灵芝孢子油通过下调miR-21促进人肺腺癌SPC-Al细胞凋亡

目的:通过检测灵芝孢子油对人肺腺癌细胞SPC-Al增殖、凋亡与miR-21及其靶基因表达的影响,探讨灵芝孢子油的抗肿瘤机制.方法:灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞SPC-Al 24 h以及48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-21及其靶基因PTEN和PDCD4的表达.结果:灵芝孢子油剂量、时间依耐性地抑制人肺腺癌SPC-Al细胞的增殖;当灵芝孢子油体积分数达到0.2%时,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油显著下调SPC-Al细胞中miR-21的表达并相应上调PTEN以及PDCD4基因的表达.结论:灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞SPC-Al细胞增殖,引起细胞形态学改变.通过下调miR-21的表达,上调抑癌基因FFEN以及PDCD4的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用.     

灵芝孢子油通过下调miR-21促进人肺腺癌SPC-A1细胞凋亡

目的:通过检测灵芝孢子油对人肺腺癌细胞SPC-A1增殖、凋亡与miR-21及其靶基因表达的影响,探讨灵芝孢子油的抗肿瘤机制。方法:灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞SPC-A1 24 h以及48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-21及其靶基因PTEN和PDCD4的表达。结果:灵芝孢子油剂量、时间依耐性地抑制人肺腺癌SPC-A1细胞的增殖;当灵芝孢子油体积分数达到0.2%时,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油显著下调SPC-A1细胞中miR-21的表达并相应上调PTEN以及PDCD4基因的表达。结论:灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞SPC-A1细胞增殖,引起细胞形态学改变。通过下调miR-21的表达,上调抑癌基因PTEN以及PDCD4的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用。     

基于抑郁模型大鼠miR-665表达及靶基因功能分析探讨开心解郁方抗抑郁疗效机制

摘 要：目的：检测中药开心解郁方干预抑郁症模型大鼠过程中海马miR-665表达变化并对miR-665的靶基因进行生物信息分析,探讨miR-665在抑郁症的发病及开心解郁方抗抑郁机制中的作用。方法：建立慢性应激抑郁症大鼠模型并用开心解郁方干预42天,取海马组织提取总RNA,采用RT-qPCR检测各组大鼠海马miR-665相对表达量,采用TargetScan和microRNAorg数据库对miR-665进行靶基因预测,采用DAVID数据库对预测得到的靶基因进行GO功能富集分类及KEGG信号通路分析。结果：与正常组比较,模型组大鼠海马miR-665表达水平显著增高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组及西药组大鼠海马miR-665表达水平显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-665靶基因的生物学功能主要富集于有机物质反应等;信号通路主要富集于N-糖链的合成等。结论：miR-665可能参与了抑郁症病理机制过程调控,通过改善其表达异常可能为开心解郁方的抗抑郁机制之一,通过对其靶基因的功能预测分析对于后期继续研究开心解郁方干预miR-665的具体作用机制提供了方向和理论基础。     

益气除痰方对肺癌系列基质金属蛋白酶表达的影响

目的 研究益气除痰方对人肺腺癌A549细胞及LEWIS肺癌小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶MMP1、MMP2、MMP9、MMP14等促肿瘤转移因子表达的影响.方法:培养A549细胞,20%益气除痰方含药血清干预,划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变,RT-PCR检测其对A549肺癌细胞MMPl、MMP2、MMP9、MMP14 mRNA基因表达的影响.建立C57BL/6)小鼠Lewis肺癌模型,治疗组每日予益气除痰方3.0 g·kg-1,处理,灌胃21d后,处死,检测肿瘤体积、重量、肺转移灶,并用免疫组化法比较各组肿瘤组织MMP2、MMP14的表达.结果:20%益气除痰方含药血清可抑制A549细胞的侵袭和转移能力,并能降低MMP2、MMP14转录水平基因的表达,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),MMP1、MMP9 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);益气除痰方3.0 g·kg-1组LEWIS肺癌小鼠肿瘤体积、重量、肺转移灶数明显降低,肿瘤组织MMP2,MMP14的表达降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:益气除痰方能抑制肺腺癌A549细胞的侵袭和转移,降低MMP2,MMP14 mRNA转录水平的表达;能抑制LEWIS肺癌小鼠肿瘤肺转移,降低其肿瘤组织MMP2,MMP14的表达,抗转移可能是益气除痰方治疗肺癌的作用机制之一.     

