人胆固醇酯水解酶对泡沫细胞的影响及相关机制的研究

目的 探讨人胆固醇酯水解酶(hCEH)表达对泡沫细胞的影响及相关机制.方法 利用含hCEH的慢病毒转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,转染成功后巨噬细胞泡沫化.油红O染色和高效液相色谱分析hCEH对细胞内脂滴堆积情况及游离胆固醇含量变化的影响;Western blot检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达情况.结果 转染72 h后,荧光细胞数量最多,接近50％,hCEH在细胞内大量表达;随着时间的延长,油红O染色阳性细胞数逐渐减少,细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量逐渐下降;Western blot显示在0～8 h,ABCA1和ABCG1表达逐渐增加,8h达高峰,以后逐渐减少.结论 hCEH表达可以促进巨噬细胞表面ABCA1、ABCG1的表达,并且ABCA1、ABCG1之间存在一定的协同性,从而有效增加了游离胆固醇外流、减少胆固醇酯在细胞内聚积,抑制泡沫细胞形成.     

2型糖尿病患者三磷酸腺苷结合盒转运子G1表达下调不依赖于肝X受体的调节

目的:研究2型糖尿病患者胆固醇外流的功能改变及调节基因三磷酸腺苷结合盒转运子G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的表达,并探讨肝X受体(liver X receptor,LXR)对ABCG1表达的调节作用.方法:选取2型糖尿病和健康对照组各30例,抽取外周静脉血40 mL,分离人外周血单核细胞,经巨噬细胞集落刺激因子诱导分化为巨噬细胞.以[3H]胆固醇标记巨噬细胞,用液闪计数法测定胆固醇外流率.实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT PCR)法检测人单核巨噬细胞ABCA1/G1的mRNA表达,Western blot法检测ABCA1/G1的蛋白表达;siRNA法抑制LXRα、LXRβ,观察其对ABCG1mRNA表达的影响;电泳迁移率试验方法(electrophery mobility supershift assay,EMSA)检测LXR与ABCG1启动子区LXR反应元件(liver X receptor element,LXRE)结合的DNA结合蛋白的表达.结果:与健康对照组相比,2型糖尿病患者ABCG1的mRNA及蛋白表达水平与高密度脂蛋白介导的胆固醇外流率显著降低(19.0％ ±1.2％ vs.12.8％ ±3.6％,t=2.532,P=0.016),而ABCA1的mRNA及蛋白表达水平与载脂蛋白A1(Apolipoprotein A1,ApoA1)介导的胆固醇外流率差异无统计学意义(12.0％ ±1.2％vs.10.2％ ±2.3％,t=1.771,P=0.109).LXRα、LXRβ的mRNA表达水平以及LXR-LXRE DNA结合蛋白的表达差异均无统计学意义(t=1.025,P=0.315;t=-0.531,P=0.600;t=1.483,P=0.164),且LXR的siRNA抑制对ABCG1 mRNA的表达也无显著影响(t=2.143,P=0.061).结论:2型糖尿病患者巨噬细胞胆固醇外流功能的下降与ABCG1表达下调相关,而ABCG1的表达下调可能不依赖于LXR.     

吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ表达的影响

目的:探讨吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1 (ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)及B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)表达的影响及可能作用机制.方法:Real time PCR及Westernblot检测不同浓度吡格列酮(1,10,20,30 μmol/L)作用24 h,THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠmRNA和蛋白的表达.使用过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)特异性拮抗剂GW9662(2 μmol/L)阻断吡格列酮(10 μmol/L),24 h后检测THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-B Ⅰ mRNA和蛋白的表达.结果:吡格列酮可浓度依赖性增高24 h THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白的表达,GW9662可显著抑制吡格列酮诱导的THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白表达的增高(P＜0.05).结论:吡格列酮激动PPARγ上调THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ基因的表达.     

