布地奈德对哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用

目的:研究布地奈德(BUD)对支气管哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用.方法:30只清洁级幼年健康雄性Wisar大鼠经造模后,随机分为对照组、哮喘组和BUD组.实验结束后对支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用ELISA法测定血清中IL-4的含量;采用免疫组化法检测STAT6蛋白表达的变化.结果:(1)哮喘组BALF中细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著高于对照组(P＜0.01),BUD组BALF中上述各项指标较哮喘组均显著降低(P＜0.01);(2)哮喘组BALF中IL-4的浓度显著高于对照组(P＜0.01),BUD组较哮喘组显著降低(P＜0.01);(3)哮喘组支气管上皮细胞STAT6蛋白阳性表达较对照组明显增强(P＜0.01).结论:哮喘大鼠支气管STAT6较强表达,BUD有抑制气道炎症的作用,使IL-4合成减少,从而下调STAT6及其基因表达.     

布地奈德对哮喘大鼠IKK/NF-κB信号通道影响的实验研究

目的:观察布地奈德混悬液(Bud,商品名:普米克令舒)对哮喘大鼠肺组织IκB激酶(IKKβ)mRNA表达及核转录因子(NF-κB)活化的影响.方法:复制哮喘大鼠模型,分为正常组、哮喘组和布地奈德混悬液雾化组,用原位杂交法检测肺组织IKKβ mRNA表达,免疫组化检测肺组织NF-κBp65蛋白活性,双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)检测血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-5 的浓度.结果:哮喘组肺组织IKKβ mRNA(0.203±0.038)及NF-κBp65(0.256±0.063)表达量均显著高于正常组(分别为 0.015±0.006,0.034±0.008,P＜0.01).布地奈德混悬液雾化组肺组织IKKβ mRNA (0.101±0.010)和NF-κBp65(0.062±0.014)表达均显著低于哮喘组(P均<0.01).结论:哮喘组肺组织IKKβ mRNA、NF-κBp65表达显著增强,Bud雾化吸入能有效抑制哮喘大鼠肺组织IKKβ mRNA的表达及NF-κBp65的活性,证明Bud能有效抑制IKK/NF-κB信号通道的活性.     

布地奈德对哮喘大鼠中性粒细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的：观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白在哮喘大鼠血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN参与哮喘炎症的可能机制,并研究布地奈德的影响。方法：采用卵白蛋白（OVA）和Al（OH）3制备大鼠哮喘模型,分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测PMN中iNOS蛋白的表达水平,比色法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中NO浓度。结果：哮喘组大鼠PMN中iNOS蛋白的表达水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,布地奈德治疗组PMN中iNOS蛋白的表达水平显著低于哮喘组（P〈0.01）;哮喘组支气管壁iNOS蛋白的表达水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,布地奈德治疗组支气管壁iNOS蛋白的表达水平显著低于哮喘组且高于正常对照组（均P〈0.01）;哮喘组BALF中NO浓度显著高于正常对照组（P〈0.01）,布地奈德治疗组BALF中NO浓度显著低于哮喘组（P〈0.01）;PMN中iNOS蛋白的表达水平与BALF中NO浓度呈显著正相关（n=29,r=0.754,P〈0.01）;支气管壁iNOS蛋白的表达水平与BALF中NO浓度呈显著正相关（n=29,r=0.760,P〈0.01）。结论：哮喘大鼠PMN合成iN-OS蛋白的功能增加,PMN可能部分通过iNOS参与哮喘的发病,这种功能可以部分被布地奈德所抑制。     

地塞米松抑制哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶的表达

目的:探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶(p38 MAPK)表达的变化以及地塞米松对其影响.方法:复制大鼠哮喘模型,随机分成3组:正常对照组、哮喘对照组和地塞米松(DEX)干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-5含量和肺组织磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察气道阻力、BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化.结果:哮喘对照组大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平及气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加(P＜0.01);DEX干预组上述指标较哮喘对照组显著降低(P＜0.01),肺组织病理学损伤程度明显减轻.肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关(r=0.77、0.63、0.65,P＜0.01).结论:p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.DEX对哮喘的治疗作用至少部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关.     

