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相似文献
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1.
目的:用丙型肝炎(丙肝)阳性血清(抗HCV阳性及HCVRNA RT-PCR阳性)感染HepG2细胞,以期建立稳定的HCV感染的细胞模型。方法:采用丙肝阳性血清连续感染法感染HepG2细胞,用逆转录多聚酶链反应检测传代HepG2细胞内HCVRNA正链和负链,电镜观察感染后的细胞内的病毒颗粒,免疫组化方法检测感染后的细胞内丙肝病毒蛋白抗原(HCVNS5、HCV capsid)的存在。结果:感染后传代的  相似文献   

2.
丙型肝炎病毒感染成年树Qu的实验研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
探讨成年树Qu感染HCV的可能性。方法用HCVRNA阳性人血清接种10只健康成年Tupaia。观察临床表现;定期检测血清ALT和HCVRNA正,负链;检测肝组织中HCV3种抗原和负链HCVRNA;行肝组织病理检查。  相似文献   

3.
精细胞及血单个核细胞中丙型肝炎病毒RNA及其负链检测   总被引:4,自引:0,他引:4  
用聚合酶链反应(PCR)方法对8例慢性丙型肝炎患者的血浆、外周血单个核细胞(PBMC)、精液和精细胞中的正链和负链丙型肝炎病毒(HCV)RNA进行检测,以了解HCV在肝外细胞中是否存在,有否复制。结果血浆中正链HCVRNA均阳性,而负链HCVRNA全部阴性;PBMC中正链HCVRNA阳性者5例,其中2例检出负链HCVRNA。在3例留取精液的患者中1例精液和精细胞中检出正链HCVRNA。精细胞未次洗液HCVRAN阴性,精细胞负链HCVRNA阴性。上述结果提示:(1)血浆中可能仅有正链HCVRNA存在;(2)HCV可在PBMC中存在,并可能在其中复制;(3)精液中有HCV存在,因此通过性交传播丙型肝炎的可能性确实存在,但HCV可能不在精细胞中复制  相似文献   

4.
目的:探讨成年树(Tupaia)感染HCV的可能性。方法:用HCVRNA阳性人血清接种10只健康成年Tupaia。观察临床表现;定期检测血清ALT和HCVRNA正、负链;检测肝组织中HCV3种抗原和负链HCVRNA;行肝组织病理检查。结果:Tupaia接种阳性血清后,10例均出现不同程度的肝炎症状;10例血清ALT升高,其中3例在28周时仍高于正常;6例肝组织中HCV抗原持续阳性,持续时间大于28周;10例出现急性肝炎的肝组织病理学变化,其中4例有慢性肝炎病变。检测4只动物血清的系列标本,HCVRNA均呈间歇性阳性;检测3只动物肝组织负链HCVRNA均为阳性;检测1例动物肝外组织,其中心肌细胞、胰岛细胞和肾小管上皮细胞中有HCV3种抗原染色阳性信号。结论:HCV能够感染成年Tupaia,并可形成慢性病变,感染率约为60%,慢性病变发生率约为40%。Tupaia可作为研究丙型肝炎的实验动物  相似文献   

5.
运用巢式聚合酶链反应(PCR)等方法检测了5例丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV—RNA)阳性患者的肝癌、癌旁组织和周围血清中HCV—RNA正链和负链,其中男4例,女1例。结果,正链检测:血清及癌旁组织全部阳性,癌组织中3例阳性。负链检测:血清中均阴性,癌组织3例阳性,癌旁组织5例均阳性。本组5例患者肝脏HCV—RNA负链阳性,推测HCV以HCV—RNA负链作为模板在感染的肝脏组织中复制,HCV持续存在于肝脏组织中对肝癌的发生起了一定的作用。  相似文献   