miR-664-3p在电针改善大脑中动脉栓塞大鼠学习记忆能力中的作用机制

目的:探讨miR-664-3p在电针改善局灶性大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠学习记忆能力中的作用途径,为miR-664-3p及其靶基因调控学习记忆能力的深入研究奠定基础。方法:SD大鼠随机分为假手术组、MCAO组和电针组,每组9只。采用线栓法制备左侧大脑中动脉栓塞模型。电针组电针"百会""神庭"穴,每天1次,每次20min,持续7d。各组在造模后第3～7天采用水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,水迷宫检测结束后,取海马组织,采用高通量下一代测序,同时测量mRNA和miRNA表达谱,mRNA和miRNA表达联合分析确定miR-664-3p相应的mRNA靶基因,对其靶基因进行GO分析和KEGG分析。结果:MCAO组大鼠平均逃避潜伏期较假手术组和电针组延长(P0.01),平均穿越平台次数少于假手术组和电针组(P0.05)。与假手术组、电针组比较,MCAO组大鼠海马组织miR-664-3p表达量明显上调,差异倍数大于2。miR-664-3p靶基因的GO分析发现,分子功能部分显著富集于细胞转运活性、离子结合、跨膜转运蛋白活性功能上。在生物过程部分,显著富集于运输、细胞信号转导、定位等功能类别。KEGG分析结果显示miR-664-3p靶基因主要富集于Hippo信号通路、MAPK信号转导通路、cAMP信号通路,等。结论:在电针"百会""神庭"穴改善MCAO大鼠学习记忆能力过程中,miR-664-3p与细胞的质膜跨膜运输、细胞与环境的相互作用、细胞通讯等功能密切相关,可能是重要分子生物学标签,在电针对基因表达调控研究中具有潜在的价值。     

甘草素对非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的影响

【目的】 探讨甘草素对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞放疗敏感性的作用及机制。【方法】 体外培养NSCLC细胞株A549。使用不同浓度甘草素处理,筛选20%抑制浓度（IC20）的甘草素浓度。经甘草素处理后,克隆形成实验观察细胞放疗敏感性,选择半数细胞存活分数（SF）对应的放射线剂量进行后续实验。A549细胞随机分为对照组、甘草素组、miR-21 mimics-NC组、miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组。miR-21 mimics-NC组转染miR-21模拟物阴性对照,miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组转染miR-21模拟物,24 h后观察转染效果,甘草素组、甘草素+miR-21 mimics组加入0.2 mmol/L 甘草素作用24 h、4 Gy 6 MV-X射线照射3 h进行后续实验。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-21、蛋白络氨酸磷酸酶MEG2 mRNA相对表达量;双荧光素酶报告基因实验验证 miR-21 与 MEG2 的靶向关系;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测 MEG2 蛋白相对表达量。【结果】 选取甘草素浓度为0.2 mmol/L,甘草素处理后,A549细胞SF降低（P＜0.05）,放射增敏比＞1。与对照组比较,甘草素组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量升高（P＜0.05）,miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与甘草素组比较,miR-21 mimics 组、甘草素+miR-21 mimics 组细胞相对活力、miR-21 相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA 和蛋白相对表达量降低（P＜ 0.05）;与miR-21 mimics-NC组比较,miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与miR-21 mimics组比较,甘草素+miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-21直接靶向MEG2。【结论】 甘草素可以抑制NSCLC细胞增殖,促进细胞凋亡及增强放疗敏感性,其机制可能与调控miR-21对MEG2转录和翻译的抑制有关。     

