聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的临床应用价值

目的探讨用聚合酶链反应(PCR)荧光定量法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对189例临床确诊的结核病患者(结核病组)和45例非结核呼吸系统疾病患者(对照组)的痰或支气管灌洗液标本,分别应用PCR实时荧光定量法、涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法检测,然后对3种方法的阳性检出率进行统计学分析。结果 PCR法检测结核病组标本的阳性检出率为74.1%(140/189),明显高于涂片抗酸染色法的24.9%(47/189)及结核杆菌培养法的43.9%(83/189)。3种方法检测45例对照组患者的结果均为阴性,特异度为100.0%(45/45)。结论 PCR荧光定量法的敏感度和特异度明显高于涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法,用于结核分枝杆菌的鉴定简便、快速、特异,适于在卫生检疫系统和临床实验室应用。对于结核病的及早诊断、预防和疗效监测具有良好的临床应用前景。     

7种实验方法诊断结核病的临床应用价值

目的评估直接涂片法、浓集涂片法、结核分枝杆菌罗氏培养法、BACTEC MGIT960系统培养结核分枝杆菌法、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)扩增法、结核分枝杆菌IgG抗体检测等7种方法对临床结核诊断的应用价值。方法对临床确诊的672例肺结核患者和62例健康体检者的痰标本用7种结核菌检测方法进行检测。结果 672例患者中检测阳性率分别为直接涂片法17.0%(115/676)、浓集涂片法25.6%(173/676)、改良罗氏培养法32.2%(218/676)、BACTEC MGIT960系统培养结核分枝杆菌法45.7%(309/676)、实时荧光定量PCR 90.1%(609/676)、SAT扩增法96.4%(652/676)、结核分枝杆菌IgG抗体检测法65.4%(442/676)。对照组只有荧光PCR法和结核抗体法检出阳性,阳性率分别为8.1%、12.9%。涂阴标本经罗氏培养法+结核抗体法+SAT法联合检出阳性率高于单一检测方法。结论涂片法操作简便、快速和价格便宜,但阳性率低,在长时期内其依然是基层医院诊断结核病的主要检测手段;结核分支杆菌培养能进行菌种鉴定和药物敏感试验仍是不可缺少的方法,但周期长;结核抗体法方便,简单,仍是结核实验室诊断的重要手段,但不能区分感染与发病;荧光PCR扩增法快速,灵敏,有较好诊断价值,但设备昂贵,技术要求高,易污染;SAT法快速,灵敏,要求较荧光PCR扩增法低,可以辅助诊断结核病。同时联合检测提高诊断率,并满足不同临床需要。     

6种检测方法在HIV合并结核分枝杆菌感染诊断中的应用价值分析

目的探讨6种检测方法在人类免疫缺陷病毒(HIV)合并结核分枝杆菌(TB)感染诊断中的应用价值。方法采用抗酸染色涂片法、BACTEC MGIT 960、罗氏培养基法、GeneXpert和PCR-荧光探针法同时检测有咳痰症状的95例HIV感染者痰标本;同时采用酶联免疫斑点法(T-Spot)检测95例HIV感染者血液标本。比较各种检测方法在HIV合并TB感染诊断中的灵敏度、特异度和阳性率。结果 6种检测方法中,T-Spot、BACTEC MGIT 960和GeneXpert的阳性率分别为32.6%、24.2%和20.0%,3种方法比较,差异均无统计学意义(P0.05)。GeneXpert、抗酸染色涂片法、罗氏培养基法的阳性率分别为20.0%、4.2%、6.3%,2组方法比较,差异均有统计学意义(P0.05)。以BACTEC MGIT 960培养为"金标准",5种痰检测方法中GeneXpert、抗酸染色涂片法、罗氏培养基法的灵敏度分别为82.6%、26.1%、17.4%,2组比较,差异均有统计学意义(P0.05),而PCR-荧光探针法灵敏度为52.2%,与抗酸染色涂片法、罗氏培养基法的灵敏度进行比较,差异有统计学意义(P0.05),GeneXpert和BACTEC MGIT 960的灵敏度(82.6%和100.0%),具有高度一致性(K=0.655)。5种痰检测方法的特异度比较,差异均无统计学意义(P0.05);GeneXpert和BACTEC MGIT 960的特异度(94.7%和100.0%),具有较强一致性。结论应用GeneXpert检测HIV合并TB感染耗时短、操作方便,具有较高的灵敏度和阳性率,在灵敏度和特异度方面与"金标准"BACTEC MGIT 960培养有较高的一致性,结合T-Spot血清学检查,对临床上准确、快速诊断HIV合并TB感染具有重要价值。     

