转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室杀蚊幼毒效的观察

目的 观察转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室对淡色库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊不同龄期幼虫杀灭效果. 方法 利用不同浓度的工程藻,分别作用于淡色库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊敏感品系Ⅲ龄幼虫,以及它们不同龄期的幼虫,并设计阴性及空白对照,分别于24H、48H计数死亡率,从而分析基因蓝藻的杀蚊幼毒效.结果 工程藻对三种蚊种Ⅲ龄幼虫均具有杀灭作用,对淡色库蚊、白纹伊蚊幼虫杀灭效果较高,对中华按蚊幼虫效果较差.48H对以上三种蚊虫Ⅲ龄幼虫的杀灭率分别为100％、100％和42％;工程藻对低龄幼虫的杀灭效果高于高龄幼虫,即龄期越低对工程藻的敏感性越高,杀蚊毒效与龄期呈负相关. 结论 转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻具有明显杀蚊幼效果,为今后蚊虫防治提供了新的方法.     

南宁市2021年白纹伊蚊抗药性和病原学监测研究

目的 掌握南宁市白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性程度和病毒携带率,为合理选择、使用杀虫剂及蚊媒生物传染病的风险评估和预测预警提供科学依据。方法 白纹伊蚊抗药性监测分别采用成蚊接触筒法、幼虫浸渍法对拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类和有机磷类杀虫剂进行敏感性测定,并运用SPSS 20.0进行统计学分析;白纹伊蚊病原学监测采用半巢式RT-PCR法对黄病毒属和甲病毒属进行检测。结果 2021年南宁市白纹伊蚊抗药性监测结果显示,白纹伊蚊幼虫对高效氯氰菊酯、残杀威LC₅₀分别为0.261、4.978 mg/L,抗性倍数分别为48.253、5.591,抗性水平分别为高抗和抵抗;成蚊高效氯氰菊酯、残杀威、马拉硫磷药纸死亡率分别为57%、80%、100%,抗性水平分别为抗性、可能抗性和敏感;2021年南宁市白纹伊蚊病原学监测结果显示,野外采集的白纹伊蚊雌性成蚊共2 199只,黄病毒属和甲病毒属病毒检测结果显示均未扩增出阳性条带。结论 南宁市白纹伊蚊幼虫及成蚊对高效氯氰菊酯和残杀威存在不同程度抗药性,应参照抗药性检测结果,结合当地实际情况,高抗或抗性杀虫剂应停用一段时间,低抗或疑似抗性杀虫剂应...     

苏云金杆菌H-14灭蚊幼虫的实验观察

苏云金杆菌H-14(Bacillus thuringiensis H-14,简称Bt H-14)杀灭蚊幼具有很高的效果。用18×10~3/ml Bt H-14(含芽孢数)处理致倦库蚊和白纹伊蚊效果可达100％。不同龄期和不同蚊种幼虫对Bt H-14敏感度不同。导致幼虫的死亡原因为晶体毒素使中肠细胞的细胞器发生病理改变,影响能量代谢和酶活性而死亡。少数晚期4龄幼虫吞食Bt H-14后可继续化蛹,但后代的繁殖均受到一定的影响。     

武汉市登革热媒介白纹伊蚊对常用杀虫剂的敏感性研究

目的 了解武汉市白纹伊蚊常用的化学杀虫剂、生长调节剂及部分生物杀虫剂对野外白纹伊蚊幼虫的敏感性,为当地白纹伊蚊的防控提供科学依据。方法 采集武汉市白纹伊蚊野外种群,经实验室鉴定计数,白纹伊蚊幼虫 1 847只,蛹302只,实验室饲养至F₁代,试虫为F₁代三龄幼虫。采用幼虫浸渍法测定幼虫对不同杀虫剂（96.85%溴氰菊酯、99.00%氯菊酯、87.40%双硫磷、95.56%残杀威、97.00%吡丙醚、95.00%S-烯虫酯、98.70%除虫脲）及 7 000 ITU/mg Bti对白纹伊蚊的敏感性;白纹伊蚊二龄幼虫被武昌罗索线虫寄生后,每天统计幼虫死亡情况,绘制存活曲线。结果 武汉市白纹伊蚊幼虫对双硫磷、溴氰菊酯、氯菊酯、残杀威LC₅₀分别为0.023 40、0.036 37、0.200 0、1.562 9 mg/L,对双硫磷和溴氰菊酯较为敏感。对S-烯虫酯、吡丙醚和除虫脲IE₅₀分别为0.000 310、0.000 412、0.009 594 mg/L,对S-烯虫酯和吡丙醚较为敏感。Bti对白纹伊蚊LC₅₀为0.002 697 mg/L,在蚊幼虫∶线虫=1∶5和1∶10的感染比例时,蚊幼虫死亡率分别为77.42%和95.04%,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.000 1）。结论 武汉市白纹伊蚊幼虫防控时,双硫磷、溴氰菊酯可作为快速杀灭手段,也可以选用S-烯虫酯和吡丙醚等生长调节剂。同时,生物测定表明生物防治剂武昌罗索线虫对白纹伊蚊幼虫也有较好的防控效果。     

