抗人IgG结合型Lambda McAb和抗人IgG McAb的鉴定

SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞和经人IgG的Fab抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,其融合率为97.22％。用微量ELISA和PHA试验检测抗体,筛出7个亚克隆杂交瘤细胞株,对其中的C31.10和C31.6株的鉴定结果为:用人IgG作抗原,两个McAb的PHA效价均为1∶16000～1∶32000,被动血凝抑制的抑制率随抗原量而增加,两者呈线性关系,证明它们对人IgG特异;用含2～3％PEG-6000的琼脂糖双扩散试验,C31.JoMcAb与IgG,Lambda型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及正常人血清呈阳性反应,但不与IgA、IgM、IgD、     

抗人IgA单克隆抗体的定鉴

人 IgA免疫的 BALB/C 鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,以ELISA和PHA方法检测抗体,建立了两株对 IgA 的单克隆杂交细胞林39-1,2-9。本株单克隆抗体不与 IgG、IgM、κ及λ抗原反应,是对α链特异的,两株单克隆抗体分别属鼠 IgG2b和 IgG1亚类。     

分泌抗人IgG重链单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用人IgG免疫的BALB/C小鼠脾细胞与NS-1鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇1000作用下融合,并经克隆后获得了4株抗人IgGMcAb的杂交瘤细胞(1B3,2D5,2A4,2B6)。用ELISA和被动血凝方法测定培养物上清,含有较高滴度的抗体含量。用琼脂免疫双扩散方法,证明它仅与人IgG发生反应,产生透明沉淀线。被动血凝抑制试验,抑制效价与所加的     

抗人载脂蛋白B单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及应用

用人血清分离纯化的载脂蛋白B(Apo B)作为抗原免疫BaLE/C小鼠,取脾脏制成脾细胞悬液与SP2/O小鼠骨髓瘤细胞融合,融合率为19.3％。融合后检测抗体,经第二次亚克隆培养,抗体阳性率已达100％。杂交瘤细胞上清液效价为1:256,腹水效价为8×10~(-6),经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,此纯化的单克隆抗体显示单一区带。经免疫电泳和免疫扩散法证实此免疫球蛋白属IgG2b。与ApoA_Ⅰ、A_Ⅱ、Cs、E及人血清白蛋白均无交叉反应。比较用单克隆抗体法与浊度法测定血浆ApoB水平的结果时,发现它们之间呈显著相关性(r=0.85)。     

分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人A型红细胞作为抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞杂交。从五批细胞融合中选取五个克隆细胞株,其中一株命名C_(11)细胞株,经七次克隆化培养,体外传代培养达八个多月,生长良好,继续分泌单克隆抗体。其单克隆抗体与不同血型红细胞(凝集法)和正常人外周血T、B淋巴细胞以及三个正常人B淋巴母细胞系补体依赖微量细胞毒方法作交叉试验,结果C_(11)细胞株产生的单克隆抗体只对A型红细胞发生反应与淋巴细胞抗原亦无交叉反应。     

抗人IgA McAb的鉴定

用人IgA免疫BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0-Ag 14融合,测定99个融合孔,抗体阳性者10孔。其中2个经克隆获得代表株39-1,2-9。对后者所分泌的McAb及杂交瘤细胞免疫小鼠的腹水,进行了特异性和纯度鉴定。被动血凝抑制试验证明,2个McAb均可被抗原IgA所抑制,抑制率与抗原量成正比;用含2％PEG-6000的琼脂免疫双扩散试验,39-1McAb和免疫抗原IgA产生一条沉淀线,     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

抗人IgG重链McAb和抗人IgG亚类限制性McAb的鉴定

本文对4株针对人IgG重链杂交瘤细胞株(1B3,2D5,2A4和2B6)所分泌的McAb用琼脂糖免疫双扩散试验及ELISA试验分析,均证实它们是针对人IgG上的三个不同抗原决定簇;用人IgG亚类Ig分析,证明1B3 McAb可与IgG所有的4个亚类反应,而其它3种McAb为IgG亚类限制性的McAb,2B6和2D5不与IgG4反应,称缺-IgG4 McAb,2A4不与IgG3反应,称缺-IgG3 McAb。     

