SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元的保护作用

目的探讨SP600125-JNK特异性抑制剂对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的保护性作用及其作用机制。方法雄性SD大鼠54只,体重230～250g,随机分成假手术组（SH组）,缺血再灌注组（IR组）和JNK抑制剂SP600125组（SP组）,每组根据再灌注时间分为30min、24h和72h3个亚组,每亚组6只动物。采用4-VO法建立SD大鼠脑缺血模型,三组于缺血前30min侧脑室注射DMSO,DMSO及JNK抑制剂SP600125（溶媒采用DMSO）,容积均为10μl;脑缺血再灌注后30min、24h、72h免疫组织化学方法测定各时间点海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达阳性细胞数量,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果缺血再灌注使海马CA1区Bcl-2和Bax阳性锥体细胞数目表达增加,再灌注24h阳性锥体细胞数目表达至高峰（P〈0.01）,再灌注24～72h可见阳性锥体细胞数目表达减少（P〈0.05）。其中SP组Bcl-2阳性锥体细胞数目显著多于IR组（P〈0.05）,而Bax阳性锥体细胞数目显著小于IR组（P〈0.05）。脑缺血再灌注后海马CA1区神经元存活数目SP组高于IR组（P〈0.01）,凋亡细胞数目低于IR组（P〈0.01）。结论 SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤具有保护作用。     

依达拉奉治疗短暂脑缺血再灌注损伤的MR评价和病理对照研究

目的 探讨依达拉奉对兔短暂脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带(IP)区线粒体细胞色素C(CytC)向胞浆释放和Bcl-2蛋白表达的影响,并进行MR评价. 材料与方法健康新西兰白兔15只,随机分为假手术组、对照组和依达拉奉组,每组5只.分别在脑缺血再灌注后2 h和24 h行扩散加权成像(DWI)和灌注加权成像(PWI)以确定IP是否存在,于再灌注后24 h免疫组织化学染色测定3组IP区神经元CytC和Bcl-2蛋白的表达. 结果 假手术组可见少量CytC蛋白释放和Bcl-2蛋白表达;对照组CytC蛋白的表达量显著多于依达拉奉组(P＜0.01),依达拉奉组Bcl-2蛋白的表达量高于对照组(P＜0.05). 结论 依达拉奉能够抑制CytC的释放和上调Bcl-2蛋白表达,对病灶周边的IP区有极好的神经保护作用;DWI和PWI结合IP图能灵敏地确定IP的存在,有利于对诊断、治疗方案的调整及疗效评估.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经元自噬的研究

目的 检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后皮质神经元的损伤及自噬情况,并初步探讨自噬在脑缺血损伤过程中的作用.方法 用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,实验动物随机分为:假手术组(Sham组)和大脑中动脉栓塞再灌注组(MCAO组).HE染色检测大鼠皮质神经细胞损伤.免疫荧光双标记法检测皮质神经元及星形胶质细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达水平.结果 与Sham组比较,大鼠脑缺血再灌注后,皮质神经细胞损伤严重;LC3/NeuN和Beclin-1/NeuN双标阳性细胞数显著增加(P＜0.05),二者分别占LC3和Beclin-1单标阳性细胞数的比例均接近100％,未发现LC3/GFAP和Beclin-1/GFAP双标阳性细胞,说明LC3和Beclin-1主要表达于神经元.结论 脑缺血再灌注可能主要通过增加LC3、Beclin-1蛋白表达水平激活皮质神经元内的自噬.     

EFFECT OF HYPOTHERMIA ON AMINO ACID NEUROTRANSMITTERS IN HIPPOCAMPUS CA_1 REGION OF ISCHEMIC SIDE IN GERBILS

目的　观察低温对沙土鼠单侧脑缺血时氨基酸递质释放的影响。方法　予１８ 只雄性蒙古沙土鼠单侧颈内动脉钳夹３０ 分钟,随机分为常温（３７ ℃）和低温（３２ ℃）组,分别观察两组缺血侧海马部谷氨酸、甘氨酸和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）浓度变化。采用体内微透析和高效液相色谱法监测。结果　常温组脑缺血后谷氨酸和甘氨酸浓度明显升高,而低温组无明显上升;再灌注期常温组ＧＡＢＡ 浓度迅速下降,而低温组ＧＡＢＡ 长时维持在较高浓度。在缺血和再灌注期,低温组兴奋毒性指数显示低于常温组（Ｐ＜ ０．０１）。结论　低温的神经保护特性可能是由于细胞外兴奋毒性指数的降低所致。     

