/L)组和Chi(0.2 g/L)组第7天外,TGF-β1、Chi各浓度组及人参皂苷Rg1组在3、5、7天均能明显增强牙周膜细胞的增殖能力(P<0.05).②TGF-β1、Chi各浓度组及人参皂苷Rg1组细胞裂解液中ALP活性均明显高于对照组(P< 0.05).③ 7天时,除Chi(0.2 g/L)组外,其他各组骨钙素分泌均明显强于对照组(P<0.05);21天时,人参皂苷Rg1(0.01 μmol/L)组明显高于其他各组(P < 0.05).④TGF-β1 (1 μg/L)组、Chi (0.1 g/L)组和人参皂苷Rg1(0.01 μmol/L)组细胞凋亡百分率与对照组比较均明显降低(P< 0.01). 结论与TGF-β1一样,Chi及人参皂苷Rg1有促进牙周膜细胞增殖的作用,能增强人牙周膜细胞ALP活性,增加牙周膜细胞骨钙素的分泌,有降低牙周膜细胞凋亡率的作用.     

碘酸钾和双酚A对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响

目的   观察碘酸钾和双酚A对人甲状腺乳头状癌细胞BHP10-3增殖的影响。方法   采用10-3~10-10mol/L碘酸钾和10-3~10-10mol/L双酚A(BPA),10-7mol/L碘酸钾+10-8mol/L双酚A培养BHP10-3细胞后,采用CCK-8细胞增殖活性法测定细胞增殖,采用流式细胞仪分析甲状腺乳头状癌细胞周期,采用western-blot印迹法和RT-PCR法分别检测细胞增殖周期调控基因（Cyclin D1）在蛋白和mRNA水平的表达。结果   与对照组细胞相比,10-7mol/L碘酸钾组、10-8mol/L双酚A组以及10-7mol/L碘酸钾联合10-8mol/L双酚A组,细胞吸光光度值增加（P<0.05）; G0-G1期细胞比例减少,  S期细胞比例增加(P<0.05);CyclinD1蛋白和mRNA的表达量均增加（P<0.05）。结论   碘酸钾和双酚A在一定浓度范围内可以促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖。     

过氧化氢诱导人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的建立

 目的 通过研究不同浓度过氧化氢(H2O2)作用不同时间对人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激水平的影响,确定建立滋养细胞氧化应激模型的条件。 方法 将HTR-8/SVneo用不同浓度(125、250、500 μmol/L) H2O2分别处理不同时间(1、2、4、24 h)后,采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术分析检测细胞内超氧化物阴离子水平以及细胞凋亡情况;紫外分光光度法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。结果 随H2O2浓度增加及作用时间延长,HTR-8/SVneo细胞存活率逐渐下降,细胞内超氧化物阴离子含量及细胞凋亡率不断增加,细胞培养上清液中SOD活性逐渐降低、LDH含量不断升高。其中在250 μmol/L H2O2作用4 h条件下,SOD活性明显低于对照组(P<0.05),细胞内超氧化物阴离子水平及细胞凋亡率较对照组均显著增加(P<0.05),但LDH漏出量无明显增多(P>0.05),且该条件下细胞有较高的存活率(85.13%)。结论 建立人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的最适条件为250 μmol/L H2O2作用4 h。     

LRIG1在卵巢浆液性囊腺癌细胞对依托泊苷敏感性中的作用研究

目的  探讨亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域基因-1（LRIG1）在卵巢浆液性囊腺癌（SKOV3）细胞株中对依托泊苷敏感性的可能机制。方法  噻唑蓝比色法（MMT）检测不同浓度VP16干预下48 h的SKOV3细胞组、siRNA LRIG1转染SKOV3细胞组、SKOV3/VP16细胞组和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的增殖。平板克隆检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LRIG1 mRNA表达。结果  半抑制浓度（IC50）分别为62.90、115.49、156.50和195.42μg/L,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16的耐药指数分别为1.8、2.5和3.1。SKOV3、siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的克隆率（F =39.338,P =0.000）,细胞的LRIG1 mRNA（F =63.095,P =0.000）和凋亡细胞（F =230.046,P =0.000）明显不同,与SKOV3比较,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加（t =0.026、0.0710和0.125,P =0.042、0.000和0.000）,细胞的LRIG1 mRNA降低（t =0.130、0.525和0.825,均P =0.000）,凋亡细胞减少（t = 12.350、35.506和44.412,均P =0.000）,与siRNA LRIG1转染SKOV3比较,SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加（t =0.044和0.099,P =0.001和0.000）,LRIG1 mRNA降低（t =0.395和0.695,均P =0.000）,凋亡细胞减少（t =23.156和32063,均P <0.05）,与SKOV3/VP16比较,siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加（t =0.055,P =0.000）,细胞的LRIG1 mRNA降低（t =0.300,P =0.000）,凋亡细胞减少（t =8.906,P =0.000）。结论  LRIG1 mRNA影响SKOV3细胞对药物的敏感性,沉默LRIG1的耐药细胞可抑制SKOV3细胞凋亡。

