重组梅毒螺旋体表位抗原汲多表位嵌合抗原研究

目的：为梅毒检测试剂提供抗原性强、特异性高的重组表位抗原和多表位嵌合抗原。方法：对梅毒螺旋体的主要抗原蛋白TpN15,TpN17,TpN44.5和TpN47的优势抗原表位进行计算机分析，从中选取具有强抗原性的表位。根据大肠杆菌的偏性密码子，推断出这些抗原表达的基因序列，采用化学合成法合成表位抗原基因并克隆表达。结果：获得了梅毒各抗原蛋白的优势抗原表位，构建了各表位基因及多表位嵌合基因的表达质粒，在E.coli中获得了高效表达。用获得的重组蛋白质纯品，对122份心磷脂测定阳性血清样品进行测定，证明重组梅毒表位抗原和多表位嵌合抗原具有预期的抗原活性。结论：重组梅毒表位抗原及表位嵌合抗原具有较好的抗原活性，可用于研究不同类型的梅毒检测试剂。     

重组梅毒螺旋体表位抗原及多表位嵌合抗原研究

目的 :为梅毒检测试剂提供抗原性强、特异性高的重组表位抗原和多表位嵌合抗原。方法 :对梅毒螺旋体的主要抗原蛋白TpN15 ,TpN17,TpN44 .5和TpN47的优势抗原表位进行计算机分析 ,从中选取具有强抗原性的表位。根据大肠杆菌的偏性密码子 ,推断出这些抗原表位的基因序列 ,采用化学合成法合成表位抗原基因并克隆表达。结果 :获得了梅毒各抗原蛋白的优势抗原表位 ,构建了各表位基因及多表位嵌合基因的表达质粒 ,在E .coli中获得了高效表达。用获得的重组蛋白质纯品 ,对 12 2份心磷脂测定阳性血清样品进行测定 ,证明重组梅毒表位抗原和多表位嵌合抗原具有预期的抗原活性。结论 :重组梅毒表位抗原及多表位嵌合抗原具有较好的抗原活性 ,可用于研究不同类型的梅毒检测试剂     

梅毒螺旋体实验室检测技术的研究进展

梅毒是危害人类健康的传染病之一，本文从病原体、血清学、基因诊断技术、脑脊液等方面简要综述了梅毒螺旋体的检测方法，各种方法的敏感性和特异性均不同，针对不同用途可选用不同方法。     

梅毒螺旋体胶体金法重复性检测112例分析

2008年10-11月，我们采用胶体金法（GICA）进行梅毒螺旋体重复性检测112例。现分析报告如下。 1临床资料 1．1一般情况 112例中，男58例，女54例；年龄2～80岁，平均52岁。均为我院血液中心采用GICA法检测的梅毒螺旋体抗体可疑阳性患者。     

钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的重组表达及纯化

目的：构建L32-pQE32重组质粒，诱导表达重组钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32，对重组蛋白进行纯化。方法：采用PCR法从钩端螺旋体DNA中获取编码LipL32的基因片段，构建重组克隆载体pGEM-T／L32和表达载体L32-pQE32，转化受体茵E.coli DH5α和E．coli M15，IPTG诱导表达重组LipL32蛋白。Ni-NTA亲和层析纯化重组LipL32蛋白。结果：扩增出约750bp的LipL32成熟蛋白基因，LipL32基因插入pQE32表达载体，表达产物6个组氨酸与LipL32蛋白的融合蛋白相对分子质量约为31000，与预期大小一致。Western印迹显示能与钩体抗血清特异结合。结论：LipL32蛋白能在大肠杆菌中表达，Ni-NTA亲和层析可有效纯化重组LipL32蛋白，重组LipL32蛋白具有结合活性。     

微粒子化学发光法和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验检测梅毒抗体的一致性比较

目的评价微粒子化学发光免疫技术(chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA)检测临床血清标本梅毒螺旋体抗体的敏感性和特异性。方法用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination test,TP-PA)法作为对照标准,采用CMIA法检测4686例血清标本,并用Kappa检验评价两种检测方法对同一个样本的化验结果的一致性。结果 4686例血清标本中用CMIA法检出阳性率5.48%,TPPA法检出阳性率5.14%。以TPPA为金标准,CMIA法敏感性为99.17%,特异性为99.60%。其中CMIA法检测血清S/CO值>4.00的215例,用TPPA确认214例阳性,阳性预测值(PPV)为99.53%。结论 CMIA法可替代TPPA法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测,对于CMIA法检测S/CO值1.0～4.0的需进一步复检。     