缺血后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠SOD、MDA的影响

目的：观察缺血后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠SOD、MDA的影响。方法：线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,将成年雄性Wistar大鼠144只,随机分成三组：假手术组、对照组（脑缺血再灌注组）、缺血后处理组？假手术组只进行假手术;对照组（脑缺血再灌注组）给予90min大脑中动脉缺血（MCAO）;缺血后处理组在大脑中动脉缺血90rain后,给予灌注30s缺血30s,反复3次。各组分别再灌注1211、24h、48h、72h后测定脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平的改变：结果：局灶性脑缺血后再灌注前给予后处理,缺血后处理组与缺血再灌注组相比,SOD的表达明显增加,而MDA的表达明显减少。结论：脑缺血后处理增加脑缺血再灌注后SOD的表达、减少MDA的表达,进而提高脑组织的抗氧化能力。     

异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的 观察异丙酚预先给药对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响,在分子水平上探讨异丙酚对迟发性脑神经元损伤保护作用机制.方法 采用Pulsinelli-Brierley四血管阻断法制备全脑缺血模型.应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测海马CA1区iNOS的表达.结果 同缺血再灌注对照组相比,异丙酚预处理组大鼠海马CA1区iNOS表达明显降低,存活的神经元数目明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.结论 异丙酚可能通过抑制iNOS表达而对脑缺血再灌注迟发性神经元损伤有一定的保护作用.     

局部亚低温对大鼠脑缺血组织钙调神经磷酸酶活性的影响

为探讨局部亚低温的脑保护作用，制备大鼠大脑中动脉脑缺血模型。分为常温组、FK－506组、亚低温组和正常对照组，测定缺血后不同时间脑组织中钙调神经磷酸酶（CaN）的活性。结果发现，常温组、FK－506组于缺血后6h CaN活性开始下降，而亚低温组CaN活性无明显变化，差异有显著意义。说明局部亚低温治疗可明显抑制缺血脑组织中CaN活性的变化，具有明确的脑保护作用。     

复方曲肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究复方曲肽对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常对照（normal control,NC）组、大脑中动脉闭塞再灌注（middle cerebral artery occlusion reperfusion,MCAO/R）组及MCAO/R+复方曲肽[MCAO/R+(troxerutin and cerebroprotein,TC)]组3组（每组10只）。缺血1 h再灌注23 h后,各组取6只动物接受神经功能评分后进行MRI检查,随后处死行2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色检测脑梗死体积;各组另4只动物处死,免疫蛋白印迹检测缺血半暗带中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,Caspase 1)、Caspase 3及Caspase 8的表达。结果:MCAO/R组术后动物均出现了脑梗死病灶及神经功能的损伤,复方曲肽治疗可减小脑梗死体积并改善神经功能。MCAO/R组缺血半暗带中Caspase 1、Caspase 3、Caspase 8表达显著高于NC组（P<0.05）,MCAO/R+TC组Caspase 1、Caspase 3、Caspase 8表达低于MCAO/R组（P<0.05）。结论:复方曲肽对缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制与复方曲肽抑制细胞凋亡相关基因表达从而达到抗凋亡作用有关。     

异丙酚预处理对全脑缺血再灌注大鼠脑组织S100β和神经元特异性烯醇化酶的影响

目的探讨异丙酚预处理对全脑缺血再灌注大鼠脑组织S100β及神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量的影响，评价异丙酚对脑组织的保护作用。方法30只雄性SD大鼠，随机分为假手术组（A组）、单纯脑缺血再灌注组（B组）和缺血前2h异丙酚预处理组（C组），每组10只，C组动物在缺血前腹腔注射异丙酚100mg／kg，采用线栓法制作全脑缺血再灌注模型，于脑缺血再灌注后24h评估并记录动物的神经行为学评分，测定大鼠脑组织S100β和NSE含量。结果异丙酚预处理组神经行为学评分较单纯脑缺血再灌注组高（P〈0．05），假手术组评分也明显高于单纯脑缺血再灌注组（P〈0．05），异丙酚预处理组脑组织中S100β和NSE含量明显低于单纯脑缺血再灌注组（P〈0．05）。结论异丙酚可以降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织S100β和NSE的含量，减轻神经损害，缺血前2h异丙酚预处理可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为学评分，有明显的脑保护作用。     