辛伐他汀对THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ABCA1、CD36表达影响

目的研究不同剂量辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ATP结合盒受体A1(ABCA1)、CD36表达的影响。方法建立ox-LDL诱导泡沫细胞模型,THP-1巨噬细胞体外培养,用辛伐他汀进行干预,用[3H]标记胆固醇,液体闪烁计数法检测胆固醇外流量,油红O染色观察细胞泡沫化程度,Western Blot、RT-PCR检测细胞内ABCA1及CD36蛋白和mRNA表达。结果辛伐他汀组较ox-LDL诱导组胆固醇外流明显增加,ABCA1受体蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.05),同时CD36受体蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)呈剂量依赖性。结论辛伐他汀可促进ox-LDL诱导的泡沫细胞胆固醇外流,抑制巨噬细胞泡沫化,该作用可能与辛伐他汀上调ABCA1及抑制CD36表达有关。     

胆固醇的跨膜外向转运及调控

组织细胞胆固醇的外向跨膜转运要有ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1、B族I型清道夫受体(SR-BI)、载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)/高密度脂蛋白(HDL)等多种膜蛋白的共同参与,并且受过氧化物酶增殖活化受体(PPAR)及肝X受体(LXR)的调控.文中就参与胆固醇跨膜转运过程的膜蛋白与调控因子的结构和功能作一综述.     

ABCA1-565C/T基因多态性对心梗患者来源的巨噬细胞胆固醇外流功能影响及其机制研究

目的 比较三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)启动子区-565C/T不同基因型的心肌梗死患者巨噬细胞胆固醇外流功能及ABCA1蛋白表达.方法 应用人外周血单核细胞原代细胞培养及乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)诱导获得巨噬细胞,3H标记的胆固醇测量巨噬泡沫细胞胆固醇外流功能;采用western blot技术测量ABCA1蛋白表达.结果 (1)单核细胞原代培养分化成巨噬细胞,经Ac-LDL诱导成泡沫细胞 ;(2)ABCA1-565C/T TT型巨噬泡沫细胞胆固醇流出率低于CT型和CC型;(3)TT型巨噬细胞中ABCA1蛋白表达显著低于CT型和CC型,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCA1-565 C/T位点 TT基因型ABCA1的蛋白表达及胆固醇外流功能较CC、CT型减低,推测TT基因型通过影响ABCA1蛋白表达而影响巨噬细胞胆固醇外流功能而促进冠心病的发生和发展.     

25-(R)-羟化胆固醇对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究肝X受体(LXR)激动剂25-(R)-羟化胆固醇对大鼠肝脏缺血再灌注(IR)后炎症反应及损伤的影响,并探讨其机理.方法 将18只Sprague-Dawley大鼠采用钳夹法制备肝脏IR模型,随机分为假手术组、IR组、羟化胆固醇预处理组,检测再灌注4h和8h后检测血清转氨酶以及肝组织髓过氧化物酶(MPO)水平.Wesstern blot方法检测肝组织ABCA1、ABCG1、ICAM-1及iNOS的蛋白表达水平.结果 IR组可见ALT、AST以及MPO水平明显升高,ICAM-1与iNOS的表达增加.与IR组相比,T0预处理使ALT、AST及MPO值明显降低,ICAM-1和iNOS的表达降低,然而ABCA1及ABCG1的表达明显升高.结论 25-(R)-羟化胆固醇引起的肝脏LXR激活可以通过抑制炎症反应,在肝脏IR损伤中发挥保护作用.     

槲皮素对非酒精性脂肪肝细胞ATP结合框转运子A1 mRNA表达的影响

目的: 探讨植物化学物质槲皮素(quercetin)对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver,NAFL)细胞三磷腺苷结合框转运子A1(ABCA1)表达的影响.方法: 建立人肝L-02细胞脂肪变性模型,以不同浓度的槲皮素处理细胞后,用RT-PCR检测ABCA1 mRNA的表达.结果: 槲皮素可以增加NAFL细胞ABCA1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性.结论: 槲皮素能上调胆固醇转运中的重要蛋白ABCA1的表达.     

