HBV DNA和HCV RNA检测试剂抗干扰能力验证

目的:评估乙型肝炎病毒(HBV)脱氧核糖核酸(DNA)和丙型肝炎病毒(HCV)核糖核酸(RNA)定量检测试剂的抗干扰能力.方法:选择高、低浓度HBV DNA和HCV RNA阳性血清标本,采用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度血红蛋白(hemoglobin,Hb),总胆红素(total bilirubin,TBIL)和甘油三酯(triglyceride,TG)对2种阳性血清标本检测的干扰.以偏差<±7.5％ 为可接受范围.结果:HBV DNA检测,当Hb浓度≤4.5 g/L时,各样本均未受到干扰,Hb浓度≥8.1 g/L时,各样本受到不同程度的干扰;当TBIL浓度≤370μmol/L时,高浓度样本检测未受到明显干扰,TBIL浓度≥666μmol/L,各样本受到不同程度的干扰;TG浓度≤12.6 mmol/L时,未对检测造成干扰.HB≤8.1 g/L,TBIL浓度≤666μmol/L,TG浓度≤12.6 mmol/L均未对HCV RNA检测造成干扰.结论:HBV DNA和HCV RN A定量检测试剂具有一定的抗干扰能力.     

多聚酶链反应检测血清HBVDNA的临床观察

聚合酶链反应（PolymerasechainReaction，PCR）是新近建立的一种体外基因扩增技术，具有高灵敏度、高特异性、简便和快速等优点，国外已应用于遗传，肿瘤及传染病等多种疾病的临床诊断。近年来，国内用于检测HBVDNA，丰富和更新HBV感染的认识，对HBV感染的临床诊断及研究有广阔的前景。我院从1992年7月至1993年6月应用PCR技术对284例各型HBy感染者及20名正常人直接检测血清中HBVDNA，进行临床观察及其HBVDNA与乙型肝炎血清标志物间的关系，以探讨PCR技术在乙型肝炎病毒感染中的应用。1．材料与方法1．1检测对象3o4例为近一…     

PCR检测HBVDNA的初步研究

在我国 ,ＨＢＶ是引起病毒性肝炎的主要病原之一。目前对其感染导致的乙肝特异性诊断仍以ＥＩＡ或ＲＩＡ为主。近年来 ,国内外学者一直尝试利用ＲＣＲ法检测ＨＢＶ。本文设计了一对ＨＢＶ引物 ,并对之检测ＨＢＶ的扩增产物进行了探讨。1　材料与方法1.1　标本来源用于确定ＰＣＲ产物分子量的ＨＢＶ阳性血清(ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＤＮＡＰ、ＨＢＶＤＮＡ均阳性 ) ,及ＨＢＶＤＮＡ阴性血清由北京医科大学肝病研究所惠赠。用于临床考核的ＨＢｅＡｇ阳性血清的来自本院门诊及住院病人 ,阴性血清取自健康献血员。1.2　引物通过计算机检索Ｇｅ…     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

有用聚合酶链反庆（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９例乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比为杂交高（Ｐ〈０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ一率为５７．１％；血清阳性率为６１．３％；两者总阳性率为８０．９％，说明ＰＣ     

多重PCR快速检测血清中HAVRNA和HBVDNA

多重ＰＣＲ快速检测血清中ＨＡＶＲＮＡ和ＨＢＶＤＮＡ肖乐义，阎小君，李陕区，郭宴海，苏成芝，侯瑜，刘君，陈远鑫（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词多重聚合酶链反应；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒中图号Ｒ５１２．６约７０％病毒性肝炎为甲肝病毒...     

PCR法检测HBVDNA及其与乙肝病毒标志物关系探讨

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测２５６例乙型肝炎患者血清中乙肝病毒ＤＮＡ （ＨＢ－ＶＤＮＡ），同时用ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒标志物，即ＨＢｓＡｇ，抗－ＨＢｓ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ，结果表明ＨＢＶＤＮＡ的检出率与肝病临床类型无明显关系，而与乙肝病毒标志物的存在状态有关。乙肝五项病毒标志物不同组合状态，血清ＨＢＶＤＮＡ检出率不同，以ＨＢｓＡｇ（＋），抗－ＨＢｃ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋）的组合形式检出率     