布地奈德对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统表达的调控作用

目的：通过观察布地奈德对大鼠肺泡巨噬细胞（Mφ）GITR/GITRL表达的影响,探讨GITR/GITRL信号系统参与哮喘炎症反应的机制。方法：将30只SD大鼠随机分为哮喘组、对照组、布地奈德组,每组10只,卵白蛋白建立哮喘模型。行支气管肺泡灌洗分离提纯肺泡Mφ,分别采用实时荧光定量PCR法和细胞免疫化学法测定肺泡MφGITR/GITRL mRNA和蛋白的表达。结果：哮喘组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（11.05±0.23,9.82±1.24）和蛋白OD值（0.64±0.08,0.71±0.05）表达水平显著高于对照组△CT值（12.79±1.28,11.88±1.37）和蛋白OD值（0.37±0.09,0.39±0.04）（P均〈0.05）;布地奈德组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（12.97±0.97,11.16±1.42）和蛋白OD值（0.40±0.06,0.40±0.07）表达量显著低于哮喘组（P均〈0.05）,但与对照组比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论：哮喘大鼠肺泡MφGITR/GITRL的表达升高,肺泡Mφ可能通过GITR/GITRL信号系统起到促进哮喘气道炎症的作用,而糖皮质激素布地奈德可能通过抑制肺泡MφGITR/GITRL信号通路在哮喘治疗中起作用。     

布地奈德早期干预对急性哮喘模型大鼠转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨布地奈德早期干预对急性哮喘模型大鼠转化生长因子-β1(TGFβ-1)/Smad信号传导通路影响。方法30只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机均分成正常对照组(C组)、哮喘模型组(A组)和布地奈德组(B组)等3组,每小组10只,用卵白蛋白(OVA)制备哮喘大鼠模型,通过早期布地奈德混悬液雾化吸入方式对急性哮喘模型大鼠进行干预,用双抗体夹心ELISA法测定血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1浓度,免疫组化方法检测肺组织TGF-β1以及磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、Smad7蛋白表达水平。结果C组的血清、BALF中TGF-β1浓度分别低于A组和B组,B组血清、BALF中TGF-β1浓度较A组下降;A组肺组织P-Smad2/3蛋白表达较C组和B组增高,而Smad7蛋白表达下降。结论布地奈德早期干预可抑制急性哮喘大鼠体内TGFβ-1和P-Smad2/3的过度表达及上调Smad7,从而阻断TGFβ-1的胞内信号转导,可在一定程度上减轻急性哮喘大鼠气道炎症和抑制气道重塑的发生发展。     

支气管哮喘小鼠肺组织T-bet mRNA与Muc5ac蛋白的表达

目的 探讨支气管哮喘(哮喘)小鼠肺组织T-bet mRNA与黏蛋白基因Muc5ac蛋白的表达及两者的相关性.方法 制作小鼠哮喘模型,应用RT-PCR法测定哮喘组及对照组肺组织T-bet mRNA的表达,分别用免疫组织化学法和阿辛蓝过碘酸雪夫染色法测定两组气道Muc5ac蛋白和黏蛋白的表达.结果 哮喘组小鼠肺组织T-bet mRNA的表达较止常组明显减低[(0.954±0.07)vs.(0.48±0.10),(P＜0.01)].哮喘组小鼠气道黏蛋白基因Muc5ac蛋门的表达较对照组明显增高[(43.24±5.82)VS.(89.12±5.56),(P＜0.01)].哮喘组小鼠肺组织T-bet mRNA与气道Muc5ac蛋白呈线性负相关(P＜0.05).结论 哮喘小鼠肺组织T-bet mRNA表达减少是可能促进了气道Muc5ac蛋白的表达.从而促进了气道黏液过度分泌.     

