麝黄消瘤汤诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)凋亡的研究

目的:研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)的诱导凋亡作用.方法:制备含药血清,孵化人肝癌细胞系(Bel-7402),用电子显微镜观察法、荧光显微镜观察法研究凋亡细胞超微结构,用流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图及凋亡率.结果:电子显微镜及荧光显微镜下,麝黄消瘤汤含药血清诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)出现凋亡征象,最大凋亡率为50.96%.流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图上出现亚二倍体峰,细胞周期分布频率与对照组有显著区别(P≤0.05).结论:麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)有显著的诱导凋亡作用.     

麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系的抑制增殖作用研究

目的　研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系 (Bel- 74 0 2 )的抑制增殖作用。方法　制备含药血清 ,孵化人肝癌细胞系 (Bel- 74 0 2 ) ,用MTT比色法、倒置相差显微镜观察法及PCNA(增殖细胞核抗原 )免疫组化染色法等方法研究不同浓度的麝黄消瘤汤含药血清 ,经过不同作用时间对人肝癌细胞系的抑制增殖作用。结果　麝黄消瘤汤含药血清对人肝癌细胞系有明显杀伤作用 ,最大杀伤率达 98.4 5 % (含药血清浓度为 30 % ,孵化 72h) ;可明显降低人肝癌细胞系PCNA阳性细胞率 ,含药血清浓度 2 0 %、孵化 72h后PCNA阳性细胞率为 97.32 %。结论　麝黄消瘤汤对人肝癌系有显著的抑制增殖作用     

麝黄消瘤汤对人肝癌细胞多药耐药性逆转作用的实验研究

目的:通过观察麝黄消瘤汤对细胞内阿霉素浓度、细胞膜转运蛋白(P-gp)表达以及多药耐药基因表达的影响,探究其逆转人肝癌细胞系耐药的分子生物学机制。方法:制备麝黄消瘤汤含药兔血清,配制成15%、20%、25%、30%等不同浓度,培养人肝癌细胞系(Bel-7402),测定麝黄消瘤汤含药兔血清干预前后阿霉素诱导的细胞半数致死量,计算耐药倍数及逆转耐药倍数;应用荧光分光光度计检测细胞内阿霉素浓度,以流式细胞仪检测Pgp表达,以RT-PCR技术检测MDR1mRNA表达。结果:Bel-7402ADR细胞的耐药倍数约为93.5倍。加入20%含药血清后,其IC50降低为9.3μg/ml,由此计算出麝黄消瘤汤含药血清对Bel-7402ADR细胞的增敏倍数为8.3倍;不同浓度的含药血清作用均可降低Bcl-7402细胞的P-gp阳性细胞率,且呈明显的量效关系,与对照组比较有显著意义;麝黄消瘤汤含药血清可抑制人肝癌细胞中MDR基因的表达,且以20%含药血清浓度对MDR的抑制效果最突出,抑制作用随着作用时间的延长而增强,具有时间依赖关系。结论:麝黄消瘤汤能通过提高肿瘤细胞内化疗药物浓度,降低细胞膜转运蛋白的表达,下调多药耐药基因的表达,从而达到逆转人肝癌细胞多药耐药性产生的作用。     

姬松茸多糖通过增强小鼠脾淋巴细胞功能诱导Bel-7402细胞凋亡

目的：探讨姬松茸多糖（ABP）对Bel-7402细胞凋亡的影响及其机制。方法：制备ABP与小鼠脾淋巴细胞共培养上清（ABP-SL-CM），作用于Bel-7402细胞，流式细胞仪分析诱导凋亡情况以及p53基因的蛋白表达；透射电子显微镜观察细胞形态学变化。结果：不同浓度的ABP-SL-CM能诱导Bel-7402细胞凋亡，流式细胞仪检测凋亡率高达21.68%，DNA直方图上可见到亚二倍体峰，透射电子显微镜显示细胞凋亡的典型形态学变化；p53蛋白的荧光强度值组间比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：ABP通过增强小鼠脾淋巴细胞活性诱导Bel-7402细胞凋亡，但其诱导凋亡机制未见与p53基因蛋白表达有关。     

