MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

蒜素对神经样细胞RhoA活性和轴突生长的影响

【目的】探讨蒜素（Allicin）对神经样PCI2细胞Rho亚家族蛋白A（RhoA）活性和轴突生长的影响。【方法】体外培养神经样PCI2细胞,RhoA激动剂溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）诱导RhoA活化,并使用Allicin干预,Western blot检测RhoA、相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（R0ck1）、相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2（Rock2）、轴突生长蛋白神经微丝（NF）、突触蛋白（synapsin）、突触素（synaptophysin）表达并比较。【结果1I。PA作用诱导RhoA活化,RhoA、ROCK1、ROCK2过表达,NF、synapsin、synaptophysin表达显著降低。Allicin干预处理后,RhoA活化被抑制,RhoA、ROCK1、ROCK2表达下调;恢复NF、synapsin、synapto—physin表达。【结论】Allicin干预能有效缓解LPA处理PCI2细胞诱导的RhoA活化和对轴突生长的抑制;提示Allicin可通过抑制RhoA的活化促进轴突生长。     

TAB3过表达促进结肠癌的上皮间质转化和侵袭迁移的研究

目的观察过表达TAB3对结肠癌细胞SW620的上皮间质转化(EMT)和侵袭迁移能力的影响,探究TAB3对NF-κB的影响以及NF-κB在TAB3调控结肠癌EMT和侵袭迁移中的作用,为阐明TAB3在结肠癌发生发展过程中的作用及其分子机制提供理论依据。方法通过qRT-PCR和Western blot检测结肠癌与癌旁组织中TAB3的表达情况。利用结肠癌细胞株SW620构建稳定过表达TAB3的细胞,应用Western blot检测EMT相关分子标记物Vimentin、E-cadherin的表达变化;利用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变。结果与癌旁组织相比,TAB3在结肠癌组织中呈高表达;过表达TAB3后,结肠癌细胞SW620中Vimentin表达升高,E-cadherin表达下降;划痕实验和Transwell侵袭实验显示过表达TAB3能够上调SW620细胞的侵袭和迁移能力;此外,过表达TAB3使p65表达增加,核内分布增多;NF-κB抑制剂能够减弱过表达TAB3对结肠癌EMT和侵袭迁移的促进作用。结论 TAB3在结肠癌中高表达,其通过NF-κB信号通路调控结肠癌的EMT和侵袭迁移。     

转化生长因子βⅠ型受体多态性在结肠癌细胞侵袭迁移中的作用

目的探讨转化生长因子βⅠ型受体多态性——TGF-βRⅠ6A在结肠癌SW48和DLD-1细胞侵袭转移中的作用。方法将TGF-βRⅠ6A基因转染SW48和DLD-1细胞,MTT法检测TGF-βRⅠ6A对结肠癌细胞增殖能力的影响;MatrigelTM侵袭试剂盒检测转染TGF-βRⅠ6A后细胞侵袭迁移能力的变化。Western blot检测TGF-βRⅠ6A在TGF-β1作用下,SW48细胞中ERK、磷酸化ERK、p38、磷酸化p38、Smad2和磷酸化Smad2基因的变化。结果转染TGF-βRⅠ6A的SW48细胞和DLD-1细胞,在TGF-β1(5ng/ml)的作用下,其体外增殖、侵袭、迁移能力均增强。此外SW48细胞中磷酸化ERK、磷酸化p38表达增强,Smad2和磷酸化Smad表达无明显变化。结论 TGF-βRⅠ6A在TGF-β1的作用下,能够增强SW48和DLD-1细胞的体外增殖、侵袭、迁移能力,可能与非Smad信号通路交联增强ERK、p38等基因的表达,从而促进结肠癌细胞侵袭迁移的作用有关。     

沉默MADD基因诱导甲状腺癌细胞凋亡及机制研究

目的研究沉默有丝分裂原激酶活化死亡结构域蛋白(MADD)基因对甲状腺癌细胞SW579凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人甲状腺癌细胞SW579,将MADD小干扰RNA(MADD siRNA)转染至甲状腺癌细胞,同时转染阴性对照(siRNA Control)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞中MADD的表达,确定转染效率。当细胞转染后48 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达情况。结果转染后甲状腺癌细胞中MADD的转录和表达水平显著降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);MTT法检测结果显示沉默MADD能够抑制甲状腺癌细胞增殖;流式细胞术检测结果显示,沉默MADD能够诱导甲状腺癌细胞凋亡;Western blot检测结果显示,沉默MADD能够上调甲状腺癌细胞中Cleaved Caspase-3和Bax蛋白的表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论沉默MADD能够在体外抑制甲状腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与活化Caspase-3及上调Bax蛋白的表达相关。     

HDAC1对喉癌细胞侵袭、迁移及血管内皮生长因子水平影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对喉癌细胞侵袭、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)水平影响。方法喉癌细胞Hep2中转染HDAC1 siRNA和siRNA对照记为HDAC1 siRNA组和siRNA-NC组,同时以不做转染的细胞为对照组。qRT-PCR测定细胞中HDAC1 mRNA水平,Western blot检测细胞中HDAC1蛋白水平,Transwell小室检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测细胞迁移,ELISA检测培养液上清中VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)水平,Western blot检测细胞中信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平。结果 HDAC1 siRNA组细胞中HDAC1 mRNA和蛋白水平均明显低于对照组(P0.05)。siRNA-NC组细胞中HDAC1 mRNA和蛋白水平与对照组相比无显著差异(P0.05)。siRNA-NC组细胞迁移率、侵袭数目及培养液上清中VEGF、b FGF含量均明显降低,细胞中MMP-2、p-STAT3/STAT3水平也下降,与对照组相比差异有显著性(P0.05)。siRNA-NC组细胞迁移率、侵袭数目、MMP-2水平、p-STAT3/STAT3水平及培养液上清中VEGF、b FGF含量与对照组相比无显著差异(P0.05)。结论下调HDAC1表达可降低喉癌细胞侵袭和迁移能力,降低细胞分泌VEGF、b FGF水平,作用机制可能与抑制STAT3信号通路有关。     