攀枝花市登革热媒介白纹伊蚊防制效果研究

目的观察蚊虫孳生地治理和化学防治控制白纹伊蚊的效果。方法实验区使用超低容量喷雾器喷洒悬浮剂,处理蚊虫栖息的植被,治理成蚊密度;采用直接投入缓释剂和孳生地治理白纹伊蚊幼虫。对照区不采取任何控制措施。实验用布雷图指数法和叮咬指数法监测白纹伊蚊幼虫和成蚊密度,评价其控制效果。结果在采用防制方法后的1 d~4 w期间登革热媒介白纹伊蚊幼虫的布雷图指数达到70.11%~95.88%,而成蚊的叮咬指数达到40.39%~93.12%种群密度的下降效果;并且在第4周后幼虫密度的下降维持在95%以上,而成蚊的密度下降维持在90%以上。结论孳生地治理和化学防治可有效控制白纹伊蚊的密度。     

表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌杀蚊幼活性及增效剂型测试

目的 构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用.方法 分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得分别表达AaIT和Cyt2Ba的工程菌株,经IPTG诱导后,用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白的表达;测试不同浓度工程菌菌液对于蚊幼虫的杀灭效果;并将有效的工程菌制成干粉剂,检测其干粉末及其配剂对蚊幼虫的杀灭效果.结果 AaIT和Cyt2Ba重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,但AaIT重组蛋白对蚊幼虫不具有毒性.表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌菌液对白纹伊蚊和致倦库蚊幼虫均具有明显的杀灭作用,48 h的LC50分别为3.00×106和1.25×107 cells/mL,其中对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果要显著优于对致倦库蚊幼虫的杀灭效果(P<0.001),并且表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌干粉末及其配剂均具有较好的杀蚊幼虫效果.当该工程菌干粉末与干酵母粉、小麦粉和白胡椒粉分别按4:1、1:1和1:4比例制成配剂处理蚊幼虫48 h后,结果显示当质量比为1:1时,配剂杀蚊幼效果显著提高(P=0.044),并且白胡椒粉末配剂效果要显著好于干酵母粉和小麦粉配剂(P=0.002).结论 表达Cyt2Ba的重组大肠埃希菌对蚊幼虫具有较好的杀灭作用,合适配剂的使用可以增强其在蚊虫防制中的效果.     

重庆市沙坪坝区2020年登革热媒介白纹伊蚊密度及抗药性监测

目的 了解重庆市沙坪坝区登革热媒介白纹伊蚊密度季节消长及对常用卫生杀虫剂的抗药性水平,为合理使用卫生杀虫剂、科学防控登革热提供依据。方法 2020年4—12月在沙坪坝区城镇居民区、农村居民区、公园和旧轮胎堆放地等4类生境中采用双层叠帐法监测白纹伊蚊成蚊密度;6—7月在沙坪坝区渝碚路街道、天星桥街道、覃家岗街道、山洞街道等4个街道采集白纹伊蚊幼虫,饲养至成蚊采用诊断剂量法中的成蚊接触筒法测定其抗药性;利用SPSS20.0软件,采用一般线性模型对不同生境白纹伊蚊成蚊密度季节消长进行比较。结果 沙坪坝区2020年平均帐诱指数为1.81只/（顶·h）,其中,城镇居民区成蚊密度最高,帐诱指数为2.26只/（顶·h）,4类生境的白纹伊蚊成蚊活动高峰期在6—9月。不同生境白纹伊蚊成蚊密度差异无统计学意义（F=0.093,P>0.05）,不同月份白纹伊蚊成蚊密度有统计学意义（F=10.197,P<0.05）。白纹伊蚊成蚊对0.03%溴氰菊酯、0.4%氯菊酯、0.08%高效氯氰菊酯、0.07%高效氟氯氰菊酯产生抗药性,对0.05%残杀威、0.2%噁虫威、0.5%马拉硫磷、0.2%杀螟硫磷、2...     

