外周血干细细移植后GVHD的动态监控可溶性人类白细胞抗原-Ⅰ及临床意义

目的研究动态监测可溶性人类白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)血清浓度对预测异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的意义.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗夹心法,以W6/32单克隆抗体包被酶标板,加被检血清,再加抗β2m辣根过氧化物酶及底物显色.测定63名中国汉族正常献血员sHLA-Ⅰ含量,并对24例异基因外周血干细胞移植患者移植前及移植后不同时间段血清sHLA-Ⅰ含量进行连续检测.结果6例未发生GVHD和4例仅发生Ⅰ度GVHD移植受者sHLA-Ⅰ水平在移植前后无明显变化(P＞0.05);而发生Ⅱ-Ⅳ度GVHD的14例移植患者在发生GVHD前3～7 d,sHLA-Ⅰ浓度就有统计学意义的升高(P＜0.05),在GVHD期升高程度更明显,具有显著性差异(P＜0.005).经免疫抑制剂冲击治疗至稳定期又降至基础水平.结论动态监控allo-PBSCT患者血清中sHLA-Ⅰ含量对预测外周血干细胞移植后GVHD及治疗效果和预后有重要意义.     

人类白细胞Ⅰ、Ⅱ类抗原的中分辨度基因芯片分型技术研究

目的 应用基因芯片技术进行北方汉族人群人类白细胞抗原（HLA）Ⅰ、Ⅱ类中分辨度分型研究.方法 根据中国北方汉族人群HLA-Ⅰ、Ⅱ类常见的基因位点以及临床应用中对分型分辨度的实际需要,设计特异性寡核苷酸中分辨度分型探针,制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.共检测30份临床样本.结果 所有样本的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分辨出598个Ⅰ类抗原等位基因,511个Ⅱ类抗原等位基因,可捡出Ⅰ抗原特异性57个,Ⅱ抗原特异性30个.结论 基因芯片用于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原分型可行.     

外周血干细细移植后GVHD的动态监控可溶性人类白细胞抗原-I及临床意义

目的研究动态监测可溶性人类白细胞抗原-I(sHLA-I)血清浓度对预测异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗夹心法,以W6/32单克隆抗体包被酶标板,加被检血清,再加抗β2m辣根过氧化物酶及底物显色。测定63名中国汉族正常献血员sHLA-I含量,并对24例异基因外周血干细胞移植患者移植前及移植后不同时间段血清sHLA-I含量进行连续检测。结果6例未发生GVHD和4例仅发生Ⅰ度GVHD移植受者sHLA-I水平在移植前后无明显变化(P>0.05);而发生Ⅱ-Ⅳ度GVHD的14例移植患者在发生GVHD前3~7d,sHLA-I浓度就有统计学意义的升高(P<0.05),在GVHD期升高程度更明显,具有显著性差异(P<0.005)。经免疫抑制剂冲击治疗至稳定期又降至基础水平。结论动态监控allo-PBSCT患者血清中sHLA-I含量对预测外周血干细胞移植后GVHD及治疗效果和预后有重要意义。     

人类白细胞抗原G、E在人胎盘组织中的表达及其意义

用原位杂交法分别检测人类白细胞抗原G、E（HLA—G、E）mRNA及蛋白质在人正常早孕绒毛组织、晚孕胎盘组织中的表达。结果：在人正常早孕绒毛组织中的绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞（EVCT）内均有HLA—G、EmRNA及HLA-E蛋白质表达，而HLA-G蛋白质仅在EVCT内表达：晚孕胎盘组织中HLA-G、EmRNA及蛋白质表达于蜕膜板内的EVCT及羊膜上皮细胞。结论：HLA-E表达于人正常早孕绒毛组织中所有类型的滋养细胞及晚孕胎盘组织中的EVCT和羊膜上皮细胞。抗人HLA-G单克隆抗体4H84仅能检出人胎盘组织中EVCT及羊膜上皮细胞内的HLA-G蛋白。图12参10     

