地塞米松抑制碱烧伤后角膜新生血管的实验研究

目的：探讨地塞米松对角膜新生血管形成及角膜内血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的影响。方法：采用碱烧伤的方法制备家兔角膜新生血管模型,分为三组,每日结膜下注射地塞米松０．５毫克组、１．０毫克组、对照组。分别采用宏观测量新生血管长度及生长速度,免疫组化染色检查ＶＥＧＦ蛋白的表达,显微镜下微血管计数方法研究角膜新生血管形成及抑制情况。结果：实验组新生血管生长速度变慢,微血管数量减少,ＶＥＧＦ蛋白表达下降,具     

碱烧伤后角膜干细胞活性的实验研究

目的 了解大鼠角膜烧伤后角膜干细胞的活性。方法 对大鼠角膜中央区,上半周及全周３个不同区域分别进行碱性烧灼,于伤后２４小时取材做离体角膜＾３Ｈ－Ｔｄｒ掺５入,计算角膜基底细胞标记率。结果 中央区及上半周烧伤组角膜基底细胞标记率分别为６．７８４和６．００２,与对照组１．２９相比,Ｈ＝３０．５５,Ｐ〈０．００１,有显著性差异,而全周烧伤组未见标记细胞。     

聚乙二醇化内皮抑素抑制碱烧伤角膜新生血管的实验研究

目的观察聚乙二醇化内皮抑素（PEG—endostatin）抑制碱烧伤诱导的兔角膜新生血管（CNV）的效果，探讨其作用机制。方法采用碱烧伤法诱导兔角膜新生血管形成。在碱烧伤后1d，治疗1、2组和对照组分别在球结膜下注射50μg／mL PEG化内皮抑素、50μg／mL重组内皮抑素、生理盐水各0．2mL。以后隔日注射1次，共8次。动态观察CNV的生长状况。利用免疫组化方法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达，并在显微镜下进行微血管计数。结果治疗1、2组CNV的长度和面积、VEGF的表达及微血管数量均明显少于生理盐水对照组（P〈0．05）；而治疗1组的CNV的长度和面积、VEGF的表达及微血管数量均明显少于治疗2组（P〈0．05）。结论PEG化内皮抑素及重组内皮抑素都可有效抑制CNV的生长，但前者效果更好。     

角膜上皮移植对角膜碱烧伤表层新生血管抑制的实验研究

为评价角膜上皮移植术对角膜碱烧伤后表层新生血管的抑制作用，对大鼠角膜全周碱烧伤后立即行上缘自体角膜上皮移植术，连续观察５周。结果，６４％移植区角膜表面无或有很少新生血管，组织学证实为角膜上皮表型。而９５％的对照组角膜表面全部新生血管化，组织学显示有散在杯细胞为结膜上皮。本文提示角膜上皮移植术对碱烧伤后重建角膜表面的完整性，并预防角膜新生血管化，具有重要价值。     

核糖核酸酶抑制因子抑制碱烧伤后角膜新生血管

目的 制作兔碱烧伤后角膜新生血管(CNV)模型,结膜下注射核糖核酸酶抑制因子(RI),以探讨RI对碱烧伤后CNV的抑制效果。方法 每只兔双眼均制成碱烧伤后CNV模型。自身双眼对照,实验眼结膜下注射RI,对照眼用等量生理盐水结膜下注射。根据烧伤范围和烧伤时间,16只兔随机分成4组,各组给药量相应改变。两周后,摄片分析CNV面积。结果 实验眼组较对照眼组,CNV被抑制了27.83％,P<0.01组1的抑制率为35.26%,P<0.01;组2的抑制率为48.32％,P<0.05;组3的抑制率为8.01％,P<0.01;组4的抑制率为34.84%,P<0.01。结论 RI能够抑制碱烧伤后CNV的发生。     

