大鼠肝纤维化组织中PTEN蛋白的定位分布

目的 探讨大鼠纤维化肝组织中PTEN蛋白的定位分布及其在肝纤维化病理过程中的作用。方法 结扎胆总管建立大鼠肝纤维化模型;用免疫组织化学染色测定大鼠肝组织中PTEN及α-SMA 蛋白的分布及表达;免疫荧光双标记共聚焦激光扫描显微术测定大鼠肝组织中活化肝星状细胞（HSC）的PTEN蛋白分布及表达。结果 随着肝纤维化的发展,大鼠肝纤维化组织中α-SMA阳性细胞明显增多(P<0.01),PTEN阳性表达细胞逐渐减少(P<0.01);PTEN蛋白在活化HSC广泛表达,主要表达于细胞质,随着肝纤维化的加重,表达PTEN的活化HSC占总的活化HSC的比例逐渐减少(P<0.01)。 结论 大鼠肝纤维化组织中PTEN阳性表达细胞减少,减少程度与HSC的活化、增殖呈负相关。     

肝纤维化时肝脏OPN和PAI-1的表达变化

目的:研究骨桥蛋白(OPN)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达特征及其在肝纤维化时的变化。方法:采用二甲基亚硝胺制作大鼠肝纤维化模型,大鼠肝脏常规HE和天狼猩红染色,采用SABC法做免疫组织化学染色及Western blotting检测OPN和PAI-1蛋白表达,抽提肝组织总RNA,RT-PCR检测OPN mRNA表达。结果:正常大鼠肝组织OPN和PAI-1表达极弱,肝纤维化大鼠肝脏中OPN表达增强,阳性信号散在或弥漫性分布,主要见于小叶内中央静脉周围、纤维间隔内以及周围巨噬细胞胞浆、枯否氏细胞、汇管区的部分肝细胞、肝窦壁内皮细胞。PAI-1在肝纤维化大鼠肝组织汇管区、肝细胞变性坏死处,肝窦周Disse间隙及毗邻以上部位的肝细胞,组织纤维间隔处及其外周细胞亦见阳性染色。Western blotting检测正常大鼠肝脏OPN的蛋白表达极低,肝纤维化组OPN的蛋白表达较正常组显著增强(P0.01)。与正常组比,肝纤维化组PAI-1表达也显著增强。RT-PCR检测结果显示,正常大鼠肝脏OPN mRNA表达极低,肝纤维化大鼠肝脏OPN mRNA的表达明显增强(P0.05)。研究结果证明,肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高。结论:肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高,OPN可能会促进PAI-1的高表达,从而抑制ECM降解、加速肝纤维化进程。     

黏着斑激酶酪氨酸磷酸化促大鼠肝纤维化形成及其可能机制

目的探讨在肝纤维化发生中,黏着斑激酶(FAK)酪氨酸磷酸化与肝星状细胞(HSC)增殖的关系,并从细胞周期角度探讨其促HSC增殖的机制。方法采用胆总管结扎(BDL)方法建立大鼠肝纤维化模型;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;Western blot检测p-FAK(Tyr397)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)在肝组织中的含量。结果正常大鼠肝组织有少量α-SMA分布,随着肝纤维化发展,α-SMA阳性细胞明显增多;肝组织中p-FAK(Tyr397)、cyclin D1及CDK4蛋白表达逐渐增加,造模4周时达峰值。多元相关分析示α-SMA与p-FAK(Tyr397)正相关(r=0.964,P<0.01);α-SMA与cyclin D1、CDK4正相关(r=0.953,0.906;P<0.01);p-FAK(Tyr397)与cyclin D1、CDK4亦明显正相关(r=0.969,0.893;P<0.01)。结论FAK磷酸化促HSC增殖及肝纤维化形成机制可能与调控细胞周期相关蛋白有关。     

C-met 蛋白和α平滑肌肌动蛋白在肝纤维化大鼠部分肝切除后肝组织中的表达

目的:研究 C-met 蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肝纤维化大鼠部分肝切除后肝组织中的表达情况及两者之间的关系.方法:成年雄性 SD 大鼠正常组、肝纤维化组和肝纤维化大鼠部分肝切除组(PH).免疫组织化学、免疫荧光组织化学和免疫印迹法检测各组大鼠肝组织中 C-met 蛋白和α-SMA 的表达情况.结果:肝纤维化大鼠部分肝切除后肝组织中 C-met 蛋白和α-SMA 的表达都呈现出先降低后升高的规律,两者的变化具有高度的相关性.结论:C-met 蛋白和α-SMA 在纤维化肝再生过程中的表达都呈现出先降低后升高的规律性变化,肝星状细胞活化可能是纤维化肝再生过程中 C-met 蛋白表达的重要影响因素.     