抗狂犬病疫苗单克隆抗体的制备和初步鉴定

用狂犬病疫苗为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/O融合,经过培养、克隆、ELISA鉴定,筛出3株分泌抗狂犬病疫苗单克隆抗体细胞株。双扩散结果证明:3株细胞均分泌IgG1。     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。     

两个分泌抗小鼠T淋巴细胞单克隆抗体杂交瘤细胞亚株的建立

用C3H小鼠胸腺细胞免疫的大鼠脾细胞分别与两株小鼠骨髓瘤细胞(8P2/0和NS-1)融合,选择出两个杂交瘤细胞孔连续用有限稀释法进行克隆化,获得了50个亚克隆细胞培养物。对其中两个亚克隆细胞培养上清液的生物学特性作初步分析表明:(1)它能在补体参与下杀伤多种品系小鼠的胸腺细胞(>90％)、淋巴结细胞(约60％)和脾细胞(约30％);(2)用间接荧光法证实它与多种品系小鼠胸腺细     

抗小鼠T淋巴细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用C3H小鼠胸腺细胞免疫的Wistar大鼠脾细胞分别与两株小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O和NS-1)融合,选择两个具有分泌抗小鼠T细胞单克隆抗体(McAb)阳性孔的杂交瘤细胞,用有限稀释法连续进行3次克隆化,获得50个分泌阳性McAb的亚克隆杂交瘤细胞。对其中两个亚克隆细胞培养上清液的生物学特性进行分析。结果表明:(1)它能在补体参与下杀伤多种品系小鼠的胸腺细胞(>90％)、淋巴结细胞(约60％)和脾细胞(约30％);(2)用间接荧光法证实它与多种品系小鼠胸腺细胞、淋巴结细胞和脾细胞结合的百分率与上述补体依赖细胞毒试验的结果一致;(3)用细胞培养上清液加补体共同处理小鼠淋巴结和脾脏细胞后,受处理的细胞失去对刀豆素A(ConA)的应答反应而保留对脂多糖(LPS)的应答能力。初步认为这两个亚克隆杂交细胞培养物所分泌的McAb是针对小鼠T淋巴细胞表面抗原的。     

小鼠抗食蟹猴IgG单克隆抗体的制备

目的 制备抗食蟹猴、恒河猴等非人灵长类实验动物免疫球蛋白二级抗体,开展对其传染病血清学快速诊断方法的建立.方法 采用饱和硫酸铵盐析、Agarose-Protein G亲和层析技术,从食蟹猴血清中提纯IgG.经SDS-PAGE电泳鉴定,采用常规法免疫C57BL/6小鼠,三次免疫后取脾细胞与Sp2/0-Agl4骨髓瘤细胞通过PEG4000融合制备杂交瘤细胞,利用间接ELISA、Western blot等方法进行筛选、鉴定.结果 得到5株阳性杂交瘤,分别命名为2B6、2B7、2D9、3B2、5E4,并且5株杂交瘤分泌的抗体均与恒河猴的IgG或血清发生交叉反应,而与其他物种如东北虎、犬等动物的IgG或血清无交叉反应.结论 5株杂交瘤产生的单克隆抗体(McAb)具有较好免疫活性,且能长期、稳定地分泌抗体.此项研究工作为后续研究食蟹猴、恒河猴传染病血清学诊断方法奠定基础.     

两个新的抗人小细胞肺癌单克隆抗体的制备及其应用研究

用人小细胞肺癌细胞系免疫BALB/C小鼠。免疫脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株分泌抗人小细胞肺癌表面相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞系,2D6和2F1。经ELISA测定,它们与人小细胞肺癌细胞呈强阳性反应。与肺腺癌、肺鳞癌、食管癌、喉癌、人白血病细胞系(molt4)、Hela细胞系及人周血单核细胞均呈弱反应。~(120)Ⅰ标记的抗体在人小细胞肺癌裸鼠异种移植模型上的放射免疫显像表明,在72h时放射标记物在瘤区高度浓集。提示,单克隆抗体对人小细胞肺癌具有相当高特异性和亲和力。对这两个单克隆抗体的其他特性及临床应用前景正在研究中。     

