甲氧滴滴涕对人绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响。方法:用胰蛋白酶消化后再经流式细胞仪分离得到人绒毛外滋养细胞进行原代培养及鉴定。细胞分为MXC(1μmol/L,3μmol/L、5μmol/L、7μmol/L)处理组及空白对照组,培养12h、24h和48h。用侵袭小室检测每组各时间点的侵袭能力,Western blot检测各组各时间点MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1表达,RT-PCR法检测MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达。结果:MXC处理组滋养细胞侵袭能力呈时间剂量依赖型下降,MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达下降,MMP-9、MMP-2表达下降,TIMP-2、TIMP-1表达增高。MMP-2及其mRNA下降程度与MXC有时间剂量效应。结论:MXC可通过改变基质金属蛋白酶及其抑制物的比例降低绒毛外滋养细胞侵袭能力。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯可抑制人原代培养早孕绒毛滋养细胞浸润能力

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯[di-(2-ethylexyl)phthalate,DEHP]对人原代培养早孕绒毛滋养细胞浸润能力及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1和TIMP-2表达的影响,探讨DEHP对妊娠的影响及其毒性机制。方法2006年12月于北京军区总医院采用不同浓度DEHP预处理人原代培养早孕绒毛滋养细胞,采用Transwell体外浸润实验检测滋养细胞浸润能力的改变。RT-PCR法检测滋养层细胞侵袭性相关基因MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA表达,Western blot法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达水平。结果DEHP作用后,滋养细胞浸润能力明显下降。当DEEP为50、100μmol/L时,MMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA表达量分别为0.35±0.07、0.26±0.03、0.97±0.18和0.30±0.10、0.20±0.05、1.02±0.20,与DEEP为0时MMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA的表达量(0.77±0.15、0.45±0.04、0.80±0.20)比较P<0.05;当DEEP为50、100μmol/L时,MMP-2、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达量分别为0.35±0.03、0.23±0.05、0.69±0.08和0.24±0.02、0.17±0.02、0.86±0.10,与DEEP为0时MMP-2、MMP-9、TIMP-1的mR-NA的表达量(0.69±0.04、0.57±0.03、0.24±0.12)比较P<0.05。可见DEHP剂量≥50μmol/L时,滋养细胞MMP-2和MMP-9表达下降、TIMP-1表达增加,且呈剂量依赖性。结论DEHP可通过抑制MMP-2、MMP-9的表达并促进TIMP-1表达,影响滋养细胞浸润能力。     

低分子肝素对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响作用

目的:研究低分子肝素(LMWH)对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响。方法:取妊娠8~10周正常绒毛组织,酶消化法分离人早孕绒毛滋养层细胞,分别置2%和20%O_2分压的细胞培养箱培养。用不同浓度LMWH(0、0.1、5、10IU/ml)处理滋养细胞,观察滋养层细胞侵袭力的改变,检测细胞中HIF-1α、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-3表达。结果:低氧浓度下,早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力随着LMWH浓度(0,0.1,5IU/ml)升高而增强,但高浓度的LMWH(10IU/ml)对其有抑制作用;随着LMWH浓度增加,HIF-1α和MMP-2表达呈先上升后下降的趋势;TIMP-2、TIMP-3表达改变的趋势与MMP-2相同。正常氧浓度下的滋养层细胞,其侵袭能力未见显著增强,各细胞因子的表达无上调。结论:低氧环境下,一定浓度的LMWH可提高早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力,其发生机制可能是通过诱导、增强滋养层细胞HIF-1α和MMP-2基因表达。     

白血病抑制因子对人早孕滋养细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的调节

目的:研究白血病抑制因子(LIF)对人早孕滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和MMPs组织抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:以不同浓度的LIF作用于体外培养的细胞滋养细胞,于2h、4h、12h收集细胞。用RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达。结果:LIF对人早孕滋养细胞MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达无明显作用。LIF作用4h和12h,实验组MMP-9 mRNA明显上升(P<0.01),并呈明显剂量依赖关系。结论:LIF可以在一定的时间和剂量范围内促进滋养细胞MMP-9的表达。推测LIF可能通过节制性调节MMPs的表达,进而分解子宫内膜细胞外基质,介导滋养细胞的入侵。     

