消痰散结方对裸鼠人胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响

目的:探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预胃癌组织NF-κBP65蛋白、COX-2蛋白表达的影响及相关性。结果:①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κBP65蛋白的阳性表达与模型组相比P0.05,有统计学意义;②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P0.05,有统计学意义,消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学差异,P0.01;③胃癌细胞中NF-κBP65蛋白与COX-2蛋白表达存在正相关(r=0.952,P0.01)。结论:胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的COX-2蛋白,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对COX-2的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,从而阻断胃癌发展,控制胃癌复发与转移。     

消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中血管内皮生长因子D表达的影响

目的观察消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中血管内皮生长因子D（VEGF-D）表达的影响,探讨消痰散结方防治胃癌淋巴转移的作用机制。方法 30只裸鼠建立MKN-45人胃癌原位移植模型,并随机分为生理盐水组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组及消痰散结方组,每组10只,分别给予生理盐水、5-Fu和消痰散结方干预后,采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测瘤组织VEGF-D蛋白及mRNA的表达。结果消痰散结方可不同程度下调肿瘤组织中VEGF-D蛋白和mRNA水平的表达,与生理盐水组比较,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论调控淋巴管生长因子VEGF-D蛋白和mRNA的表达是消痰散结方防治胃癌淋巴转移的可能机制之一。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的影响

目的探讨消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的作用机制。方法采用MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源,采用0B胶黏合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。20只模型裸鼠分为模型组和中药组。中药组予消痰散结方干预6周后,测瘤质量,计算抑瘤率并检测5个微卫星不稳定位点（D17S250、D2S123、D5S346、Bat-25和Bat-26）。结果中药组的瘤质量明显低于模型组（P〈0．01）,其抑瘤率为40．84％。模型组的肿瘤组织中能扩增到5个微卫星位点,其中微卫星位点D2S123、D5S346出现某些延长和缩短。使用消痰散结方干预6周后,微卫星位点D2S123、D5S346的变异趋于稳定。结论消痰散结方能抑制MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤的微卫星不稳定。     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型E-cad基因甲基化的影响

目的:研究消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法:培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,造模后分为模型对照组和中药组,分别给予生理盐水和消痰散结方水煎剂。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定E-cad基因表达,Methylight法测定E-cad基因甲基化水平。结果:消痰散结方能抑制肿瘤生长以及转移,抑瘤率达45.17%。消痰散结方能逆转E-cad基因甲基化,增加E-cad mRNA表达,与模型对照组比较,差异有非常显著性意义(P0.01)。结论:消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长和转移,逆转E-cad基因甲基化可能是其作用机制之一。     

消痰和胃方干预胃癌前病变大鼠NF-κB通路的研究

目的:检测消痰和胃方对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织NF-κB通路的影响,探讨该方干预胃癌前病变的机制。方法:清洁级Wistar雄性大鼠,空白对照组和模型组,模型组采用以化学干预为主的多因素造模方法,共32周。模型组再分为模型对照组、维酶素组、消痰和胃方组。干预6周后采用Western blot检测大鼠胃黏膜组织中p-NF-κB p65蛋白表达的差异。结果:与模型对照组相比,消痰和胃方组p-NF-κB p65表达降低(P<0.05),维酶素组无统计学意义(P>0.05),并且消痰和胃方能改善胃癌前病变大鼠整体情况,较维酶素更优。结论:消痰和胃方防治胃癌前病变的机制有可能通过干预NF-κB通路实现的,值得进一步深入研究。     

消痰散结方对胃癌组织核转录因子活性表达影响的研究

目的：通过建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,观察消痰散结方对胃癌组织核转录因子（NF-κB）活性表达的影响,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,采用EMSA方法检测胃癌组织NF-κB活性的表达。结果：①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异（P〈0.01）;②消痰散结方低、中、高剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比逐渐降低,且呈明显的剂量依赖效应。消痰散结方低剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比有统计学意义（P〈0.05）,消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的活性表达与模型组相比,P〈0.01,有显著统计学意义,但组间相比无统计学意义。结论：①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方可能通过抑制NF-κB活性而阻断胃癌细胞增殖进程,可有效抑制胃癌发展。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞E-Cad表达的影响

目的:观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子E-Cad表达的影响,初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节.方法:制备消痰散结药物血清,体外培养MKN-45人胃癌细胞,拟消痰散结方药物血清干预培养细胞,采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中E-Cad的表达.结果:中药组胃癌组织中E-Cad表达水平明显高于空白对照组.结论:消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达,从而影响细胞的粘附性机制有关.     

