肝细胞癌发生中丙型肝炎病毒NS3蛋白对诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 :研究肝细胞癌 (HCC)及其癌旁肝组织 (PCLT)中丙型肝炎病毒 (HCV)NS3 蛋白对诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA表达的影响 ,以探讨其在HCC发生中的作用。方法 :利用SP免疫组化和原位杂交技术检测 5 2例HBV(- )的HCC及其PCLT中HCVNS3 蛋白和iNOSmRNA的表达 ,并比较两者的相关性。结果 :HCC中HCVNS3 蛋白的阳性率 (4 6 .2 % )和信号强度明显低于PCLT(6 7.3% ) ,且其表达强度与癌细胞分化程度相关 (P <0 .0 1) ;iNOSmRNA的阳性率 (80 .8% )与PCLT中者无差别 (90 .4% ,P <0 .0 1) ,但其阳性信号强度明显低于PCLT(P <0 .0 5 )。PCLT中HCVNS3 蛋白表达愈高iNOSmRNA的信号强度愈强 (P <0 .0 1) ,特别是在有些病例中两者的定位和信号形态几乎一致。结论 :HCVNS3 蛋白可能在肝细胞转化早期通过作用于iNOS基因促进NO生成导致肝细胞癌变     

肝细胞癌发生中丙型肝炎病毒NS3蛋白对诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的研究肝细胞癌（HCC）及其癌旁肝组织（PCLT）中丙型肝炎病毒（HCV）NS3蛋白对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达的影响,以探讨其在HCC发生中的作用。方法利用SP免疫组化和原位杂交技术检测52例HBV（-）的HCC及其PCLT中HCVNS3蛋白和iNOSmRNA的表达,并比较两者的相关性。结果HCC中HCVNS3蛋白的阳性率（46.2%）和信号强度明显低于PCLT（67.3%）,且其表达强度与癌细胞分化程度相关（P<0.01）;iNOSmRNA的阳性率（80.8%）与PCLT中者无差别（90.4%,P<0.01）,但其阳性信号强度明显低于PCLT（P<0.05）。PCLT中HCVNS3蛋白表达愈高iNOSmRNA的信号强度愈强（P<0.01）,特别是在有些病例中两者的定位和信号形态几乎一致。结论HCVNS3蛋白可能在肝细胞转化早期通过作用于iNOS基因促进NO生成导致肝细胞癌变。     

肝细胞癌组织中丙型肝炎NS3蛋白对P53蛋白表达的影响

目的探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）及其癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３蛋白对Ｐ５３蛋白表达的影响及其在肝癌发生中的作用。方法用免疫组织化学技术检测４７例乙型肝炎病毒阴性的ＨＣＣ及其癌旁肝组织中ＨＣＶＮＳ３蛋白和Ｐ５３蛋白的表达。结果ＨＣＶＮＳ３蛋白在ＨＣＣ中的阳性率（６２％）明显低于癌旁肝组织（８３％）,Ｐ＜００２５。癌组织中其表达强度与癌细胞分化程度呈相关性（Ｐ＜００２５）。Ｐ５３蛋白在癌组织中的阳性率（８１％）明显高于癌旁组织（４７％）,Ｐ＜００２５;癌细胞分化愈差,表达愈强（Ｐ＜００５）;癌组织中Ｐ５３蛋白表达与ＨＣＶＮＳ３蛋白的表达无相关性（Ｐ＞０５）,而癌旁肝组织中两者表达呈显著相关性（Ｐ＜００１）,ＨＣＶＮＳ３蛋白阳性患者中Ｐ５３蛋白表达明显高于ＨＣＶＮＳ３阴性病例,Ｐ＜００５。结论ＨＣＶＮＳ３蛋白可能是在肝细胞转化早期通过内源性机制间接作用于Ｐ５３基因使其突变导致肝细胞癌变。     

