人子宫内膜基质细胞及上皮细胞的分离

为获得供人胚胎联合培养的人子宫内膜上皮和基质细胞标本，必须进行人子宫内膜上皮和基质细胞的分离和培养。为此，我们对传统的Ｋｅｖｉｎ［１］方法进行改进，现介绍如下。一、材料及方法１．标本来源：选自１９９６年１０月～１９９７年１２月在山东省立医院妇产科因子宫肌瘤做子宫切除术病例１０例，年龄３６～４８岁，月经周期规律（２８～３２天），术前３个月未用激素，病理检查为增殖期至早分泌期子宫内膜。２．子宫内膜上皮细胞及基质细胞的分离：参照Ｋｅｖｉｎ等［１］方法加以改良：术后立即刮取子宫内膜，置于含无菌Ｄ－Ｈａｎ…     

子宫内膜体外三维重建的形态学研究

目的 :探索建立子宫内膜体外三维模型的方法。方法 :将分离的子宫内膜基质细胞和上皮细胞依次种植于生物可降解胶原 -聚乳酸羟基乙酸共聚物杂交聚合网上下两面 ,光镜及扫描电镜观察细胞的生长状况。结果 :接种后第 5天子宫内膜细胞能在聚合网上融合生长 ,第 1 4天细胞融合成片 ,呈复层生长 ,形成三维结构。结论 :生物可降解的杂交聚合网作为支架可建立体外子宫内膜三维模型。     

原位杂交检测HOXA-10基因在人子宫内膜的表达

目的 :探讨正常生育妇女月经周期不同时期子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞中HOXA-1 0基因的表达。方法 :采用原位杂交的方法。结果 :HOXA-1 0基因在子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞均有表达 ;中晚分泌期的表达高于增殖期及分泌早期 ,且间质细胞的表达高于腺上皮细胞。结论 :( 1 ) HOXA-1 0基因在分泌中期子宫内膜高表达提示其可能在人胚胎着床过程中起某种作用。 ( 2 ) HOXA-1 0基因可能在人子宫内膜蜕膜化过程中有重要作用。     

子宫内膜异位症子宫内膜及输卵管细胞对鼠胚胎发育的影响

目的探讨子宫内膜异位症(内异症)子宫内膜及输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响。方法小鼠2细胞期胚胎202个与卵巢巧克力囊肿患者术中切除的子宫内膜及输卵管上皮细胞共培养(实验组),314个与非卵巢巧克力囊肿患者子宫内膜及输卵管上皮细胞共培养作为对照。结果体外培养72~96h后,与对照组输卵管上皮细胞及子宫内膜共培养时有25.7%和26.2%的2细胞期胚胎发育到扩张期囊胚,与实验组输卵管上皮细胞共培养有25.9%发育到扩张期囊胚,二者无显著差异(P>0.05),而子宫内膜仅为11.1%,二者有显著差异(P<0.05)。结论内异症患者的输卵管上皮细胞对鼠早期胚胎体外发育无影响;子宫内膜对胚胎发育有明显的抑制作用,这可能与内异症的生育率降低有关。     

人子宫内膜腺上皮核仁管状系统的研究现状

排卵后的子宫内膜发生程序性变化,开始具备接受胚胎的能力,此过程中内膜上皮细胞超微形态出现了显著的变化。核仁管状系统是在透射电镜下观察到的子宫内膜腺上皮细胞核内的特殊结构,其形成与核仁蛋白Nopp140有关,其出现是子宫内膜容受性的重要标志。本文拟从整体上对核仁管状系统的形态、功能及其与子宫内膜容受性和Nopp140的关系进行综述。     

子宫内膜体外构建及其应用研究进展

体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体。种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素。构建的子宫内膜在病理研究、三维培养体系、胚胎发育学及移植等方面具有重要的研究意义。只有更进一步模拟自然子宫的结构,优化构建技术路线和培养条件,才可以再造出真正意义上的组织工程化子宫。     