梅毒螺旋体抗体三种检测方法的价值比较

目的比较三种血清梅毒螺旋体抗体(TPHA)检测方法,优选一种简便、准确的TPHA检测方法。方法采用临床上常用的胶体金法、酶联免疫吸附试验法(ELISA法)、化学发光微粒子免疫分析法(CMIA法)对400例标本进行TPHA检测,分别计算ELISA法、CMIA法、胶体金法检测结果的阳性率、灵敏度和特异度。结果 CMIA法检测TPHA的阳性率、灵敏度和特异度分别为74.50%、99.67%和100%;胶体金法的阳性率、灵敏度和特异度分别为41.25%、55.18%和100%;ELISA法的阳性率、灵敏度和特异度分别为60.25%、80.60%和93.46%。CMIA法检测阳性率和敏感性明显高于ELISA法和胶体金法(P<0.05),而特异性高于ELISA法(P<0.05)。结论CMIA法检测TPHA特异性强、灵敏度高,具有很高的临床应用价值。     

分泌表达Der p2的重组BCG的构建与鉴定

目的构建并鉴定能够分泌表达外源蛋白——屋尘螨抗原（Der p2）的基因重组卡介苗（rBCG）。方法采用PCR技术,从结核分枝杆菌H37Rv基因中扩增信号肽Alpha抗原（α-ss）的穿膜区基因,经测序鉴定后克隆入胞内表达Der p2的rBCG中。通过Western blot鉴定目标抗原在rBCG中的表达。结果经测序证实,所克隆的α-ss信号肽基因序列正确,构建的Der p2-rBCG能完成在大肠埃希菌（E.coli）和牡牛分枝杆菌细胞之间的穿梭,并介导抗生素抗性基因表达。外源基因Der p2表达于BCG培养上清。结论成功构建了以分泌方式表达外源蛋白的Der p2-rBCG。     

老年患者梅毒螺旋体抗体阳性临床分析

 目的 探讨老年患者梅毒螺旋体( Treponema pallidum,TP)抗体阳性的临床价值.方法 对98例老年人采用酶联免疫吸附试验( ELISA)筛查梅毒抗体阳性标本,分别进行梅毒螺旋体血球凝集试验(treponema pallidum hemagglutination assay,TPHA)检测和快速血浆反应素诊断试验(rapid plasma regaining,RPR)检测,对实验结果 进行统计分析.结果 98例TP- ELISA阳性标本,用TPHA法检测阳性48例,阳性符合率48.98％.RPR法检测阳性44例,该44例仅16例用TPHA确证阳性.结论 老年人梅毒血清学试验阳性,只提示其体内有抗类脂抗体或抗TP抗体存在,不能作为感染梅毒螺旋体的绝对依据.     

无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的价值评价

目的：评价无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的筛检价值。方法：以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本40份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100份为评价标本。用梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)法，厦门新创梅毒抗体ELISA1诊断试剂盒(ELISA1)及北京金豪梅毒抗体ELISA诊断试剂盒(ELISA2)对评价标本作盲法筛检，以卫生部临床检验中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。用四格表法评价真实性与可靠性指标，并对二种ELISA试剂盒的Cut-off值的合理性进行评价。结果：TRUST法、ELISA1及ELISA2试剂盒的灵敏度分别为68．2％，95．5％，100．0％，特异度分别为77．8％，94．4％，94．4％，约登指数分别为0．46，0．900．94，重复试验符合率分别为90．0％，100．0％，100．0％，二种ELISA试剂盒的Cut-off值较合理。结论：ELISA试剂盒的灵敏度、特异度及重复试验符合率要远高于TRUST法。尽管TRUST法的灵敏度与特异度较低，在无偿献血者的粗筛快检中可降低血液报废率，因而在无偿献血中的仍有很高价值，如果将ELISA试剂盒的灵敏度与特异度加以提高，将会具有更大的临床应用价值。     

Novel radiographic presentation of primary syphilis of the tonsil

A 61-year-old HIV+ male presented to an infectious disease clinic with a complaint of sore throat. A painless ulcerated mass was discovered on the right tonsil resulting in further evaluation with a CT scan of the neck. Imaging confirmed the presence of a mass centered on the palatine tonsil and associated lymphadenopathy. A presumptive diagnosis of HPV-related squamous cell carcinoma was made due to patient risk factors. However, multiple biopsies found no evidence of carcinoma, but instead revealed the presence of spirochetes that stained positive for T Pallidum. Soon after, the patient developed the characteristic copper-red maculopapular rash of secondary syphilis, indicating that the tonsillar mass was, in fact, a primary chancre. Since such chancres are most often found externally in the genital or anal region, they are seldom radiographically characterized, placing them low on the differential diagnosis for most radiologists. A high index of suspicion could aid future radiologists in placing primary syphilis higher on the differential diagnosis in similar cases in which the patient has appropriate risk factors, such as a known history of genital-oral sexually transmitted infections or an immunocompromised state. Prompt recognition of the nature of a primary syphilitic lesion can lead to rapid resolution of symptoms following treatment with intramuscular benzathine penicillin G, as eventually occurred in this case.     