实时荧光定量PCR在疑似肺外结核诊断中的应用价值

目的探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测在疑似肺外结核诊断中的价值。方法将怀疑有结核分枝杆菌感染的患者101例分为关节炎组(17例)、胸腹膜炎组(32例)、浅表淋巴结核组(20例)、肾结核组(13例)、其他结核组(19例),分别取关节腔穿刺液、胸腹腔穿刺液、浅表淋巴穿刺液、尿液等标本采用实时FQ-PCR进行结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)检测,同时进行抗酸杆菌涂片检测,对检测结果进行比较和统计分析。结果 101例疑似肺外结核患者关节穿刺液、胸腹腔穿刺液、浅表淋巴穿刺液、尿液、脑脊液等TB-DNA检测阳性率分别为41.18%、37.50%、50.00%、46.15%、35.87%;抗酸杆菌涂片检测阳性率分别为11.76%、9.38%、10.00%、7.69%、5.26%。抗酸杆菌涂片检测阴性标本采用实时FQ-PCR检测阳性率为35.87%,抗酸杆菌涂片检测阳性标本采用实时FQ-PCR检测全部为阳性。结论实时FQ-PCRR在疑似肺外结核诊断中具有重要价值。     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的 评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值.方法 采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者,20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测.同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 73例结核性胸膜炎胸水.噬菌体生物扩增法阳性率为49.3%(36/73)、涂片抗酸染色阳性率为2.7%(2/731、罗氏培养阳性率为4.1%(3/73).20例非结核性胸膜炎,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法 .     

结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应对结核性脑膜炎的早期诊断价值

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(荧光定量PCR)检测技术对诊断结核性脑膜炎的应用价值。方法:对165例确诊为结核性脑膜炎患者和38例非结核性脑膜炎患者行腰椎穿刺术,标本送检结核分枝杆菌的荧光定量PCR、结核分枝杆菌培养、涂片找抗酸杆菌,比较各种检测方法的敏感性和特异性。结果:荧光定量PCR反应检测阳性率52.7%,明显高于脑脊液涂片找抗酸菌(1.2%)及结核分枝杆菌培养(11.5%)。荧光定量PCR与抗酸杆菌培养方法对比,P<0.01,差异有统计学意义,PCR检测明显优于细菌学培养。结论:结核分枝杆菌的荧光定量PCR对结核性脑膜炎诊断特异性高,分析周期短,在早期诊断结核性脑膜炎方面有重要的参考价值。     

五种结核病实验室检测方法对结核病诊断价值的效果评价

目的评价涂片法、BACTECMGIT960快速培养法、改良罗氏培养法、荧光定量PCR法和斑点免疫层析法在结核病实验室快速诊断方法中的作用和地位。方法对1260例结核病患者（结核病组）和100例非结核病患者（非结核病组）的各类标本采用涂片法、快速培养法、改良罗氏培养法、荧光定量PCR法进行检测,同时分离患者外周血血清进行结核抗体检测,并对这五种检测方法的结果进行分析比较。结果五种实验室检测方法对结核病组阳性标本和非结核病组阴性标本的检测结果差异均有统计学意义（χ2=466．31,χ2=216．14,P均〈0．05）。对于结核病组的涂阳和涂阴标本,快速培养法和荧光定量PCR法检测的灵敏度及准确度均高于其他三种方法,而涂片法、改良罗氏培养法、快速培养法的特异性均为100．0％,高于荧光定量PCR法和斑点免疫层析法;快速培养法的阳性检出率均较改良罗氏培养法高,差异均有统计学意义（χ2=3387．00,χ2=4233．00,P均〈0．05）,平均培养时间也较改良罗氏培养法短;但快速培养法与荧光定量PCR法的阳性检出率差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论BACTECMGIT960快速培养法和荧光定量PCR法是诊断结核病快速、有效的检测方法,其阳性检出率高,且能缩短培养时间,BACTECMGIT960快速检测系统还能进行快速药物敏感性试验,为结核病的快速诊断提供依据。     