神经生长因子低亲合力受体在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞的表达

目的探讨神经生长因子低亲合力受体（P75）在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞（HSCs）的分布及作用机制。方法对四氯化碳（CCL）法制备的肝纤维化大鼠肝组织及肝穿刺获取的肝纤维化患者肝组织,常规石蜡包埋;大鼠离体培养的活化HSCs离心涂片,行免疫组织化学染色,确定P75的表达分布。结果P75在大鼠离体培养的活化HSCs膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化患者HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化大鼠HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在健康人和正常对照大鼠HSCs膜,免疫组织化学染色呈阴性,表明人和大鼠活化的HSCs膜表达P75。结论P75为肝纤维化的治疗提供了新的靶点。     

大鼠肝纤维化组织内ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697和α-SMA表达增强

 目的 探讨ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白及其mRNA在实验性大鼠肝纤维化形成过程中的动态表达及肌动蛋白细胞骨架的变化。方法 结扎胆总管制备肝纤维化模型,用免疫组织化学、Western blot与RT-PCR检测ROCK-I、α-SMA蛋白及其mRNA的表达,用特异性荧光染色检测肌动蛋白细胞骨架。结果 随着肝纤维化的发展,大鼠肝脏中ROCK-I及α-SMA阳性细胞明显增多;造模1~4周肝组织ROCK-I、α-SMA的阳性面积及ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白表达显著性高于正常组（P<0.05）;ROCK-I基因表达与α-SMA表达呈正相关(r=0.718,P<0.05);随着造模时间延长,肝组织肌动蛋白荧光信号增强。结论 ROCK-I在肝纤维化发生过程中有表达上调和功能活化,可能通过诱导肌成纤维细胞表型形成而参与肝纤维化的发生。     

PTEN在肝纤维化大鼠肝组织中的动态表达

目的： 探讨大鼠肝纤维化过程中肝组织PTEN的动态表达。方法: 采用胆总管结扎法建立大鼠肝纤维化模型,HE及Masson三色染色检测肝脏组织学变化,免疫组织化学染色、Western blotting及实时荧光定量PCR技术检测大鼠肝组织的PTEN蛋白及mRNA表达。结果: 大鼠肝纤维化模型成功建立,随着造模时间延长,肝纤维化程度逐渐加重,造模不同时间均可见不同程度的肝细胞变性坏死而导致正常肝细胞逐渐减少;免疫组织化学染色显示正常大鼠肝组织中PTEN广泛表达,主要表达于细胞浆,随着肝纤维化的进展,PTEN阳性表达细胞逐渐减少（P<0.01）;Western blotting及实时荧光定量PCR显示造模1周、2周、3周及4周不同时间大鼠纤维化肝组织中PTEN蛋白及mRNA表达均显著低于假手术组（P<0.01）,并随着肝纤维化的进展逐渐降低（P<0.01）。结论: 大鼠纤维化肝组织中PTEN蛋白及mRNA表达均随着肝纤维化的进展逐渐降低,其下降程度与肝纤维化程度一致。     

碱性成纤维细胞生长因子在乙型肝炎肝组织中的表达

目的：研究肝组织中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)及bFGF mRNA的表达及其与慢性乙型肝炎（CHB）肝血管增生、改建及肝血管纤维化的关系。方法：对120例CHB及50只CC14诱导肝损伤大鼠肝标本进行bFGF免疫组织化学染色及bFGF mRNA原位杂交，并检测了CHB肝组织中α－SMA、FN、LN、CoⅣ表达与bFGF的关系。结果：随着CHB肝细胞变性坏死及肝血管病变加重，bFGF在肝血管及肝窦壁表达强阳性率逐渐上升（P＜0．01），部分固缩性肝细胞也未强阳性显示。原位杂交显示，bFGF mRNA主要分布于血管纤维化区域肝窦壁及部分肝细胞。同时bFGF在肝组织的表达与α－SMA、FN、LN及CoⅣ呈同步关系。结论：bFGF通过激活血管及肝窦内皮细胞，引发肝血管增生及内皮细胞凋亡，在细胞外基质等参与下，最终导致肝血管纤维化、肝窦毛细血管化及假小叶纤维间隔形成。     