68例HBsAg阳性产妇初乳中HBVDNA定量检测的临床意义

目的　探讨HBsAg阳性产妇能否进行母乳喂养。 方法　选择住院分娩的HBsAg阳性产妇 6 8例 ,收集其产后 2～ 5d母体静脉血及初乳 ,检测母血乙肝病毒标志物 (HBV M)和HBVDNA以及初乳HBVDNA。结果　母血清HBeAg阳性、HB VDNA阳性者母乳中HBVDNA检测阳性率高 ,而HBeAg阴性、HBVDNA阴性者初乳中排毒率低 ,两组比较差异有高度显著性 (P <0 .0 1)。结论　母血HBeAg、HBVDNA阳性组母乳中排毒率高 ,不宜母乳喂养。而HBeAg及HBVDNA阴性组母乳中排毒低 ,可以哺乳 ,但应给予正确的哺乳指导。     

乙肝病毒血清标志物与DNA定量联合检测的临床应用价值

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）两对半抗原抗体系统、前S1蛋白（Pre-S1）和HBV脱氧核糖核酸（HBV-DNA）之间的关系及临床意义。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清标志物,用荧光定量PCR检测HBV-DNA。结果A组（HBsAg^＋HBeAg^＋抗HBc^＋）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为98.63%、86.30%;B组（HBsAg^＋抗HBe＋抗HBc^＋）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为48.37%、22.22%;C组（其它模式）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为4.96%、0.83%。HBV-DNA定量结果A组显著高于B、C两组（P〈0.01）;B组显著高于C组（P〈0.05）。结论正确合理地分析HBV血清学指标出现的类型,与HBV-DNA的联合动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。     

HBV DNA免提取核酸荧光定量PCR检测法应用评价

目的评价乙型肝炎病毒核酸免提取荧光定量PCR方法(一步法)对不同病毒载量时检测性能。方法评价试剂为圣湘公司HBV DNA荧光定量PCR检测免提取试剂盒,对照试剂为匹基公司、科发公司、达安公司3家煮沸核酸提取法试剂盒。将4种试剂盒按各自要求对配套的不同浓度标准品、阴性、临界值的反应曲线考核其线性和灵敏度。另检测1份已知浓度质控品、5份未知浓度样本血清考核其准确性、可比较性。检测仪器为瑞士罗氏公司Light Cycler荧光定量仪。结果一步法、匹基公司、科发公司、达安公司4家标准品浓度相关性R2分别为0.992、0.998、0.999及0.963,线性均满意。4个不同浓度标准品扩增曲线图形:一步法曲线比其他3家更为光滑,呈间距均匀的S形抛物线,2次结果重复曲线更趋重迭。对已知定值为(1.5E+06)IU/mL的质控品检测:一步法、匹基公司、科发公司、达安公司相应结果为(1.16E+06)、(5.27E+05)、(4.32E+05)及(4.90E+06)IU/mL,一步法最接近靶值。5份血清结果显示:4种试剂盒除P公司对2号样本结果为低于检出下限外,其他对1号、2号、3号、5号检出结果均与其他3家接近,可为临床接受。4号样本为一个低值临界范围,出现低于报告限、低值及临界追踪值3种结果现象。结论 4家HBV DNA荧光定量PCR检测检测试剂线性结果均满意,对中、高浓度样本检测结果较接近,但在低浓度临界范围检测报告可能会对临床诊断带来误导,需追踪复查。HBV PCR一步法检测技术免除了核酸高温裂解提取步骤,操作简便,人为误差减少,性能稳定,有利提高检测灵敏度、结果准确性。     

抗凝剂对定量检测乙型肝炎病毒DNA的影响

目的探讨用实时荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒DNA拷贝数时，不同抗凝剂对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响。方法采集40例乙型肝炎患者血液，分别置于不含抗凝剂及含肝素钠、枸缘酸钠、EDTA-k2抗凝剂的无茵试管中，分离血清和血浆后于-20℃冰箱保存备用。采用实时荧光定量PCR方法检测血清和血浆中乙型肝炎病毒DNA的拷贝数，用配对t检验对检测结果进行统计处理。结果40例乙型肝炎患者不合抗凝荆组的乙型肝炎病毒DNA拷贝数的对数均数为5．66±2．10，含肝素钠组的对数均数为5．42±2．26，含枸缘酸钠组的对数均数为5．36±2．11，含EDTA-k2组的对数均数为5．58±2．16。三种含抗凝剂的标本分别与不合抗凝剂的血清组标本中的乙型肝炎病毒DNA拷贝数转换为对数经配对t检验统计处理，含肝素钠组和枸缘酸钠组的DNA拷贝数与不含抗凝剂组DNA拷贝数差异有统计学意义（P〈0．05），而含EDTA-K2组的DNA拷贝数与不含抗凝荆组的的DNA拷贝数差异无统计学意义（P〉0.05）。结论实时荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒DNA拷贝数，应避免使用含肝素钠和枸缘酸钠的血浆标本，使用不合抗凝剂或含EDTA-K2抗凝剂的无菌试管收集标本。     

