MMP-9/TIMP-1表达在糖尿病鼠皮肤伤口愈合过程中的变化及意义初探

目的：观察基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达和MMP-9/TIMP-1比值在糖尿病组和正常组大鼠皮肤伤口愈合过程中不同时点表达的动态变化，探讨其可能的作用机制。 方法:糖尿病大鼠形成6周后行皮肤伤口造模，采用HE染色、Masson染色和免疫组织化学方法评估伤口形成后3、7、14 d伤口组织的再上皮化、炎症细胞浸润、肉芽组织厚度、新生血管形成和胶原纤维密度的情况；通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测术后不同时点MMP-9、TIMP-1在伤口组织中的表达情况。结果:糖尿病大鼠伤口愈合明显迟缓。术后第3 d两组间胶原纤维、肉芽组织、新生血管和再上皮化没有差异，术后第7 d糖尿病组以上指标得分均低于正常组，第14 d这种趋势更加明显；而第3 d至14 d，糖尿病组的单核巨噬细胞浸润得分均低于正常组。术后第3 d两组MMP-9表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组MMP-9表达水平在各时点均高于正常组；术后第3 d两组TIMP-1表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组TIMP-1表达水平在各时点均低于正常组；正常组MMP-9/TIMP-1蛋白水平比值始终维持在一个动态平衡的稳定水平，而糖尿病组却长期处于高水平状态。结论:异常的胶原产生、新生血管重建、炎症反应、再上皮化、肉芽形成可能是糖尿病鼠创面愈合减慢的组织病理学基础；皮肤组织MMP-9/TIMP-1的平衡性改变可能是这种组织病理学异常的重要原因之一。     

软骨肉瘤中MMP-1及TIMP-1的表达及意义

目的 研究软骨肉瘤组织中MMP-1及TIMP-1的表达情况,探讨二者在软骨肉瘤间质浸润中的作用机制.方法 收集32例软骨肉瘤标本和10例内生性软骨瘤标本,分别用免疫组化法、Western blot法、实时荧光定量PCR法检测MMP-1、TIMP-1及Ⅱ型胶原的表达情况.结果 MMP-1和TIMP-1在软骨肉瘤中高表达,并随软骨肉瘤恶性程度的升高而加强(P<0.01);Ⅱ型胶原在软骨肉瘤中的表达降低(P<0.01).结论 MMP-1在软骨肉瘤中通过对细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)的降解,来增加软骨肉瘤的侵袭能力.     

内皮素-1对人系膜细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响

目的研究内皮素-1(ET-1)对人系膜细胞(MC)基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及其组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用体外MC培养,应用细胞ELISA法测定MC内MMP-3、TIMP-1蛋白的表达。结果ET-1促进MC内MMP-3、TIMP-1蛋白表达,但MMP-3/TIMP-1比值呈剂量及时间依赖性下降。结论ET-1可能是人系膜细胞内MMP-3/TIMP-1比值下降的原因之一,这与肾小球细胞外基质降解受抑密切相关。     

缺氧对肺动脉成纤维细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的：探讨缺氧对肺动脉成纤维细胞（Fpa）分泌基质金属蛋白酶（MMPs）、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）的影响。 方法： 采用酶谱法测定Fpa培养基中MMP-2的酶活性，免疫印迹法检测培养基中MMP-2、TIMP-1 的蛋白水平，免疫组化法测定细胞原位的蛋白表达， RT-PCR法检测mRNA表达量。 结果： 缺氧后Fpa分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降；而TIMP-1的表达则呈相反变化。 结论： 缺氧可使肺动脉成纤维细胞MMP-2/TIMP-1的表达失衡，可能参与缺氧性肺血管重建。     

HL-60细胞ATRA诱导后MMP-9/TIMP-1表达的变化

为了检测HL-60细胞经过全反式维甲酸(ATRA)诱导后基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)及金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)表达变化,并探讨其变化的意义。采用瑞氏染色观察细胞形态,WST1实验测定细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,RT-PCR方法检测MMP-9、MMP-2、TIMP-1、VEGF的mRNA的表达。结果显示,HL-60细胞经ATRA作用24h后,随着细胞增殖降低与分化的发生,MMP-9mRNA表达增加,TIMP-1mRNA和VEGF表达降低,MMP-2mRNA未见明显表达。ATRA诱导HL-60细胞分化后MMP-9表达增加,而TIMP-1表达降低,MMP-9不促进HL-60细胞表达VEGF。     

MMP-2及TIMP-2在宫颈癌组织中的表达及其对侵袭和转移的影响

目的 通过检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)在宫颈癌中的表达,探讨其对宫颈癌侵袭转移的影响.方法 应用免疫组化SP法检测53例宫颈癌和14例正常宫颈组织中MMP-2和TIMP-2的表达情况,并进行*9字2检验.结果 免疫组化结果 显示MMP-2和TIMP-2在宫颈癌组织中...     