高糖通过氧化应激及NF-κB通路抑制血管平滑肌细胞ATP结合盒转运体G1的表达

目的 探讨高糖对人血管平滑肌细胞(VSMCs)表面介导细胞内胆固醇逆向转运的ATP结合盒(ABC)转运体ABCA1和ABCG1表达的影响及可能机制.方法 VSMCs分别与不同浓度的D-葡萄糖(5～30mmol/L)孵育1～7 d,realtime PCR及Western blot方法检测葡萄糖对VSMCs的ABCA1和ABCG1 mRNA和蛋白水平的影响,以及高糖干预的VSMCs经抗氧化剂NAC和NF-κB抑制剂Bayll-7085、TPCK作用后,ABC转运体表达的变化.结果 高糖可时间和浓度依赖性地抑制VSMCs的ABCG1 mRNA和蛋白水平的表达,而对ABCA1的表达影响不明显.抗氧化剂和NF-κB抑制剂几乎可完全逆转高糖对ABCG1 mRNA表达的抑制.结论 高糖可抑制VSMCs表面促进胆固醇流出的重要受体ABCG1表达,其作用机制可能与高糖增加的氧化应激和活化的NF-κB信号通路有关.     

二苯乙烯苷对HepG2 细胞胆固醇含量的 影响及其作用机制研究

目的 探索二苯乙烯苷对HepG2 细胞胆固醇含量的影响及其作用机制。方法 将细胞随机分为 正常组、模型组（ox-LDL 50 mg/L）、A 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷250μmol/L）、B 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷188μmol/L）、C 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷125μmol/L）及D 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷62.5μmol/L）。细胞处理48 h 后，采用油红O 脂肪染色法观察、胆固醇测定试剂盒测 定各组胆固醇的含量并用逆转录聚合酶链反应检测肝癌HepG2 细胞ABCG1、ABCA1 及SR-BI 的表达水平。 结果 正常组、A、B、C 和D 组细胞内总胆固醇（TC）、细胞内游离胆固醇（FC）含量均低于模型组（P <0.05）， 同时A、B、C 和D 组上清TC 和FC 含量较正常组升高（P <0.05）。二苯乙烯苷能够降低HepG2 细胞内 胆固醇含量，增加胆固醇外流率（P <0.05），其中二苯乙烯苷浓度为125μmol/L 时达最高值。模型组细胞 ABCA1 mRNA 表达水平较正常组下降（P <0.05）。A、B、C 和D 组ABCA1、ABCG1 和SR-BI mRNA 表 达水平较模型组上升（P <0.05）。结论 二苯乙烯苷能够降低HepG2 细胞胆固醇的含量，其机制可能是通过 上调ABCA1、ABCG1 和SR-BI 的表达水平而增加胆固醇外流。     

LXR激动剂TO901317对成年小鼠海马齿回星形胶质细胞的作用

目的 观察肝脏X受体(liverX receptor,LXR)激动剂TO901317对成年小鼠海马齿回(dentate gyrus,DG)星形胶质细胞数量以及海马齿回颗粒下区(dentate gyrus subgranular zone,DG-SGZ)星形胶质细胞放射状突起的作用.方法 3个月龄健康雄性C57B/L...     

高糖降低内皮细胞ABCG1表达与内皮细胞损伤相关

目的探讨ABCG1在高糖促进内皮细胞功能损伤中的作用。方法不同浓度D-葡萄糖(5.6 mmol/L和30 mmol/L)干预血管内皮细胞24~72 h,Real time PCR及Western blotting检测葡萄糖对血管内皮细胞ABCG1 mRNA和蛋白水平的影响,液体闪烁仪分析细胞内胆固醇流出率,并测量葡萄糖干预后内皮细胞NOS活性;使用LXR内源性激活剂22(R)-hydroxycholesterol预先干预内皮细胞2 h,再予不同浓度葡萄糖干预48 h,观察血管内皮细胞ABCG1表达、功能及内皮细胞NOS活性的改变。结果高糖时间依赖性地抑制血管内皮细胞ABCG1mRNA和蛋白水平的表达,同时降低细胞内胆固醇向HDL流出,高糖也降低了内皮细胞eNOS活性。使用22(R)-hydroxycholesterol逆转高糖对ABCG1表达的抑制后,细胞内胆固醇流出率增加,高糖对内皮细胞eNOS活性的抑制也被部分逆转。结论高糖损伤内皮细胞功能的机制可能与高糖降低内皮细胞ABCG1表达相关。     

