强精煎对小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因表达影响的研究

目的：观察强精煎对实验小鼠睾丸Fas、Fasl、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：将80只健康雄性昆明种小鼠分为正常组、模型组、强精煎组、黄精赞育胶囊组,以环磷酰胺注射液40mg/kg腹腔注射制造小鼠生精功能障碍模型,以HE染色观察小鼠睾丸病理形态,采用Johnson评分评价精子发生和发生障碍程度,用免疫组织化学SABC法检测Fas、Fasl、Bcl-2和Bax蛋白在小鼠睾丸实质组织中的表达率。结果：模型组小鼠睾丸组织可见明显的病理损伤,强精煎组则生精功能良好,黄精赞育胶囊组稍差。与正常组比较,模型组Johnson评分偏低,且Fas和Fasl蛋白表达率偏高（P〈0.01）,强精煎组和黄精赞育胶囊组与正常组各方面差异均无统计学意义（P〉0.05）。与模型组比较,正常组、强精煎组和黄精赞育胶囊组睾丸Johnson评分偏高,Fas、Fasl和Bax蛋白表达率显著降低（P〈0.01）,Bcl-2表达率显著升高（P〈0.01）,细胞内Bcl-2/Bax比值显著升高（P〈0.01）。结论：强精煎可以抑制Bax、Fas和Fasl,并促进Bcl-2蛋白在受损伤小鼠睾丸实质组织中的表达。     

甲醛对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达及超微结构改变的影响

目的:研究甲醛对小鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达及超微结构的改变.方法:取24只雄性清洁级(ICR)小鼠,随机分为4组,每组6只,用0.2、2、20 mg/kg甲醛腹腔注射,每天一次,连续5 d,第6天用免疫组化法测定小鼠睾丸生精细胞的Bcl-2、Bax蛋白表达率;用电镜观察小鼠睾丸生精细胞超微结构变化.结果:小鼠睾丸生精细胞的Bcl-2蛋白表达率明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05),Bax蛋白表达率明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05);电镜观察结果显示,各浓度甲醛能使生精细胞的细胞核、染色质、线粒体等超微结构发生不同程度的病理改变.结论:甲醛可使小鼠生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达及超微结构发生显著性改变,从而诱导细胞凋亡.     

补肾生精丸对生精细胞损伤模型大鼠生精细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的影响

目的 观察补肾生精丸对腺嘌呤所致生精细胞损伤模型大鼠生精细胞凋亡的影响及凋亡相关基因的调控情况.方法 SD大鼠40只随机分为4组:正常组、模型组、中药治疗组(补肾生精丸组)、中药对照组(五子衍宗丸组).以腺嘌呤灌胃诱发生精细胞损伤肾阳虚模型,用TUNEL法检测各组大鼠睾丸组织生精细胞的凋亡情况;用免疫组化的方法检测Bcl-2、Bax、Fas及FasL的表达.结果 补肾生精丸能够抑制大鼠睾丸曲细精管生精细胞的凋亡,上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax、Fas、FasL的表达,与模型组比较有统计学意义(P<0.01).结论 补肾生精丸对腺嘌呤致生精细胞损伤模型大鼠生精细胞的凋亡有一定的抑制作用,其作用可能与该药调控Bcl-2、Bax、Fas、FasL的表达有关.     

育阴灵冲剂对自然流产小鼠蜕膜细胞凋亡调控基因作用的实验研究

目的探讨补肾中药方育阴灵冲剂对自然流产小鼠的保胎机理。方法建立正常妊娠模型CBA/J×BALB/c和自然流产模型CBA/J×DBA/2。正常妊娠模型孕鼠灌服生理盐水,自然流产模型孕鼠随机分为中药组(灌服育阴灵冲剂)、西药组(腹腔注射CsA)、模型组(灌服生理盐水)。孕13 d观察各组小鼠的流产情况,用免疫组化测定4组孕鼠蜕膜细胞Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达,并对其染色强度进行半定量分析。结果中药组、西药组胚胎吸收率明显低于模型组(P0.05),与正常组相比,中药组、西药组的胚胎吸收率变化不明显(P0.05)。与模型组相比,中药组、西药组小鼠蜕膜细胞FasL、Bax的表达降低,Bcl-2表达升高(P0.05);与正常组相比,中药组、西药组FasL的表达均有所升高(P0.05),Bax的表达升高,Bcl-2的表达降低(P0.05);中药组与西药组比FasL、Bax、Bcl-2的表达均无统计学意义(P0.05);Fas的表达各组比较无明显差异(P0.05)。结论育阴灵冲剂的保胎作用可能与其纠正免疫失衡状态及降低流产率有关。     