6.
目的:研究27例肝炎病人血清、外周血单核细胞(PBMC)及肝脏中GBV-C/HGV正链及负链RNA(复制中间体)的存在状况。方法:应用逆转录-巢式多聚酶链反应技术检测GBV-C/HGV正、负链RNA。结果:27例病人中21例病人血清、7例PBMC、10例肝组织中检测到GBV-C/HGV正链RNA,其中2例单一GBV-C/HGV感染者肝组织中检测到负链RNA,在27例病人血清及PBMC中均未检测到负  相似文献   

7.
目的 研究庚型肝炎病毒(HGV)混合感染对慢性丙型肝炎(CHC)临床、病毒复制及干扰素抗丙型肝炎病毒(HCV)疗效的影响及HGV对干扰素治疗的反应。方法 以逆转录套式降合酶链反应(RT-nested PCR)检测90例CHC患者血清HGV RNA,比较HGV RNA阳性及阴性两组90例CHC患者的临床资料和对干扰素治疗的反应。结果 HGV RNA阳性18例,阳性率20%,HGV RNA阳性及阴性两组CHC患者在性别、年龄、病程、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平、HCV RNA水平和对干扰素治疗的反应等方面无明显差异。5例HGV RNA阳性CHC患者接受干扰素治疗过程中,HGV RNA均转为阴性,停止治疗后1年,3例HGV RNA恢复治疗前水平。结论 混合感染HGV对CHC的临床、病毒复制及干扰素抗HCV疗效无明显影响。HGV对干扰素敏感,但停药后易复发。  相似文献   

8.
探讨乙型肝炎病毒(HBV)与丙型肝炎病毒(HCV)重叠感染对HBV或HCV复制的影响。方法检测124例各型肝炎血清HBVDNA、HCVRNA、抗HCV和HBV5项标志,对比分析HBV或HCV单纯感染及两者重叠感染时血清HBV复制标志[HBVDNA及(或)HBeAg]或HCV复制标志(HCVRNA)的检出率。结果HCV单纯感染组HCVRNA检出率83.33%(25/30),高于HCV与HBV重叠感染组55.56%(P<0.05),临床类型分析显示这种差异发生在慢性肝炎组;HBV单纯感染组复制标志检出率为41.86%(18/43),重叠感染组HBV复制标志检出率为30.56%(11/36),两组差异无显著性。结论HBV与HCV重叠感染时HCV复制受到抑制,HBV复制标志无明显影响  相似文献   

9.
丙型肝炎病毒(HCV)感染后血清HCV—RNA、抗HCV及肝功ALT水平的检测对丙型肝炎(HC)的早期诊断、肝病的活动及病毒的复制判断都有一定意义。本文作者对临床上不同类型的63例丙肝患者同时检测了HCV—RNA,抗HCV及血清ALT,对其相互间的关...  相似文献   

10.
丙型肝炎病毒感染者血清ALT,抗—HCV及HCV—RNA关系的分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
对89例丙型肝炎病毒感染者血清ALT、抗-HCV及HCV-RNA进行检测分析,结果表明:抗-HCV与HCV-RNA阳性检测的符合率为48.31%,抗-HCV与HCV-RNA虽然有较好的相关性,但二者无平行关系,说明义气风发-HCV仅在某些情况下能反映HCV的复制状态,但不能代替HCV-RNA的检测,2份HCV-RNA阳性血清抗-HCV阴性,说明HCV-RNA的检测早期诊断意义较抗-HCV更大。AL  相似文献   

11.
ProgressonhepatitisCresearchhasadvancedquickly.However,theabsenceofcellculturesystemofHCVinfectionhashamperednotonlytheunder-standingofitslifecycle,butalsotheanalysisofthemoleculardeterminantsofitspersistence.Toidentifycriticalepitopesthatelicitaneutralizingantibodyre-sponseandtounderstandthepathogenesisofpersis-tentHCVinfection,efficientcellmodelsofHCVin-fectionisneeded[1].HumanT-lymphocytecelllines[2-5],humanfibroblastcells[6](VH3),peripheralbloodmono-nuclearcells[7](PBMCs)andhepatocy…  相似文献   