宫腔镜子宫内膜切除治疗子宫腺肌病临床疗效研究

目的探讨宫腔镜子宫内膜切除术（transcervical resection of endometrium,TCRE）治疗子宫腺肌病的手术指征及疗效。方法对2004年11月-2007年10月因子宫腺肌病接受TCRE的31例临床资料进行回顾性分析,比较术前后痛经缓解率、月经量、血Hb、CA125水平。结果31例TCRE手术时间（14.4±1.4）min（10-28min）,术中出血量10-50ml。术后随访24-48个月,痛经缓解有效率93.5%（29/31）,2例痛经不能缓解,且子宫进行性增大,1例行全子宫切除术,另1例服用孕三烯酮仍在随访中。1例术后11个月宫腔粘连致宫腔积血,行宫腔扩创引流积血约10ml痊愈。月经量由术前（102.0±4.7）ml减少至术后（15.6±2.1）ml（t=223.77,P=0.000）,其中闭经7例,点滴状月经18例,月经量显著减少6例。22例术后3个月内贫血纠正,血红蛋白由术前（78.6±3.6）g/L上升至（126.8±8.9）g/L（t=-27.953,P=0.000）。术后血清CA125除2例持续〉35IU/ml,其余术后3个月降至正常范围。结论TCRE治疗子宫腺肌病能有效缓解痛经症状,治疗贫血,但术前应排除盆腔子宫内膜异位症,子宫大小≤8孕周。     

正常人与子宫内膜异位症患者子宫内膜抗原的研究

对正常人和子宫内膜异位症(EMT)患者的子宫内膜抗原(EMAg)进行了分析。Western blot试验显示,与 EMT 患者血清抗子宫内膜抗体(EMAb)反应的正常人 EMAg 有25、36、46KD 区带,EMT 患者的 EMAg 有36、48、82、94、110、120和140KD 区带。以 EMT 的 EMAg 作为包被抗原,用 ELISA 法检测血清 EMAb 的阳性率高于用正常人 EMAg 包被组(P<0.01)。两种 EMAg 中糖原、氨基酸和元素水平亦有差异。提示 EMAg 成分的变化可能与 EMT 不孕机制相关。     

子宫腺肌病的在位内膜异常

子宫腺肌病是一种严重影响女性健康的良性子宫疾病,近年在40岁以下、无临床症状的以及因不孕行辅助生殖治疗的女性中检出率有所增加."子宫内膜内陷"和"细胞化生"的假说提示子宫腺肌病可能起源于子宫内膜.本文从子宫内膜的角度出发对子宫腺肌病的早期子宫内膜变化进行总结,进而对子宫腺肌病的致病因素有综合了解,以便更加深入的认识子宫...     

子宫内膜异位症和腺肌症患者子宫内膜雌激素受体的时空表达

目的　研究子宫内膜异位症和子宫腺肌症子宫内膜各种细胞中雌激素α和 β受体的表达模式 ,为探索子宫内膜异位症和子宫腺肌症的致病机理提供依据。　方法　 10 8例患有内膜异位症、腺肌症、两症并发组和对照组子宫内膜组织 ,常规光镜下按Noyes分期标准行形态学分期。采用免疫组织化学的方法观察不同月经周期时相子宫内膜腺上皮、基质和血管内皮细胞中雌激素受体ERα和ERβ的表达。　 结果　与对照组相比 ,ERα信号强度在各组相应的细胞类型、相应的时相无显著差异 ,但子宫内膜腺上皮细胞、基质细胞和血管内皮细胞中显示阳性信号的细胞比例增大 ,且腺上皮细胞质普遍出现ERα阳性信号。子宫内膜异位症和腺肌症的血管内皮细胞中ERα阳性细胞数显著增加。ERβ在各组的表达模式与对照组相比无明显差异 ,甚至略呈下降趋势。　结论　人子宫内膜中ERα为雌激素效应的主要受体亚型 ,表达ERα的腺上皮、基质和血管内皮细胞数量的增多以及腺上皮细胞质普遍出现ERα阳性信号可能与这两种疾病的发病密切相关 ;ERβ并不参与这一过程。     

层粘连蛋白、纤粘连蛋白、IV型胶原在人月经周期子宫内膜中的表达

目的　研究细胞外基质蛋白层粘连蛋白 (LN)、纤粘连蛋白 (FN)和IV型胶原 (IVCL)在正常人月经周期子宫内膜中的表达。　方法　采用免疫组织化学方法检测 4 9例正常月经周期子宫内膜中LN、FN、IVCL蛋白的表达。　结果　LN主要分布于腺上皮及腔上皮基底膜 ,分泌中期表达最强。FN主要分布于间质 ,腔上皮及腺上皮基底膜也均有表达 ,分泌中期含量丰富。IVCL在腺上皮基底膜的表达分泌中期最强 ,在间质的表达分泌早期最强 ,分泌中、晚期表达逐渐减弱。LN、FN、IVCL在血管基底膜上均有表达 ,无周期性变化。　结论　LN、FN、IVCL在月经周期子宫内膜中的表达随月经周期而变化。     

