消痰散结方对胃癌组织核转录因子活性表达影响的研究

目的：通过建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,观察消痰散结方对胃癌组织核转录因子（NF-κB）活性表达的影响,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,采用EMSA方法检测胃癌组织NF-κB活性的表达。结果：①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异（P〈0.01）;②消痰散结方低、中、高剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比逐渐降低,且呈明显的剂量依赖效应。消痰散结方低剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比有统计学意义（P〈0.05）,消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的活性表达与模型组相比,P〈0.01,有显著统计学意义,但组间相比无统计学意义。结论：①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方可能通过抑制NF-κB活性而阻断胃癌细胞增殖进程,可有效抑制胃癌发展。     

裸鼠人胃癌MKN-45细胞核转录因子NF-κBP~(65)蛋白与增殖细胞核抗原表达的相关性

目的:通过观察胃癌细胞核转录因子NF-κBP65蛋白与增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达及关系,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机数字表法分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预对胃癌组织核转录因子NF-κBP65蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响及相关性。结果:①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的P65蛋白的阳性表达与模型组相比P0.05,有统计学意义;②消痰散结方低、中、高剂量组、5-Fu组的PCNA阳性表达率与模型组相比有统计学意义,P0.05;③胃癌细胞NF-κBP65蛋白与PCNA表达存在正相关(r=0.857,P0.01)。结论:胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的PCNA,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对PCNA的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,控制胃癌复发与转移。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响

目的:探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预胃癌组织NF-κBP65蛋白、COX-2蛋白表达的影响及相关性。结果:①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κBP65蛋白的阳性表达与模型组相比P0.05,有统计学意义;②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P0.05,有统计学意义,消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学差异,P0.01;③胃癌细胞中NF-κBP65蛋白与COX-2蛋白表达存在正相关(r=0.952,P0.01)。结论:胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的COX-2蛋白,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对COX-2的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,从而阻断胃癌发展,控制胃癌复发与转移。     

裸鼠人胃癌MKN-45细胞核转录因子NF-κBP^65蛋白与增殖细胞核抗原表达的相关性

目的：通过观察胃癌细胞核转录因子NF-κBP^65白与增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达及关系,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机数字表法分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预对胃癌组织核转录因子NF-κBP^65白、增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响及相关性。结果：①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的P65蛋白的阳性表达与模型组相比P〈0.05,有统计学意义;②消痰散结方低、中、高剂量组、5-Fu组的PCNA阳性表达率与模型组相比有统计学意义,P〈0.05;③胃癌细胞NF-κBP^65白与PCNA表达存在正相关（r=0.857,P〈0.01）。结论：胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的PCNA,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对PCNA的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,控制胃癌复发与转移。     

裸鼠人胃癌细胞核转录因子NF—κBP^65蛋白与端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白的表达及关系

目的：通过观察胃癌细胞核转录因子NF-κBP^65蛋白与端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白的表达及关系,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机数字表法分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预对胃癌组织NF-κBP^65蛋白、hTERT蛋白表达的影响及相关性。结果：①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κBP^65蛋白的阳性表达与模型组相比,P〈0．05,有统计学意义;②消痰散结方中剂量组、5-Fu组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组比较明显降低,P〈0．05,有统计学意义;消痰散结方高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组有显著差异,P〈0．01;③胃癌细胞NF-κBP^65蛋白与hTERT蛋白表达呈显著正相关（r=0．929,P〈0．01）。结论：胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF—κB及高表达的hTERT蛋白,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF—κB活性,阻断了NF—κB对hTERT的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,从而阻断胃癌发展,控制胃癌复发与转移。     

消痰散结方对荷瘤裸鼠胃癌组织中成纤维细胞活化蛋白表达的影响

目的：观察消痰散结方对MKN-45原位移植瘤裸鼠胃癌组织中成纤维细胞活化蛋白（fibroblast activation protein,FAP）表达的影响,探讨消痰散结方防止胃癌复发转移的作用机制。方法：建立人胃癌MKN-45裸鼠原位移植瘤模型,将40只模型鼠随机分为模型组、生理盐水组、中药组及化疗组,每组10只。观察各组荷瘤鼠肿瘤生长情况及抑瘤率;观察各组荷瘤鼠胃癌组织FAP蛋白及mRNA表达。结果：消痰散结方可明显抑制裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤的生长,下调胃癌组织中FAP蛋白及mRNA的表达。结论：消痰散结方可以下调FAP蛋白及mRNA的表达,可能是其抗胃癌复发转移的机制之一。     