Bcl-2/Bax、Fas/Fasl在子宫内膜息肉中的表达及意义

目的 研究凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/自血病-2及其同源蛋白(Bcl-2/Bax)及肿瘤坏死因子和神经生长因子受体跨膜蛋白及其配体(Fas/Fasl)在子宫内膜息肉中的表达,探讨子宫内膜息肉形成的原因和机制.方法 选择子宫内膜息肉患者63例作为研究组,正常子宫内膜者55例作为对照组.采用免疫组织化学二步法检测两组患者增生期及分泌期Bcl-2、Bax及Fas、Fasl的表达,作半定量分析后进行组间比较.结果 (1)与对照组增生期比较,研究组增生期Bcl-2及Bcl-2/Bax均明显升高(均P<0.05);与对照组分泌期比较.研究组分泌期Bcl-2、Bcl-2/Bax均明显升高(均P<0.05),而Bax明显降低(P<0.05).(2)研究组和对照组增生期Fas均呈中等强度表达,而且研究组增生期Fas的表达明显低于对照组(P<0.05);研究组分泌期Fas及Fasl的表达减弱,均明显低于对照组(均P<0.05).(3)研究组Bcl-2的表达与Fas的表达无明显相关性(r=0.083,P>0.05),而对照组Bcl-2的表达与Fas的表达呈显著负相关(r=0.934,P<0.01).结论 凋亡机制调控失常可能参与了子宫内膜息肉的发生、发展.     

羊睾丸提取液对铅暴露小鼠睾丸生精细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究羊睾丸提取液对铅暴露小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法 30只成年雄性昆明种小鼠分为3组:对照组、实验1组和实验2组,分别给予生理盐水、醋酸铅、醋酸铅+羊睾丸提取液,每天1次,共14 d.停药1周后手术取睾丸.用免疫组织化学技术检测睾丸生精细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达.结果 实验1组细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达较对照组差异均有显著性(P<0.01),实验2组较对照组均无显著性差异(P>0.05).结论 一定量的铅负荷可导致小鼠生精细胞凋亡,而羊睾丸提取液可通过上调Bcl-2及下调Bax的表达抑制铅暴露所导致的生精细胞凋亡.     

Bcl-2、Bax、Fas在大肠癌脾胃虚弱证病人舌苔脱落细胞表达及其相关性研究

目的:探讨舌苔脱落细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas表达水平与大肠癌脾胃虚弱证的关联性.方法:用免疫组化方法,检测舌苔脱落细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas的阳性表达率.结果:三组间Bcl-2、Bax蛋白阳性表达率有统计学意义,P<0.05;Fas蛋白阳性表达率无统计学意义,P>0.05.结论:Bcl-...     

BCl-2iBax、Fas／Fasl在子宫内膜息肉中的表达及意义

目的研究凋亡相关基因B细胞淋巴瘤／白血病-2及其同源蛋白（Bcl-2／Bax）及肿瘤坏死因子和神经生长因子受体跨膜蛋白及其配体（Fas／Fasl）在子宫内膜息肉中的表达,探讨子宫内膜息肉形成的原因和机制。方法选择子宫内膜息肉患者63例作为研究组,正常子宫内膜者55例作为对照组,采用免疫组织化学二步法检测两组患者增生期及分泌期Bcl-2、Bax及Fas、Fasl的表达,作半定量分析后进行组间比较。结果（1）与对照组增生期比较,研究组增生期Bcl-2及Bcl-2／Bax均明显升高（均P〈0.05）;与对照组分泌期比较,研究组分泌期Bcl-2、Bcl-2／Bax均明显升高（均P〈0.05）,而Bax明显降低（P〈0.05）。（2）研究组和对照组增生期Fas均呈中等强度表达,而且研究组增生期Fas的表达明显低于对照组（P〈0.05）;研究组分泌期Fas及Fasl的表达减弱,均明显低于对照组（均P〈0.05）。（3）研究组Bcl-2的表达与Fas的表达无明显相关性（r=-0.083,P〉0.05）。而对照组Bcl-2的表达与Fas的表达呈显著负相关（r=-0.934,P〈0.01）。结论凋亡机制调控失常可能参与了子宫内膜息肉的发生、发展。     