枸杞多糖对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及凋亡的研究

目的 研究枸杞多糖诱导人肝癌细胞Bel-7402的凋亡作用及其作用机制.方法 体外培养的人肝癌细胞Bel-7402,细胞经不同剂量枸杞多糖(LBP)处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪分析LBP对Bel-7402细胞周期和凋亡的影响,用RT-PCR技术检测Bel-7402细胞SurvivinmRNA的表达.结果 LBP可明显抑制人肝癌细胞Bel-7402的生长,并能诱导Bel-7402细胞凋亡,凋亡率(%)分别为(6.20±0.62),(12.80±0.47)和(18.10±0.70),与对照组比较,差异有非常显著性(P<0.01);各剂量药物处理组的肿瘤细胞Survivin mRNA表达水平均明显降低(P<0.01).结论 枸杞多糖可抑制Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,该作用可能与下调细胞Survivin 表达有关.     

消瘤平移合剂含药血清诱导肝癌H-7402细胞凋亡的实验研究

目的：观察消瘤平移合剂含药血清对肝癌H－7402细胞凋亡的诱导作用。方法：运用血清药理学方法，选择不同浓度的含药血清与人肝癌H－7402细胞共同孵育，于不同时间观察，并与空白血清作对照。结果：消瘤平移合剂含药血清可显著抑制H－7402细胞的增长；H－7402细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变，流式细胞仪检测可见亚G1峰，凋亡呈含药血清浓度、时间依赖性特点，对照组及5％、10％含药血清作用24h，其凋亡率分别为0．49％、5．58％、8．46％，48h凋亡率分别为0．83％、11．58％、14．25％；bcl-2基因检测显示bcl-2基因表达受抑。结论：消瘤平移合剂可通过诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其临床抗肿瘤、抗转移的作用。     

水红花子不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖抑制作用的研究

目的：观察水红花子不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402生长的抑帝】作用,筛选其有效作用部位。方法：采用系统溶剂法制备水红花子不同提取物,MTT法观察水红花子不同浓度的各提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖的的抑制作用;通过光学显微镜、透射电镜观察凋亡细胞的形态学及超微结构的改变,并用流式细胞仪检测其乙酸乙酯提取物对该细胞周期分布及凋亡的影响。结果：水红花子石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取物对人肝癌细胞Bel-7402均有-定的抑制作用,其中乙酸乙酯提取物抑制作用最明显,呈现较好的剂量-效应曲线;流式细胞仪检测发现水红花子乙酸乙酯提取物可阻滞Bel-7402细胞周期于G0／G1期,诱导肿瘤细胞凋亡。结论：水红花子乙酸乙酯提取物可能是其抗肝癌作用的有效部位之-。     

姬松茸多糖抗肿瘤作用研究

目的:研究姬松茸多糖(ABP)对肝癌细胞生长的抑制作用。方法:采用MTT法检测ABP体外与肝癌细胞Bel-7402作用48小时的直接细胞毒作用、ABP与小鼠脾细胞共培养上清(ABP-SL-CM)体外与Bel-7402细胞作用48小时的抑制作用;用流式细胞仪分析诱导肿瘤细胞凋亡情况;腹腔注射给药观察对移植性H22小鼠腹水型肝癌模型的抑瘤率。结果:ABP体外无直接细胞毒作用;不同浓度的ABP-SL-CM体外对Bel-7402细胞生长均有抑制作用,其中低剂量组(ABP-SL-CM-L)作用最显著,抑制率为39.65%;诱导Bel-7402细胞凋亡率为21.68%,DNA直方图上可见到亚二倍体峰;体内实验对肿瘤的生长的抑瘤率为45.83%。结论:姬松茸多糖对肝癌细胞生长有一定的抑制作用,其作用机制不是直接的细胞毒作用,而是通过增强小鼠的细胞免疫功能诱导肿瘤细胞凋亡实现的。     