环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核诊断中的应用研究

目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核病的诊断中的应用。方法收集140例本院临床诊断为肺结核病或者怀疑为肺结核患者的痰液标本,分别用涂片抗酸染色法、LAMP法和改良罗氏培养法检测痰标本中结核分枝杆菌的阳性检出率、敏感性和特异性。结果 140份痰标本中涂片抗酸染色法、LAMP法和改良罗氏培养法的阳性检出率分别是25.71%(36/140)、43.57%(61/140)和41.43%(58/140)。LAMP法的阳性检出率明显高于涂片法,差异有统计学意义(P0.05)。以改良罗氏培养法为金标准,并结合临床诊断及患者使用抗结核药物的反应性综合判断,LAMP法的敏感性是87.93%(51/58),特异性是87.80%(72/82),两种方法检测结果的一致性κ=0.752,说明LAMP法在检测结核分枝杆菌方面与罗氏培养法有较好的吻合性。结论 LAMP法在检测痰标本中的结核分枝杆菌方面有着比较高的敏感性和特异性,在结核病的快速诊断上具有优势。     

LAMP法在肺结核患者痰标本中的应用评价

目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核患者痰标本中的应用。方法收集该院2016年12月至2017年4月门诊及住院诊断为肺结核且抗结核治疗涂片阳性的患者痰标本75份、涂片阴性患者痰标本72份,每份痰标本同时进行LAMP法结核分枝杆菌复合群核酸快速检测、罗氏固体(L-J)培养,分别计算LAMP法及L-J培养的阳性率。结果 75份痰涂片抗酸染色阳性标本中,LAMP法检测阳性75份,L-J培养阳性64份,LAMP法阳性检出率[(100%)75/75]显著高于L-J培养阳性检出率[(85.3%)64/75],且差异具有统计学意义(χ2=9.09,P0.05)。72份痰涂片抗酸染色阴性标本中,LAMP法检测阳性23例,L-J培养阳性12例;与痰涂片阴性标本比较,LAMP阳性检出率[31.9%(23/72)]显著高于L-J培养阳性检出率[16.7%(12/72)],且差异具有统计学意义(χ2=6.67,P0.05)。结论 LAMP法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性检出率高于痰涂片和L-J培养,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可用于临床上早期发现结核病患者。     

结核杆菌三种实验方法的应用评估

目的比较痰涂片法、实时荧光定量PCR法和免疫结核抗体(金标法)检测对结核病的诊断意义。方法选取2015年7月至2015年10月在我院诊疗疑似或确诊患者172例,进行涂片抗酸染色、实时荧光定量PCR法检测和采集血样进行免疫结核抗体检测。结果 172例检测样本中,抗酸染色痰液标本阳性例数只有20例,阳性率为11.6%。实时荧光定量PCR法阳性例数55例,阳性率31.2%。免疫结核抗体(金标法)阳性例数为87例,阳性率为50.6%。结论三种方法中,以结核抗体阳性率最高,实时荧光定量PCR法次之,抗酸染色法阳性率最低。如果三种方法联合运用,相互佐证,可提高准确性。     

BACTEC MGIT 960仪的临床应用评价

目的评价BACTEC MGIT 960仪的临床应用效果。方法 BACTEC MGIT 960、罗氏和直接涂片抗酸染色3种方法对送检标本进行检测,观察结核分枝杆菌阳性检出情况,BACTEC MGIT 960和罗氏培养时间。结果共有1 998例送检标本,污染率4.30%（86/1 998）,1 912例标本列入本次统计,786份标本的结核分枝杆菌检测阳性率为41.10%（786/1 912）。3种方法的结核分枝杆菌检测阳性率分别为39.22%（750/1 912）、34.83%（666/1 912）和25.05%（479/1 912）,差异有统计学意义（P〈0.05）;BACTEC MGIT 960和罗氏培养总的平均时间分别为11.82和20.64d,两种方法比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论结核分枝杆菌的检测率由高到低的检测方法为BACTEC MGIT 960仪、罗氏培养、抗酸涂片。BACTEC MGIT960培养时间明显短于罗氏。BACTEC MGIT 960仪在分枝杆菌培养中,阳性检出率高、培养时间短,有很好的应用前景。     