雌二醇对BG-1卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响

目的:探讨雌二醇(E2)对卵巢癌细胞BG-1增殖、侵袭的影响及作用机制。方法:MTT法检测10-9~10-5mol/L E2作用于BG-1细胞72h后的细胞增殖率的变化,并筛选最适作用浓度。将BG-1分为4组:E2组、E2+ICI(ICI182,780 ER阻断剂)组、E2+PPT(特异性ERα激动剂)组和E2+DPN(特异性ERβ激动剂)组。MTT法检测不同药物作用72h后的细胞增殖率;RT-PCR、Western blot法分别检测药物作用6、24h和48h后各组细胞中cyclin(细胞周期素)D1和p21表达水平;ELISA检测10-9~10-5mol/L E2作用后,BG-1细胞中MMP-9水平的变化;Transwell侵袭实验检测E2及ER调节剂作用后BG-1细胞的侵袭力变化。结果:10-9~10-5mol/L E2作用于BG-1细胞72h后,细胞增殖率均高于对照组(P0.05),并且E2浓度为10-7mol/L时BG-1细胞的增殖率最高。不同药物作用后,E2+PPT组的细胞增殖率显著高于E2组(P0.05),E2+ICI组的细胞增殖率显著低于E2组(P0.05),而E2+DPN组细胞增殖率无显著变化(P0.05)。与E2组相比,E2+ICI组中cyclin D1表达明显降低,p21表达显著升高(P0.05);E2+PPT组中cyclin D1与p21的表达水平与E2+ICI组大致相反(P0.05);E2+DPN组中cyclin D1和p21的表达均无明显变化(P0.05)。10-9~10-5mol/L E2均可促进MMP-9分泌(P0.05),其中10-8mol/L E2作用3h后MMP-9分泌最多。E2组的侵袭力显著高于空白对照组,而E2+ICI组的侵袭力显著低于空白对照组(P0.05)。结论:E2通过ERα信号通路促进BG-1细胞增殖;E2还能促进MMP-9分泌,增强BG-1细胞的侵袭力。     

MMP-9在绒毛外滋养细胞诱导内皮细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达对血管内皮细胞凋亡的影响。方法:MMP-9的siRNA转染绒毛外滋养细胞株(TEV-1),利用实时定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)和ELISA法检测转染前后细胞中MMP-9、FasL基因及蛋白表达的变化;通过trans well共培养技术,研究滋养细胞对内皮细胞凋亡的影响。结果:(1)MMP-9 siRNA转染后24h,滋养细胞MMP-9 mRNA的表达较对照组明显降低(P0.05),而FasL mRNA表达与对照组无明显差异(P0.05);转染后48h,细胞培养液中MMP-9蛋白及FasL蛋白表达均较对照组显著降低(P0.05);(2)与未转染者比较,转染MMP-9 siRNA的滋养细胞与内皮细胞共培养48h后,内皮细胞凋亡率显著降低,差异有显著性(P0.05)。结论:绒毛外滋养细胞表达MMP-9的水平影响其诱导内皮细胞凋亡的作用,此作用可能与MMP-9调节FasL蛋白的分泌表达有关。     

缺氧对大鼠肺泡上皮细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的 探讨氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)化学缺氧对大鼠肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AEC)凋亡的影响及相关凋亡蛋白缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-talpha,HIF-1α)的表达变化及意义.方法 将AEC进行体外培养,分4组,每组6个样本.缺氧4 h组:选用化学缺氧物质CoCl2 500/μmol/L为作用浓度,诱导AEC缺氧,共培养4 h;缺氧24 h组:与CoCl2共培养24 h;缺氧48 h组:与CoCl2共培养48 h;常氧对照组:不做任何特殊处理.利用荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电子显微镜进行细胞凋亡的形态学观察,Western印记法检测HIF-1α蛋白的表达情况.结果 (1)荧光显微镜的结果 显示缺氧4、24、48 h组细胞凋亡率分别为(5.83±0.76)%、(15.00±3.28)%和(51.50±3.00)%,均高于常氧对照组[(1.50±0.50)%](P＜0.05);(2)流式细胞仪的结果 与荧光显微镜的结果一致;(3)透射电子显微镜可以观察到AEC凋亡的形态学改变,缺氧24 h显著;(4)缺氧4、24、48 h组HIF-1α蛋白的表达分别为0.69±0.035、1.02±0.044和0.71±0.046,均高于常氧对照组(0.21±0.026)(P＜0.01);(5)各组HIF-1α蛋白变化与荧光显微镜及流式细胞仪检测的细胞凋亡率变化均呈正相关(r=0.484,P=0.016;r=0.713,P=0.009).结论 缺氧对大鼠AEC的生存有抑制作用,这种抑制作用与缺氧引起的细胞凋亡有关;HIF-1α可能参与了缺氧诱导AEC凋亡的发生,而AEC凋亡可能又参与了缺氧肺损伤的发病.     