MMP-2,TIMP-1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及抑制剂-1(TIMP-1)在人肝癌及癌旁组织中的表达及其与肝癌侵袭转移的关系.方法:应用免疫组织化学法研究50例肝癌及癌旁组织中MMP-2和TIMP-1的表达.结果:MMP-2在肝癌和癌旁组织表达阳性率分别为76%和72%,明显高于正常肝组织的表达(P<0.01)a TIMP-1在肝癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为58%和56%,高于正常肝组织中的表达(P<0.01).而MMP-2洋相表达率与肝细胞癌的转移、淋巴浸润、包膜形成和肿瘤分化有关(P<0.05).而TIMP-1的表达与癌组织的转移,淋巴结浸润和包膜形成有关(P<0.05).结论:MMP-2,TIMP-1在肝癌及癌旁组织中的表达明显增高,可能对于判断肝癌的浸润、转移有重要价值.     

压应力对人软骨终板细胞MMP-1、3、13和TIMP-1表达的影响研究

目的观察压应力对体外培养人软骨终板细胞分泌基质金属蛋白酶-1、3、13(MMP-1、MMP-3、MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的影响。方法将6个月意外流产胎儿软骨终板,进行软骨终板细胞的分离、培养。将第2代软骨细胞按实验要求种板培养,分别施加周期性压应力(压力大小0.8 MPa,频率为0.1Hz),分别连续加载2 h、6 h和12 h。根据压应力作用时间分为2 h组、6 h组和12 h组,以空白组为对照,测定各组细胞上清液中MMP-1、MMP-3、MMP-13和TIMP-1的表达。结果贴壁后的软骨终板细胞成短梭形、三角形以及多边形,呈典型的"铺路石"状。随着细胞加压时间延长,长梭形细胞数目明显增加,去分化现象明显,老化速度加快,坏死细胞明显增多。施加压应力第3天,6 h组和12 h组MMP-1、MMP-3、MMP-13表达明显增高,TIMP-1明显下降,且加压时间越长,改变越明显。24 h组分别与各组相比较有统计学意义(0.05)。结论长期压应力可使MMP-1、MMP-3、MMP-13表达增高,TIMP-1表达降低,并抑制细胞增殖,同时MMP-1、MMP-3、MMP-13表达水平与压应力作用时间相关。     

咪唑克生对EAE小鼠血脑屏障通透性及对MMP-9/TIMP-1的影响

 目的：观察咪唑克生（idazoxan,IDA）对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）时血脑屏障(BBB)通透性及脊髓内的MMP-9/TIMP-1表达的影响。 方法：选用36只8周左右的C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、EAE组和IDA干预组,每组12只,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导经典EAE模型,干预组采用IDA 2 mg/kg腹腔注射,每天2次,共15 d。观察每组大鼠发病情况并进行神经功能障碍评分,采用HE染色和LFB髓鞘染色观察病理改变,采用伊文思蓝荧光定量方法检测BBB通透性的变化,并用Western blotting法检测MMP-9和TIMP-1的表达。结果：空白对照组无一发病,与EAE组比较, IDA干预组神经功能障碍评分明显下降,炎性病灶明显减少,BBB通透性明显降低,MMP-9的表达和MMP-9/TIMP-1比值明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：IDA可能通过下调MMP-9,降低MMP-9/TIMP-1比值,减轻血脑屏障的降解破坏,从而稳固BBB,降低BBB通透性,减缓小鼠EAE的发病。     

厄贝沙坦对肾硬化大鼠肾小管间质中MMP-9/TIMP-1表达的影响

为探讨基质金属蛋白酶9（MMP－9）及其抑制剂（TIMP－1）在单侧肾切除后，重复注射阿霉素复制肾小球硬化大鼠肾小管－间质的表达，以及厄贝沙坦对其的影响和可能的保护作用机制。将肾小球硬化大鼠分为厄贝沙坦治疗组和对照组，设假手术组为正常对照。检测厄贝沙坦治疗4周后，肾功能和病理改变，并用免疫组化或原位杂交的方法分别检测肾小球和肾小管－间质中MMP－9／TIMP－1，转化生长因子β1（TGF－β1）的表达。结果表明肾小球硬化组肾小管中MMP－9，TIMP－1，TGF－β1显著增加。厄贝沙坦组中肾小管中上述指标表达下降。提示厄贝沙坦在延缓肾小球硬化同时，在减轻肾小管－间质纤维化方面有一定保护作用。     