福州市建筑工地登革热蚊媒孳生现状与药物控制方法研究

目的:研究福州市建筑工地登革热传播媒介白纹伊蚊的孳生现状与药物控制方法,为制订防制措施提供科学依据。方法:采用捞勺和人诱法进行现场测定伊蚊幼、成蚊的密度,用溴氰菊酯、三氯杀虫酯、倍硫磷等药物制成烟薰、喷杀、缓释剂等卫生杀虫剂,用对比法观察计算杀灭前后伊蚊的密度下降情况。结果:调查350家建筑工地的积水分布状况,长期积水为252个,占72％;积水数为3850处,其中有幼虫孳生为2402处,占62.38％。使用溴氰菊酯、三氯杀虫酯作为烟薰杀虫剂,2d内成蚊密度分别下降80％和60％;用溴氰菊酯、倍硫磷作为喷杀剂,1d内成蚊密度分别下降98％和100％,制成缓释剂,幼蚊密度1d内分别下降100％和98％。结论:福州市建筑工地普遍生白纹伊蚊,并多与致倦库蚊共生占87％,与三带喙库蚊或三蚊种共生占4％,伊纹在6～20m2积水里仍可以孳生。用三氯杀虫酯烟薰灭工地地下密闭部位的成蚊,倍硫磷喷杀剂灭成蚊,溴氰菊酯缓释剂杀灭较大积水中的幼、成蚊均具有较好效果,可将白纹伊蚊密度降至不足为害的水平。     

TNF-a 与IFN-g 诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡

目的探讨TNF-a 与IFN-g 诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用.方法建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系;利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测TNF-a 与IFN-g 处理后的细胞凋亡情况.结果 TNF-a 与IFN-g 可引起活细胞数减少;透射电镜观察到染色体边集、核固缩、凋亡小体;DNA琼脂糖凝胶电泳有"梯形条带".结论 TNF-a 能够诱导人妊娠早期绒毛滋养层细胞凋亡,IFN-g 对TNF-a 具有协同作用.     

白纹伊蚊嗅觉受体OR7的基因克隆、鉴定和功能分析

目的克隆鉴定白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7,并对其表达谱和功能进行分析。方法提取成蚊总RNA,采用RT - PCR技
术扩增白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,并检测OR7在不同虫期和不同组织器官中的表达谱;将OR7基因克隆于
真核表达载体pME18s中,转染HEK293细胞,利用钙成像技术初步分析其对气味分子刺激的钙调功能。结果成功克隆出白纹
伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,经测序得知其编码区序列长度为1395 bp;表达谱分析显示,其在蚊幼虫、蛹、成蚊中
都有表达,且在雌蚊嗅器中表达显著。钙成像结果显示OR7对气味分子刺激后的钙离子通道有一定的调节功能。结论克隆出
白纹伊蚊的嗅觉受体基因OR7 ,初步分析显示其在雌蚊中显著表达,并具有对气味分子的识别功能。
     

人非抗凝血块中基因组DNA提取不同方法的比较

目的:比较三种不同方法提取人非抗凝血块基因组DNA的效果差异。方法:分别采用酚/氯仿法,天根试剂盒,Invitrigen purelinkTM试剂盒提取冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,测定浓度、OD260/280值,琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA浓度和纯度,测定PCR产物灰度值。结果:三种方法都可以提取出基因组DNA,测定DNA浓度分别为:(35.56±15.27)ng/μL,(45.13±16.54)ng/μL,(57.93±14.5)ng/μL,组间存在统计学差异(P<0.01),A260/A280值分别为:1.46±0.19,1.49±0.16,1.519±0.23,三组间比较差异无统计学意义(P>0.05);三种方法提取的基因组DNA都能通过PCR扩增出目的条带,PCR产物电泳灰度值结果分别为:75.421±3.435,149.32±6.875和229.52±19.55,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:三种不同方法都能提取出冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,但Invitrigen purelinkTM试剂盒法效果最好。     