The Effect of Chronic Alcohol Ingestion on TGF-β1 and bFGF mRNA of Lung Tissues in Rats

目的:观察慢性饮酒后大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的表达,探讨慢性饮酒对肺间质的影响.方法:健康雄性Sprague-Dawley大鼠20只随机分为无乙醇液体饲料的对照组和乙醇液体饲料的乙醇组,每组10只.喂养16周后观察所有大鼠肺泡内炎性细胞浸润程度并评分,Masson染色观察肺间质胶原沉积情况,电镜观察肺组织超微结构变化,实时荧光定量PCR检测肺组织TGF-β1和bFGF mRNA的表达量.结果:光镜下肺泡内炎性细胞浸润程度评分乙醇组高于对照组,差异有统计学意义(Z=50,P＜0.05).乙醇组电镜可见线粒体膜和嵴均有不同程度融合、模糊不清,细胞间隔均可见不同程度的胶原纤维沉积.乙醇组肺组织中TGF-β1和bFGF mRNA表达量高于对照组,差异有统计学意义(t分别为3.702和3.487,均P＜0.01).结论:慢性饮酒可增加大鼠肺组织中TGF-β1、bFGF mRNA表达量,使肺组织胶原沉积,引起肺泡炎症和肺间质疾病.     

PTEN在哮喘大鼠肺部的表达及地塞米松的干预

目的：研究哮喘大鼠PTEN的表达和地塞米松（DXM）对其表达的影响。方法：24只体重（200±10）g的SPF级雄性SD大鼠,随机分为3组：正常对照组、哮喘组、地塞米松组。对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-13浓度;采用免疫组化法和Western blot法分别检测PTEN的表达及各组大鼠肺组织PTEN量的变化。结果：正常对照组、地塞米松组支气管PTEN蛋白的表达分别为7.87±0.80、1.80±0.23,均高于哮喘组（0.92±0.23,均为P〈0.01）,其主要表达细胞是支气管上皮细胞;哮喘组大鼠BALF中IL-13表达明显升高,明显高于正常对照组;地塞米松组BALF中IL-13量明显下降,与哮喘组比有统计学意义。哮喘组大鼠支气管PTEN蛋白与BALF中的IL-13浓度呈显著负相关（r=-0.675,P〈0.01）。结论：气道上皮细胞是PTEN主要表达细胞,哮喘大鼠PTEN蛋白表达明显减少,PTEN能减少Th2因子的表达;DXM可以促进PTEN的表达,可能为其抑制哮喘气道炎症形成的重要作用机制。     

热休克蛋白70在哮喘小鼠气道炎症模型中的表达及意义

目的 观察哮喘小鼠肺组织中热休克蛋白70(HSP70)的表达及其在哮喘中的作用.方法 将32只BALB/c小鼠随机分为N(正常对照组)、A(急性哮喘组I)、B(急性哮喘组II)和C(慢性哮喘组)4组,每组8只;卵蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠模型;支气管肺泡灌洗液(BALF)分析和HE染色鉴定哮喘模型;免疫组化及Western blot法测定各组小鼠肺组织中HSP70的表达和定位.结果 哮喘组BALF嗜酸性粒细胞绝对计数及分类计数较N组皆有显著增高(P＜0.05),HE染色提示哮喘组与N组相比出现嗜酸性粒细胞浸润增多、纤毛脱失、平滑肌细胞层增厚等改变.HSP70在哮喘各组小鼠中主要定位在支气管上皮细胞、部分肺泡上皮细胞和炎症细胞中,而在N组中表达呈阴性结果;HSP70在哮喘组表达量较N组为高(P＜0.05),B组表达量显著高于A组(P＜0.05).结论 哮喘小鼠肺组织中HSP70主要表达于支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和炎症细胞中,参与哮喘发病.     