肾移植术后特异性人类白细胞抗原-Ⅱ类抗体对移植肾长期存活的影响

目的 评价肾移植术后特异性人类白细胞抗原（HLA）-Ⅱ类抗体对移植肾长期存活的影响。方法 采用前瞻性队列研究,通过酶联免疫吸附（ELISA）法检测118例肾移植患者围手术期特异性HLA—Ⅱ类抗体水平,随访观察抗体对移植肾长期存活的影响。结果 （1）生存分析提示HLA-Ⅱ类抗体阳性组第3、第4年移植肾存活率明显低于抗体阴性组（第3年：78．6％vs84．4％,第4年：71．4％vs80．0％,P=0．002）;排除受者死亡因素后,HLA—Ⅱ类抗体阳性组移植肾存活率仍然低于抗体阴性组（第3年：85．7％vs92．2％,第4年：82．1％vs90．0％,P=0．003）。（2）HLA-Ⅱ类抗体阳性组患者第3、第4年移植肾功能下降的比例高于抗体阴性组（第3年：39．3％vs33．3％,第4年：46．4％vs38．9％,P=0．001）。（3）HLA-Ⅱ类抗体阳性组和阴性组比较,晚期急性排斥发生率的差异无统计学意义（10．7％vs13．3％,P〉0．05）。结论 术后特异性HLA-Ⅱ类抗体可能是影响移植肾长期存活的的重要因素之一,移植后HLA-Ⅱ类抗体水平的动态变化可以从一个侧面反映移植肾的预后情况。     

肾移植供者抗人类白细胞抗原抗体特异性判别中两个常见问题的探讨

抗体介导排斥反应(AMR)是影响移植肾长期存活的关键因素, 供者特异性抗体(DSA)是AMR的病因, 其准确判定至关重要。目前临床广泛应用的单抗原微珠法(SAB)判别DSA时容易出现漏检以及平均荧光强度(MFI)值低估两个问题。本文通过与中国人群常见人类白细胞抗原(HLA)等位基因进行比对, 计算了常用的两种SAB试剂的漏检概率, 探讨了体外实验体系中抗体交叉反应对DSA的MFI值的影响。笔者提出应重视上述两个问题的临床意义, 尝试用功能性表位(eplet)分析的方法予以校正并列举了临床实例, 最后分析了这种校正方法的局限性。     

人类白细胞抗原G分子、凋亡相关因子及FAS配体分子在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变中表达的研究

目的 检测人类白细胞抗原-G分子(HLA-G)、FAS/FASL分子在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变中的表达情况.方法 应用免疫组织化学方法检测18例宫颈鳞癌,40例宫颈上皮内瘤变(包括CINⅢ16例,CINⅡ12例,CIN Ⅰ 12例),18例正常宫颈组织中HLA-G分子、FAS分子、FASL分子的表达,并分别比较各分子之间的相关性.结果 宫颈鳞癌中HLA-G分子的表达水平显著高于正常宫颈组织,其FAS分子的表达水平显著低于正常宫颈组织.HLA-G与FAS分子在宫颈鳞癌与CINs中的表达水平无统计学差异性,在CINs组间以及CINs与正常组织中的表达无显著差异性.FASL分子在宫颈鳞癌和CINs及正常组织中的表达水平无明显差异性.HLA-G与FASL分子在各宫颈病变中表达均具有正相关性,其两者与FAS分子之间表达无相关性.结论 宫颈鳞癌组织中HLA-G和FASL分子呈高表达,FAS分子呈低表达.HLA-G与FASL分子呈正相关.但HLA-G分子是否介导宫颈鳞癌的免疫耐受,以及FAS/FASL分子介导的细胞凋亡途径是否为其发生的途径之一尚需进一步研究.     

抗CD25单克隆抗体治疗异基因造血干细胞移植后激素耐药的Ⅳ度急性移植物抗宿主病

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植后常见并发症.在人类白细胞抗原(HLA)全相合的非亲缘异基因骨髓移植中Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的发生率为78%,Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的发生率为36%[1].尽管多种免疫抑制剂如环孢霉素A(CsA)、霉酚酸酯(MMF)、甲氨蝶呤(MTX)、糖皮质激素、他克莫司(FK506)等已用于防治aGVHD,仍有一部分aGVHD不能控制,尤其是甲基强的松龙日剂量大于2mg/kg仍无法获得临床缓解者大多预后不良.本中心共进行异基因造血干细胞移植术180例,其中8例发生糖皮质激素耐药的Ⅳ度aGVHD,予以人源化抗CD25(白介素2受体α链)单克隆抗体(商品名赛尼派)治疗,取得较好效果,现报道如下.