HIF1α在大鼠碱烧伤角膜新生血管形成中的表达

目的探讨碱烧伤后角膜新生血管形成过程中缺氧诱导因子1(HIF1α)的表达及作用。方法使用碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管模型,将25只SD大鼠随机分成5组:每组5只,右眼作为正常对照组,左眼作为实验组,每日用裂隙灯显微镜观察角膜新生血管,分别计算角膜新生血管面积,并行免疫组织化学检测和统计学分析。结果正常大鼠角膜HIF1α、VEGF没有表达或在上皮基底膜有微弱表达,新生血管组角膜全层HIF1α、VEGF表达明显增强,其表达部位主要分布在形成的新生血管区域和上皮全层。结论本实验HIF1α表达水平与角膜新生血管有明显相关性。     

螺内酯抑制大鼠角膜碱烧伤新生血管形成的作用

目的:观察螺内酯(spironolactone,SL)对大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CRNV)形成的抑制作用。方法:健康SD大鼠42只随机分为3组,6只6眼为正常组,其余36只36眼建立碱烧伤诱导的大鼠CRNV模型后随机分为实验组和对照组,每组18只。实验组给予SL(100mg/kg)灌胃,对照组给予等量生理盐水灌胃,1次/d。术后第4,7,14d在裂隙灯显微镜下观察CRNV的面积。结果:对照组在碱烧伤后4d,大鼠角巩膜缘处有新生血管芽成刷状生长,生长速度迅速,至14d新生血管交织成网状,几乎布满整个角膜。实验组大鼠CRNV管径细、分布生长速度缓慢。在碱烧伤后4,7和14d实验组CRNV面积均明显小于对照组(P<0.01)。     

HIF-1α在大鼠角膜碱烧伤后的作用研究

目的检测大鼠角膜碱烧伤后缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化,探讨其在角膜碱烧伤损伤机制中的作用。方法建立大鼠角膜碱烧伤模型,采用免疫组织化学与原位杂交技术,检测角膜碱烧伤后不同时间HIF-1α在角膜各层中的表达变化。结果在正常角膜组织中,角膜各层均未见HIF-1α免疫染色,碱烧伤后1d时HIF-1α免疫活性增强,且3d时表达最强,15d时明显下降,30d时仍有高于正常水平的弱表达。原位杂交检测中正常角膜组织有极弱的HIF-1α mRNA表达,碱烧伤后HIF-1α mRNA表达增强,在伤后3d、7d时表达最明显,15d后表达强度恢复至正常组织水平。结论HIF-1α参与碱烧伤后角膜的损伤病理机制,其表达变化影响新生血管形成过程,为寻找角膜碱烧伤新的治疗途径提供了理论依据。     

水通道蛋白1在大鼠角膜碱烧伤新生血管形成中的表达

目的检测大鼠角膜碱烧伤后新生血管形成过程中水通道蛋白1（AQP1）的表达变化,探讨其在角膜新生血管（CNV）形成中的作用。方法碱烧伤诱导CNV模型,将25只sD大鼠按处死的时间点不同分成5组,每组5只。每日裂隙灯下观察CNV的生长情况,并采用免疫组织化学法和RT-PCR法检测AQP1及VEGF在大鼠CNV形成中的表达。结果在正常大鼠角膜组织中,AQP1和VEGF不表达或弱表达。碱烧伤后1d,AQP1表达开始增强,第7天表达最强,14d下降,21d时仍有弱表达。RT—PCR检测显示碱烧伤后AQP1表达增强,在伤后第7天表达最明显,21d后呈弱表达（t1d=3．491,t4d=10．690,t7d=12．936,t14d=10．767,t21d=8．594,P〈0．05）。免疫组织化学检测结果表明,VEGF与AQP1的表达分布相似,强度较弱,统计学分析表明二者的表达水平呈正相关（r=0．834,P〈0．05）。结论AQP1在碱烧伤后角膜巾的表达水平与新生血管的形成明显相关。     

碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究

目的动态检测大鼠角膜碱烧伤后的角膜新生淋巴管和血管的变化,并阐明二者之间的关联。方法制备大鼠角膜碱烧伤模型,于碱烧伤后1周、2周行角膜组织电镜检查,检测角膜新生淋巴管与新生血管。5’核苷酸酶-碱性磷酸酶(5’-nase-alkaline phos-phatase,5’-NA-ALP)双重酶组织化学染色及全角膜免疫荧光染色分别检测碱烧伤后6h、1d、3d、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周的角膜新生淋巴管和新生血管的动态变化,并进行淋巴管计数(lymphatic vessels counting,LVC)和血管计数(blood vessels counting,BVC)比较。结果电镜观察结果:角膜碱烧伤后1周,角膜基质层出现新生血管,未见淋巴管;碱烧伤后2周,新生血管和新生淋巴管均出现。酶组织化学染色结果显示:碱烧伤后6h有新生血管,1周时角膜基质层存在新生淋巴管,2周时LVC和BVC均达到高峰,分别为(16.41±1.00)个和(50.40±1.56)个;以后逐渐下降,5周时LVC为(0.33±0.50)个,BVC为(12.52±2.51)个;8周时均为0。碱烧伤后,新生淋巴管和新生血管呈显著性正...     

吡非尼酮抑制大鼠角膜急性碱烧伤后新生血管的实验研究

目的研究吡非尼酮(PFD)对大鼠角膜急性碱烧伤后角膜新生血管(CNV)的抑制作用。 方法碱烧伤法制备CNV模型,模型制作成功后,将健康的斯泼累格·多雷(SD)大鼠20只随机平均分为PFD组和磷酸缓冲盐溶液(PBS)组,PFD组给予3 mg/ml PFD滴眼液,PBS组给予磷酸缓冲盐溶液,4次/d、连续14 d。裂隙灯显微镜观察角膜炎症反应评分、角膜混浊程度和角膜新生血管生长情况。第14 d处死大鼠取角膜,行苏木精－伊红(HE)染色法染色观察角膜病理形态,免疫组化CD34染色检测角膜微血管密度(MVD)。角膜炎症反应和新生血管情况在不同时间点,PFD和PBS两组间的比较采用两因素重复测量方差分析。 结果第14 d PFD组的角膜混浊评分是(1.00±0.00)分,PBS组的角膜混浊评分是(3.40±0.52)分,PFD组的角膜混浊评分低于PBS组,差异有统计学意义(t＝－14.697,P<0.05)。第7 d和第14 d PFD组的角膜炎症评分分别是(3.50±0.53)分和(2.2±0.42)分,PBS组的角膜炎症评分分别是(4.9±0.57)分和(3.3±0.48)分,PFD组的角膜炎症评分均低于PBS组,差异有统计学意义(t＝－5.715,－5.425;P<0.05)。PFD组,随时间延长,角膜透明度增加,炎症下降。该组第7 d与第3 d比较,差异有统计学意义(t＝7.56,P<0.05)。第14 d分别与第3 d及第7 d比较,差异均有统计学意义(t＝13.17,6.08;P<0.05)。PBS组,第7 d与第3 d比较,差异有统计学意义(t＝2.64,P<0.05)。第14 d分别与第3 d及第7 d比较,差异均有统计学意义(t＝8.74,6.79;P<0.05)。第3 d、第7 d及第14 d PFD组的CNV面积分别是(6.06±0.93)mm²、(17.94±1.89)mm²及(23.89±1.84)mm²,PBS组的CNV面积分别是(9.08±1.42)mm²、(27.11±2.02)mm²及(31.01±2.04)mm²,PFD组的CNV面积均低于PBS组,差异均有统计学意义(t＝－5.609,－10.452,－8.202;P<0.05)。PFD组大鼠角膜CNV模型的CNV面积,第7 d比第3 d增大,差异有统计学意义(t＝17.83,P<0.05);第14 d比第3 d及第7 d,差异均有统计学意义(t＝27.38,7.13;P<0.05)。PBS组,第7 d与第3 d的CNV面积比较,差异有统计学意义(t＝23.09,P<0.05);第14 d比第3 d及第7 d,差异均有统计学意义(t＝27.90,4.29;P<0.05)。HE病理染色显示PBS组的角膜基质有大量炎症细胞浸润及纤维组织增生,而PFD组炎症细胞数量极少,基质排列较规则。免疫组化CD34染色结果显示PFD组的MVD为(3.17±1.17)条/mm²,PBS组的MVD为(10.83±2.48)条/mm²,PFD组的MVD低于PBS组,差异有统计学意义(t＝－6.842,P<0.05)。 结论PFD能减轻大鼠角膜急性碱烧伤模型中的角膜炎症反应,并抑制角膜新生血管形成,有望为临床防治角膜新生血管类疾病提供一种新方法。     