Effective chemotherapy induce apoptosis in vivo in patients with leukemia

Ｓｏｍｅｓｔｕｄｉｅｓｉｎｖｉｔｒｏｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｓｔｈｅｍｏｄｅｏｆｃｅｌｌｄｅａｔｈｉｎｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｓ ,1 3 　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｄｒｕｇｓｋｉｌｌｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ 4 ,5　Ｂｌｏｃｋｉｎｇｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｓｉｇｎａｌｉｎｇｃｏｕｌｄｂｅａｎｏｔｈｅｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｍｕｌｔｉ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ 6　Ｈｏｗｅｖｅｒｌｉｔｔｌｅｉｓｋｎｏｗｎａｂｏｕｔａｐｏｐｔｏｓ…     

光气对小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用

OBJECTIVE: To study apoptosis of pulmonary epithelial cells and endothelial cells in mice with pulmonary edema induced by phosgene exposure. METHODS: Thirty-two mice were divided into normal group and phosgene group with 16 mice in each group. The mice in phosgene group were exposed to phosgene (11.9 mg/L) for 5 min and those in the control group to air. Four hours after exposure, alveolar type II cells were isolated and cultured to observe their apoptosis by electron microscope and flow cytometry. The lung tissues were also taken for DNA gel electrophoresis and TUNEL assay. RESULTS: Apoptotic bodies were observed in alveolar type II cells under electron microscope in phosgene group, which had higher cell apoptosis rate than the control group [(40.26+/-7.74)% vs (1.58+/-1.01)%, P<0.001] as determined by flow cytometry. Ladder-like DNA fragmentation pattern was observed in DNA gel electrophoresis in phosgene group with apoptosis of the pulmonary epithelial and endothelial cells observed by TUNEL. CONCLUSIONS: Phosgene can induce pulmonary epithelial and endothelial cell apoptosis in mice, suggesting that the mechanism of phosgene-induced pulmonary edema involves apoptosis of the lung cells.     

Study on Taxol in Inhibiting Human Leukemia Cell Proliferation andInducing Apoptosis

Objective: To explore the effects of Taxol in inhibiting human leukemia k562 cell proliferation and inducing apoptosis in vitro. Methods: Human leukemia K562 cells were treated with Taxol of different concentrations for 12-72 hrs. Cell proliferation was evaluated by MTT assay and morphological changes of apoptosis were examined by microscopy. Cell apoptosis was determined by flow cytometry (FCM) and DNA gel electrophoresis. Results: Growth of K562 cells was inhibited by Taxol with an IC50 value of 0. 84μg/ml. Typical nuclear condensation and apoptosis bodies were observed as early as 24 hrs after a 0.5μg/ml Taxol treatment; Apoptotic rate of the Taxol-treated K562 cells increased from 3.7% to 24.0% in 24 hrs. No DNA ladder was observed by DNA gel electrophoresis. Conclusion: Taxol could inhibit K562 cell growth and induce apoptosis in vitro.     

缺氧的血清剥夺诱导的PC12细胞DNA损伤与修复

探讨PC12细胞在缺氧(37℃,5%O2,95%N2)、血清剥夺条件下DNA损伤与修复、凋亡、坏死或生存的变化规律.应用单细胞凝胶电泳技术、流式细胞学技术检测在不同时间点,缺氧、无血清培养等诱导下对PC12细胞单链DNA损伤与修复、凋亡的影响.结果发现在PC12细胞DNA损伤值均在0.5h时达第一个峰值,随后下降.3h后DNA损伤数值再次逐渐增加并达到最高值.细胞凋亡峰值略滞后于DNA损伤峰值,并于DNA损伤程度基本相平行.提示PC12细胞在缺氧和血清剥夺条件下存在DNA损伤与修复的动态变化过程,DNA损伤后可能直接诱导细胞凋亡,DNA损伤程度在早期与细胞凋亡程度相一致.     