消痰散结方对裸鼠胃肿瘤中ICAM-1表达的影响

观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子ICAM 1表达的影响。建立裸鼠MKN 4 5人胃癌模型 ,采用免疫组化S P法检测胃癌组织中ICAM 1的表达。结果 ,中药组胃癌组织中ICAM 1表达水平明显低于空白对照组。说明 ,消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能与影响粘附分子的表达 ,进而影响细胞的粘附性机制有关。     

消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态的影响

目的 探讨消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）的影响及其机制。 方法 30只裸鼠右前肢腋部皮下移植人胃癌瘤块建立荷瘤模型。造模后的荷瘤鼠随机分为模型组（10只）、消痰散结组（10只）和多西环素组（10只）,分别给予相应药物灌胃治疗4周后,脱颈椎处死荷瘤鼠。剥取肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率;计数肿瘤中VM的数量;运用免疫组织化学法检测肿瘤中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白的表达。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45皮下移植瘤模型血清蛋白质组表达的影响

目的观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45皮下移植瘤模型血清蛋白质组表达的影响。方法 30只BALB/c-nu/nu裸鼠随机分为正常组、模型组、干预组,采用瘤块接种方法造模。正常组自由饮食,模型组、干预组分别给予生理盐水、消痰散结方灌胃。运用蛋白质组学的双向凝胶电泳技术,观察3组之间的血清蛋白质组表达差异,筛选出与消痰散结方作用相关的差异表达蛋白质,并对其进行质谱鉴定,确认差异表达蛋白质的身份。结果去除血清中高丰度蛋白质后获得分辨率高、重复性稳定性好的血清2-DE图谱。与正常组比较,模型组中找到25个差异表达蛋白点,其中12个表达上调,13个表达下调。与模型组比较,干预组中找到19个差异表达蛋白点,其中14个表达上调,5个表达下调。3组间比较共找到差异表达蛋白点9个,与正常组比较,在模型组中表达上调、在干预组表达回调至正常组水平的3个,最终鉴定为结合珠蛋白、泛素蛋白连接酶、组蛋白甲基转移酶;与正常组比较,在模型组中表达下调、在干预组表达回复至正常组水平的有6个,其中3个鉴定为载脂蛋白A1、过氧化物酶1、超氧化物歧化酶。结论消痰散结方对载脂蛋白A1、过氧化物酶1等功能蛋白表达的综合性调节可能是其发挥抗胃癌作用的重要机制。     

消痰散结方对MKN—45人胃癌细胞ICAM—1表达的影响

目的：观察水痰散结方对体外培养的胃癌细胞粘附分子ICAM－1表达的影响，初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节。方法：制备消痰散结药物血清，体外培养MKN－45人胃癌细胞，拟消痰散结方药物血清干预培养细胞，采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中ICAM－1的。结果：中药组胃癌组织中ICAM－1表达水平明显低于空白对照组。结论：消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达，从而影响细胞的粘附性机能有关。     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响

目的观察消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,分为模型对照组和中药组。中药组给予消痰散结方水煎剂(含原药材2.51g/mL),模型对照组给予生理盐水,连续6周。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定P16基因表达,Methylight法测定P16基因甲基化水平。结果消痰散结方能抑制肿瘤生长,抑瘤率达54.82%。消痰散结方能逆转P16基因甲基化,增加P16mRNA表达,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长,逆转P16基因甲基化可能是其作用机制之一。     

消痰散结方对鼠胃移植瘤相关炎性因子表达的影响

目的观察消痰散结方对小鼠胃移植瘤和瘤旁胃组织中炎性因子白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素8（IL-8）表达的调节作用,探讨消痰散结方抑瘤、防复发的部分作用机制。方法 40只昆明小鼠随机分为正常组、模型组、喃氟啶组、消痰散结方组;除正常组外,其余各组通过移植S180瘤块,建立小鼠胃移植瘤模型;实验3周后,剥取肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率;运用RT-PCR及ELISA方法分别检测瘤及瘤旁胃组织中IL-6mRNA及IL-8蛋白表达。结果正常胃组织-瘤旁胃组织-瘤组织中IL-6、IL-8表达呈递增趋势;消痰散结方较喃氟啶可明显抑制肿瘤生长、下调肿瘤及瘤旁胃组织中IL-6、IL-8的表达。结论消痰散结方可明显下调胃肿瘤及瘤旁胃组织中IL-6、IL-8表达,是其抑瘤、防复发的可能机制之一。     