新鲜羊膜移植术治疗早期碱烧伤对角膜新生血管和上皮愈合的影响

探讨新鲜羊膜移植术在早期角膜碱烧伤治疗中对角膜新生血管和上皮愈合作用的影响 ,并与保存羊膜作比较。方法 :以 48只新西兰大白兔制作角膜碱烧伤模型 ,烧伤后 48小时设立新鲜羊膜移植组、保存羊膜移植组和对照组。术后每日观察角膜新生血管和上皮愈合情况。并于术后 14天、 30天以计算机图像分析系统定量测定新生血管和上皮愈合面积。结果 :新鲜羊膜移植组角膜新生血管面积小于保存羊膜移植组 ,两者均小于对照组 (P <0 0 1)。术后 14天新鲜羊膜移植组角膜上皮愈合面积较保存羊膜移植组大 ,两者均较对照组愈合快 (P <0 0 1)。结论 :在角膜碱烧伤早期治疗中 ,新鲜羊膜移植可抑制角膜新生血管和促进角膜上皮愈合 ,其效果优于保存羊膜移植。     

姜黄素对碱烧伤诱导的兔眼角膜新生血管抑制作用的实验研究

目的探讨姜黄素对碱烧伤诱导的大耳兔眼角膜新生血管(CNV)的影响及其机制。 方法采用碱烧伤法制备CNV模型。模型制作成功后,采用数字表法将健康的成年雄性日本大耳兔48只随机平均分为4组,对照组给予二甲基亚砜,实验1组给予40 μmol/L姜黄素,实验2组给予80 μmol/L姜黄素,实验3组给予160 μmol/L姜黄素。右眼分别滴眼相应药物,所有滴眼药物用量均为20 μl,4次/d,连续用药14 d。用裂隙灯显微镜观察CNV的生长情况。采用酶联免疫吸附试验检测大耳兔眼碱烧伤2 d、4 d、7 d及14 d后的房水中血管内皮生长因子(VEGF)、4E结合蛋白(4EBP1)因子的蛋白含量;采用逆转录-聚合酶链反应检测眼角膜组织中4EBP1、S6蛋白激酶(P70S6K)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的信使核糖核酸(mRNA)的相对表达量。组间比较采用两因素重复测量方差分析,当差异有统计学意义时,进一步采用SNK法两两比较。计算Spearman相关系数判断4EBP1与VEGF蛋白之间的相关性。 结果大耳兔眼角膜碱烧伤后4 d时,各实验组与对照组的平均CNV面积无统计学差异(F＝0.592,P>0.05);眼角膜碱烧伤后7 d、14 d时,则各实验组与对照组平均CNV面积差异有统计学意义(F＝27.5,28.64;P<0.05)。大耳兔眼角膜碱烧伤后2 d时,各实验组房水中的4EBP1、VEGF蛋白含量与对照组的差异无统计学意义(F＝2.46,3.62;P>0.05)。大耳兔眼角膜碱烧伤后4 d、7 d、14 d时,各实验组房水中的4EBP1、VEGF蛋白含量与对照组相比,差异具有统计学意义(F＝10.73,49.15,62.37,17.55,106.61,202.13;P<0.05),且4EBP1与VEGF的蛋白表达呈线性正相关(r＝0.969,0.803,0.67,0.972;P<0.05)。大耳兔眼角膜碱烧伤后7 d时,实验1组的角膜组织中mTOR、4EBP1及P70S6K的mRNA相对表达量为(0.73±0.26)、(0.58±0.19)和(0.52±0.29);实验2组的相对表达量分别为(0.48±0.13)、(0.39±0.21)和(0.41±0.18);实验3组的相对表达量分别为(0.36±0.09)、(0.22±0.09)和(0.18±0.07)。大耳兔眼角膜碱烧伤后14 d时,各实验组mTOR、4EBP1和P70S6K的mRNA表达量较眼角膜碱烧伤后7 d时的mRNA表达量降低;且随着姜黄素浓度的增高,mTOR、4EBP1和P70S6K在mRNA水平的相对表达量依次降低。 结论姜黄素可通过抑制mTOR信号传导通路降低VEGF蛋白的表达,从而抑制眼角膜碱烧伤后新生血管的生长。     