CLIA、TRUST和TPPA3种梅毒检测方法的比较

目的 通过比较化学发光免疫分析（CLIA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）3种梅毒检测方法的优缺点,为临床选择合适的梅毒检验方法.方法 随机选取已确诊为梅毒感染的患者446例和非梅毒感染的健康体检者398例.分别采用CLIA、TRUST、TPPA法对血清中的梅毒抗体进行检测,评价3种方法之间的差异及临床应用.结果 在对梅毒患者的血清检测中,CLIA、TRUST和TPPA的灵敏度分别为98.2％,80.3％和94.8％;特异度分别为98.5％、76.4％和99.7％.在对照组中,CLIA、TRUST和TPPA的假阳性率分别为1.5％、23.6％和0.2％.结论 CLIA的灵敏度高于TPPA,重复性好,操作简便,可用于梅毒初筛,但CLIA的特异度低于TPPA,因此CLIA的阳性标本应结合TPPA及临床症状确诊.TRUST的灵敏度及特异度均低于CLIA和TPPA.因此,TRUST主要用于梅毒的临床疗效观察.     

重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定

目的表达重组脂联素融合蛋白（adiponectin-Trx）,并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列（18-247氨基酸）亚克隆至pET-32（a）表达载体,重组质粒adiponectin/pET32（a）的序列经测序证实。将adiponectin/pET32（a）转化表达宿主菌OrigamiTM（DE3）,在27℃以1mmol/L IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的蛋白经组氨酸镍螯和树脂亲和纯化。以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性。结果小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被G置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代。序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达。表达产物的相对分子量（Mr）同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43000,Trx Mr为19000。在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖。结论小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同。成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性。     

重叠PCR合成蓖麻毒素B链基因及其在大肠杆菌中表达和抗原性分析

目的:表达蓖麻毒素B(RTB)链蛋白,为制备RTB特异性抗体奠定基础。方法:采用密码子优化软件对RTB编码基因序列重新优化设计,以18条长片段寡核苷酸引物经两步重叠PCR合成RTB基因片段,并在RTB的C端引入6×H is标签序列,插入表达载体pBV220,转化E.coliDH5α获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用W estern印迹和间接ELISA方法鉴定重组RTB蛋白的抗原性。结果:表达工程菌株E.coliDH5α在42℃经诱导3 h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的65.48%,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与RTB相对分子质量相符,为29×103左右。表达产物经N i-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度达96.21%,并可得到约25 mg/L重组RTB蛋白。结论:在国内首次应用重叠PCR合成RTB基因并实现高表达,纯化重组RTB蛋白可被抗天然蓖麻毒素多抗所识别,为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了基础。     

霍乱弧菌外膜蛋白W的原核表达及抗原性分析

目的在大肠杆菌中表达霍乱弧菌种特异性外膜蛋白（Omp）W,纯化后制备检测用OmpW抗体。方法采用PCR法以霍乱弧菌基因组为模板扩增ompW基因,插入表达载体pET-32a（＋）的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-32a-ompW;重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导获得目的蛋白,纯化后免疫新西兰大耳白兔,制备OmpW的多克隆抗体并进行鉴定。结果扩增得到ompW基因片段,并成功构建pET-32a-ompW原核表达系统,重组蛋白OmpW以包涵体形式高效表达;制备的OmpW抗体能与天然的O1群和O139群霍乱弧菌结合。结论霍乱弧菌OmpW可由原核系统高效表达,免疫获得的抗体具有较好的效价,为进一步制备霍乱弧菌检测用抗体奠定基础。     

FAS抗原胞外区片段GST融合蛋白的产生

目的：获得重组ＦＡＳ抗原，用于抗体制备及进一步的功能分析。方法：用ＰＣＲ技术从完整的ＦＡＳｃＤＮＡ克隆上扩增其编码胞外区的部分，将ＰＣＲ产物直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统，ＤＮＡ序列分析证实序列完全正确；用ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ将ＦＡＳ胞外区片段切出，定向克隆到经同样酶切处理的ｐＧＥＸ－ＫＧ表达载体，转化大肠杆菌，经优化ＩＰＴＧ的诱导条件，获得了ＦＡＳ胞外区与谷胱甘肽－Ｓ－转移酶的融合蛋白高效表达；用亲合层析法从细菌粗提物中纯化了ＧＳＴ－ＦＡＳ融合蛋白，免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体。结果：用重组ＦＡＳ为免疫原制备的抗体能诱导Ｕ９３７细胞产生细胞凋亡。结论：重组ＦＡＳ抗原和制备的抗体能用于对ＦＡＳ系统的功能研究