消痰散结方对胃癌组织中癌基因ras及cerbB2在mRNA水平表达的影响

目的:探讨消痰散结方对胃癌组织中ras及cerbB2癌基因在mRNA水平表达的影响.方法:用40只BALB/c无胸腺裸鼠,建立人胃腺癌SGC-7901原位移植模型,建模次日随机分为对照组、化疗组、中药组、中药加化疗组,分别给予生理盐水、5-氟脲嘧啶(5-Fu)、消痰散结方及5-Fu加消痰散结方,共给药3周,12周左右拉颈处死.应用RT-PCR法检测各组胃癌组织中ras及cerbB2表达情况.结果:各组移植瘤组织ras/β-肌动蛋白(β-actin)值及cerbB2/β-actin值与对照组相比,均有显著性差异(P<0.01),且中药组作用优于化疗组,有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论:消痰散结方对SGC-7901胃癌组织中ras及cerbB2癌基因在mRNA水平表达有明显下调作用,这可能是消痰散结方抑瘤抗转移作用机理的一个重要环节.     

NF-κB信号通路蛋白在木脂素对胃癌SGC-7901细胞抗增殖作用中的机制研究

目的探讨NF-κB信号通路蛋白在木脂素对胃癌SGC-7901细胞抗增殖作用中的机制。方法利用MTT、流式细胞术和Hochest染色、western blot方法检测木脂素对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、细胞周期和NF-κB信号通路相关蛋白p50和p65蛋白及bax和bcl-2蛋白表达的影响。结果 MTT结果表明,木脂可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,并具有浓度和时间依赖性(P0.05或P0.01);流式细胞结果表明,木脂素促进细胞凋亡,与对照组相比有显著性差异(P0.05),具有浓度依赖性,并阻止胃癌SGC-7901细胞从G0/G1期进入S期;western blot结果,木脂素下调p65、p50和bcl-2蛋白的表达而上调bax蛋白的表达。结论木脂素抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和凋亡与NF-κB信号通路密切相关。     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响

目的观察消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,分为模型对照组和中药组。中药组给予消痰散结方水煎剂(含原药材2.51g/mL),模型对照组给予生理盐水,连续6周。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定P16基因表达,Methylight法测定P16基因甲基化水平。结果消痰散结方能抑制肿瘤生长,抑瘤率达54.82%。消痰散结方能逆转P16基因甲基化,增加P16mRNA表达,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长,逆转P16基因甲基化可能是其作用机制之一。     

EGb761逆转NF-κB介导的胃癌细胞耐药及协同增敏的机制研究

目的 探讨银杏叶提取物（ginkgo biloba extract, EGb761）对顺铂诱导的胃癌细胞SGC-7901及胃癌耐药细胞SGC-7901/CDDP增殖和凋亡的影响及其对胃癌细胞化疗耐药的影响及其机制。方法 采用EGb761、顺铂单用及EGb761与顺铂联合应用处理人胃癌细胞株SGC-7901及耐药细胞SGC-7901/CDDP,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测两种细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测两种细胞中NIBP、NF-κB P65 mRNA和蛋白的表达。结果 顺铂和EGb761均对两种胃癌细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性,但SGC-7901/CDDP细胞对顺铂的敏感性较差。EGb761与顺铂联合应用可明显增强SGC-7901及SGC-7901/CDDP细胞株对顺铂的敏感性并促进细胞的凋亡。SGC-7901/CDDP细胞中NIBP和NF-κB p65的mRNA及蛋白相对表达水平均高于SGC-7901细胞（P＜0.05）,EGb761能明显抑制由顺铂诱导的NIBP和NF-κB p65的表达（P＜0.05）。结论 EGb761具有显著的化疗增敏效果,并能逆转胃癌细胞耐药,增强顺铂对胃癌细胞生长的抑制作用并促进细胞凋亡。其逆转肿瘤细胞耐药和化疗增敏的作用机制可能是通过抑制NF-κB通路的活性,减少NIBP和NF-κB p65的表达而实现。     