消瘤汤含药血清诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡的MTT法检测

消瘤汤临床应用于肝癌、结肠癌等肿瘤的治疗取得了满意的疗效。为了明确消瘤汤对人肝癌细胞凋亡的影响,本实验借鉴第一军医大学分子生物学研究所冯春琼等关于MTT染色法用于检测细胞凋亡的可行性研究方法,用于本实验,同期还采用形态学检测（光学显微镜观察）法检测消瘤汤含药血清对人肝癌细胞Bel--7402凋亡的影响,两种方法结果一致。现笔者将通过MTT法检测消瘤汤含药血清对人肝癌细胞Bel--7402凋亡的影响介绍如下。     

四氢大麻酚THC抑制肝癌细胞Bel-7402增殖和诱导其凋亡的研究

目的探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖凋亡的作用,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组,不同剂量大麻受体激动剂delta-tetrahydrocannabinol(THC)处理组。MTT法测定THC对Bel-7402细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法和流式细胞技术检测分析各组细胞凋亡情况;Western blot法检测大麻受体CB1、CB2、Caspase-3和c-myc的表达水平,分光光度法检测细胞的活性。结果 Bel-7402细胞中大麻受体CB1、CB2较L02正常肝细胞明显增强。THC能抑制Bel-7402细胞增殖,诱导Bel-7402细胞凋亡,上述效应具有浓度依赖性。THC能抑制Bel-7402细胞中c-myc的表达,诱导Bel-7402细胞中的Caspase蛋白表达和活性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肝癌细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspase和c-myc蛋白表达相关。     

三叶青黄酮诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞诱导凋亡的作用.方法 通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测三叶青黄酮对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析三叶青黄酮对肝癌细胞的诱导凋亡作用.结果 三叶青黄酮能显著的抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,并具有浓度依赖性.光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰.结论 三叶青黄酮对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,有抗肝癌的药用价值.     

半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用

目的观察并比较半夏蛋白对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法应用流式细胞技术,检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用,并观察了其诱导凋亡作用的量-效关系。结果60%硫酸铵沉淀蛋白没有明显诱导Bel-7402细胞凋亡的作用,而30%硫酸铵沉淀蛋白有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。30%沉淀进一步分离结果显示,只有0.1 mol/L NaCl洗脱峰有一定诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白有一定的诱导Bel-7402细胞凋亡作用,其主要成分可能存在于总有机酸部位。     

复合中药多糖对人肝癌Bel-7402细胞株抗癌作用研究

目的：探讨复方中药多糖对人肝癌Bel-7402细胞株的影响。方法：采用T淋巴细胞转化试验观察复合多糖对人肝癌小鼠细胞,屯疫功能的影响;采用MTT法观察复合多糖对Bel-7402株的细胞增殖抑制;采用流式细胞仪观察复合多糖对Bel-7402株细胞凋亡的影响。结果：复合多糖为1．5、0．75、0．25g,kg剂量时可提高Bel-7402小鼠的淋巴细胞转化功能;复合多糖在40、20mg／L浓度时对Bel-7402细胞株增殖具有抑制作用;复合多糖浓度在40、200、10mg／L时作用24、48、72h使Bel-7402株细胞凋亡率增加。结论：复合多糖可提高Bel-7402小鼠的淋巴细胞转化功能;对Bel-7402细胞株增殖具有抑制作用;使Bel-7402株细胞凋亡率增加,并呈现时间、浓度依赖性。     

绞股蓝总皂苷对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响.方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402 DNA损伤的影响;RT-PCR技术从分子水平上检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用机制.结果:100 ～400 μg· mL-1的Gyp对人肝癌细胞Bel-7402增殖生长有抑制作用,Gyp(182 μg·mL-1)作用4,8,12,16,24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤,12h时DNA损伤最大,达到(81.15±14.23)％,且有时间依赖性;Gyp组细胞caspase-8大量表达,对照组细胞无表达.结论:Gyp能抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖且促进其凋亡,其作用机制与DNA损伤以及caspase-8的大量表达有关.     