Taqman MGB探针荧光定量PCR检测HBV DNA含量及YMDD变异的方法学评价

目的评价Taqman MGB探针荧光定量PCR技术检测血清乙型肝炎病毒DNA含量及YMDD变异的方法学特性。方法照美国临床和实验室标准协会(clinical and laboratory standards institute,CLSI)制定的评价方案,对该方法HBV DNA定量的线性范围、精密度、准确性作评价。以序列直接测定法作为诊断YMDD变异的金标准,对该方法YMDD变异检测的灵敏度、特异性和诊断符合率作评价。结果该方法HBV DNA定量在103~108copy/ml范围内呈线性,精密度好(<10%),准确度高(平均回收率为97.5%)。CT(FAM)≤35,Ct设定临界值为7时,当HBV YMDD变异>25%时能检测到变异存在;Ct设定临界值为UNDETECT时,当HBV YMDD变异>50%时能检测到变异存在。以直接测序方法为金标准,该方法YMDD变异检测的灵敏度97%,特异性100%,诊断符合率99.5%。结论该方法检测HBV DNA载量和YMDD变异可以在同一管中完成,特异性高,灵敏度相对较低,但具有快速、准确、经济实用等特点。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的　研究荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)检测血清中乙型肝炎病毒 (HBV)DNA的临床意义。方法　用FQ -PCR诊断试剂盒 ,以完全闭管式的PCR和荧光探针技术相结合所产生的实时检测定量PCR方法 ,检测了 489份临床血清标本。结果　 132例HBsAg、HBeAg、抗 -HBc均阳性的标本 ,HBVDNA也全部阳性 ,平均HBVDNA拷贝数为 2 .83× 10 8·ml-1。 85例HBsAg、抗 -HBe和抗 -HBc均阳性的标本 ,检出HBVDNA 6 1例 (72 % ) ,平均拷贝数 7.9× 10 5·ml-1;HBV血清标志物均阴性的 74例标本 ,HBVDNA也全阴。结论　FQ -PCR可以检测HBV的感染和复制情况     

一种HBV DNA 定量检测试剂的准确性分析

目的 评价一种新型HBV DNA 定量检测试剂的准确性。方法 将第3 代HBV DNA WHO 国 际标准品稀释为6 种不同梯度浓度样本,8.5×105、8.5×104、8.5×103、8.5×102、85 及42.5 IU/ml,用待评价 试剂careHBV PCR Assay V3.0 检测,并对实测值和理论值进行相关性分析;以Cobas Taqman HBV V2.0 为参 比试剂,用careHBV PCR Assay V3.0 检测93 份HBV 感染者标本和30 份健康者标本HBV DNA 含量,并对2 种试剂定量检测结果进行相关性和一致性分析;采用巢式PCR 扩增漏检标本的HBV S 区,直接测序法测定 其基因型。结果 careHBV PCR Assay V3.0 检测WHO 国际标准品的实测值和理论值具有线性相关;2 种定 量试剂检测93 份HBV 感染者标本结果均阳性共68 份,检测结果呈线性相关,差异无统计学意义（P >0.05）, 但careHBV PCR Assay V3.0 检测值相对偏低;careHBV PCR Assay V3.0 检测有14 份标本漏检,其中13 份标 本Cobas Taqman HBV V2.0 检测结果位于30 ～ 2 000 IU/ml 间;对1 份漏检标本的基因型检测结果为C 型。 结论 careHBV PCR Assay V3.0 与Cobas Taqman HBV V2.0 试剂检测结果有较好的相关性,但对基因型C 型 的标本可能存在漏检现象。     

PCR检测HBV DNA对乙肝疫苗应答反应的研究

儿童全程接种乙肝疫苗后的应答反应率高（为９６％）［１］；而成人接种乙肝疫苗后免疫应答比较低（为６５．１２％）。本文对成人组接种乙肝疫苗无应答反应１５例（３４．８８％），进一步探索了乙肝疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例正常成人经乙肝疫苗接种后无应答反应者和３例乙型肝炎患者的血清，结果发现１５例不产生抗－ＨＢｓ者，经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ均为阴性；仅３例为阳性。本文作者在ＰＣＲ检测指导下，对１５例成人采用乙型肝炎免疫球蛋白（ＨＢＩＧ）和３０微克乙肝疫苗联合应用１０５天后，有１２例产生抗－ＨＢｓ。提示对于接种乙肝疫苗的正常人群，凡经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ阴性者，经过重复大剂量注射乙肝疫苗后可使绝大多数得到可靠的保护。     