脂多糖对小鼠巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇流出的影响

目的观察脂多糖（LPS）对小鼠腹腔巨噬细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达和胆固醇流出的影响,探讨肝X受体α（LXRα）信号途径的作用。方法60只C57小鼠分成两组,分别注射LPS（1.0 mg/kg）和等量生理盐水。12 h后取腹腔巨噬细胞,实时荧光定量PCR和Western-blot印迹法检测ABCA1和LXRα mRNA和蛋白质表达水平,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。 LXRα激动剂22（R）-羟基胆固醇（22（R）-Hch）预处理小鼠,观察对LPS调节ABCA1表达和胆固醇流出的影响。结果 LPS抑制LXRα和ABCA1的mRNA和蛋白质表达;22（R）-Hch预处理抑制LPS对ABCA1表达和胆固醇流出的下调作用。结论通过抑制TLR4/LXRα信号途径的激活,可以减轻LPS诱导的急性时相反应中的炎症程度,上调ABCA1的表达,促进细胞内胆固醇的流出。     

缺氧对细胞膜ABCA1降解的影响及其机制研究

摘要：目的  探讨缺氧对细胞膜三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）降解的影响及其与钙蛋白酶的相关机制。方法  肝X受体激动剂TO-901317刺激RAW264.7细胞24 h,实时定量聚合酶链反应检测ABCA1 mRNA表达水平。生物素标记法提取细胞膜蛋白,Western blot检测细胞膜ABCA1蛋白水平表达。Western blot检测在放线菌酮存在或不存在条件下,TO-901317干预的RAW264.7细胞经过12 h缺氧（1%氧气O2）处理后细胞膜ABCA1蛋白水平,Suc-LLVY-氨基虫荧光素法检测缺氧细胞内钙蛋白酶活性。RAW264.7细胞给予钙蛋白酶抑制剂ALLN干预,检测细胞膜ABCA1蛋白表达及钙蛋白酶活性。结果  TO-901317上调ABCA1 mRNA及细胞膜蛋白水平表达。无论放线菌酮存在或不存在情况下,缺氧均能降低细胞膜ABCA1蛋白水平,升高钙蛋白酶活性。钙蛋白酶抑制剂ALLN能部分逆转缺氧诱导细胞膜ABCA1蛋白水平降低。结论  缺氧可能通过增加钙蛋白酶活性,从而加速细胞膜ABCA1蛋白降解。

     

香砂六君子汤调控CircRNA-0067835对脾虚高脂血症大鼠胆固醇外排的影响

目的 探讨香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠脂质沉积的影响及分子生物学机制.方法 30只SD大鼠随机分成空白对照组、高脂组、脾虚高脂组、香砂六君子汤高剂量组及香砂六君子汤正常剂量组.使用不节饮食加游泳直至力竭的复合方法15 d,建立脾虚模型.随后饲喂高脂饲料10周,检测大鼠血脂水平,确定高脂血症模型复制成功后,香砂六君子汤...     

High glucose decreases the expression of ATP-binding cassette transporter G1 in human vascular smooth muscle cells

Objective:ATP-binding cassette transporters(ABC)A1 and G1 play an important role in mediating cholesterol efflux and preventing macrophage foam cell formation.In this study,we examined the regulation of ABC transporters by high glucose in human vascular smooth muscle cells(VSMCs),the other precursor of foam cells.Methods:Incubation of human VSMCs with D-glucose(5 to 30 mM)for 1 to 7 days in the presence or absence of antioxidant and nuclear factor(NF)-κB inhibitors,the expressions of ABCA1 and ABCG1 were analyzed by real time PCR and Western blotting.Results:High glucose decreased ABCG1 mRNA and protein expression in cultured VSMCs,whereas the expression of ABCA1 was not significantly decreased.Down-regulation of ABCG1 mRNA expression by high glucose was abolished by antioxidant N-acetyl-L-cysteine(NAC)and NF-κB inhibitors,BAY 11-7085 and tosyl-phenylalanine chloromethyl-ketone(TPCK).Conclusion:High glucose suppresses the expression of ABCG1 in VSMCs,which is the possible mechanism of VSMC derived foam cell transformation.     