瘦素对妊娠早期绒毛滋养细胞MMP-2/TIMP-2表达的调控作用

目的:观察体外模拟早孕微环境(雌激素、孕激素)条件下瘦素(leptin)对妊娠早期绒毛滋养细胞MMP-2/TIMP-2表达的影响,初步探讨其调控机制及意义.方法:选取正常妊娠妇女人工流产绒毛组织(6～9周),按常规方法分离滋养细胞,分为雌激素加孕激素(E+P组)、瘦素组(leptin组)、雌激素加孕激素加瘦素组(E+P+leptin组)、空白对照组(N组).置37℃、5%CO2培养24小时,收集细胞及培养上清,流式细胞仪检测瘦素受体(leptin R)表达;ELISA检测上清中可溶性瘦素受体(sleptin-R)表达,RT.PCR检测MMP-2、TIMP-2 mRNA;酶谱检测上清中MMP-2表达.结果:流式细胞仪检测结果显示,E+P组滋养细胞leptin R表达显著上调(P<0.05),上清中未检测到sleptin-R;E+P组、leptin组和E+P+leptin组MMP.2均显著上调,TIMP-2的表达下调(P<0.05).E+P+leptin组的调节效应强于E+P组和leptin组(P<0.05).结论:leptin-leptin R途径参与滋养细胞MMP-2的上调,并增强雌、孕激素联合对MMP-2的上调作用.该调节途径可能通过调控MMP-2/TIMP-2的平衡来调节滋养细胞侵袭性.     

子痫前期患者血清对滋养-平滑肌细胞共培养体系平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨子痫前期血清对滋养-平滑肌细胞共培养体系滋养细胞侵袭力改变及对平滑肌细胞凋亡的影响.方法:采用组织块贴壁法培养人孕早期细胞滋养细胞(CTB)和人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),传代后建立滋养细胞与HUASMC共培养模型并分别加入正常和子痫前期患者静脉血清培养24小时并设立相对应的单培养组;用不同的方法检测细胞滋养细胞的侵袭能力、HUASMC活力、HUASMC凋亡率、滋养细胞基质金属蛋白酶MMP-2mRNA、MMP-9mRNA、人脐静脉内皮细胞自杀相关因子(Fas)及HUASMC的Fas配体(Fasl)mRNA的表达;HUASMC的Fas蛋白的表达.结果:子痫前期患者血清能显著抑制共培养体系中的细胞滋养细胞的侵袭能力,上调HUASMC活力,降低HUASMC早期凋亡率,降低细胞滋养细胞MMP-2mRNA、MMP-9mRNA、FasmRNA及HUASMC的Fasl mRNA和Fas蛋白水平的表达.结论:子痫前期血清可能通过降调细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9表达而影响滋养-平滑肌细胞共培养体系滋养细胞的侵袭能力,子痫前期血清培养滋养-平滑肌细胞共培养体的Fas/Fasl的表达异常可能与HUASMC凋亡下降有关.提示滋养细胞MMP-2、MMP-9、Fas/Fasl 系统的表达异常可能参与了子痫前期子宫螺旋动脉重铸障碍的病理过程.     

GPR30在妊娠期胎盘中的表达及其对滋养细胞侵袭能力影响的研究

目的:探讨G-蛋白偶联受体30(GPR30)在妊娠期胎盘中的表达,以及其对人胎盘滋养细胞侵袭力的影响。方法:免疫组化法检测早孕期绒毛、正常产妇胎盘和重度子痫前期患者胎盘组织中GPR30表达。用17-β-雌二醇(17β-E2)、GPR30激动剂G1和阻滞剂G15预处理体外培养绒毛组织和人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo。显微镜下观察体外绒毛组织滋养细胞生长侵袭范围,Transwell侵袭实验检测HTR8/SVneo细胞侵袭能力。免疫荧光法检测绒毛组织和HTR8/SVneo细胞中GPR30蛋白表达。Western blot法检测HTR8/SVneo细胞中GPR30和MMP-9蛋白表达。结果:GPR30在早期绒毛组织和正常末期胎盘滋养细胞上都有表达,且早孕期的表达水平高于正常末期胎盘,但在重度子痫前期胎盘上GPR30蛋白表达明显减少。E2及GPR30激动剂G1可增加滋养细胞的侵袭能力,阻滞剂G15则可下调其侵袭性;E2、G1可诱导滋养细胞GPR30蛋白表达上调,而G15则下调其表达。GPR30蛋白水平与侵袭相关蛋白MMP-9表达水平有相关性。结论:GPR30可能参与人类滋养细胞侵袭力的调节,对滋养细胞的侵袭力有正性促进作用。