肾缺血再灌注损伤对大鼠肾脏CD44表达的影响

目的观察大鼠肾缺血再灌注损伤（RIRI）对肾脏CD44表达的影响。方法健康Wistar大鼠48只,体重300～350g,随机分为4组（n=12）：假手术组（sham组）只分离肾动脉不夹闭;肾缺血60min再灌注1h组（I/R1h组）,双肾缺血60min再灌注1h;肾缺血60min再灌注4h组（I/R4h组）,双肾缺血60min再灌注4h;肾缺血60min再灌注24h组（I/R24h组）,双肾缺血60min再灌注24h。实验结束处死大鼠,抽血检测血清CD44含量,光镜观察肾脏组织形态学改变,免疫组化检测肾脏CD44分子的表达。结果光镜观察sham组肾组织肾小球较多,肾小管结构完整。I/R各组肾小球毛细血管扩张、淤血,部分肾小球纤维化,体积缩小,大量肾小管细胞水肿、变性,宫腔缩小,部分肾小管腔闭合。其中以I/R4h组形态学改变最明显。I/R各组血清CD44含量分别为（0.88±0.03）ng/ml、（10.22±3.01）ng/ml、（40.12±6.59）ng/ml、（8.12±1.59）ng/ml,肾组织表达分别为0.41±0.024、14.35±5.262、36.357±8.774、10.317±3.726,各组表达均较sham组升高,但是I/R4h组高于其他组（P〈0.05）。结论大鼠肾脏缺血再灌注后CD44表达增加,再灌注4h达到峰值,24h开始回落。     

CT灌注成像对大鼠脑梗死半暗带的时间依赖性

目的：应用CT灌注成像对急性脑梗死缺血半暗带阈值进行判定,并着重探讨其时间依赖性。方法：取110只Wister大鼠,随机分为3组：对照组（10只）、缺血组（50只,分为5个亚组）、缺血再灌注组（50只,分为5个亚组）。用栓线法制作大鼠脑缺血动物模型,后2组于手术后5个时间点（2、4、6、8和10 h）分别行CT灌注成像检查,再灌注组经再灌注24 h后还需再次行CT灌注成像检查。检查结束后对图像进行判定,确定半暗带和最终梗死区的rCBF值,并取大鼠的脑组织进行病理观察。结果：缺血2 h和4 h的中心区及边缘区,缺血6、8和10 h的边缘区为半暗带,在缺血4 h之前,即使此区域的rCBF低至0.143,仍可逆;缺血6 h之后rCBF〉0.223以及10 h之后rCBF〉0.271的区域才有挽救的意义。病理检查显示在缺血6 h后,光镜和电镜发现有坏死神经细胞。结论：CT灌注成像能够判断半暗带及其阈值,预测其转归。在判断阈值应考虑到阈值与缺血时间的关系。     

Effect of brain,body, and magnet bore temperatures on energy metabolism during global cerebral ischemia and reperfusion monitored by magnetic resonance spectroscopy in rats

To record brain temperature for comparison with rectal and temporalis muscle temperatures in preliminary studies before MR spectroscopy experiments, a thermistor was inserted into the basal ganglia in eight anesthetized, ventilated, and physiologically monitored rats. The rats were placed in an MR spectrometer and subjected to 60 min of global cerebral ischemia and 2 h of reperfusion without radiofrequency (RF) pulsing. Body temperature was maintained at 37.5–38.0°C (normothermia) or 36.5–37.0°C (mild hypothermia). Brain temperature during ischemia, which dropped to 31.9 ± 0.3 (hypothermia) and 33.6 ± 0.5±C (normothermia), correlated with temporalis muscle temperature (r² = 0.92) but not with body or magnet bore temperature measurements. Ischemia reduced brain temperature approximately 1.7°C in rats subjected to mild hypothermia (1° reduction of body temperature). Parallel MR spectroscopy experiments showed no significant difference in energy metabolites between normothermic and hypothermic rats during ischemia. However, the metabolic recovery was more extensive 20–60 min after the onset of reperfusion in hypothermia rats, although not thereafter (P < 0.05). Mild hypothermia speeds metabolic recovery temporarily during reperfusion but does not retard energy failure during global ischemia in rats.     