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义

目的 探讨荧光定量PCR法检测的乙型病毒DNA与乙肝病毒标志物之间的关系。方法 362例血清标本同时进行乙肝病毒标志物和HBV DNA的检测,按照不同的乙肝病毒标志阳性情况分级后,进行乙肝病毒DNA与乙肝病毒标志物的分析研究。结果 乙肝病毒标志物HBsAg HBeAg HBcAb阳性组HBV DNA阳性率97.7%,拷贝数在10^4-10^8之间;HBsAg HBeAb HBcAb阳性组阳性率56％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBcAb阳性组阳性率54％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBeAg组阳性率100％,拷贝数在10^7之间;HBeAb HBcAb组3例,有1例阳性,拷贝数10^2;HBsAb组阳性率14.3%,拷贝数在10^3－10^7之间;189例全阴性有2例阳性（1.06%）,拷贝数在10^4－10^5之间。结论 HBV DNA在各种模式的HBV标志阳性血清甚至全阴性的血清中均可检出,但检出率相差甚大,从1.06%－100％;HBV DNA乙肝病毒标志中HBeAg阳性者其HBV DNA阳性率及拷贝数较高;HBsAg及其抗体阳性者仍可检出HBV DNA,说明仅仅依靠乙肝病毒标志进行早期诊断以及判断病人是否具有传染性是不够的。     

HBV感染各阶段血清乙肝表面抗原与HBV DNA及年龄的相关性分析

目的:探析未接受抗病毒干预治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者各阶段的血清乙肝表面抗原(HBsAg)定量值与HBV DNA及患者年龄的关系.方法:2015年3月~2016年12月在我院就诊但未接受抗病毒治疗的498例慢性HBV感染患者的临床资料.根据临床诊断结果,将入选者分成非活动性HBsAg携带组(145例)、慢性HBV携带组(57例)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)(+)慢性乙型肝炎(CHB)组(151例)、HBeAg(-)CHB组(65例)、HBeAg(-)乙肝肝硬化(LC-B)组(43例)和HBeAg(+)LC-B组(37例)6组.对血清HBsAg定量与血清HBV DNA及患者年龄进行相关性分析.结果:各组间的HBsAg定量值有统计学差异,其中HBeAg(-)、(+)的CHB组间HBsAg水平差异显著.除外非活动性HBsAg携带的HBV感染者的HBV DNA与血清HBsAg定量值呈显著正相关性.HBV感染者的血清HBsAg定量值与其年龄间存在显著负相关性.年龄>40岁的非活动性HBsAg携带者血清HBsAg定量值明显低于同年龄段的HBeAg(-)CHB患者.结论:HBV感染各阶段的血清HBsAg水平各不相同,该水平与患者的年龄及HBV DNA关系密切,是区分年龄超过40岁的非活动性HBsAg携带者与HBeAg(-)CHB患者的一个重要预测指标.     

电穿孔法增强HBV DNA疫苗免疫效果的评价

目的: 评估电穿孔法3个主要变量（DNA剂量、接种部位和电压）对诱导Balb/c小鼠体液免疫应答的影响。方法:用能够表达荧光蛋白的荧光素酶质粒肌肉注射小鼠,通过荧光蛋白表达量的测定观察电穿孔法对肌肉细胞中抗原基因的转染效率和蛋白表达的影响。构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)的DNA疫苗,电穿孔法接种疫苗,在DNA疫苗的剂量（0.5、5.0和50.0 μg)、接种部位（肌肉、皮内和皮下)及电穿孔所施加电压（0、36和60V）改变时,采用ELISA法检测HBV表面抗体(HBsAb),以观察小鼠体液免疫的变化。 结果：电穿孔能够加速抗原基因在小鼠体内的表达,荧光蛋白表达随电击电压的升高而增强（P<0.01）;5 μg荧光素酶质粒电穿孔所施加电压60V时荧光蛋白表达在7 d时达到最高。注射途径为皮内的电转染效果最佳。在电场作用下,电压36和60V时HBV DNA疫苗5.0 μg肌肉注射后产生抗体水平分别为22.4 和81.2　IU•mL^-1。结论: 电穿孔法可以有效提高HBV DNA疫苗的免疫原性。