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中核转录因子κBp65基因和蛋白表达的影响

目的观察四神丸对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织中核转录因子κB p65(NF-κB p65)基因和蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将实验大鼠分为空白组、模型组、四神丸组和柳氮磺胺嘧啶(SASP)组,采用TNBS/乙醇溶液灌肠法造模,四神丸组给予四神丸浸膏剂5 g/kg灌胃,SASP组给予0.3 g/kg SASP灌胃,空白组和模型组灌服等体积生理盐水。肉眼观察各组大鼠结肠大体形态损伤并评分,采用免疫组化和反转录法检测NF-κB p65蛋白和基因表达水平。结果肉眼观察,模型组大鼠结肠组织黏膜层可见炎症和溃疡形成,与空白组比较,差异有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠结肠组织NF-κB p65基因和蛋白表达均高于空白组,差异有统计学意义(P0.01);四神丸组NF-κB p65基因和蛋白表达均较模型组降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论四神丸对UC具有治疗作用,其机制可能与激活NF-κB信号通路有关。     

消痰和胃方干预胃癌前病变大鼠NF-κB通路的研究

目的:检测消痰和胃方对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织NF-κB通路的影响,探讨该方干预胃癌前病变的机制。方法:清洁级Wistar雄性大鼠,空白对照组和模型组,模型组采用以化学干预为主的多因素造模方法,共32周。模型组再分为模型对照组、维酶素组、消痰和胃方组。干预6周后采用Western blot检测大鼠胃黏膜组织中p-NF-κB p65蛋白表达的差异。结果:与模型对照组相比,消痰和胃方组p-NF-κB p65表达降低(P<0.05),维酶素组无统计学意义(P>0.05),并且消痰和胃方能改善胃癌前病变大鼠整体情况,较维酶素更优。结论:消痰和胃方防治胃癌前病变的机制有可能通过干预NF-κB通路实现的,值得进一步深入研究。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组、消痰散结方低剂量组、消痰散结方中剂量组、消痰散结方高剂量组、5-Fu组,每组8只,运用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR方法检测hTERT蛋白及mRNA的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中、高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01);③消痰散结方中、高剂量组hTERTmRNA含量与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方通过下调hTERT蛋白及mRNA的表达而抑制端粒酶的活性,使癌细胞端粒长度逐渐缩短,丧失无限增殖能力,起到抑制肿瘤细胞生长、增殖的作用。     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型E-cad基因甲基化的影响

目的:研究消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法:培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,造模后分为模型对照组和中药组,分别给予生理盐水和消痰散结方水煎剂。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定E-cad基因表达,Methylight法测定E-cad基因甲基化水平。结果:消痰散结方能抑制肿瘤生长以及转移,抑瘤率达45.17%。消痰散结方能逆转E-cad基因甲基化,增加E-cad mRNA表达,与模型对照组比较,差异有非常显著性意义(P0.01)。结论:消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长和转移,逆转E-cad基因甲基化可能是其作用机制之一。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型COX-2蛋白表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法,建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结方低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,运用免疫组化方法检测胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P<0.05,有统计学意义;③消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学意义,P<0.01,与5-Fu组相比无统计学差异,P>0.05。结论:消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45细胞原位移植瘤有较好的抗肿瘤作用,抑制胃癌细胞增殖作用是多靶点的,有较好稳定下调胃癌细胞COX-2蛋白表达的作用,并且呈剂量依赖性。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞超微结构的影响

目的观察消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞超微结构的影响,探讨其治疗胃癌的作用机制。方法采用MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源,采用0B胶黏合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。40只模型裸鼠分为空白对照组、模型组、消痰散结方组、替加氟组,每组10只。消痰散结方组给予消痰散结方灌胃,替加氟组给予替加氟灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,空白对照组正常饮食喂养。干预6周后,测瘤质量,计算抑瘤率。透射电镜观察药物作用后移植瘤细胞超微结构。结果消痰散结方组瘤质量明显低于空白对照组及模型组(P0.05,P0.01),其抑瘤率为46.2%;电镜观察可见胃癌细胞出现典型细胞凋亡的形态学改变。结论消痰散结方具有诱导MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞凋亡的作用,提示诱导细胞凋亡是消痰散结方治疗胃癌的可能作用机制之一。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的抑制作用观察