神经生长因子抗体对哮喘模型大鼠肺中趋化素样因子1表达的影响

目的观察神经生长因子(NGF)抗体对OVA诱导的哮喘模型大鼠肺中趋化因子CKLF1的表达变化。方法采用OVA诱导的大鼠哮喘模型,通过腹腔给予NGF(8 ng.kg-1)及NGF抗体(0.1 mg.L-1),采用Western blot、ELISA和免疫组化观察CKLF1在支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中的表达变化。结果 CKLF1在OVA诱导的哮喘模型大鼠肺组织中的蛋白表达升高(P<0.05);NGF抗体能够降低CKLF1的表达;CKLF1在哮喘大鼠BALF中的含量升高(P<0.05),NGF抗体能够降低BALF中CKLF1的含量(P<0.05);NGF对肺组织及BALF中CKLF1的表达没有明显的影响。结论 NGF抗体能够抑制哮喘模型大鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液中CKLF1的表达和释放,改善哮喘症状。     

贴敷"咳喘宁"贴膏对支气管哮喘模型大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞的影响

目的:通过建立大鼠支气管哮喘模型,观察穴位贴敷“咳喘宁”贴膏对支气管哮喘模型大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞的影响。方法:将60只Wistar大鼠按随机数字表分组法随机分为空白对照组(A组)、模型对照组(B组)、内服“桂龙咳喘宁”对照组(C组)、内服“地塞米松”对照组(D组)、穴位贴敷“咳喘宁”高剂量治疗组(E组)、穴位贴敷“咳喘宁”低剂量治疗组(F组)6组,每组10只。各组大鼠用Elwood法造模。于诱喘前10h开始给药,并分别观察各组哮喘模型大鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的改变。结果:与C组比较,D、E、F组炎性细胞减少有显著性差异(P<0.05);与D组比较,C组、E组、F组嗜酸性粒细胞明显增高,有显著性差异(P<0.05);各治疗组中的中性粒细胞都明显减少,与B组比较有显著性差异(P<0.05);各治疗组中淋巴细胞水平明显降低,P<0.05或P<0.01。结论:穴位贴敷“咳喘宁”贴膏对支气管哮喘模型大鼠有明显的抑制炎症的作用,其作用虽不及内服“地塞米松”组,但等同内服“桂龙咳喘宁”组;有明显的改善变态反应和增加免疫功能作用。     

地塞米松对哮喘豚鼠气道白介素-5、白介素-10mRNA表达及嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：检测地塞米松对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-5（IL-5）mRNA及IL-10 mRNA表达水平及嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡率。方法：健康雄性Hartley系豚鼠随机分为地塞米松组、哮喘组和正常对照组。采用原位细胞凋亡（TUNEL）、RTPCR技术检测BALF中EOS凋亡、IL-5 mRNA及IL-10 mRNA表达水平。结果：地塞米松组BALF中的EOS较哮喘组明显下降，EOS凋亡明显上升（P〈0．01）；IL-5 mRNA水平较哮喘组明显下降，IL-10 mRNA水平较哮喘组明显升高（P〈0.05）。结论：地塞米松可以通过减少IL-5 mRNA的表达，增加IL-10 mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升，增加EOS的凋亡。     

咳喘宁粉剂治疗支气管哮喘的临床与实验研究

目的：探讨咳喘宁粉剂治疗支气管哮喘的疗效及部分作用机理。方法：观察支气管哮喘患儿服用咳喘宁粉剂前后的肺功能，血清IgE水平以及给药1年后的临床控制率；动物实验观察正常对照组、哮喘组、咳喘宁组的引喘潜伏期，肺泡灌洗液(BALF)，一氧化氮(NO)和内皮素—1(ET-1)水平。结果：咳喘宁粉剂不仅可以改善哮喘患儿肺功能，使异常升高的IgE下降，显示较好的临床控制率，而且显延长豚鼠引喘潜伏期、降低BALF的NO和ET-1水平。结论：咳喘宁粉剂对儿童支气管哮喘有较好治疗作用，此作用可能与其减少IgE、NO和ET-1生成有关。     