钙中性蛋白酶2及Bax在肝纤维化大鼠肝组织中的表达变化及意义

 目的：探讨钙中性蛋白酶2（calpain 2）及Bcl-2相关X蛋白(Bax)在肝纤维化过程中的表达变化及其在肝纤维化过程中的可能作用。方法:  雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照4周、8周组和肝纤维化模型4周、8周组,每组各10只。肝纤维化组按3 mL/kg体重的剂量皮下注射40% CCl4植物油溶液,每隔3 d注射1次,造模时间分别为4周和8周;对照组大鼠皮下注射等量植物油溶液。采用TUNEL法检测肝组织中肝细胞凋亡情况;real-time PCR检测肝组织中calpain 2及bax mRNA的表达变化。免疫组织化学法及Western blotting检测肝组织中calpain 2及Bax蛋白的表达情况。 结果:  Real-time PCR检测发现肝纤维化4周和8周组大鼠肝组织中calpain 2及bax mRNA表达较相应的正常对照组显著增加。免疫组化及Western blotting检测显示肝纤维化4周组大鼠肝组织中calpain 2蛋白的表达与正常4周组比较无显著差异;随着肝纤维化程度的加重,肝纤维化8周时大鼠肝组织中calpain 2的表达显著增加;而肝组织中Bax的表达从肝纤维化4周时就显著增加,肝纤维化8周时达到高峰。此外,通过TUNEL法检测发现肝纤维化4周和8周组大鼠肝组织中肝细胞凋亡的数目较正常组大鼠显著增加。结论:  Calpain 2与Bax可能参与了肝纤维化的发生发展过程。     

迪康胶囊抗大鼠肝纤维化作用机制的实验研究

目的通过迪康胶囊治疗不同剂量二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠,分离星状细胞检测胞浆CollagenⅢ、αSMA、Smad3、Smad7mRNA表达的变化,以期了解其在抗肝纤维化作用中的分子机制,为其抗肝纤维化提供证据。方法Wistar雄性大鼠共50只,分为病理1组、2组,治疗1组、2组,正常对照组。分别以不同剂量诱导形成肝纤维化模型并用迪康胶囊治疗。6周后,处死大鼠,分离各组大鼠肝星状细胞,进行体外培养,采用RTPCR方法测定各组大鼠星状细胞中胞浆信号蛋白CollagenⅢ、αSMA、Smad3、Smad7的mRNA的表达,以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)做内参,琼脂糖电泳后照相读取灰度,以扩增片段/GAPDH的比值为mRNA的相对含量进行比较。结果两组病理组星状细胞CollagenⅢ、αSMA和Smad3mRNA与正常对照组相比表达均增加(P<0.01),两组病理组之间无统计学差异;而Smad3与正常组相比则无统计学差异。迪康胶囊治疗后,CollagenⅢ、αSMA和Smad3表达均下降(P<0.05),而Smad7表达则明显增加(P<0.05)。结论迪康胶囊缓解DMN诱导的大鼠肝纤维化程度,使其胶原表达减少,星状细胞αSMA的表达降低,使星状细胞胞浆信号蛋白Smad3的mRNA表达降低,Smad7mRNA表达升高,说明迪康胶囊对不同剂量DMN诱导的肝纤维化均有不同程度的抗纤维化作用。     

肝管的测量及其临床意义

在90具成人尸体上,测量了肝左管,肝右管及肝总管的长度,直径和有关的角度.肝左管平均长7.5mm,直径7.6mm,与肝总管形成的角度为34.9°;肝右管长9.6mm,直径6.2mm,与肝总管形成的角度为50.2°.结果表明肝左管粗、短而直,肝右管细,长而倾斜.肝管这种解剖形态学上的差异,似与临床上常见华枝睾吸虫病肝左叶肿大较多及肝左管结石较多有关。     