益气除痰散结法对Lewis 肺癌小鼠的作用研究

【摘要】目的：观察益气除痰散结法治疗中晚期非小细胞肺癌的临床疗效,并讨论其部分作用机理。方法：将复制转移性 Lewis 小鼠肺癌模型,随机设为中药高、中、低剂量组、化疗组和模型组（各10 只）,观察其肿瘤增长体积、瘤体重量、免疫器官指数、肺转移率,并采用免疫组化方法结合计算机图象分析技术,观察小鼠肿瘤组织中的 VEGF 表达的差异。结果：从HE染色的病理切片中发现,在应用中药治疗后,动物肿瘤组织的病理学表现与对照组存在明显的异差,与模型组相比,益气除痰散结法中、高剂量组能明显减少发生肺转移的小鼠数目以及肺部转移灶数量 (P＜0.05),提示益气除痰散结法具有明显抗转移效果,与环磷酰胺组无统计学差异（P＞0.05)。用免疫组化法检测益气除痰散结法各剂量组移植瘤的VEGF表达情况,显微图象分析表明,肿瘤微血管内皮细胞被染成棕黄色,VEGF主要表达肿瘤细胞核和胞浆内,肿瘤细胞亦有少量染色,阳性染色的肿瘤细胞大多位于液化坏死区,浸润的淋巴细胞有表达,各组血管内皮细胞呈弱阳性染色。但益气除痰散结法各剂量组VEGF值与生理盐水组比较,无统计学意义（P＜0.05）。结论：益气除痰散结法能明显抑制荷瘤小鼠局部肿瘤的生长及自发性肺转移。 其抗肺癌作用的机理可能与促进肿瘤细胞凋亡、提高细胞分化程度,增强免疫力有关,与 VEGF 靶点的意义不大。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

miR-21和miR-93联合检测在三阴性乳腺癌诊断中的价值

目的探讨miR-21和miR-93联合检测在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达情况及与临床病理特征的关系。方法选取行乳腺癌根治的TNBC患者33例,选取同期正常乳腺组织15例。采用RT-PCR方法检测miR-21和miR-93在TNBC组织和正常乳腺组织中的相对表达量。结果 miR-21和miR-93在TNBC组织中的相对表达量分别为0.874±0.124和0.764±0.163,而在正常乳腺组织的表达量分别为0.235±0.034和0.183±0.028,TNBC组织中的miR-21和miR-93表达量明显高于正常乳腺组织（P均〈0.01）。miR-21和miR-93基因的高表达与年龄、月经状态无明显相关性,而与肿瘤直径、临床分期和淋巴结转移具有明显的相关性（P〈0.05或0.01）。组织中miR-21和miR-93的高表达呈正相关（r=0.732,P〈0.01）。结论 miR-21和miR-93参与了TNBC的发生、发展和转移,是重要分子标记物。     

益气除痰方对肺癌移植瘤小鼠内质网应激蛋白GRP78/BIP、caspase-12的影响

目的探讨益气除痰方治疗肺癌的可能作用机制。方法 15只BALB/c小鼠采用人肺腺癌细胞A549建立人肺癌小鼠皮下移植瘤模型,随机分为模型组和益气除痰方低、高剂量组,每组5只。益气除痰方低、高剂量组分别予益气除痰方生药量27.3g/(kg·d)、54.6g/(kg·d),造模后第8天开始灌胃,每天1次,连续2周;模型组予同体积生理盐水。采用常规HE染色法、透射电镜观察各组小鼠移植瘤组织形态学改变;应用免疫组织化学法、免疫蛋白印迹法检测GRP78/BIP、caspase-12蛋白的表达。HE染色观察各组小鼠主要脏器病理学改变。结果益气除痰方治疗后移植瘤细胞呈现凋亡形态学改变,以高剂量较典型。与模型组比较,益气除痰方低、高剂量组GRP78/BIP表达下降,caspase-12、cleaved caspase-12表达升高(P0.05或P0.01),且益气除痰方高剂量组优于益气除痰方低剂量组(P0.01)。各组小鼠主要脏器无明显病理学改变。结论益气除痰方诱导肺癌细胞发生凋亡具有剂量依赖性,其机制可能与内质网应激凋亡特异性蛋白caspase-12活化,启动内质网应激凋亡通路有关。     