生精汤对腺嘌呤所致雄性不育大鼠睾丸的实验研究

目的:研究生精汤对不育大鼠睾丸生精细胞凋亡及增殖的影响.方法:选择雄性SD大鼠,用腺嘌呤制作不育大鼠模型,应用免疫组织化学法和图像分析系统计算Bcl-2、Bax的平均光密度及PCNA的阳性细胞率.结果:与模型组比较,生精汤高剂量组睾丸Bcl-2蛋白的表达显著增加(P<0.01),Bax的表达降低(P<0.05).PCNA阳性细胞率升高(P<0.01).结论:生精汤通过抑制睾丸生精细胞的凋亡及促进生精细胞增殖来改善不育大鼠的生殖功能.     

宫瘤消胶囊对子宫内膜异位症大鼠异位内膜中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察宫瘤消胶囊对子宫内膜异位症(内异症)模型大鼠异位内膜中凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白的表达的影响,为该药治疗内异症提供理论依据。方法:于大鼠动情期行自体移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、桂枝茯苓胶囊组及宫瘤消胶囊小、中、大剂量组,各组分别给予指定药物进行灌胃干预,另取一组正常大鼠为正常内膜组,用生理盐水灌胃。用免疫组织化学法检测各组大鼠异位内膜中凋亡基因Bcl-2和Bax的蛋白表达情况。结果:与正常内膜组比较,模型组Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白的表达明显升高,Bax/Bcl-2比值降低(P0.01);与模型组比较,宫瘤消胶囊各剂量组Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax/Bcl-2比值增加(P0.05,P0.01),且作用随药物剂量增加而增加(P0.05,P0.01)。结论:宫瘤消胶囊可能通过调节凋亡基因Bcl-2和Bax的表达来实现对异位内膜的凋亡的控制。     

补肾活血方对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响

目的探讨补肾活血方对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡及各级生精细胞数的影响。方法将50只3月龄雄性SD大鼠先随机抽出10只为假手术组，其余40只大鼠采用肾静脉缩窄法建立精索静脉曲张病理模型，造模完成后再随机均分为模型组，补肾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组。造模后48d开始给药，连续给药60d，用流式细胞仪检测各纽大鼠睾丸生精细胞凋亡数、凋亡率及各级生精细胞数。结果假手术组未出现明显的凋亡峰，模型组与各治疗组均出现明显的凋亡峰，且模型组大鼠睾丸生精细胞凋亡率显著高于各治疗组（P〈0．01）。各级生精细胞数比较，1C细胞（精子细胞与精予）数模型组与各治疗组比较有显著性差异（P〈0．05）；2C细胞（次级精母细胞）数各组间比较无显著性差异；4C细胞数（初级精母细胞）模型组与治疗组比较有非常显著性差异（P〈0．01）。结论生精细胞大量凋亡是精索静脉曲张导致不育的重要病理机制，补肾活血方能降低生精细胞凋亡率，提高模型动物各级生精细胞数量。     

禁水致脱水对大鼠睾丸内精子输送影响的形态定量研究

目的:确定脱水是否影响睾丸产生的精子向附睾的输送。方法:把30只51～52天龄的雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成两组:1组既喂食(颗粒饲料)又喂水(对照组,n=18);另1组只喂食不喂水(实验组,n=12)。4～5 d后取一侧睾丸和附睾,制作甲基丙烯酸树脂包埋切片,观察并定量研究其组织学变化。结果:对照组分别有5.9%和14.2%的生精小管轮廓可见生精细胞排列疏松、长形精子细胞滞留,而实验组的这两个结果分别高达29.4%和53.5%。与对照组相比,实验组附睾头部和尾部的体积分别减少41%和26%,但附睾管内的细胞团(包含精子和未成熟生精细胞)的总体积没有减少,球形精子细胞的数量(半定量分析)甚至增加。结论:禁水致短期急性脱水并未影响睾丸内精子和未成熟生精细胞的输送,但可能损害了生精细胞与Sertoli细胞之间的连接,从而使精子释放障碍,生精细胞排列疏松并提前脱落。     