一氧化氮合酶表达与肝癌发生发展的关系

目的 研究一氧化氮合酶（NOS）与肝癌发生发展的关系。方法 用免疫组化法对肝癌及癌旁组织中的3种NOS（诱导型，神经型和内皮型）及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达进行原位检测和观察。结果 非癌组织诱导型NOS多呈阴性或弥漫弱阳性，但部分非癌组织中可见诱导型NOS阳性细胞呈点状分布；癌旁组织多呈阳性；癌组织核心多呈阴性或弥漫弱阳性，但分化中和差的癌组织核心分别有1例NOS呈强阳性；周边癌组织呈局灶阳性，侵入纤维组织中的弥漫癌细胞呈强阳性，VEGF，神经型NOS的分布与诱导型NOS相似，内皮型NOS主要分布在肝癌组织小血管壁内皮及其肌层组织，结论 NOS表达与肝组织癌变及肝癌浸润能力有关，NOS表达增加是肿瘤形成中的关键步骤。与获得血管形成和转移表型有关。     

诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶在胃癌中的表达关系及临床意义

目的 检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在小鼠正常胃组织及原位移植人胃癌组织SGC-7901中的表达情况,探讨严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠胃癌不同阶段时iNOS和eNOS含量变化的相关性研究及临床意义.方法 采用苏木精-伊红染色法进行检测.结果 可见eNOS和iNOS在10只正常胃组...     

一氧化氮合酶表达与肝癌发生发展的关系

目的研究一氧化氮合酶(NOS)与肝癌发生发展的关系。方法用免疫组化法对肝癌及癌旁组织中的3种NOS(诱导型、神经型和内皮型)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达进行原位检测和观察。结果非癌组织诱导型NOS多呈阴性或弥漫弱阳性,但部分非癌组织中可见诱导型NOS阳性细胞呈点状分布;癌旁组织多呈阳性;癌组织核心多呈阴性或弥漫弱阳性,但分化中和差的癌组织核心分别有1例NOS呈强阳性;周边癌组织呈局灶阳性,侵入纤维组织中的弥漫癌细胞呈强阳性。VEGF、神经型NOS的分布与诱导型NOS相似。内皮型NOS主要分布在肝癌组织小血管壁内皮及其肌层组织。结论NOS表达与肝组织癌变及肝癌浸润能力有关,NOS表达增加是肿瘤形成中的关键步骤,与获得血管形成和转移表型有关。     

诱导型一氧化氮合酶蛋白在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白在鼻咽癌组织的表达以及与鼻咽癌的临床参数的关系。方法采用免疫组织化学方法对30例鼻咽部正常黏膜组织,115例鼻咽癌患者组织中的i NOS蛋白的表达情况进行检测,使用受试者工作特征曲线(ROC)预测i NOS表达在鼻咽癌中的诊断价值。分析i NOS在鼻咽癌中的诊断价值及i NOS与性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、临床分期、复发等临床病理参数的关系。结果在鼻咽癌组织中,i NOS的阳性表达率为57.4%,与正常鼻咽部黏膜组织的阳性表达率(16.7%)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。使用ROC研究i NOS对于鼻咽癌的诊断价值,发现曲线下面积为0.704[95%CI(0.605,0.802),P=0.01]。在鼻咽癌组织中,i NOS与年龄(r=0.269,P=0.004),淋巴结转移(r=0.242,P=0.009),临床分期(r=0.282,P=0.002)呈正相关。结论 i NOS对鼻咽癌的诊断具有一定的价值,并与鼻咽癌的转移、临床分期密切有关。     

丙型肝炎病毒感染与肝细胞癌

目的;了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肝细胞癌（ＨＣＣ）的关系。方法：采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）对皖北地区８７例肝细胞癌、８０例肝硬化和１００名健康对照进行乙肝型肝炎病毒（ＨＢＶ）、ＨＣＶ血甭标志和ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＣＶ－ＲＮＡ检测。结果;皖北地区肝癌和肝硬化的发生,除与ＨＢＶ感染密切相关外,与ＨＣＶ感染亦密切相关。     