益气除痰方下调vimentin表达与逆转 EMT相关性研究

目的：观察益气除痰方肺癌肿瘤生长、肺转移的影响,并通过差异蛋白组学技术筛选出差异表达蛋白vimentin,并结合相关技术分析其可能的意义。方法：C57BL小鼠40只,接种Lewis肺癌细胞,造模第2天,随机分为对照组（生理盐水）和低、中、高剂量观察组予益气除痰方1.0g·kg^-1·d^-1,3.0g·kg^-1·d^-1,9.0g·kg^-1·d^-1,每组10只,灌胃21d后,检测肿瘤体积、重量、肺转移灶,分别提取最佳剂量治疗组和模型组肿瘤组织的总蛋白,应用双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）系统获得蛋白点表达差异信息,运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-TOF）鉴定出差异蛋白质。并以荧光定量PCR和Western blot法对差异蛋白进行表达差异鉴定。培养A549细胞,20%益气除痰方含药血清干预,划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变,RT-PCR检测其对A549肺癌细胞MMP-1、MMP2、MMP9、MMP14mRNA基因表达的影响。结果：益气除痰方3.0g·kg-1·d^-1治疗组肿瘤体积、瘤重、肺转移灶数均明显小于LEWIS模型组（P〈0.01）,肿瘤抑制率为57.21%。蛋白质组学研究鉴定受益气除痰方调控影响的蛋白37个,其中vimentin下调尤其明显。20%益气除痰方含药血清可抑制A549细胞的侵袭和转移能力,并能降低MMP2、MMP14mRNA基因的表达,与空白组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论：益气除痰方明显下调vimentin表达,抑制A549细胞的运动能力,减少基质金属蛋白酶MMP2、MMP14的分泌,这可能与益气除痰方逆转肺癌细胞上皮-间质转化有关,值得进一步研究。     

血浆miR-127-3p及miR-129-5p分子与狼疮性肾炎微观血瘀证的相关性探讨

【目的】 探讨狼疮性肾炎（LN）患者miR-127-3p、miR-129-5p分子的表达情况及与微观血瘀证和相关临床指标的相关性。【方法】 收集符合微观血瘀证及微观非血瘀证的LN患者各30例,同时选取15例健康志愿者作为健康对照组。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测所有受试者血浆miR-127-3p、miR-129-5p分子表达量,比较2组LN患者肾功能[血尿素氮（BUN）、血尿酸（UA）、血肌酐（Cr）、血清胱抑素（Cys-C）]和肾病理指数[活动性指数（AI）、慢性化指数（CI）]的差异,分析miR-127-3p、miR-129-5p分子与上述临床指标的相关性。【结果】（1）微观血瘀证组患者miR-127-3p、miR-129-5p及Cr、BUN、UA、Cys-C、AI、CI水平均明显高于非血瘀证组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。微观血瘀证组miR-127-3p的表达量明显高于健康对照组（P＜0.05）,而 2 组 LN 患者 miR-129-5p 表达与健康对照组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。（2）LN 患者 miR-127-3p 表达量与血 Cr、BUN、UA、Cys-C、AI 水平具有正相关性（P＜0.05）,miR-129-5p 表达量与血Cr、BUN 水平具有正相关性（P＜0.05）。【结论】 LN 合并微观血瘀证患者肾功能更差,病理活动、慢性化程度均更高;MiR-127-3p、miR-129-5p分子与微观血瘀证具有一定相关性,有可能作为潜在的生物标志物以指导辨证。     

解毒复正汤通过干扰miR-223-3p并靶向调控TGFBR3影响肺癌侵袭转移的实验研究

目的 探讨解毒复正汤（JieduFuzhengdecoction,JDFZ）通过影响微小核糖核酸-223-3p(Mircro ribonucleic acid-223-3p,miR-223-3p)靶向调控转化生长因子β受体3(Transforming growth factor β Receptor3,TGFBR3)的表达及其对肺癌细胞迁移的影响。方法 利用RT-qPCR技术检测肺腺癌患者癌组织及癌旁组织、肺腺癌患者及健康人外周血清中miR-223-3p表达水平的差异;并检测不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞（95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460）以及人肺上皮细胞BEAS-2B中miR-223-3p的本底表达量,从组织、血浆及细胞3个维度验证miR-223-3p的差异性。利用生物信息学网站重叠分析,初步预测到miR-223-3p与TGFBR33’UTR具有潜在的结合位点序列。接着运用双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与TGFBR3的靶向关系。体外培养肺癌A549细胞,采用脂质体法分别将miR-223-3p-过表达序列（miR-223-3p-mimics）及携...     