法舒地尔预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞色素C和caspase-3表达的影响

目的研究法舒地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞色素C（CytC）和caspase-3蛋白表达的影响,探讨其脑保护机制。方法线栓法制作大鼠中动脉缺血再灌注损伤模型。成年雄性SD大鼠120只随机分成3组：假手术组（Sham组）、脑缺血再灌注模型组（Mod组）、法舒地尔干预组（Fas组）,再分为再灌注3h、12h、24h和48h,以及TTC染色组5个亚组,每组8只大鼠。缺血再灌注后进行神经功能缺损评分（NDS）,免疫组织化学方法检测脑组织中CytC蛋白、cas-pase-3的表达,TTC染色测量鼠脑梗死体积并计算百分比。结果①Sham组大鼠无神经功能缺损,NDS评分为0,TTC染色亦未见脑组织梗死;Mod组和Fas组大鼠均有明显的神经功能缺损,TTC染色亦可见明显的脑组织梗死;但与Mod组相比,Fas组神经功能缺损少、NDS评分低（P〈0.01）,脑梗死体积减小（P〈0.05）。②与Sham组相比,脑缺血再灌注后,Mod组和Fas组大鼠脑组织CytC和caspase-3的表达显著升高（P〈0.01）,其中CytC表达高峰出现在12h,caspase-3表达高峰出现在24h;Fas组和Mod组间比较显示Fas组CytC和caspase-3的表达又显著低于Mod组（P〈0.01）。结论①法舒地尔能减轻大鼠脑局灶性缺血再灌注引起的神经功能缺损,减小脑梗死体积。②部分抑制脑缺血再灌注引起的CytC和caspase-3表达增加可能是法舒地尔的脑保护机制之一。     

亚低温对于心肺复苏后大鼠海马神经细胞ROS产生量和Caspase-3mRNA表达的影响

目的观察亚低温（Hypothermia,HT）对心肺复苏（Cardiopulmonaryresuscitation,CPR）后大鼠海马神经细胞活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）产生量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）mRNA表达的影响。方法37只健康成年雄性SD大鼠随机分为3组：空白对照组、常温CPR组、亚低温CPR组。CPR组再分2个亚组：即自主循环恢复（ReturnofSpontaneousCirculation,ROSC）后12h、24h组,除空白对照组为5只大鼠外,余各亚组大鼠均为8只。亚低温CPR组在ROSC后立即行亚低温干预。到达各观察时相点时立即取材,应用流式法检测大鼠海马单细胞悬液中活性氧水平,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术测定海马神经细胞Caspase-3mRNA的表达水平。结果亚低温CPR组ROSC后12h、24h的ROS产生量和Caspase-3 mRNA表达与相同时相点常温CPR组比较均显著降低（P〈0．05）。结论HT能减少CPR后大鼠神经细胞ROS的产生,并能通过抑制Caspase-3mRNA表达而使神经细胞凋亡减少。     

大鼠脑缺血再灌注的磁共振扩散加权成像研究

目的：采用磁共振扩散加权成像（DWI）评价大鼠脑缺血早期再灌注的动态变化,观察缺血早期再灌注对脑梗死的保护作用。方法：选取16只SD雄性大鼠,采用线栓法制作右侧大脑中动脉闭塞（MCAO）脑缺血模型,随机分为缺血再灌注组（缺血2h后再灌注）及对照组（永久性缺血）,每组8只。分别于制作MCAO模型后30min、2h、6h、12h及24h行MRI扫描。计算并比较缺血再灌注组与对照组大鼠每次扫描的脑梗死体积、脑梗死体积的增长率、脑梗死最大层面梗死区域的ADC值和rADC值。磁共振检查结束后处死大鼠,断头取脑行HE染色,并与DWI结果进行比较。结果：缺血再灌注组和对照组大鼠MCAO后DWI均显示右侧大脑中动脉供血区异常高信号,ADC图上为低信号。MCAO后2h、6h、12h及24h的DWI图上缺血再灌注组体积增长率均低于对照组,仅12h及24h时差异有统计学意义（P〈0.05）。MCAO后30min缺血再灌注组与对照组梗死区ADC值及rADC值差异均无统计学意义（P〉0.05）,但2h、6h、12h及24h时缺血再灌注组梗死区ADC值及rADC值均明显小于对照组（P〈0.05）。缺血再灌注组与对照组大鼠MCAO后HE染色均显示脑梗死灶体积与相应DWI层面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：DWI是评价超早期脑梗死再灌注的敏感方法,为脑梗死的疗效评价提供客观依据。     