兔角膜碱烧伤新鲜羊膜移植后的角膜病理学及超微结构观察

目的观察兔角膜碱烧伤立即行新鲜羊膜移植后的角膜病理学和超微结构变化。方法40只新西兰白兔中随机取4只作为正常对照组,剩余36只制作双眼碱烧伤模型,右眼立即行新鲜羊膜移植术,左眼不做羊膜移植。分别在术后7、14、28d取材分别行HE染色和透射电镜观察。结果光镜、电镜结果显示:羊膜移植组与未移植组相比,上皮愈合好,基质纤维排列整齐,炎细胞浸润轻,新生血管少。结论兔角膜碱烧伤急性期行新鲜羊膜移植可以减少炎症反应、促进角膜上皮愈合、减轻角膜瘢痕形成、减少角膜新生血管形成。     

血管内皮钙黏蛋白对实验性角膜新生血管的作用及机制

目的 探讨血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）在实验性角膜新生血管发生过程中的作用及机制。方法 动物实验研究。以碱烧伤诱导构建小鼠角膜新生血管模型;RT-PCR法检测VE-cadherin在碱烧伤角膜组织中的表达;碱烧伤1周后角膜局部应用阻断性抗小鼠VE-cadherin抗体进行干预,碱烧伤3周后大体观察角膜新生血管的发生情况以及全角膜铺片CD31荧光组织化学法检测角膜组织新生血管的面积;RT-PCR检测烧伤角膜组织内caspase-3 mRNA的表达;流式细胞术检测角膜组织血管内皮细胞凋亡数目;体外实验进一步验证VE-cadherin对血管内皮细胞（HREC）血管网形成的影响。采用成组t检验方法处理数据。结果 碱烧伤3周后,VE-cadherin抗体干预组角膜新生血管数目较对照组明显减少。RT-PCR结果显示VE-cadherin抗体干预组caspase-3基因水平表达增高;进一步流式细胞术检测结果显示VE-cadherin抗体干预后,角膜组织内凋亡的血管内皮细胞明显增多。体外实验证实VE-cadherin抗体明显抑制HREC细胞系血管网的形成。结论 VE-cadherin钙黏蛋白能通过维护细胞间黏附以及抑制细胞的凋亡等作用保护实验性角膜新生血管内皮细胞的生长,从而维持新生血管的发生发展。     