石榴皮多酚通过调控miR-4316表达抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭实验研究

目的：探讨石榴皮多酚在肺癌中的抗肿瘤作用及可能机制。方法：RT-qPCR 检测肺癌组织中 miR-4316 表达水平。将肺癌细胞A549 分为石榴皮多酚-低组、石榴皮多酚-中组、石榴皮多酚-高组、对照 组、miR-NC 组、miR-4316 组、石榴皮多酚+anti-miR-NC 组、石榴皮多酚+anti-miR-4316 组。细胞迁移、增 殖及侵袭分别采用划痕愈合实验、平板克隆实验和CCK-8 法、Transwell 实验检测。结果：肺癌组织中miR- 4316 表达水平显著降低（P＜0.05）。石榴皮多酚（低、中、高） 组A549 细胞抑制率、miR-4316 水平较对照 组高,克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数较对照组低（P＜0.05）。与miR-NC 组比较,miR-4316 组较miRNC 组A549 细胞抑制率更高（P＜0.05）,克隆形成数、划痕愈合率及侵袭数miR-4316 组较miR-NC 组 低（P＜0.05）。石榴皮多酚+anti-miR-4316 组较石榴皮多酚+anti-miR-NC 组A549 细胞抑制率更低（P＜ 0.05）,克隆形成数、划痕愈合率及侵袭数石榴皮多酚+anti-miR-4316 组较石榴皮多酚+anti-miR-NC 组 高（P＜0.05）。结论：石榴皮多酚通过上调miR-4316 表达来抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-150-5p在非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达及靶基因的生物信息学分析

目的通过对miR-150-5p进行靶基因预测及生物信息学分析,为miR-150-5p靶基因相关实验验证提供数据支持,并为深入研究miR-150-5p在非酒精性脂肪性肝纤维化中的调控机制及生物学功能提供理论指导。方法将健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为2组,模型组10只采用胆碱-蛋氨酸缺乏饲料喂养制备非酒精性脂肪性肝纤维化模型,正常组10只采用胆碱-蛋氨酸充足的饲料喂养,均饲养8周。采用microRNA(miRNA)芯片检测2组小鼠肝组织中miR-150-5p表达水平,选择TargetScan、PicTar及miRanda靶基因预测软件预测miR-150-5p靶基因的交集作为分析的基因集合,分别进行功能富集分析,应用DAVID数据库进行靶基因信号转导通路富集分析。结果模型组小鼠肝组织中miR-150-5p表达水平显著高于正常组(P0.05),miR-150-5p靶基因集合分别富集在ATP结合、嘌呤核苷酸结合以及蛋白酶的活性等分子功能(P均0.05),主要参与磷脂代谢、蛋白质氨基酸的磷酸化和去磷酸化、血管再生与重建及促凋亡等生物学过程(P均0.05),靶基因信号转导通路显著富集于胰岛素信号通路、MAPK信号通路、TGF-β信号通路等信号转导通路中。结论 miR-150-5p参与了非酒精性脂肪性肝纤维化发生发展过程,为非酒精性脂肪性肝纤维化新型诊断标志物与治疗靶点的研究提供了理论依据。     

MiR-27与miR-29在糖尿病肾病发病中的作用及相关中药研究应用＊

糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）是糖尿病（Diabetes mellitus，DM）最常见的微血管并发症之一，也是造成患者出现终末期肾病（End-stage renal disease，ESRD）的重要原因。研究发现，微小核糖核酸（microRNA，miRNA）与DN的发生发展关系密切。MiR-571、miR-152、miR-1303、miR-192、miR-200、miR-21、miR-146、miR-23、miR-145、miR-126、miR-377等多种miRNAs均参与了DN的发生发展过程。基于文献和课题组前期高通量测序筛选，对其中的差异miRNAs进行聚类分析与靶基因预测，结果发现miR-27和miR-29两种miRNA表达有显著差异，现就这两种miRNA参与调控糖尿病肾病关系、下游信号通路及相关中药研究应用予以综述。     