肝Ⅳa、Ⅳb亚段的门脉分支类型及径线测量

目的:进一步了解肝Ⅳa、Ⅳb两亚段门脉分支的解剖学资料。方法:对肝铸型标本供应第Ⅳ段的门静脉分支进行详细地观察和测量。结果:肝门静脉左支横部可发出供应肝Ⅳa亚段的分支;肝门静脉左支发出供应第Ⅳ段的分支数日为3～10支,供应Ⅳa亚段的分支为1～4支,供应Ⅳb亚段的分支为1～8支;门脉左支供应第Ⅳ段的分支直径平均为(2.95±0.98)mm;Ⅳa亚段的门脉分支类型只有一种,Ⅳb的分支类型有两种。结论:肝Ⅳa、Ⅳb两亚段的肝门静脉分支解剖学数据,可为临床上肝第Ⅳ段疾病的术前影像学诊断及亚段手术提供参考。     

肝裂的定位与肝段的划分

目的：精确定位肝裂与肝段,为肝脏病变的诊断和治疗提供解剖学依据。方法：用过氯乙烯分色灌注肝静脉和门静脉。固定灌注后的肝脏,再用雕刻法移去肝组织,保留肝静脉和门静脉,并对其进行详细地解剖学观察。结果：3条肝静脉的位置可精确定位3条肝裂。门静脉左、右支可精确定位1条段间裂。肝裂和段问裂将肝脏分成5叶8段。结论：肝裂和段间裂确定了肝叶和肝段的精确定位与划分,对肝脏病变的诊断和治疗非常重要。     

纳洛酮治疗亚临床型肝性脑病疗效观察

目的探讨纳洛酮治疗亚临床型肝性脑病(SHE)的疗效。方法69例SHE按双盲法随机分为治疗组及对照组二组,分别给予纳洛酮0.4mg、0.9%氯化钠静脉推注,连用5-10天,用药前后分别作数字连接试验(NCT)、数字符号试验(DS)、脑干诱发电位(BAEP),并随访有否发性临床型肝性脑病。结果治疗组治疗后各项指标均较治疗前有明显改善,且随访无一例发生肝性脑病,对照组治疗前后各项指标改善不明显,且随诊有3例发生临床型肝性脑病。结论纳洛酮是一种对SHE治疗有效的药物。     

Regulation of Sinusoidal Perfusion in Portal Hypertension

Portal hypertension, a major complication of cirrhosis, is caused by both increased portal blood flow and augmented intrahepatic vascular resistance. Even though the latter is primarily caused by anatomical changes, it has become clear that dynamic factors contribute to the increased hepatic vascular resistance. The hepatic sinusoid is the narrowest vascular structure within the liver and is the principal site of blood flow regulation. The anatomical location of hepatic stellate cells, which embrace the sinusoids, provides a favorable arrangement for sinusoidal constriction, and for control of sinusoidal vascular tone and blood flow. Hepatic stellate cells possess the essential contractile apparatus for cell contraction and relaxation. Moreover, the mechanisms of stellate cell contraction are better understood, and many substances which influence contractility have been identified, providing a rationale and opportunity for targeting these cells in the treatment of portal hypertension in cirrhosis. Anat Rec, 291:693–698, 2008. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

改良法分离大鼠肝星状细胞

目的　探讨一种高效、经济、稳定的肝星状细胞的分离方法 ,为探索肝纤维化的发生机制提供细胞模型。方法　采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌流 ,以Nycodenz为分离介质 ,单层一步密度梯度离心法 ,分离大鼠的肝星状细胞。结果　肝星状细胞的获得率为 3 .95× 10 7 只、纯度为 97% ,存活率为 98%。结论　本法是一种较理想的分离肝星状细胞的方法。     