环介导等温扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的评价环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术在结核分枝杆菌诊断中的应用价值。方法收集246份疑似肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检,罗氏培养以及实时定量PCR和LAMP法检测。结果涂片镜检,罗氏培养实时定量PCR和LAMP法对结核分枝杆菌的检出率分别为30.89%,45.53%,54.47%,57.32%。以罗氏培养结果作为金标准,LAMP法诊断的敏感性为96.19%（101/105）,特异性为76.87%（103/134）,两种方法检测结果的一致性是Κ=0.71,两法具有很好的吻合性。以实时定量法为标准,LAMP法的敏感性为90.07%（127/141）,特异性为93.33%（98/105）,两法检测结果的一致性是κ=0.83,P〈0.001。结论 LAMP法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,与罗氏培养和RT-PCR有着较高的吻合性,很适合作为临床检测项目开展。     

痰液结核杆菌的检查方法结果比较

目的：探讨不同方法结果比较痰液结核杆菌(TB)阳性率。方法：痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌；痰培养；实时动态荧光定量PCR(FQ—PCR)检测痰液TB—DNA。结果：浓集法较直接法阳性率有大幅提高，培养法阳性率较低。对50份来自临床诊断肺结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，FQ—PCR检出28份阳性，直接法检出6份阳性，浓集法检出16份阳性，培养法检出12份阳性，其中1例假阳性，其余证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论：涂片检查结核杆菌应提倡用浓集法，FQ—PCR法检测TB—DNA可列入TB实验诊断常规项目，涂片。培养，及FQ—PCR同时检测可从不同方面满足临床需要。     

免疫磁珠荧光染色法在痰液结核分枝杆菌检测中的应用

目的 建立免疫磁珠 (immunomagnetic beads,IMB)荧光染色法并评估其在临床痰液标本结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）检测的应用价值。方法 利用 IMB富集纯化结核分枝杆菌,利用自动染色机和自动显微镜智能软件扫描系统进行荧光染色及结果分析,建立结核分枝杆菌 IMB荧光染色法。用实验室培养的标准菌株评估该方法的检测灵敏度和特异度。同时选取 2021年 5月～2022年 2月在山东省第二人民医院就诊的 145例疑似肺结核患者作为临床研究对象,取每例患者的痰液标本,选用萋 -尼氏（Ziehl-Neelsen,Z-N）抗酸染色法、 IMB荧光染色法和 BACTEC 960系统培养法检测结核分枝杆菌感染情况,比较三种方法的阳性检出率、灵敏度、特异度和准确率,验证 IMB荧光染色法在诊断结核分枝杆菌感染中的优势和临床应用价值。结果 IMB荧光染色法的最低结核分枝杆菌检测量是 30 CFU/ml,在标本含菌量≥ 30 CFU/ml时,该方法学的敏感度为 100%;而在 10 CFU/ml时则降到 56%,该方法检测的特异度为 100%。在利用临床标本检测中, IMB荧光染色法、 Z-N抗酸染色法和培养法对于结核分枝杆菌的阳性检出率分别为 73.10%,40.69%和 78.62%;IMB荧光染色法的阳性率明显高于传统 Z-N抗酸染色法的阳性率,差异具有统计学意义（χ2=31.059 9,P＜ 0.05）;略低于培养法,差异无统计学意义（χ2=1.205 2,P＞ 0.05）。IMB荧光染色法在临床标本检测中的灵敏度、特异度和准确率分别为 92.98%,100.00%和 94.48%,明显高于 Z-N抗酸染色法的灵敏度、特异度和准确率（47.37%,83.87%和 55.17%）,差异具有统计学意义（χ2=56.664 7,5.438 6,P＜ 0.05;59.479 2,均 P＜ 0.05）。结论 研究建立的 IMB荧光染色法优于目前应用的其他染色法,可为结核病早期诊断提供新方法。     