胎膜中MMP-2/TIMP-2表达与胎膜早破关系的研究

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制因子-2（TIMP-2）在自发性胎膜早破孕妇的胎膜中的变化及其意义。方法收集胎膜早破确诊病例30例,同期收集正常妊娠择期剖宫产30例。采用免疫组织化学PV9000法检测MMP-2及TIMP-2在胎膜中的表达。结果1.所选两组标本感染率比较差别无统计学意义（χ^2=2.857,P=0.091）;2.PROM组胎膜组织结构明显疏松,羊膜与绒毛膜之间的区域普遍较对照组增宽;3.早破组与正常组在HE染色后着色深浅有异,早破组略显淡;4.MMP-2在胎膜早破产妇胎膜中的表达高于正常妊娠剖宫产组阳性率分别为100%,46.67%差异有显著性（U=5.849,P=0.000）;5.TIMP-2在胎膜早破产妇胎膜中的表达低于正常妊娠剖宫产组,差异无显著性（U=1.690,P=0.091）。结论胎膜早破的发生可能与MMP-2的表达上调有关。     

小檗碱对2型糖尿病大鼠巨噬细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的： 探讨小檗碱对2型糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞（AM）和腹腔巨噬细胞（PM）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。 方法：SD大鼠随机分成4组，正常对照组、高脂组、糖尿病组、小檗碱治疗组。治疗12周后，测定各组大鼠血清葡萄糖、胰岛素和血脂含量，并检测肺泡和腹腔巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）含量、MMP-9和TIMP-1的基因表达水平。结果：糖尿病组大鼠血糖、血胰岛素、血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）浓度明显高于对照组，AM和PM内ox-LDL浓度、MMP-9 mRNA表达明显高于对照组；而TIMP-1 mRNA的表达低于对照组。小檗碱治疗组大鼠血糖、血胰岛素、LDL、TC、TG浓度低于糖尿病组，AM、PM内MMP-9 mRNA的表达低于糖尿病组，而TIMP-1 mRNA的表达高于糖尿病组。 结论：小檗碱具有降低血糖、调节血脂、防治2型糖尿病动脉粥样硬化的作用，其机制可能与其减少ox-LDL生成，直接下调巨噬细胞中MMP-9的表达有关。     

麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达的影响,探讨其治疗哮喘的可能机制。方法:将72只健康雌性BALB/c小鼠随机分为:空白对照组,模型组,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组,阳性对照组。采用卵清蛋白致敏激发建立小鼠哮喘模型。空白对照组和模型组于激发前30 min以生理盐水灌胃;麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组分别于激发前30 min以麻杏石甘汤按5.0 g/kg、10.0 g/kg和20.0 g/kg剂量灌胃;阳性对照组于激发前30 min以地塞米松按0.005 g/kg剂量灌胃。连续给药7 d后,观察气道反应性、支气管肺泡冲洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)计数、杯状细胞百分比和胶原沉积的变化;ELISA法检测MMP-9和TIMP-1水平;Western blot法检测MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-qPCR法分析检测MMP-9和TIMP-1的mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组的气道反应性、杯状细胞百分比、胶原沉积、BALF中EOS计数及肺组织MMP-9和TIMP-1的mRNA和蛋白水平均显著升高(P 0.01);与模型组比较,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组及阳性对照组上述指标则明显降低(P 0.05或P 0.01)。结论:麻杏石甘汤可能通过降低MMP-9和TIMP-1的表达改善哮喘模型小鼠气道重塑状态。     

肺癌MMP-9、TIMP-1表达与微血管密度的关系及意义

目的探讨肺癌组织中MMP-9和TIMP-1的表达与肺癌血管生成的关系及其意义。方法采用免疫组化SP法检测84例肺癌组织中MMP-9、TIMP-1和CD34的表达。结果肺癌组织MMP-9表达显著高于癌旁正常肺组织(P<0.01),小细胞肺癌和腺癌显著高于鳞癌(P<0.01)。肺癌MMP-9表达:有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.01),Ⅲ~Ⅳ期高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05)。肺癌组织TIMP-1表达显著高于癌旁正常肺组织(P<0.01)。肺癌MMP-9表达阳性者微血管密度高于MMP-9表达阴性者(P<0.01)。结论MMP-9促进肺癌血管生成,与肺癌侵袭转移密切相关。     