益气除痰方调控JNK/SAPK信号通路干预A549细胞的试验研究

目的:研究益气除痰方含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及对JNK、p-JNK等表达的影响。方法:采用MTT法检测益气除痰方含药血清对A549细胞增殖的影响,流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染色法)测定细胞凋亡率,Western blotting检测JNK和p-JNK的蛋白表达。结果:MTT结果显示益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的时间-浓度依赖性;流式细胞术结果显示益气除痰方含药血清可诱导A549细胞凋亡;Western blotting结果显示益气除痰方含药血清干预A549细胞后可减少p-JNK的蛋白表达,但对JNK蛋白表达无明显影响。结论:益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路有关。     

益气除痰方对脾虚Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、生存期及PRDX-1、PRDX-6表达的影响

目的 观察益气除痰方对脾虚C57BL/6J小鼠Lewis肺癌肿瘤生长、肺转移、生存期及肿瘤组织中过氧化物氧化还原酶PRDX-1、PRDX-6表达的影响。     

miR-21在针刺治疗脑性瘫痪中的运用研究

介绍miR-21在针刺治疗脑性瘫痪中的运用研究价值。miR-21是miRNA家族中的一种小分子调控RNA,研究表明脑性瘫痪与miRNA之间具有密切的联系,miRNA及其调节的信号通路可以通过与靶基因结合,调控神经元细胞凋亡进而影响脑性瘫痪的病情及进展。但具体产生作用的基因还尚不明确,本研究通过对miR-21的深入挖掘,发现在脑性瘫痪细胞凋亡这一过程中,miR-21展示出了独特的优势与研究价值,因此作者围绕着脑性瘫痪、miR-21以及针刺疗法展开讨论,梳理了miR-21在脑性瘫痪中的作用机制以及针刺在脑性瘫痪中对于神经元细胞凋亡的调控作用,提出了针刺可能通过干预miR-21抑制神经元细胞凋亡从而治疗脑性瘫痪的可能性。     

抑肺饮抑制肺癌转移的机制研究

【目的】 观察抑肺饮对肺癌细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）-核转录因子kappaB（NF-κB）信号通路以及细胞上皮间质转化（EMT）的影响,探讨抑肺饮对肺癌细胞生长和转移的抑制作用及机制。【方法】 制备抑肺饮含药血清,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）实验、侵袭实验和迁移实验观察抑肺饮对肺癌细胞A549增殖、侵袭和迁移能力的影响。以TNF-α诱导A549细胞建立细胞EMT模型,采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法观察抑肺饮对细胞EMT的影响,采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法观察抑肺饮对A549细胞中EMT标志物蛋白表达水平及NF-κB p65磷酸化水平的影响,采用荧光素酶报告基因实验观察抑肺饮对NF-κB启动子活性的影响。建立Lewis肺癌移植瘤小鼠模型,称瘤体质量,观察肺脏转移灶情况,采用免疫组织化学法检测瘤组织磷酸化 NF-κB p65 的表达水平,荧光定量 PCR 法检测瘤组织 B 细胞淋巴瘤-xL（Bcl-xL）、细胞周期蛋白 D1（CyclinD1）的mRNA表达水平。【结果】（1）抑肺饮含药血清能够抑制肺癌A549细胞的增殖、侵袭、迁移能力;（2）抑肺饮含药血清能够上调上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平,下调间质细胞标志物波形蛋白（Vimentin）的表达水平,抑制NF-κB p65磷酸化水平和NF-κB启动子活性;（3）体内研究结果显示,抑肺饮高剂量组的瘤质量和肺转移率,瘤组织中NF-κB p65磷酸化表达水平,靶基因Bcl-xL、CyclinD1的mRNA表达水平显著低于模型组,且抑肺饮联合顺铂使用时抑制效果最佳。【结论】 抑肺饮可能通过干预TNF-α-NF-κB信号通路,调节细胞EMT,从而发挥抑制肺癌细胞增殖和转移的作用。