     

雷帕霉素对莱菔硫烷诱导人结肠癌细胞UGT1A同工酶及CYP3A4表达的调控

目的 以人结肠癌Caco-2细胞为模型,观察雷帕霉素 (Rapa) 对莱菔硫烷 (SFN) 诱导葡萄糖醛酸转移酶(UGT) 1A1、UGT1A8、 UGT1A10及细胞色素P450 (CYP) 3A4的调控,探讨Rapa对SFN化学预防效应的影响。方法 实验分为对照组、10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组。透射电镜观察细胞超微结构,Western blotting法测定微管相关蛋白1轻链3 (LC3) 和核因子E2 P45相关因子2 (Nrf2) 的表达,实时荧光定量PCR法测定UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10及CYP3A4 mRNA的表达,免疫荧光法观察Nrf2的核内转位。结果 透射电镜观察到10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组细胞中自噬体及自噬溶酶体的形成;与对照组相比,25μmol/L SFN组、25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组可诱导LC3-II蛋白及UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10 mRNA的表达增加,诱导Nrf2蛋白的表达及核内转位增强,且25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组的作用更显著;而10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组中,CYP3A4 mRNA的表达均受到抑制。结论 Rapa可协同增强SFN对Caco-2细胞自噬效应的诱导;Rapa可能通过上调Nrf2信号通路,使SFN诱导 UGT1A1、UGT1A8和UGT1A10表达增加,进而增强SFN的化学预防效应,同时未影响SFN对CYP3A4转录抑制效应。     

瑞舒伐他汀对晚期内皮祖细胞增生、迁移及凋亡的影响

目的观察不同浓度及不同时间的瑞舒伐他汀(rosuvastatin)对晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增生(proliferation)、迁移(migration)和凋亡(apoptosis)的影响。方法采用密度梯度法从大鼠骨髓获取单个核细胞,培养28 d,通过FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色鉴定为正分化晚期EPCs。以不同浓度的瑞舒伐他汀(0.001、0.01、0.1、1.0、10、100μmol/L)和晚期EPCs共培养24 h,分别采用MTT比色法、Transwell小室及Tunel法检测其增生、迁移及凋亡功能;以浓度为0.1μmol/L的瑞舒伐他汀与晚期EPCs分别共培养1、3、6、12、24、48 h,应用同样方法检测其增生、迁移及凋亡功能。结果体外培养7 d时,细胞呈典型长梭形;28 d时,呈铺路石样,并可摄取FITC-UEA-I和DiI-acLDL。不同浓度的瑞舒伐他汀组与对照组相比均可明显地改善晚期EPCs的增生(P<0.05)、迁移(P<0.05)及凋亡(P<0.05)功能,且浓度为0.1μmol/L的瑞舒伐他汀改善细胞功能最强(P<0.05)。当瑞舒伐他汀浓度为0.1μmol/L、共培养不同时间后,与对照组相比可增强晚期EPCs的增生(P<0.05)、迁移(P<0.05)及抗凋亡(P<0.05)功能。结论瑞舒伐他汀能够提高晚期内皮祖细胞的增生、迁移功能,减少细胞的凋亡,且呈浓度及时间依赖性。     

HDAC1 expression and effect of curcumin on proliferation of Raji cells

Summary Histone deacetylase (HDAC₁) has a high expression in many cancer cells and curcumin can inhibit the growth of cancer cells. This paper was designed to investigate the expression of HDAC₁ of Raji cells and the effect of curcumin on their proliferation and apoptosis. Raji cells were treated with 3. 125–50 μmol/L curcumin for 8–48 h and the growth inhibition rates of Raji cells were measured by MTT. The expression of HDAC₁ on Raji cells were examined by mRNA, Western blot at 24 h various concertrations (1.6–50 μmol/L). Curcumin could selectively inhibit the proliferation of Raji cells in a dose and time dependent manner, with the inhibition rate being 52.47%–82.18% (P<0.01). The up-regulation of HDAC₁ expression was observed within 24 h after the treatment with curcumin as shown by RT-PCR and Western blot. With the increase of concentration, the expression was down-regulated in a dose dependent manner. It is concluded that the expression of HDAC₁ plays an important role in the proliferation and apoptosis of Raji cells and curcumin can inhibit the growth of Raji cells at various concentrations and promote the apoptosis of Raji cells. WU Qing, female, born in 1970, M. D., Ph. D. This project was supported by a grant from the National Natural Sciences Foundation of China (No. 30271672).     