12.
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)在体外培养原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系7721中复制和表达的异同,探讨HCV体外培养条件。方法 原代人胎肝细胞系7721分别与HCV感染血清共孵育后,用逆转录-聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化检测细胞和培养上清中的HCV RNA和抗原表达。结果 从孵育的2~3天,即可在细胞内和/或培养上清中间断地检出HCV RNA(其中HCV在7721细胞株中的复制至少可达66d,HCV在 人胎肝细胞中的复制持续25d);HCV抗原可在感染细胞内得到稳定表达,感染细胞内存在HCV负链RNA杂交信号,且多位于细胞浆。结论 两种肝细胞对HCV易感,尤其是7721细胞可以稳定地支持HCV体外复制,可用于HCV体外长期培养的靶细胞。  相似文献   

13.
目的 探讨构建的重组丙型肝炎病毒(HCV)能否在易感细胞系中复制和表达。方法 用人工构建的HCV感染易感细胞系7721,培养72h后利用RT-PCR检测HCV的RNA表达,并应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察免疫荧光标记的HCV核心抗原和胞膜抗原E1在细胞中的表达。结果 人工构建的HCV感染7721细胞72h后,RT-PCR检测细胞内可检出HCV正链及负链RNA,细胞培养上清中可检出HCV正链RNA,CLSM检测HCV核心抗原和E1抗原在细胞内的分布呈胞浆型。结论 构建的HCV72h内可以在易感细胞系7721中复制和表达。  相似文献   

14.
目的 探讨构建的重组丙型肝炎病毒(HCV)能否在易感细胞系中复制和表达。方法 用人工构建的HCV感染易感细胞系7721,培养72h后利用RT-PCR检测HCV的RNA表达,并应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察免疫荧光标记的HCV核心抗原和胞膜抗原EI在细胞中的表达。结果 人工构建的HCV感染7721细胞72h后、RT-PCR检测细胞内可检出HCV正链及负链RNA,细胞培养上清中可检出HCV正链RNA,CLSM检测HCV核心抗原和E1抗原在细胞内的分布呈胞浆型。结论 构建的HCV72h内可以在易感细胞系7721中复制和表达。  相似文献   

15.
丙型肝炎病毒感染细胞模型的实验研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 建立接近体内自然感染状态并能长期复制的丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型.方法 用HCV阳性血清感染人肝癌细胞株HepG2、SMMC 7721及胎肝细胞株L02,继续培养60d,用巢式逆转录-聚合酶链反应(nested RT-PCR)检测培养细胞及上清中正、负链HCV RNA。结果 HepG2、SMMC 772l在感染后第2-30d,L02在感染后第3-30d细胞中可以间断检出HCV正链RNA;3株细胞的细胞内HCV负链RNA均在感染后第3-30d可以间断检出,检出率与正链RNA接近。3株细胞以HepG2细胞中HCV RNA正、负链检出率较高,并在第3l—60d仍可间断检出,但复制程度逐渐减弱。3株细胞的培养上清中HCV正链RNA感染后也呈间断阳性,检出率与细胞内正链RNA基本一致。培养上清中均末检出HCV负链RNA。结论 HePG2、SMMC772l及L02细胞均对HCV易感,并能支持HCV长期复制。而HePG2细胞是较为理想的HCV体外感染细胞模型。  相似文献   