百日咳杆菌效应CpG-ODNs调控变应性哮喘Toll信号分子的实验研究

从百日咳杆菌中分离出非甲基化寡核苷酸单链(CpG-ODNs),建立卵白蛋白(OVA)致敏的小鼠急性哮喘与慢性哮喘模型,经急性哮喘模型从百日咳杆菌CpG-ODNs与9条相似度高且含有CG片段的seq A～seq I序列中筛选出有效序列(seq A),以seq A腹腔注射(ip)及灌胃(ig)对急、慢性哮喘小鼠分别进行干预。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)总数和嗜酸性粒细胞(EOS)数,酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中细胞因子及血管内皮生长因子(VEGF)水平。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测小鼠脾细胞TLR-9 mRNA表达量;蛋白印迹(Western blotting)法检测小鼠肺组织TLR-9蛋白表达。结果表明,小鼠急性哮喘模型经腹腔注射及灌胃seq A预处理,可明显抑制BALF中WBC总数增加,显著抑制EOS增加;百日咳杆菌、CpG+及seq A～seq D灌胃组亦显著抑制EOS增加,而seq E～seq I作用不明显;上述各序列干预组以腹腔注射途径抑制EOS作用较为显著。对小鼠慢性哮喘模型,CpG+和seq A腹腔注射预处理均能明显上调BALF中γ干扰素(IFN-γ)...     

气道局部治疗对气道黏液高分泌干预作用的对比研究

目的探讨常用局部治疗性药物对慢性气道黏液高分泌作用的机制和特点。方法用超声雾化吸入中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)复制慢性支气管炎动物模型,分别吸入糖皮质激素布地奈德(budesonide)、胆碱M受体阻断剂异丙托溴铵以及两者配伍联用进行干预,用酶联免疫吸附试验(ELISA)及斑点印迹法分别检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中黏蛋白(MUC)的含量和MUC5ACmRNA表达水平。结果NE能显著增加气道MUC和MUC5ACmRNA的表达(P<0.01);普米克令舒和异丙托溴铵均可降低MUC和MUC5ACmRNA的表达(P<0.05),两者联用可增强抑制黏蛋白的效应(P<0.01)。结论NE是慢性气道黏液高分泌发生的重要因素;布地奈德和异丙托溴铵可抑制MUC基因及转录水平的表达,且两者联用有协同效应。     

诱导型一氧化氮合酶在哮喘大鼠肺组织及中性粒细胞中的表达及地塞米松对其的影响

目的：观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在哮喘大鼠肺组织及血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN参与哮喘炎症的可能作用机制。方法：采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组、地塞米松干预组,分离纯化血PMN,免疫组织化学法检测iNOS蛋白的表达水平,测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中NO浓度。结果：哮喘组PMNiNOS蛋白光密度（OD）值（0.122±0.017）的表达水平显著高于对照组OD值（0.076±0.014）（P〈0.01）,地塞米松干预组OD值（0.089±0.013）PMNiNOS蛋白的表达水平显著低于哮喘组OD值（P〈0.01）,但与对照组相比差异无统计学意义。哮喘组支气管壁iNOS蛋白OD值（0.243±0.039）的表达水平显著高于对照组（0.119±0.016）（P〈0.01）,地塞米松干预组OD值（0.164±0.016）支气管壁iNOS蛋白的表达水平显著低于哮喘组且高于对照组（P均〈0.01）。哮喘组BALFNO浓度（8.59±1.07）ng/mL显著高于对照组（3.69±1.00）ng/mL（P〈0.01）,地塞米松干预组BALFNO浓度（4.28±0.89）ng/mL显著低于哮喘组（P〈0.01）,但与对照组相比差异无统计学意义。PMNiNOS蛋白的表达水平与BALFNO浓度呈显著正相关（n=29,r=0.770,P〈0.01）。支气管壁iNOS蛋白的表达水平与BALFNO浓度呈显著正相关（n=29,r=0.802,P〈0.01）。结论：哮喘大鼠PMN合成iNOS蛋白的功能增加,PMN可能通过iNOS参与哮喘的发病机制,这种功能可以部分被地塞米松所抑制。