心肾综合征中硫酸吲哚酚对巨噬细胞吞噬氧气型低密度脂蛋白的诱导作用的研究

目的  探讨硫酸吲哚酚（IS）对RAW264.7巨噬细胞吞噬氧气型低密度脂蛋白（ox-LDL）的诱导作用及其作用机制。方法  0、10、50、100、200和400μmol/L IS处理RAW264.7细胞24 h，采用CCK-8法测定RAW264.7细胞存活率，流式细胞术测定RAW264.7细胞的Dil标记氧化型低密度脂蛋白（Dil-ox-LDL）吞噬量。200μmol/L IS处理RAW264.7细胞0、12、24、36和48 h，测定RAW264.7细胞存活率和Dil-ox-LDL吞噬量。IS组RAW264.7细胞用200μmol/L IS处理24 h，UO126+IS组RAW264.7细胞以5μmol/L UO126预处理2 h后再200μmol/L IS处理24 h，测定非处理组、IS组和UO126+IS组RAW264.7细胞存活率和Dil-ox-LDL吞噬量，并采用蛋白质印迹法（Western blot）检测在IS刺激15 min时的ERK1/1蛋白表达情况。结果  IS对RAW264.7细胞存活率的浓度效应和时间效应检测中，不同组间比较差异无统计学意义（P >0.05）。Dil-ox-LDL吞噬量与IS浸润浓度及处理时间均呈正相关（P <0.01）。IS组的Dil-ox-LDL吞噬量和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于非处理组（P <0.01）。UO126+IS组的Dil-ox-LDL吞噬量略低于非处理组，但差异无统计学意义（P >0.05）；磷酸化ERK1/2蛋白表达量大幅低于非处理组，差异有统计学意义（P <0.01）。UO126+IS组同IS组比较，Dil-ox-LDL吞噬量和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均呈现大幅降低（P <0.01）。  结论  IS可在体外直接诱导RAW264.7巨噬细胞吞噬ox-LDL，该效应经由活跃MAPK信号转导通路实现，且随IS浓度升高和浸润时间延长而增强。

     

AEG-1表达下调对非小细胞肺癌A549细胞增殖和对顺铂敏感性的影响

目的探讨下调AEG-1表达对非小细胞肺癌A549细胞增殖以及其对顺铂敏感性的影响。方法采用siRNA技术,下调非小细胞肺癌A549细胞AEG-1基因的表达,反转录PCR和免疫细胞化学检测AEG-1表达抑制程度。通过MTT增殖实验、平板克隆形成实验检测AEG-1表达下调对细胞增殖的影响。将转染后的细胞暴露于不同浓度的顺铂中作用48h,通过MTT实验检测AEG-1表达下调后细胞对顺铂敏感性变化。结果 AEG-1表达下调后,细胞增殖受到抑制,48h和72h的抑制率分别达到54.6%和59.7%;细胞克隆形成能力下降,AEG-1表达下调组克隆形成数较阴性对照组降低60.2%;实验组和对照组的IC50分别为4.8μmol/L和20.4μmol/L。结论下调AEG-1基因表达可明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性。     

Expression of macrophage inflammatory protein 1α in the endothelial cells exposed to diamide

Summary In order to study whether the endothelial cells (ECs) with lipid peroxidation induced by diamide can express and secrete macrophage inflammatory protein 1α (MIP-1α), the expression of MIP-1α protein in the cells was detected by cell enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and that of MIP-1α mRNA was determined by cell in situ hybridization and nuclease S1 protection assay after the ECs were exposed to different concentrations of diamide for 4 h. The chemotactic activity of MIP-1α was tested by micropore filter method using modified Boyden chambers. Cell ELISA showed that the expression of MIP-1α protein in endothelial cells exposed to 1 μmol/L, 5 μmol/L and 10 μmol/L diamide was 1.9-fold, 2.3-fold and 1.7-fold respectively as much as that in the control cells, which was statistically significant by analysis of variance. In situ hybridization revealed that the mRNA expression of ECs treated with 1 μmol/L, 5 μmol/L and 10 μmol/L diamide was 1.3-fold, 3.0-fold and 1.7-fold as much as that in the control group, which had statistical significance (F=188. 93,P<0.01). The mRNA expression in 5 μmol/L dimide treated ECs, measured by nuclease S1 protection assay, was 3.4-fold as much as that in the control group (t=8.70,P<0.05). Chemotactic response (99.50±4.31 μm) to the culture medium conditioned by 5 μmol/L diamide treated ECs, which was stronger than that (66.47±3.25 μm) conditioned by the ECs (F=404.31,P<0.05), was significantly decreased (F=192.25,P<0.05) after adding MIP-1α antibody. It suggests that diamide, a lipid peroxidation inducer, could stimulate ECs to produce high level of MIP-1α, and might play an important role in atherogenesis by promoting the migration of peripheral blood monocytes into arterial intima. YANG Limin, female, born in 1973, M. D., Ph.D. This project was supported by a grant from National Natural Sciences Foundation of China (No. 39730220).