诱导型一氧化氮合酶在膀胱移行细胞癌中表达的临床意义

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS)在膀胱移行细胞癌中表达及与临床病理特征的关系。方法 应用兔抗入iNOS多克隆抗体对60例膀胱移行细胞癌和10名正常人膀胱粘膜进行免疫组化染色,观察iNOS的表达情况。结果 膀胱移行细胞癌中阳性表达率为63．3％（38／60）,10名正常人膀胱粘膜中无阳性表达。iNOS在肿瘤中表达与患者年龄、性别、肿瘤分级无关（P＞0．05）;但浸润型肿瘤iNOS表达显著高于表浅型（P＜0．01）,有淋巴结转移的肿瘤组iNOS表达高于无淋巴结转移组（P＜0．05）。结论 iNOS在膀胱移行细胞癌中可能促进了肿瘤的浸润和转移,iNOS对膀胱移行细胞癌预后判断和基因治疗具有重要理论意义。     

一氧化氮合酶和IL10基因表达对肝细胞再生的影响

目的：探讨一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）在白介素１０（ＩＬ１０）和肝再生信息传导中的作用。方法：以７０％肝切除制备肝再生模型，注射５０％ＣＣｌ４和脾切除引起肝损伤和机体免疫功能低下，４８ｈ后采用逆转录ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）和点杂交（ｄｏｔｂｌｏｔ）方法检测ｅＮＯＳ和ＩＬ１０ｍＲＮＡ基因表达，免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＩＬ１０蛋白在肝内的分布，流式细胞仪（ＦＣＭ）检测再生肝ＤＮＡ含量，最后采用统计学作再生肝组织ＤＮＡ含量与ＩＬ１０和ｅＮＯＳ变化的相关分析，以此判断ＩＬ１０和ｅＮＯＳ的变化对再生肝的影响。结果：ｅＮＯＳ和ＩＬ１０对肝再生具有明显的调控作用，无论在生理或在病理状态下都是如此，并且二者呈现一种完全相反的调控方式，同时受到脾脏或全身免疫系统的影响。结论：ｅＮＯＳ的表达同肝细胞ＤＮＡ的合成呈正相关，而ＩＬ１０的表达与其呈负相关。     

丙肝病毒感染对C反应蛋白表达的影响

目的：探讨丙型肝炎病毒(HCV)在体内外对C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法收集武汉大学中南医院2015年1月至2016年2月HCV感染患者标本106例和健康体检者标本110例,免疫透射比浊法检测其血清CRP水平,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV感染的Huh7.5.1细胞及其对照细胞中CRP mRNA的表达。结果 HCV感染患者血清CRP水平为(8.62±5.56) mg/L,显著高于健康体检者的(1.35±0.71) mg/L,差异有显著统计学意义(P<0.01);HCV感染的Huh7.5.1细胞中CRP mRNA的表达水平较对照细胞高,其CRP/β-actin灰度比值分别为0.31和1.5。结论 HCV感染能够上调肝细胞CRP的表达。     

转染丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B对P53表达的影响

目的了解丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B对肝细胞内p5 3表达的影响 ,探讨其在肝癌发生中的作用 ,及其发生机制。方法使用脂质体介导法 ,转染丙型肝炎病毒非结构蛋白重组质粒PCXN2 NS4B及突变型p5 3基因重组质粒P5 3 CX2 2AN3进入Chang肝细胞内 ,并用G4 18筛选获得稳定表达细胞 ,分别采用细胞化学法检测p5 3表达率。设置空白对照组、空白载体组、转染NS4B组 ,转染p5 3组、共转染NS4B及p5 3组。结果空白对照组无p5 3表达 ,空白载体组及转染NS4B组呈弱阳性表达 ,转染p5 3组及共转染组呈阳性表达 ,与空白对照组、空白载体组及转染NS4B组比较有显著差异 ,P <0 .0 1。结论NS4B可能抑制突变型p5 3表达 ,也可能阻止其进入细胞核。     