三种方法同时检测艾滋病合并结核分枝杆菌感染

目的 提高艾滋病合并结核病的病原学诊断的阳性率.方法 同时采用萋-尼抗酸染色、BacT/ALERT 3D 360MP 结核分枝杆菌培养和实时荧光定量PCR 方法,对艾滋病合并疑似结核感染患者不同时段的样本进行检测.结果 涂片萋-尼抗酸染色阳性率为11.69%(18/154);样本直接进行TB-DNA PCR 扩增的阳性率为18.18%(28/154);MP 培养阳性经抗酸染色和TB-DNA PCR 确认结核分枝杆菌的阳性率为20.13%(31/154).结论 三种方法同时检测可以提高检测阳性率,实时荧光PCR 扩增TB-DNA 能为临床提供早期病原学诊断依据,而结核分枝杆菌培养在提供病原学诊断"金标准"的同时,可为进一步检测其耐药性准备菌株.鉴于艾滋病患者免疫缺陷的特殊性,需要采用多种方法对多份样本和多种类样本同时检测,提高检测的特异性和敏感性.     

3种方法检测痰结核分枝杆菌的比较

目的：探讨建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法：采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较。结果：荧光定量PCR技术的检出率最高,快速培养法次之且检测时间较长,抗酸染色法检出率最低。结论：荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便、快速、敏感、特异的检测,在肺结核的早期诊断和疗效观察中将能发挥重要作用。     

荧光定量聚合酶链反应快速检测胸腹水抗酸杆菌的临床应用

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测胸腹水抗酸杆菌的实用价值及其临床应用.方法 比较FQ-PCR法、涂片染色法及罗氏培养法检测80例结核性胸腹水标本的阳性检出率.结果 涂片染色法阳性率为11.25%,FQ-PCR法为45.0%,两者比较差异有统计学意义(χ2=22.539 1,P＜0.05);以罗氏培养法...     

联合检测胸水中TB-Ab和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值

目的 评价检测胸水中结核抗体(TB-Ab)和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值.方法 以胸水为标本,用斑点免疫金渗试验检测结核抗体,用荧光探针PCR(TaqManPCR)技术检测TB-DNA,同时对胸水进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 179例结核性胸膜炎胸水,结核抗体阳性率为60.89%(109/179)、TB-DNA阳性率为63.13%(113/179),TB-Ab阳性及/或TB-DNA阳性共135例(75.4%),涂片抗酸染色阳性率为1.1%(2/179)、罗氏培养阳性率为1.68%(3/179).30例非结核性胸膜炎胸水,结核抗体阳性率为6.67%(2/30),TaqManPCR、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 结核抗体和TB-DNA均是诊断结核性胸膜炎的较好指标,两者联检可进一步提高检测敏感性.     

DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用

目的 探讨DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用.方法 采用抗酸杆菌涂片法、罗氏培养法、比例法药敏试验及DNA微阵列芯片法对海南地区的2069例疑似结核病患者痰标本进行检测,并对结核分枝杆菌检出率、耐药性及耐药基因突变特征进行分析.结果 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌检出率为明显高于罗氏培养法和...     

显色固液双相培养基快速检测结核分枝杆菌的临床应用评价

目的探讨固液双相培养基快速检测结核分枝杆菌的临床价值。方法对350例患者的痰标本分别进行涂片抗酸染色、改良罗氏培养法、固液双相培养法、Bactec 960培养法检测。结果 350例痰标本涂片抗酸染色法阳性率为14.8%,改良罗氏培养法为24.0%,固液双相法为35.7%,Bactec 960培养法为40.3%,改良罗氏培养法与涂片抗酸染色法比较,差异有统计学意义(P0.01),固液双相培养法与改良罗氏培养法比较,差异有统计学意义(P0.01),固液双相培养法与Bactec 960培养法比较,差异无统计学意义(P0.05)。改良罗氏培养法平均报告阳性时间为21.5d,固液双相培养法液相平均为13.2d,固相为16.4d,Bactec 960培养法平均为11.8d。结论固液双相培养法操作简便,阳性率高,时间短,适合基层医院快速检测结核分枝杆菌。