人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究

目的探讨一种人高活性血管基质层细胞(stromal vascular fraction cells,SVFs)快速分离及荧光标记的有效方法,为SVFs用于临床奠定理论基础。方法取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织,分别用0.065%、0.125%、0.185%3种浓度的Ⅰ型胶原酶消化,提取SVFs。收集细胞悬液进行细胞计数,锥虫蓝染色计算细胞成活率。用1’双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羧化青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate,DiI)荧光标记0.125%浓度组SVFs,倒置荧光显微镜下观察标记情况;将DiI标记的SVFs接种培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测DiI标记前后细胞增殖能力。结果 0.065%、0.125%及0.185%浓度组SVFs细胞总数分别为(138.68±11.64)×104、(183.80±10.16)×104、(293.07±8.31)×104个,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);细胞成活率分别为91%±2%、90%±2%、81%±2%,0.065%浓度组和0.125%浓度组均显著高于0.185%浓度组(P<0.01),0.065%浓度组和0.125%浓度组比较差异无统计学意义(P=0.881)。倒置荧光显微镜观察示,0.125%浓度组细胞均可被DiI荧光标记,标记后的细胞膜完整,细胞质丰富,细胞形态正常,细胞核未染荧光;DiI标记的SVFs细胞悬液接种培养后,细胞能顺利贴壁及传代。MTT法检测示DiI标记前后SVFs细胞生长曲线相似,生长趋势吻合。结论 0.125%浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织,获取大量SVFs,同时对细胞损伤较小,是理想的工作浓度;DiI可有效标记SVFs。     

The study on three-dimensional reconstruction of endometrium in vitro

<正> Objectives:To establish a three-dimensional model of endometrium in vitro.Methods:The endometrial cells were cultured on a biodegradable hybrid Collagen-PGLA polymer mesh and observed by scanning electron microscopy and light micro-scopy.Results:It showed that the endometrial cells adhered and spread well on the surfacesof the collagen sponge of the hybrid mesh after being cultured for 5 days.After 2weeks,the cells proliferated to become confluence achieving a three dimensional struc-ture.Conclusion:The three-dimensional model of endometrium could be establishedusing the hybrid polymer mesh as a skeleton in vitro,     

人正常子宫内膜蛋白质表达图谱的初步建立

目的通过双相电泳方法建立正常子宫内膜组织的蛋白质表达图谱。方法收集正常卵泡期子宫内膜组织5份,采用双相电泳建立子宫内膜组织的蛋白质表达谱;利用凝胶染色技术和图像分析软件进行蛋白质点的识别和检测;随机选择5个蛋白质点,应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法进行蛋白质的鉴定。结果以固相pH梯度(IPG)胶条pH=4~9进行第一相等电聚焦,以12.5%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二相,成功建立了正常卵泡期子宫内膜组织蛋白质双相电泳图谱,平均含(523±41)个蛋白点,匹配率81.89%。通过MALDI-TOF-MS对5个蛋白质点进行了鉴定。结论成功建立了人正常子宫内膜蛋白质双相电泳图谱,并应用质谱技术进行了部分蛋白质点的鉴定,为进一步构建人子宫内膜蛋白质表达数据库提供了基础,并为研究子宫内膜生理功能和相关疾病提供了一种新的研究方法。     