补肾生精丸对生精细胞损伤模型大鼠精子动态参数的影响

目的研究补肾生精丸对生精细胞损伤大鼠精子运动能力的影响。方法SD雄性大鼠40只,随机分为5组:正常组、模型组、补肾生精丸大剂量组(480mg/kg)、补肾生精丸小剂量组(100mg/kg)、阳性对照组(五子衍宗丸480mg/kg),每组8只。采用腺嘌呤(250mg/kg)灌胃,诱发生精细胞损伤大鼠模型,通过计算机辅助精子分析系统(CASA)观察补肾生精丸对精子运动速度和运动方式的影响。结果各实验组可显著改善精子密度、活力、活率及动态参数曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP);大剂量组与阳性对照组疗效相似但优于小剂量组;平均移动角度(MAD)、精子头侧摆幅度(ALH)、摆动性(WOB)、各组均无显著差异。结论补肾生精丸具有改善精子密度、活力、活率及动态参数的作用。     

热休克蛋白60在高脂及高脂高糖大鼠睾丸中的表达及对生精细胞凋亡的影响

目的 探讨热休克蛋白60(Hsp60)在高脂及高脂高糖SD大鼠睾丸组织中的表达情况及对生精细胞凋亡的影响.方法 将雄性SD大鼠60只随机分成对照组15例、高脂组15例及高脂高糖组30例,对照组给予普通饲料喂养,高脂组给予高脂饲料喂养,24周后加入含0.2%丙硫氧嘧啶继续喂养;高脂高糖组给予高脂饲料喂养,24周后腹腔注射链脲佐菌素,所有大鼠均喂养36周.造模成功后取睾丸组织,用免疫组化法和免疫印迹试验分析检测大鼠睾丸组织中Hsp60表达情况,并检测组织中细胞凋亡情况.结果 对照组生精细胞数量多且按序逐层排列,管腔中央可见大量精子细胞,HSP60少量表达于次级精母细胞;高脂组及高脂高糖组生精细胞数量减少且排列紊乱,部分切片可观察到生精细胞脱落.免疫组化及免疫印迹试验结果均显示,高脂组及高脂高糖组Hsp60蛋白表达量高于对照组(P<0.05),而高脂组与高脂高糖组间比较差异无统计学意义(P>0.05).高脂组及高脂高糖组的生精细胞凋亡数量明显多于对照组,且高脂高糖组生精细胞凋亡数量多于高脂组(P<0.05).结论 高脂及高脂高糖大鼠睾丸生精细胞凋亡的发生可能与Hsp60密切相关.     

小鼠骨髓间质干细胞来源的胞外囊泡对尼古丁诱导的小鼠生精细胞损伤的修复作用

目的: 构建尼古丁诱导的小鼠生精细胞体外损伤模型,探讨小鼠骨髓间质干细胞来源的胞外囊泡(mouse bone marrow mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles, mBMMSCs-EVs)对于小鼠GC-1生精细胞损伤的修复作用。方法:采用不同浓度尼古丁(0、8、16、32 μg/mL)处理GC-1生精细胞24、48、72 h,通过MTT实验筛选尼古丁诱导GC-1生精细胞损伤的最适浓度和时间;将GC-1生精细胞分为对照组、尼古丁组、尼古丁+胞外囊泡组;通过MTT实验、Transwell实验和流式细胞术凋亡实验观察mBMMSCs-EVs干预前后受损生精细胞GC-1生物学特性的变化。结果:MTT实验结果表明,32 μg/mL尼古丁作用GC-1生精细胞24 h时,细胞增殖能力明显降低(P<0.05),mBMMSCs-EVs作用于尼古丁预处理后,细胞增殖能力明显增高(P<0.05）;与对照组相比,尼古丁组GC-1生精细胞迁移能力明显降低,细胞凋亡能力明显升高(P均<0.01),与尼古丁组相比,尼古丁+胞外囊泡组生精细胞增殖和迁移能力明显升高,细胞凋亡能力明显下降(P<0.01或<0.05)。结论:mBMMSCs-EVs可以逆转尼古丁引发的GC-1生精细胞增殖、迁移能力的损伤以及细胞凋亡。     