目的观察消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的抑制作用。方法采用MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源,采用OB胶粘合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。30只模型裸鼠分为模型组、中药组和化疗组,每组10只。中药组给予消痰散结方（0.4 mL/天）灌胃,化疗组给予喃氟啶0.4 mL/天灌胃,模型组无干预措施。用药6周后,测瘤质量、计算抑瘤率,检测5个微卫星不稳定位点（D17S250、D2S123、D5 S346、Bat-25和BAT26）的大小、峰高度及峰面积。结果中药组抑瘤率为40.84%,中药组的瘤质量明显低于模型组（P〈0.01）,与化疗组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。模型组高度微卫显不稳定发生率为70%,低度微卫星不稳定发生率为30%,使用消痰散结方治疗6周后,微卫星位点趋于稳定,均表现为微卫星稳定。结论消痰散结方对微卫星不稳定MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤有抑制作用。     

黄连碱通过调控IκBα/NF-κB通路防治化疗相关性腹泻的实验研究

目的观察黄连碱对化疗相关性腹泻(CID)裸鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法 32只裸鼠随机分为正常组、模型组、洛哌丁胺组、黄连碱组,每组8只;正常组腹腔注射1 m L生理盐水,模型组、洛哌丁胺组、黄连碱组均腹腔注射伊立替康溶液(剂量为350 mg/kg)进行造模。正常组、模型组均灌胃1 m L0.5%CMC-Na溶液,洛哌丁胺组灌胃洛哌丁胺混悬液(0.3 mg/kg),黄连碱组灌胃黄连碱混悬液(30 mg/kg),2次/天,共4天。观察裸鼠腹泻情况、小肠病理改变,ELISA法检测回肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)含量,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB p65蛋白表达。结果正常组均未发生腹泻,模型组、洛哌丁胺组及黄连碱组均出现腹泻;与模型组比较,洛哌丁胺组、黄连碱组2~3分腹泻发生率及腹泻评分均明显下降(P0.05,P0.01)。洛哌丁胺组回肠破坏程度较模型组稍减轻,差异无统计学意义(P0.05),黄连碱组裸鼠回肠黏膜损伤程度较模型组及洛哌丁胺组均明显减轻(P0.01)。与正常组比较,模型组回肠组织中TNF-α、IL-6及NF-κB p65表达均升高(P0.01),IκBα表达明显降低(P0.01);与模型组和洛哌丁胺组比较,黄连碱组TNF-α、IL-6及NF-κB p65表达均明显降低(P0.05,P0.01),IκBα表达均明显升高(P0.05,P0.01)。结论黄连碱可降低伊立替康引起的CID发生率,减轻腹泻程度及回肠黏膜损伤,其机制可能与其上调IκBα表达,抑制NF-κB通路活化,减轻肠道炎症反应有关。     

香连丸对化疗相关性腹泻裸鼠模型的作用观察

目的观察香连丸对化疗相关性腹泻(CID)裸鼠腹泻程度、肠道损伤、炎症细胞因子、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法腹腔注射法制备CID裸鼠模型,裸鼠随机分成正常组、模型组、香连丸组,香连丸组灌胃给予香连丸,正常组、模型组均灌胃给予生理盐水。给药4 d后,观察裸鼠腹泻情况、小肠病理改变、血清中细胞因子含有量及小肠组织中NF-κB表达情况。结果模型组2~3分腹泻发生率、腹泻评分及小肠病理损伤程度均较正常组明显升高(P0.01),血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的含有量均显著升高,IL-4含有量显著降低(P0.05,P0.01),小肠组织NF-κB p65表达显著升高(P0.01)。香连丸组上述指标均较模型组明显改善(P0.05,P0.01)。结论香连丸对CID具有一定的治疗作用,其机制可能与抑制NF-κB p65通路活化,进而下调促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ,并上调抑炎细胞因子IL-4的表达有关。     

消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中血管内皮生长因子D表达的影响

目的观察消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中血管内皮生长因子D（VEGF-D）表达的影响,探讨消痰散结方防治胃癌淋巴转移的作用机制。方法 30只裸鼠建立MKN-45人胃癌原位移植模型,并随机分为生理盐水组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组及消痰散结方组,每组10只,分别给予生理盐水、5-Fu和消痰散结方干预后,采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测瘤组织VEGF-D蛋白及mRNA的表达。结果消痰散结方可不同程度下调肿瘤组织中VEGF-D蛋白和mRNA水平的表达,与生理盐水组比较,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论调控淋巴管生长因子VEGF-D蛋白和mRNA的表达是消痰散结方防治胃癌淋巴转移的可能机制之一。