16.
目的利用基因芯片的高通量分析性能和丙型肝炎病毒(HCV)全基因组细胞培养系统,研究HCV对宿主细胞转录调节基因的影响和机制.方法用人工构建的HCV感染Huh-7肝癌细胞株,待其发生细胞病变后收集培养细胞,以同步培养但不感染HCV的细胞作为阴性对照.提取感染细胞和对照细胞的总RNA、总蛋白和细胞培养上清.总蛋白用于Western blotting鉴定HCV蛋白在感染细胞内的表达情况.细胞培养上清用于检测HCV在感染细胞内合成后的释放情况.总RNA 用10g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定抽提情况,再纯化后进行逆转录cRNA合成、荧光标记和纯化后用于基因芯片分析,检测宿主细胞转录调节基因的差异表达.结果在细胞培养上清液中可检测到HCV,感染细胞内可检测到HCV蛋白表达.基因芯片检测2倍差异表达转录调节基因发现,上调基因11个,下调基因11个.结论HCV全基因组细胞培养系统为研究HCV对感染细胞转录调节基因表达的影响提供了良好工具.利用基因芯片技术,筛选出HCV全基因组细胞培养系统中差异表达的转录调节基因,为研究HCV感染对细胞基因转录的影响提供了重要资料,加深了对HCV和宿主细胞相互作用机制的认识.  相似文献   

17.
Transfection and expression of HCV-NS5B gene in Huh-7 cells   总被引:1,自引:0,他引:1  
Methods NS5BgenehasbeentransfectedintoHuh 7cellsbylipofectamine TheresultsoftransfectionwereconfirmedbyPCRandSouthernblotanalysis ,andthelevelofthenon structuralprotein 5B(NS5B)inHuh 7cellswasdetectedbyWesternblotanalysis Results TherewereNS5Bgenefragmentsan…  相似文献   

18.
目的:检测中空纤维丝、热可逆凝胶和低吸附培养板3种三维培养体系中丙型肝炎病毒(HCV)增殖水平,寻找效率较高的HCV体外培养系统。方法:利用中空纤维丝、热可逆凝胶及低吸附培养板培养永生化人肝细胞HuS-E/2,通过XTT法检测细胞增殖情况。以基因型为2a型的HCV病毒株JFH1进行感染,在感染后不同时间点收集细胞标本,利用实时PCR法检测细胞中HCV的滴度。结果:在中空纤维丝和热可逆凝胶中培养的HuS-E/2细胞增殖曲线为持续递增,至培养结束时细胞数为初始培养数的2~3倍,JFH1感染后中空纤维丝方法培养的细胞中HCV滴度为2.00×103 copies/1 μg total RNA,热可逆凝胶培养的细胞中HCV滴度为2.95×103 copies/1 μg total RNA,低吸附培养板方法培养的细胞中HCV滴度为1.18×103 copies/1μg total RNA。结论:与中空纤维丝及低吸附培养板比较,热可逆凝胶法为基础的JFH1体外培养系统细胞生长稳定,HCV复制效率较高。  相似文献   

19.
PCR检测丙型肝炎病毒感染各高危人群   总被引:1,自引:0,他引:1  
用PCR方法克隆了中国丙型肝炎病毒(HCV)感染者的5’端非编码区(5’-noncodingregion,5’-NCR)序列,并根据此序列合成引物检测我国HCV各高危感染人群的病毒复制情况,结果显示HCVRNA在慢性丙型肝炎患者的血清标中的阳性率为81.8%(9/11),在HCV抗体阳性的血液透析患者血清标本中的阳性率为63.6%(7/11),在HCV抗体阳性的献血员血清标中的阳性率为20%(4/  相似文献   

20.
张帆  王小红 《医学争鸣》2005,26(1):89-92
自1989年丙型肝炎病毒(HCV)被分子克隆后,其流行病学、基因组学的相关研究取得了一定的进展,然而由于缺乏有效的体外细胞复制模型,HCV的研究长期以来受到阻碍. 1999年Lohmann等在Science上首先报道了选择性双顺反子亚基因组HCV RNA复制子系统,其被公认为是HCV RNA体外复制模型研究获得突破进展的里程碑. 复制子在人肝癌细胞株Huh-7细胞株中能高水平的自主复制. 研究发现复制子在细胞中复制对宿主细胞生长和代谢无明显影响,高水平复制与病毒基因组的适应性突变和宿主细胞的容受性有关. 这些研究结果为选择性HCV全序列基因组复制子的研究奠定了基础. 复制子系统的建立对HCV致病机制、治疗药物筛选及疫苗方面的研究具有重要的意义.  相似文献   

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