体外瞬时转染野生型PTEN过表达对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：研究野生型FTEN基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法：应用携带野生型FTEN的真核表达载体pEGFP-C1-FTEN,以脂质体介导的方法体外瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,利用流式细胞术检测抗凋亡蛋白bcl-2的表达,通过相差显微镜、细胞生长曲线、MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法,观察FTEN基因过表达对MCF-7细胞生物学特性的影响。结果：荧光显微镜观察、免疫细胞化学和RT-PCR检测证实,转柒后MCF-7细胞中PTEN呈高水平表达;相差显微镜观察到MCF-7／FTEN细胞出现典型的凋亡形态学改变;细胞生长曲线低平;流式细胞检测显示,G-期细胞比例比空载体组增加14.79％,并出现凋亡峰;DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带;同时还检测到转染PTEN后细胞bcl-2表达下降。结论：外源性FTEN基因过表达可显著抑制MCF-7细胞的周期进程并诱导细胞凋亡。     

茶多酚诱导体外培养膀胱癌EJ细胞的凋亡

目的：研究茶多酚对体外培养的膀胱癌EJ细胞的抑制和诱导凋亡的作用。方法：用琼脂糖凝胶电泳,光学显微镜的方法,观察EJ细胞经过不同剂量茶多酚处理后在生理,生化和细胞 态学等指标的改变来检测细胞凋亡,结果：琼脂糖终胶电泳呈典型的“梯状电泳带”,光学显微镜镜观察见EJ细胞在形态学上凋亡细胞的形态学改变。结论：茶多酚对EJ细胞有明显的诱导细胞凋亡作用。     

Effect of tanshinone IIA on the growth behavior of human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro and its mechanism]

OBJECTIVE: To investigate the effect of tanshinone IIA on the growth behavior of human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro and explore the mechanism. METHODS: Human hepatoma cell line BEL-7402 was exposed to tanshinoneIIA at different concentrations for 72 h, and the suppression of the cell growth was observed under inverted-phase contrast microscope. Apoptosis-related alterations in the cell morphology and biochemistry were examined under fluorescence microscope and transmission electron microscope (TEM) and by DNA agarose gel electrophoresis, and the apoptotic rate was quantified by flow cytometry (FCM). RESULTS: After treatment with 0-10 microg/ml tanshinone IIA for 72 h, the proliferation of BEL-7402 cells was significantly suppressed, and cell apoptosis occurred characterized by cell shrinkage, nuclear chromatin condensation and fragmentation, formation of membrane blebs and apoptotic bodies as observed under fluorescence microscope and TEM. DNA ladder was presented in DNA electrophoresis. FCM analysis yielded the cell apoptotic rates of (20.78+/-2.17) %, (24.64+/-2.07) %, (31.47+/-3.86) %, (43.65+/-4.04) % and (52.36+/-3.75) % at tanshinone IIA concentrations of 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 and 10.0 microg/ml respectively, all significantly higher than those of the control group [(2.37+/-0.29)%]. CONCLUSION: Tanshinone IIA can inhibit the growth of human hepatoma BEL-7402 cells possibly through the mechanism of apoptosis induction.     

光气对小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用

目的 研究光气对肺水肿小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用。方法 将32只BALB/C小鼠随机分成正常对照组(16只)和染毒组(16只)2组。正常对照组小鼠以空气为对照,染毒组小鼠给予11.9mg/L剂量的光气,时间为5min。染毒后4h,取小鼠分离、培养肺Ⅱ型细胞用于电镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡,取小鼠肺脏进行DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL染色检测肺组织凋亡。结果 光气染毒肺水肿小鼠电镜下原代肺Ⅱ型细胞出现凋亡小体;流式细胞术显示肺Ⅱ型细胞凋亡率(40.26±7.74)显著高于正常对照组(1.58±1.01,P<0.001);DNA琼脂糖凝胶电泳出现"DNA梯状改变";TUNEL染色检测到肺上皮细胞和血管内皮细胞凋亡。结论 光气染毒可造成肺水肿小鼠肺脏细胞发生凋亡,提示光气造成小鼠肺水肿的发生机制存在细胞凋亡的诱导作用。     

缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响

目的研究缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响。方法体外培养人小细胞肺癌细胞H446,置于缺氧(3%O2)条件下培养,分别于0、12、24、48、72 h后提取细胞基因组DNA,用甲基化敏感性随机引物PCR(MS-AP-PCR)方法检测基因组DNA甲基化状态。结果在缺氧状态下,H446细胞经酶解后的扩增谱带明显增多,且荧光强度较强,以24 h后明显,表明H446细胞基因组DNA甲基化水平在缺氧24 h后即发生明显升高,主要表现为多位点的异常甲基化。结论缺氧可能是造成肿瘤细胞内甲基化失衡的重要原因之一。