Cytopathologic features of hepatic epithelioid hemangioendothelioma

We present the cytological features of hepatic epithelioid hemangioendothelioma (EH), which is considered to be a vascular proliferation of intermediate malignant potential. The case report concerns a 52-yr-old previously healthy man discovered to have multiple hepatic masses upon evaluation for abnormal liver function tests. Fine-needle aspiration demonstrated a neoplasm composed of interanastomosing epithelioid cells that contained intracytoplasmic lumens. Histologic sections, immunohistochemistry, and ultrastructural evaluation were confirmatory. Although hepatic EH is a rare tumor, its characteristic cytological, histological, and ultrastructural features permit a straightforward diagnosis. It is important to distinguish this entity from adenocarcinoma and angiosarcoma because long-term disease-free survival is possible, especially in the setting of orthotopic liver transplantation. Diagn. Cytopathol. 17:50–53, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

第二肝门和第三肝门的范围及其临床意义

目的:探讨第二肝门和第三肝门的范围和临床意义。方法:解剖经防腐固定血管灌注的成人尸肝标本56例,从正后方剖开肝后下腔静脉,测量肝静脉入口的大小和位置,追踪其行程和引流范围。结果:直径大于5mm的肝静脉行程长,引流范围广,入口汇聚于二个区域:肝静脉汇聚于肝后下腔静脉上部,副肝静脉汇聚于肝后下腔静脉下部,二者之间存在一个稀疏间隙;小于5mm的肝静脉,分布散行程短,引流范围小,就近入注腔静脉。结论:根据直径大于5mm的肝静脉的分布规律,结合其临床意义,把肝后腔静脉分为上、中、下三段,第二肝门位于上段长(21±4)mm,第三肝门位于下段长(36±10)mm,肝门间段长(17±9)mm。     

PTEN expression is down‐regulated in liver tissues of rats with hepatic fibrosis induced by biliary stenosis

The gene phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 (PTEN) codes for a tumor‐suppressor phospholipid phosphatase. Deletion, mutation or abnormal expression of PTEN is commonly found in many kinds of malignant tumors. At the time of this study, though, the role of PTEN expression in the pathology of hepatic fibrosis remains unclear. In this study, we investigate the dynamic expression of PTEN in a rat model of hepatic fibrosis, with special emphasis on the activation and proliferation of hepatic stellate cells (HSC) in vivo. The rat model of hepatic fibrosis used in this study employed common bile duct ligation. At four time points, the expression of PTEN in hepatic tissues and activated HSC in rat liver tissues was measured by immunohistochemical staining, Western blotting, real‐time fluorescent quantitative PCR and immunofluorescence confocal laser scanning microscopy, respectively. Further, α‐smooth muscle actin (α‐SMA), an activated HSC marker in rat liver tissues, was detected by immunohistochemical staining. This study showed that aggravation of hepatic fibrosis led to gradually decreasing expression of PTEN in the hepatic tissues. Further, as hepatic fibrosis worsens, PTEN‐expressing activated HSC accounts for an increasingly smaller percentage of all activated HSC. In contrast, the percentage of α‐SMA‐expressing HSC cells increases significantly. In conclusion, expression of PTEN mRNA and protein is down‐regulated in fibrogenic rat liver tissue, and its expression in HSC in vivo also decreases with progression of fibrosis. Thus, these results show that the dynamic expression of PTEN in hepatic tissues negatively correlates with activation and proliferation of HSC.     

肝段在矢状断面上的划分：断层标本与磁共振图像对照研究

目的：为ＭＲ矢状图像精确定位肝内占位性病变提供断层解剖学依据。方法：对照观察３８例腹部连续矢状断层标本、４１例胎肝管道铸型和８例活体腹部ＭＲ矢状图像，探讨肝段在矢状断面上的划分。结果：依肝左静脉可区分段Ⅱ和段Ⅲ，门静脉左支矢状部是段Ⅱ、段Ⅲ与段Ⅳ间的天然良界，段Ⅰ位于静脉韧带裂后方或／和下腔静脉前方，肝中静脉与肝门或胆囊窝的连线可用以区分段Ⅳ与段Ⅴ、段Ⅷ，依肝右静脉、胆囊窝和门静脉右支及其分支可区分出段Ⅴ、段Ⅷ、段Ⅵ、段Ⅶ。结论：依肝静脉、门静脉和肝的自然沟裂，在ＭＲ矢状图像上可精确划分肝段