消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中VEGF-C及其受体VEGFR-3表达的影响

目的 观察消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)及血管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)表达的影响,探讨消痰散结方防治胃癌淋巴转移的作用机制。     

益气活血方对胃癌前病变大鼠NF-κB、cyclinD1和p16表达的影响

目的:观察益气活血方对胃癌前病变大鼠NF-κB、cyclinD1和p16表达的影响。方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组8只和造模组56只,采用以MNNG损伤为主的综合法复制大鼠胃癌前病变模型,随机处死10只大鼠经病理确定造模成功后,再将46只造模组大鼠随机分为模型组12只、益气活血高、低剂量组各12只和胃复春组10只,分别给予益气活血方、胃复春混悬液灌胃治疗12周。免疫组化Envision法测定大鼠NF-κB、cyclinD1和p16的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织NF-κBp65/IκBα表达明显升高(P<0.01)。药物治疗后,益气活血高剂量组、胃复春组大鼠胃组织NF-κBp65表达较模型组明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达较模型组明显升高(P<0.01)。与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织cyclinD1和p16明显升高(P<0.01,P<0.05);药物治疗后,益气活血高剂量组及胃复春组大鼠胃组织cyclinD1表达较模型组比较明显降低(P<0.01,P<0.05);益气活血高剂量组大鼠胃组织p16表达较模型组明显升高(P<0.01)。结论:益气活血法可能通过减少致炎因子激活的NF-κB信号通路抑制cyclinDl,上调p16表达防治胃癌前病变,这可能是其防治胃癌前病变的作用机制之一。     

裸鼠人胃癌MKN-45细胞核转录因子NF-κBP^65蛋白与增殖细胞核抗原表达的相关性

目的：通过观察胃癌细胞核转录因子NF-κBP^65白与增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达及关系,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机数字表法分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预对胃癌组织核转录因子NF-κBP^65白、增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响及相关性。结果：①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的P65蛋白的阳性表达与模型组相比P〈0.05,有统计学意义;②消痰散结方低、中、高剂量组、5-Fu组的PCNA阳性表达率与模型组相比有统计学意义,P〈0.05;③胃癌细胞NF-κBP^65白与PCNA表达存在正相关（r=0.857,P〈0.01）。结论：胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的PCNA,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对PCNA的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,控制胃癌复发与转移。     

消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃腺癌组织中E-Cad表达的影响

目的：观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子E-Cad表达的影响，初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节。方法：建立裸鼠MKN-45人胃癌模型，采用免疫组化S-P法检测胃癌组织中E-Cad的表达。结果：中药组胃癌组织中E-Cad表达水平明显高于空白对照组。结论：消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达，从而影响细胞的粘附性机制有关。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的抑制作用观察

目的观察消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的抑制作用。方法采用MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源,采用OB胶粘合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。30只模型裸鼠分为模型组、中药组和化疗组,每组10只。中药组给予消痰散结方（0.4 mL/天）灌胃,化疗组给予喃氟啶0.4 mL/天灌胃,模型组无干预措施。用药6周后,测瘤质量、计算抑瘤率,检测5个微卫星不稳定位点（D17S250、D2S123、D5 S346、Bat-25和BAT26）的大小、峰高度及峰面积。结果中药组抑瘤率为40.84%,中药组的瘤质量明显低于模型组（P〈0.01）,与化疗组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。模型组高度微卫显不稳定发生率为70%,低度微卫星不稳定发生率为30%,使用消痰散结方治疗6周后,微卫星位点趋于稳定,均表现为微卫星稳定。结论消痰散结方对微卫星不稳定MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤有抑制作用。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型COX-2蛋白表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法,建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结方低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,运用免疫组化方法检测胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P<0.05,有统计学意义;③消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学意义,P<0.01,与5-Fu组相比无统计学差异,P>0.05。结论:消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45细胞原位移植瘤有较好的抗肿瘤作用,抑制胃癌细胞增殖作用是多靶点的,有较好稳定下调胃癌细胞COX-2蛋白表达的作用,并且呈剂量依赖性。