无精子症患者精液常规、精浆生化与生精细胞检测及其临床价值

目的:探讨无精子症患者精液常规、精浆生化与生精细胞检测在无精子症鉴别诊断中的价值。方法:通过改良巴氏染色法分析70例无精子症患者精液中的生精细胞,根据精液中生精细胞的有无将患者分为A组(有生精细胞,32例)和B组(无生精细胞,38例),另选取30名健康成年男性作为对照组。测定3组患者的精液量、精液pH值、精浆生化(精浆果糖含量、中性α-糖苷酶活性),并对A、B组进行睾丸穿刺活检。结果:A组精液量、pH值和精浆中性α-糖苷酶活性与对照组差异均无统计学意义(P>0.05),精浆果糖含量均明显高于B组和对照组(P<0.01);而B组精液量、pH值和精浆中性α-糖苷酶活性均显著低于对照组和A组(P<0.01)。精液生精细胞、精液常规和精浆生化联合检查对非梗阻性和梗阻性无精子症的诊断与睾丸穿刺活检符合率分别为97.3%(36/37)和97.1%(33/34)。结论:精液生精细胞检查结合精液常规及精浆生化检测可作为鉴别非梗阻性与梗阻性无精子症的重要指标,对指导临床治疗有重要意义。     

丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生精细胞PCNA表达的影响

目的:研究丝胶对2型糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA表达的影响.方法:40只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组10只.糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组大鼠均采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型.待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理;丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃(2.4g/kg/d),阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33mg/kg/d)灌胃,时间均为35天.采用ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮水平、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:糖尿病模型大鼠血清睾酮水平、睾丸生精细胞PCNA的表达均明显低于正常对照大鼠(P<0.01).丝胶可明显提高糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA的表达(丝胶治疗组与模型组比较:P<0.01);且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差别(P>0.05).结论:丝胶可显著提高2型糖尿病大鼠睾酮的合成及睾丸生精细胞PCNA的表达,明显改善2型糖尿病大鼠的生精功能,且作用与二甲双胍相当.     

菟丝子提取物对肾阳虚大鼠睾丸P450arom、CYP19表达及性激素和精子的影响

目的:观察菟丝子提取物作用于腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中P450arom、CYP19的表达、激素含量及精子数量的变化,探讨肾虚引起的雄性不育的病理机制及菟丝子提取物的作用。方法:30只雄性大鼠随机分为3组:正常对照组、模型组、治疗组,每组10只。用腺嘌呤150mg/(kg.d),分别给模型组及治疗组大鼠灌胃30天,诱导肾阳虚不育模型。诱导模型成功后,模型组用生理盐水灌胃30天;用菟丝子提取物200mg/(kg.d)给治疗组灌胃30天;用免疫组化法和Western-blot检测P450arom及CYP19在大鼠睾丸中的表达;用扫描电镜及透射电镜观察曲细精管中精子数量的变化;精子自动检测仪扫描观察精子的密度;放射免疫的方法检测FSH、LH、T、E2含量。结果:CYP19在大鼠睾丸的间质细胞、长形精子细胞中均有表达,其免疫阳性物质位于间质细胞质和长形精子细胞的头、尾部;P450arom表达于睾丸间质细胞的细胞质中。模型组大鼠睾丸CYP19、P450arom则明显低于正常对照组(P<0.05),治疗组CYP19、P450arom的表达明显高于模型组(P<0.05),正常对照组与治疗组之间无显著差异(P>0.05);正常对照组及治疗组曲细精管中的精子数量及FSH、LH、T和E2的含量明显高于模型组,正常对照组与治疗组之间无显著差异(P>0.05)。结论:P450arom及CYP19在睾丸表达的异常可能与肾虚引起的雄性大鼠不育有关,菟丝子提取物能够增加肾虚大鼠睾丸中P450arom、CYP19的表达,提高精子的数量及FSH、T、E2含量,为进一步探讨P450arom及CYP19在雄性肾虚不育模型大鼠精子生成和成熟中的作用及菟丝子提取物的作用机制提供了实验依据。