体外培养星形胶质细胞缺氧／复氧后EAAT2、谷氨酰胺合成酶的表达

目的对体外培养的星形胶质细胞（AC）进行缺氧／复氧及亚低温干预。观察兴奋性氨基酸转运体2（EAAT2）、谷氨酰胺合成酶（GS）的表达及亚低温干预对其的影响。方法选用新生大鼠的大脑皮层组织培养的AC。分为对照组（C）、缺氧／复氧组（H／R）、亚低温组（H／M＋R）,缺氧12h后H／R组及H／M＋R组分别于37℃及32℃复氧。每组设复氧2h、4h、8h、12h、24h、48h等时间点。MTT测定细胞活力,Western—blot半定量分析EAAT2、GS的表达情况。结果①MTT法检测细胞活力：H／R组与H／M＋R组的细胞活力均比C组的细胞活力低,而H／M＋R组的细胞活力较H／R组高,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）Western—blot检测结果：H／R组与H／M＋R组的EAAT2表达与C组相比较,均先减少,后随着复氧时间延长逐渐增多,差异有统计学意义（P〈0．05）,H／M＋R组的EAAT2表达与H／R组相比较,表达量下降趋势小,差异有统计学意义（P〈0．05）;H／R组与H／M＋R组的GS表达量随着复氧时间延长。均呈现增高趋势,与C组比较增高显著,差异有统计学意义（P〈0．05）,H／M＋R组的GS表达量与H／R组比较增高趋势更加明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论缺氧／复氧及亚低温干预可引起星形胶质细胞EAAT2、GS表达的改变：32℃～35℃亚低温干预可以抑制缺氧／复氧损伤后兴奋性氨基酸的释放,这可能是脑保护作用的重要机制之一。     

深低温对全脑缺血大鼠海马线粒体功能的影响

目的 研究深低温对全脑缺血大鼠海马线粒体功能的影响,并探讨其在深低温脑保护机制中的作用.方法 建立大鼠体外循环模型,实验动物按随机数字表法分成对照组(8只)、常温缺血组(8只)和低温缺血组(8只).提取海马组织线粒体,观察线粒体呼吸功能、线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)、细胞色素氧化酶(cytochrome oxidese,CCO)活性、线粒体膜流动性、线粒体内游离Ca2+和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 常温缺血组线粒体Ca2+与MDA含量均较对照组显著升高(P<0.01),而低温缺血组Ca2+与MDA含量较常温缺血组显著降低(P<0.05).常温缺血组呼吸Ⅲ态(R3)、呼吸Ⅳ态(R4)、磷氧比(P/O)及氧化磷酸化效率(OPR)均较对照组显著降低(P<0.05).低温缺血组R3、R4、P/O、OPR均较常温缺血组显著回升(P<0.05).常温缺血组线粒体膜流动性较对照组显著降低(P<0.01),而低温缺血组膜流动性较常温缺血组显著升高(P<0.05).常温缺血组线粒体SDH与CCO活性均较对照组显著降低(P<0.01),而低温缺血组SDH与CCO活性均较常温缺血组显著升高(P<0.05).结论 深低温对全脑缺血大鼠海马线粒体功能具有保护作用.

Abstract：

Objective To detect the effect of deep hypothermia on the function of mitochondria in hippocampus after global ischemia in rats and to explore the protection mechanism. Methods The animal model of cardiopulmonary bypass (CPB) was established in rats that were then randomly divided into three groups,ie,control group,normothermia ischemia group and hypothermia ischemia group,eight rats per group.The mitochondria was extracted from the hippocampus of each rats for observing the mitochondrial respiratory function,the activities of succinate dehydrogenase (SDH),the cytochrome oxidese(CCO),the lnembrane fluidity and the content of intramitochondria free calcium and MDA. Resuits The content of intramitochondria free calcium and MDA in the normothermia ischemia group was increased significantly compared to the control group and that in the hypothermia ischemia group wag decreased significantly compared with the normothermia ischemia group(P<0.05).Respiratory state Ⅲ (R3),respiratory state IV(R4),P/O ratio and oxidative phosphorylation (OPR) in the normothermia ischemia group were decreased significantly compared to the control group (P<0.05).R3,R4,P/O ratio and OPR in the hypothermia ischemia group were increased significantly compared with the normothermia ischemia group (P<0.05).Membrane fluidity in the normothermia ischemia group wag decreased significantly compared to the control group (P<0.01),while that in the hypothermia ischemia group was increased significantly compared with the normothermia ischemia group(P<0.05).The activities of SDH and CCO in the normothermia ischemia group were decreased significantly compared to the control group (P<0.01),while those in the hypothermia ischemia group were increased significantly compared with the normothermia ischemia group (P<0.05). Conclusion Profound hypothermia exerts a protective effect on the function of mitochondria in the hippocampus after global ischemia in rats.