小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的 观察不同浓度小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 佛波酯（PMA）刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞后经乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)诱导泡沫化,建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。根据小檗碱干预与否及干预浓度将泡沫细胞分为空白对照组和小檗碱（5~20 μmol/L）干预组。细胞经分组处理24 h后,流式细胞仪检测AcLDL聚集量;酶法检测胆固醇和乙酰甘油含量;闪烁计数法检测各组胆固醇流出率,同时分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662预处理对胆固醇流出率的影响（以吡格列酮作为阳性对照）;RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1) mRNA表达。结果 与空白对照组比较,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞内AcLDL聚集量及胆固醇和乙酰甘油含量均显著减少（P＜0.01）,而胆固醇流出率上升（P＜0.01）,并呈现一定的量效关系。GW9662预处理后,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞的胆固醇流出率与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞LXRα和ABCA1 mRNA表达均高于空白对照组。结论 小檗碱可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出量,其作用机制可能与激活PPARγ途径,增加LXRα和ABCA1 mRNA表达有关。     

炎性细胞模型中姜黄素对胆固醇逆转运蛋白ABCA1和ABCG1基因的影响

目的 探讨炎性反应模型中,姜黄素对胆固醇逆转运蛋白基因表达的影响。 方法 将RAW264.7细胞分为6组:空白对照组,姜黄素10 μmol/L组,姜黄素20 μmol/L组,脂多糖(LPS)组,姜黄素10 μmol/L+LPS组和姜黄素20 μmol/L+LPS组。应用荧光定量PCR检测各组中RAW264.7细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、腺苷三磷酸结合盒转运体G1(ABCG1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达情况。 结果 LPS刺激可显著上调RAW264.7细胞ABCA1和TNF-α基因的表达(P<0.05),下调ABCG1基因的表达(P<0.05);姜黄素处理后可进一步上调ABCA1基因的表达(P<0.05),但是对ABCG1和TNF-α基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 在炎性反应条件下,姜黄素可进一步上调胆固醇逆转运关键基因ABCA1的表达,这可能是其抗动脉硬化的分子机制之一。     

肝X受体的激活对小鼠糖尿病肝脏脂肪酸合成酶表达的调节

目的 探讨肝X受体(LXR)对糖尿病肝脏脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响及机制.方法 将16周龄、雄性、C57BL/6背景下瘦素受体基因缺陷的db/db小鼠和对照的db/m小鼠,分别予以LXR激动剂TO901317(TO)(3 mg·kg-1·d-1)或DMSO灌胃处理7 d;TO(10 μmol/L)刺激人肝癌细胞系HepG2细胞24 h.此外,HepG2细胞转染小鼠FAS启动子报告基因表达质粒,同时转染pcDNA3.1表达载体或LXR或活化型固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)表达质粒12 h;采用免疫组织化学方法检测FAS蛋白在肝脏上的表达,实时荧光定量PCR和蛋白印迹方法分别在mRNA和蛋白水平检测FAS和SREBP-1的表达及TO对其表达的影响,荧光素酶报告基因方法检测LXR激动剂和SREBP-1c对小鼠FAS启动子活性的影响.结果 免疫组化结果显示FAS蛋白在肝脏广泛表达,主要位于肝细胞胞质内.TO可显著降低db/db小鼠空腹血糖水平[由(12.00±1.06)mmol/L下降到(7.73±0.69)mmool/L,P＜0.01]和糖化血红蛋白水平(由5.67%±0.10%下降到4.87%±0.08%,P＜0.01).db/db小鼠肝脏FAS mRNA水平明显高于db/m小鼠,约为5.5倍(P＜0.01);在蛋白水平,db/db小鼠肝脏上的FAS也明显高于db/m小鼠.TO处理可使db/m小鼠肝脏FAS mRNA表达升高约3.5倍(P＜0.05),可使db/db小鼠肝脏FAS mRNA升高约1.7倍(P＜0.05);TO处理可使db/m小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.4倍(P＜0.05),使db/db小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.1倍(P＜0.01).TO能够上调HepG2细胞FAS的mRNA表达水平,升高约1.9倍(P＜0.05);LXR的激活还能显著增加HepG2细胞中FAS基因启动子活性,约为对照组的1.5倍;过表达LXR或SREBP-1c也能增加HepG2细胞FAS基因启动子活性,分别为对照组的1.9倍和1.6倍(均P＜0.01).结论 LXR可能通过其本身的直接作用和SREBP-1C的间接作用上调肝脏FAS的表达,LXR可能介导了糖尿病肝脏的脂质生成过程.