三烯高诺酮和米非司酮对离体大鼠及人体子宫内膜生长的抑制作用

大鼠子宫内膜离体培养４天后分组给药：对照组；丹那唑１０－６，３×１０－６，１０－５ｍｏｌ／Ｌ；三烯高诺酮３×１０－８，１Ｏ－７，３×１Ｏ－７ｍｏｌ／Ｌ；米非司酮１０－６，１０－５，１０－４ｍｏｌ／Ｌ。于给药５天后取培养子宫内膜切片，镜下观察其形态变化，全自动图象分析仪细胞计数。结果表明，丹那唑抑制大鼠子宫内膜的生长，而三烯高诺酮和米非司酮未见明显抑制效应。人体子宫内膜离体培养４天后分组给药，１Ｏ－９ｍｏｌ／Ｌ雌二醇、１０－７ｍｏｌ／Ｌ孕酮均能促进子宫内膜的生长。在给雌二醇或孕酮的同时加３×１０－６ｍｏｌ／Ｌ丹那唑或１０－７ｍｏｌ／Ｌ三烯高诺酮或１Ｏ－５ｍｏｌ／Ｌ米非司酮。结果表明，丹那唑、三烯高诺酮和米非司酮均能抑制子宫内膜的生长，而在雌二醇或孕酮缺乏的条件下，三烯高诺酮和米非司酮对子宫内膜的生长没有明显抑制作用。此结果表明三烯高诺酮和米非司酮对子宫内膜生长的抑制作用有赖于雌二醇或孕酮的存在。     

促进脂肪移植的最佳SVFs浓度的实验研究

目的 探讨应用自人脂肪组织新鲜分离的不同浓度的血管基质层细胞( stromal vasvular fraction cells,SVFs)辅助脂肪移植,从而提高移植物的存活率的方法.方法 脂肪组织来自临床行吸脂术者,提取SVFs,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与浓度为①5×105个/ml(A组);②1 × 106个/ml(B组);③2×106个/ml(C组)的SVFs混合,另设对照组为完全培养基+单纯脂肪颗粒(D组),随机注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况:①湿重.②切片HE 染色计数血管密度.③方网测试系统“点计数”法检测存活脂肪细胞计数以及纤维坏死组织计数.结果 ①湿重:A组(60.000±6.325) mg,B组(81.670±7.528) mg,C组(68.330±7.528) mg,D 组(48.330±7.528) mg,B组脂肪存活率均高于A、C、D组(P<0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②血管密度:A、B、C组血管密度均高于D组,且B组明显高于其他3组(P＜0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).③点计数:B组存活脂肪细胞计数均高于A、C、D组(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P ＜0.05),A、C2组之间比较差异均无统计学意义(P＞　0.05).结论 来源于人自体SVFs复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中1×106个/ml数量级的SVFs移植脂肪的存活率最高,更适合用于脂肪移植,具有广阔的临床应用前景.     

Expression of osteopontin in human endometrium throughout menstrual cycle

<正> Objective:To analyze mRNA and protein expression of osteopontin(OPN)in human endome-trium throughout menstrual cycle.Methods:Immunohistochemieal method was used to determine the level and the location ofOPN in normal cycling endometrium of 50 women.Western Blot analysis was also used to detectthe existence of OPN at proliferative and secretory phases in six samples.The levels of OPNmRNA in 18 samples were measured by RT-PCR.Results:The OPN mainly expressed in human endometrial glandular epithelium but not instromal cells.The expression was highest at mid and late secretory phases and menstruous phaseas well.No expression was found in early and mid proliferative endometria.Two subtypes ofOPN proteins(40 kDa-75 kDa)were detected by Western blot analysis in homogenized endome-tria at secretory phase.The level of OPN mRNA in secretory phase endometrium was significantlyhigher than that in proliferative phase.Conclusions:OPN was only found in endometrial glandular epithelial cells,and the OPN andits mRNA showed a pronounced cycle-dependent expression in human endometrium,higher ex-pression at mid and late secretory phases and menstruous phase.It's probably involved in embry-onic implantation and endometrial shedding.     

骨桥蛋白在人正常月经周期子宫内膜的表达

目的研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在人正常月经周期子宫内膜的表达。方法采用免疫组织化学法对51例人正常月经周期子宫内膜OPN蛋白质进行定位和定量检测,Western blotting法测定增殖期及分泌期OPN蛋白水平,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测18例人正常月经周期子宫内膜增殖期及分泌期OPN mRNA的表达。结果OPN蛋白质主要分布在正常子宫内膜腺上皮细胞,增殖早期、中期无表达,增殖晚期出现,分泌中期、晚期表达最强。月经期子宫内膜腺上皮细胞表达较强。OPN mRNA表达分泌期强于增殖期(P<0.05)。Western blotting检测结果显示正常子宫内膜组织中存在OPN蛋白,分泌期含量较高。结论OPN蛋白质及mRNA在正常子宫内膜中的表达呈现明显周期依赖性。分泌中、晚期表达增强提示其可能参与胚胎着床。