CpG ODN和地塞米松对哮喘气道的重塑及MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的： 探讨非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤的寡核苷酸(CpG ODN)和糖皮质激素对哮喘气道重塑和肺内MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法： 以卵蛋白致敏激发的慢性哮喘小鼠模型为对象，测定正常对照组、哮喘组、地塞米松组及CpG ODN组小鼠支气管上皮黏膜层面积(WAmuc)、平滑肌面积(WAmus)、气管内壁面积(WAi),并用支气管基底膜周径(Pbm)标准化。天狼猩红染色测定气道Ⅰ、Ⅲ型胶原的面积。免疫组化方法测定气道基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制剂TIMP-1，行免疫组化图像分析。结果： (1) CpG ODN组和地塞米松组的WAmuc/Pbm、WAmus/Pbm、WAi/Pbm显著大于对照组而显著小于哮喘组（P<0.05），而CpG ODN组和地塞米松组间则无显著差异（P>0.05）;(2) CpG ODN组和地塞米松组Ⅰ、Ⅲ型胶原面积较大于对照组而明显低于哮喘组(P<0.05)；(3) CpG ODN组和地塞米松组MMP-9、 TIMP-1表达明显高于对照组而显著小于哮喘组(P<0.05)，而CpG ODN组和地塞米松组间则无显著差异（P>0.05）。结论： 慢性哮喘小鼠气道壁明显增厚，而早期行CpG ODN和地塞米松干预则可通过抑制肺内MMP-9、TIMP-1的表达而减轻气道重塑。     

哌仑西平对近视鸡眼巩膜基质MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察玻璃体内注射哌仑西平对鸡眼形觉剥夺性近视的疗效并探讨哌仑西平抑制近视的巩膜机制。方法:1日龄鸡40只,随机分为正常组、单纯遮盖组、药物对照组和哌仑西平组,均以右眼为实验眼。后3组鸡的右眼用半透明眼罩遮盖,后2组鸡的剥夺眼分别每日玻璃体内注射0.01mol/L的磷酸盐缓冲液和1%哌仑西平磷酸盐缓冲液。5d后检测4组动物右眼屈光度、眼轴长度和赤道部直径,利用RT-PCR、Westernblotting和明胶酶谱技术检测巩膜纤维层级质金属蛋白酶2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)mRNA和蛋白质的表达及MMP-2活性的改变。结果:哌仑西平治疗组较单纯遮盖组和药物对照组鸡眼屈光度显著减少(P<0.05),眼轴长度和赤道径显著缩短(P<0.05),较正常组呈相对近视,眼轴长度和赤道径显著增加(P<0.05)。RT-PCR、Westernblotting和明胶酶谱结果显示:哌仑西平组较单纯遮盖组和药物对照组MMP-2mRNA和蛋白质的表达及其活性均明显降低(P<0.01),而较正常组显著升高(P<0.01);哌仑西平组较单纯遮盖组和药物对照组TIMP-2mRNA和蛋白质的表达均明显增高(P<0.01),而较正常组显著降低(P<0.01)。结论:玻璃体内注射哌仑西平能部分抑制近视的发生发展。哌仑西平很可能通过调节巩膜纤维层MMP-2和TIMP-2的表达而部分抑制近视的发生发展。     

缺血性脑血管病患者颈动脉粥样硬化斑块类型与血清MMP-8、TIMP-1表达的相关性研究

目的:探讨缺血性脑血管病患者颈动脉粥样硬化斑块的类型与血清基质金属蛋白酶-8(MMP-8)及其抑制剂TIMP-1的关系.方法:选择191例缺血性脑血管病患者及50例健康查体者,所有研究对象均行颈动脉彩色多普勒超声检查,并采用ELISA法检测血清MMP_8、TIMP-1的水平.结果:脑梗死、腔隙性脑梗死及短暂性脑缺血发作...     

基质金属蛋白酶MMP-7及其抑制因子TIMP-1在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 观察基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)在子宫内膜异位症(Endmetriosis,EMs)中的表达,探讨二者在EMs发病机制中的作用.方法 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测35例EMs患者的在位内膜,异位内膜及20例时照组为因肌壁间或浆膜下子宫肌瘤在我科行子宫切除术,且月经周期正常的子宫内膜中MMP-7和TIMP-1表达情况,检测结果采用SPSS软件进行统计学分析.结果 MMP-7在EMs在位内膜中的阳性表达率为57.1%,异位内膜中的阳性表达率45.7%,与对照组子宫内膜组织的表达(阳性率为40.0%)相比无显著性差异(P＞0.05).研究组异位内膜中的表达强度明显高于对照组,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).TIMP-1在两组所有标本中均有阳性表达.TIMP-1在研究组异位内膜中的表达强度低于在位内膜,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).研究组在位内膜中的表达强度稍低于对照组,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MMP-7在EMs的发生过程中起了重要作用.MMP-7在位内膜中表达增强,异位内膜TIMP-1表达减弱,是EMs患者在位内膜、异位内膜细胞具有侵袭能力的原因之一.