抗登革热Ⅱ型病毒蛋白单克隆抗体的若干特性

1983年,我室建立了两株能分泌抗登革热Ⅱ型(DEN-2)病毒单克隆抗体(MCAb)的杂交瘤细胞株。本文进一步分析了这两株McAb的若干特性。包括①两株McAb与DEN-2病毒感染的C6/36细胞裂解物进行双向免疫抗散,形成融合的沉淀线;②两株McAb都能沉淀DEN-2病毒感染的C6/36细胞裂解物中的分子量约为60K的抗原;③这两株McAb能抑制由蔗糖密度梯度离心纯化的DEN-2病毒的红细胞凝集性;④对DEN-2病毒感染的C6/36细胞作间接免疫荧光染色,呈膜抗原染色阳性。这些结果表明,与这两株McAb结合的抗原决定簇存在于DEN-2病毒的同一种蛋白上,可能是DEN-2病毒的囊膜糖蛋白V_3。同时证明这两株McAb能保护小白鼠免受DEN-2病毒的致死性感染;能有效地抑制DEN-2病毒在C6/36单层细胞中产生的融合细胞病变。此外,用火箭电泳,分析了在感染的C6/36细胞中,McAb针对的DEN-2病毒抗原的合成动态。     

血清γ球蛋白种间交叉反应抗原的单克隆抗体的制备

作者用人γ球蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,获得两株抗γ球蛋白种间交叉反应抗原的单抗杂交瘤细胞系(1B_(11)和2A_2)。鉴定表明,1B_(11)能识别IgG,猪γ球蛋白和兔γ球蛋白:2A_4所识别的抗原     

人MR1/IgG1 Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测

目的 构建MR1/IgG1 Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1 Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法 从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业化合成MR1胞外段和IgG1 Fc融合基因的全序列基因MR1/IgG1 Fc,与β2m基因重组构建pFastBac^TM Dual+[β2m+MR1/IgG1 Fc]表达载体;利用Bac-to-Bac昆虫表达系统表达MR1/IgG1 Fc二聚体融合蛋白,并通过双抗体夹心ELISA、Western blot及流式细胞术进行检测。建立MR1/IgG1 Fc二聚体加载的人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cells, aAPCs),即MR1 aAPCs,提呈大肠埃希菌(DH5α)来源的代谢物,与人外周血单个核细胞共培养,检测MAIT细胞的活化和增殖水平。结果 经PCR及测序鉴定证实pFastBac^TM Dual+[β2m+MR1/IgG1 Fc]载体中MR...     

人单克隆抗体的制备

制备人单克隆抗体(以下简称单抗)涉及EB病毒转化技术、抗原特异的B淋巴细胞的6一硫代鸟傈吟(6一TGr)抗性人浆细胞瘤或淋巴母细胞与免疫的人淋巴细胞融合技术,或两者相结合。 EB病毒转化抗原待异B细胞的方法最早由Steinitz等于1977年提出,EB病毒为多克隆刺激剂,可使少数抗原特异B细胞前体融合克懂扩增,带有EB病毒受体的小B淋巴细胞,体外经EB病毒感染     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

用O型人红细胞免疫的Balb/c小鼠脾细胞和NS--1骨髓瘤细胞融合、克隆后,获得两株杂交瘤细胞株。两株细胞分泌的单克隆抗体都是IgG_s亚类。文中对此类抗体的特性进行探讨。吸收试验表明,这两种单克隆抗体并不是和红细胞H抗原反应,但可能是同ABO各型红细胞上一种共同抗原反应。     

基因重组人睫状神经营养因子单克隆抗体的缺备及初步鉴定

目的 制备基因重组人睫状神经营养因子（rhCNTGF)单克隆抗体，方法 利用rhCNTF免疫BALB/C小鼠，取其脾细胞与小鼠NS-1骨髓细胞融合，制备3株抗rhCNTF的单克隆抗体，分别命名为CA2、CA6和BB11。结果 三株抗体类型均为IgG2a，免疫印迹试验证明为特异性抗CNTF的单克隆抗体；抗体相加试验表明三株单抗是针对CＮＴＦ两个不同的抗原决定簇。