原发性肝细胞癌组织中丙型肝炎病毒的检出及其相关意义的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒（HCV）感染导致肝细胞癌变的可能机理。方法 应用抗－HCVNS3单克隆抗体和地高辛标记的HCV全基因组cDNA探针,对19例伴单一HCV感染的肝细胞癌石蜡组织切片进行了HCAg的免疫组化和原位杂交检测。结果 两种方法的阳性检出率分别为89．5％（17／19）和57．9％（11／19）。HCAg主要分布于癌细胞和癌旁肝细胞的胞浆和胞核内,呈局灶或弥漫型分布,癌旁组织表达较癌巢显著,核型分布在癌旁组织中常见;HCV RNA仅见于癌或癌旁肝细胞的胞浆中,呈散在及局灶分布,弥漫型分布少见。结论 本研究结果支持HCV感染可能导致原发性肝细胞癌的观点。HCAg在癌旁肝细胞和癌细胞核中的存在提示其可能对肝细胞核产生基因调节作用,这是否是HCV感染导致肝细胞癌变的可能机理之一,值得进一步研究阐明。     

丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建

目的：构建HCV NS5A/pCI-neo真核表达载体,转染Huh-7细胞系,为体外高效表达NS5A蛋白奠定基础。方法：用PCR方法从带有丙型肝炎病毒NS5A基因的pC DNA 3.1（+）/HCV NS345质粒中扩增出HCV NS5A基因,然后TA克隆于pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109。阳性克隆经测序鉴定,再经双酶切消化后插入真核表达载体pCI-neo上,经酶切鉴定与测序证实。结果：用PCR方法扩增出HCV NS5A基因全序列,因其 cDNA的G+C含量高直接测序未成功,后经TA克隆,筛选得到的阳性克隆经测序鉴定,与设计的HCV NS5A基因序列完全一致。经酶切连接并成功插入pCI-neo上。结论：成功构建了高效表达丙型肝炎病毒NS5A基因的pCI-neo真核表达载体。     

Hepatitis C virus nonstructural protein NS3 and telomerase activity

Objective To study the effect of hepatitis C virus nonstructural protein NS(3) （HCV NS(3)） on telomerase activity and carcinogenesis.Methods Streptavidin-peroxidase (SP) conjugated method was used to detect the expressio n of HCV NS(3) protein in NIH3T3 cells transfected with plasmid pRcHCNS(3)-5’ and pRcHCNS(3)-3’. Telomerase activity was detected by an in situ telomerase a ctivity labeling method, telomeric repeat amplification protocol polymerase chai n reaction (TRAP-PCR) and telomerase PCR enzyme linked immunosorbent assay (ELI SA) technology in the transfected and non-transfected NIH3T3 cells.Results HCV NS(3) protein was expressed in the NIH3T3 cells transfected with plasmid pR cHCNS(3)-5’ expressing HCV NS(3) C-terminal deleted protein or with plasmid pR cHCNS(3)-3’ expressing HCV NS(3) N-terminal deleted protein. The positive sig nal of HCV NS(3) protein was localized in the cytoplasm of NIH3T3 cells, and th e signal intensity of the former was stronger. Telomerase activity in NIH3T3 c ells transfected with plasmid pRcHCNS(3)-5’ was stronger than that in NIH3T3 c ells transfected with plasmid pRcHCNS(3)-3’ (P&lt;0.01), whereas telomerase a ctivity in NIH3T3 cells transfected with plasmid pRcCMV or untreated NIH3T3 ce lls was weaker than that in NIH3T3 cells transfected with plasmid pRcHCNS(3)-3 ’ (P&lt;0.05). The expression level of HCV NS(3) protein was significantly co rrelated with the strength of telomerase activity (P&lt;0.05). The results ob tained by in situ telomerase activity labeling corresponded to the results by te lomerase PCR ELISA technology. Conclusions HCV NS(3) protein may activate telomerase through endogenous mechanism to induce host cell transformation. The effect of HCV NS(3) C-terminal deleted protein on telomerase activity in the host cell may be stronger than that of HCV NS(3) N -terminal deleted protein. In situ telomerase activity labeling was a reliabl e technology for studying pathological morphology and telomerase activity in tis sues and cells.     

丙型肝炎病毒P7蛋白体外原核表达状况的研究

目的:扩增丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)P7蛋白基因,克隆到多个原核表达系统,观察P7蛋白在体外表达的情况,获取具有生物学活性的HCV P7重组蛋白.方法:设计扩增全长HCVP7基因片段的特异引物,以H/FL质粒DNA(含HCV 1acDNA全长序列)为模板,通过PCR扩增全长HCVP7基因...