ADP-核糖基化因子抑制剂在实验性碱烧伤诱导角膜新生血管中的作用及其机制

背景角膜新生血管（CNV）是导致角膜盲的主要原因之一,研究表明,ADP一核糖基化因子（ARF）对肿瘤细胞的增生有调节作用,抑制ARF能抑制血管的形成,但ARF抑制剂对CNV是否发挥作用尚不清楚。目的探讨ARF抑制剂在碱烧伤诱导的CNV形成过程中的作用及其机制。方法7～8周龄清洁级雄性BABL／c小鼠60只按照随机数字表法分为PBS对照组和ARF抑制剂干预组,每组各30只。所有小鼠采用角膜碱烧伤诱导法构建CNV模型,ARF抑制剂干预组小鼠于造模后1周腹腔内注射0．5g／LARF抑制剂溶液0．5ml,每周3次,共1周,PBS对照组小鼠以同样方式注射0．5mlPBS。各组分别取24只小鼠,于造模后0、4、7、14d采用实时定量PCR（real—timePCR）和Westernblot法检测小鼠角膜组织中ARFmRNA和蛋白的动态表达,并于造模后14d,采用Westernblot法检测各组小鼠角膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达。各组另取6只小鼠,于造模后2、4、7、14d裂隙灯显微镜下观察CNV形成情况,并于造模后14d,采用全视网膜铺片免疫荧光组织化学法检测角膜组织中CD31在CNV中的表达。体外实验中应用ARF抑制剂干预人视网膜血管内皮细胞（RECs）,CCK8法和细胞划痕法检测ARF对人RECs增生和迁移的影响。实验动物的使用和喂养遵循视觉及眼科学研究协会有关规定及苏州大学《实验动物管理及使用指南》。结果造模后PBS对照组和ARF抑制剂干预组小鼠角膜组织中ARFmRNA在各个时间点均有表达,在造模后14d达高峰,各组小鼠角膜中ARFmRNA的表达随着时间的延长而增加,差异有统计学意义（F时间=65．17,P=0．00）,不同时间点的组间比较差异无统计学意义（F＊＊=1．98,P=0．18）;造模后14d,ARF抑制剂干预组实验后不同时间点ARF蛋白水平相对表达值比较差异有统计学意义（F=10．77,P=0．00）。裂隙灯显微镜下检查发现,ARF抑制剂干预组CNV相对面积为0．45±0．05,PBS对照组为0．72±0．11,2个组间差异有统计学意义（t=-3．87,P〈0．05）。全角膜铺片免疫荧光组织化学法检测表明,ARF抑制剂干预组小鼠角膜组织CD31表达面积明显小于PBS对照组。造模后14d,Westernblot法检测显示,ARF抑制剂干预组VEGF蛋白表达水平为1．20＋0．21,明显低于PBS对照组的2．47±0．33,差异有统计学意义（t=-5．62,P〈0．05）。CCK8法检测结果显示,随着ARF抑制剂质量浓度的增加,ARF抑制剂对人RECs的抑制率增加,差异有统计学意义（F=8．47,P=0．02）。细胞划痕实验后24h,100μg／L和1000μg／LARF抑制剂干预组人RECs迁移距离分别为（5．46±1．32）μm和（5．04±1．68）μm,与PBS对照组的（8．49±1．18）μm相比明显减小,差异均有统计学意义（t=-2．94、-2．91,P〈0．05）。结论ARF抑制剂能抑制碱烧伤诱导的CNV发生,可能与其下调VEGF的表达以及抑制血管内皮细胞的增生和迁移有关。     

角膜新生血管形成机制

临床上许多角膜病变均能引起角膜新生血管（CNV）,CNV破坏角膜正常微环境,不仅严重影响视力,而且是角膜移植失败的主要原因。近年来,随着对CNV的深入研究,大量实验研究表明许多因素参与CNV的形成过程,本文主要就CNV的形成机制作一综述。     

甘草甜素对小鼠角膜急性碱烧伤后新生血管的抑制作用

目的：研究甘草甜素(Gly)对小鼠角膜急性碱烧伤后角膜新生血管(CNV)的抑制作用。

方法：采用碱烧伤法制备小鼠碱烧伤模型60只,随机平均分为Gly组和PBS组,分别隔天结膜下注射2g/L Gly溶液或PBS溶液,共14d。裂隙灯显微镜下观察角膜炎症反应和CNV。实验结束后取角膜行HE染色法和免疫组织化学法CD34及髓过氧化物酶(MPO)染色并计算角膜微血管密度(MVD)及中性粒细胞数。

结果：造模后第7、14d Gly组CNV面积分别是4.16±0.00、7.33±0.13mm²,显著低于PBS组(7.58±0.20、9.24±0.08mm²,均P<0.05)。HE病理染色显示正常小鼠角膜结构完整,未见新生血管形成及炎症细胞浸润; Gly组角膜新生血管数量及炎症细胞浸润较少,胶原排列较规则,而PBS组角膜基质中可见大量炎症细胞浸润及新生血管。免疫组织化学CD34染色结果显示Gly组MVD为11.13±1.46条/mm²,显著低于PBS组(34.08±2.46条/mm²,P<0.001); 免疫组织化学MPO染色结果显示Gly组中性粒细胞计数为每200倍视野17.50±1.98个,明显少于PBS组(59.56±4.79个,P<0.001)。

结论：Gly能减轻小鼠角膜急性碱烧伤模型中的角膜炎症反应,并抑制角膜新生血管形成,这为临床上有效防治角膜新生血管类疾病提供了一种新的思路。