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。     

犀黄丸诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

观察犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步的探讨,目的:研究犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨.方法:犀黄丸含药血清对肝癌细胞生长的影响,检测对肿瘤Bel-7402杀伤率.在用不同浓度犀黄丸含药血清作用Bel-7402细胞不同时间后,用TUNEL法检测凋亡,用SASB法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:犀黄丸含药血清能明显抑制Bel-7402细胞生长,其肿瘤细胞Bel-7402杀伤率最高达75%,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).TUNEL法显示,细胞凋亡率明显提高,与对照组比较有显著性差异;Bel-7402细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.     

华蟾素对人肝癌细胞Bel-7402细胞增殖及周期的影响

目的:观察华蟾素注射液对人肝癌Bel-7402细胞增殖及周期的影响.方法:将不同浓度的华蟾素注射液作用于Bel-7402细胞,应用噻唑蓝还原法(MTT比色法)检测华蟾素注射液对Bel-7402细胞增殖的影响;应用流式细胞术(FCM)检测Bel-7402细胞周期分布.结果:华蟾素注射液可以抑制Bel-7402细胞增殖,其抑制作用与作用时间和剂量呈正相关,并可使细胞阻滞于G2/M期.结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌细胞Bel-7402的增殖,并可使细胞阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.     

大蒜多糖对人体肝癌BEL-7402的体外抑制作用

目的 探讨大蒜多糖(Garlic Polysaccharide,GP)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用.方法 以10,30,100,300 μg/ml 的 GP 作用于体外培养的BEL-7402 细胞,并作用不同时间,通过 MTT 法检测 GP 对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT 实验显示 GP可抑制 BEL-7402 细胞的生长,呈时间及浓度依赖性,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,流式细胞仪可检测到 BEL-7402 细胞凋亡率明显增加.结论 GP 能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌 BEL-7402 细胞的生长.     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡及Fas和FasL表达的影响

目的：观察扶正抑瘤颗粒含药血清诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的作用和对细胞Fas、FasL表达的影响．方法：应用血清药理学方法，用不同剂量的含药血清与小氟肝癌细胞在体外共同孵育后，应用相差显微镜，流式细胞仪、电子显微镜对肿瘤细胞的生长和凋亡进行观察，用SABC法检测H22细胞Fas和FasL的表达结果：小鼠肝癌H22细胞经含药血清作用后，发生明显的形态学改变，相差显微镜下可见细胞体积缩小，折光性增强，染色质浓缩，核浆比例增大，密度增高，胞浆出现颗粒样物质。电镜下可见明显的凋亡形态变化，流式细胞仪可测到凋亡峰；SABC法显示，扶正抑瘤含药血清可上调小鼠H22细胞Fas的表达，而对FasL表达的影响不明显结论：扶正抑瘤颗粒能诱导H2：细胞发生凋亡，其机制可能与其上调H22细胞Fas的表达有关，     

四藤方对Bel-7402细胞增殖和凋亡作用研究

目的:观察清热解毒中药-四藤方对肝癌细胞Bel-7402增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度四藤方处理人肝癌细胞Bel-7402、人肝细胞HL-7702,WST-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态变化,Western Blot法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活化。结果:与对照组比较,四藤方对人肝细胞HL-7702增殖无明显影响;100～400μg.mL-1四藤方作用24 h可显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,促使细胞Bel-7402凋亡,呈现细胞凋亡形态,并可活化Bel-7402细胞caspase-3。结论:四藤方可以抑制Bel-7402细胞增殖,促Bel-7402细胞凋亡,并可能与活化caspase-3相关。