黄芩素对结肠癌细胞PTEN、Akt及p-Akt蛋白表达的影响

目的研究黄芩素对人结肠癌细胞生长及肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase and tensin homologue,PTEN)、Akt及p-Akt表达的影响。方法以人结肠癌SW620细胞为研究对象,通过Ed U和MTT实验方法检测0、25、50、75μmol/L浓度的黄芩素对肿瘤细胞生长及侵袭力的影响;通过Western blot检测黄芩素对肿瘤细胞PTEN、Akt及p-Akt蛋白的表达。结果 Ed U实验结果显示,浓度为50、75μmol/L的黄芩素能够显著抑制SW620细胞的DN A复制活性(P0.05);MTT实验表明黄芩素能够抑制SW620的细胞增生,呈剂量、时间依赖性;Transwell小室迁移实验显示50、75μmol/L浓度的黄芩素能抑制SW620细胞的侵袭迁移能力(P0.05);WB实验结果显示,50、75μmol/L浓度的黄芩素能够上调PTEN的表达,下调p-Akt的表达(P0.05)。结论黄芩素能够经PTEN/Akt途径抑制结肠癌肿瘤细胞的生长和侵袭力。     

TACC2/p300/HIF-1α信号通路对结直肠癌增殖影响的研究

目的探讨靶向沉默TACC2基因的表达对人结直肠癌Lo Vo细胞增殖的影响及其主要机制。方法检测结直肠癌组织、癌旁正常组织和人结直肠癌细胞系Lo Vo、HCT116及SW480细胞中TACC2蛋白的表达,设计针对TACC2基因的siRNA,阴性对照siRNA-NC及及空白对照组Blank,检测各组对TACC2基因的沉默效果。MTT法检测siRNA、siRNA-NC和Blank各组细胞增殖能力,采用Western blot检测沉默TACC2对p300表达及HIF-1α表达的影响,活性光度法检测p300-HAT活性。结果 TACC2在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。人结直肠癌细胞系Lo Vo中TACC2蛋白的表达明显高于HCT116和SW480细胞系。siRNA在各组中有最强的基因沉默效果。与siRNA-NC和Blank组相比,siRNA组细胞增殖能力明显降低(P 0. 05),沉默TACC2基因后p300表达无明显下降,但p300-HAT活性及HIF-1α表达明显降低。结论沉默TACC2基因可有效抑制结直肠癌细胞增殖,其作用机制可能与下调TACC2/p300/HIF-1α信号通路有关。     

慢病毒介导的ROBO1沉默抑制乳腺癌细胞生长克隆及ATP合成

目的研究沉默ROBO1对乳腺癌细胞生长、克隆及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法乳腺癌细胞MDA-MB-231感染ROBO1 siRNA重组病毒和siRNA control重组病毒记为干扰组和阴性组,以不做处理的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot检测细胞中ROBO1 mRNA和蛋白水平,以MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,荧光素酶法检测细胞合成的ATP水平,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21蛋白水平。结果阴性组细胞中ROBO1 mRNA和蛋白水平、细胞OD值、克隆形成率、ATP水平、细胞周期比率及cyclin D1、p21蛋白水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。干扰组细胞中ROBO1mRNA和蛋白水平降低,细胞OD值也降低,克隆形成率及ATP水平下降,G_0/G_1期细胞比率升高,细胞中cyclin D1蛋白水平降低,p21蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论沉默ROBO1抑制乳腺癌细胞的生长、克隆及ATP合成能力,并且能将细胞周期阻滞在G_0/G_1期。     

小分子干扰RNA介导RhoA沉默优化骨髓间充质干细胞的培养

背景:以往骨髓间充质干细胞的培养方法存在衰老和分化率低等问题.目的:检测是否可以通过沉默RhoA基因的方法优化骨髓间充质干细胞培养.方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,经小分子干扰RNA转染以沉默RhoA基因表达,分为3组培养:干细胞组(未转染小分子干扰RNA)、经随机打乱顺序的小分子干扰RNA 转染干细胞组、经小分子干扰RNA 转染的干细胞组.用RT-PCR,Western blot检测骨髓间充质干细胞在转染前后RhoA基因和蛋白的表达.应用细胞生长曲线、MTT比色法观察细胞生长的优化作用,采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化.结果与结论:与干细胞组、经随机打乱顺序的小分子干扰RNA 转染干细胞组比较,经小分子干扰RNA 转染的干细胞组RhoA基因和蛋白表达量明显降低(P < 0.05),细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多(P < 0.05).说明通过沉默RhoA基因的方法可以促进骨髓间充质干细胞增殖,优化培养方法.     

沉默AQP-1对PDGF诱导的视网膜色素上皮细胞增殖迁移的影响研究

目的研究沉默水通道蛋白1(AQP-1)对血小板源生长因子(PDGF)诱导的视网膜色素上皮细胞增殖迁移的影响。方法用PDGF处理视网膜色素上皮细胞hRPE,Realtime PCR和Western blot方法检测AQP-1表达变化。在hRPE细胞中转染AQP-1 siRNA慢病毒载体,经PDGF处理以后,Realtime PCR和Western blot检测细胞中AQP-1表达水平。MTT法检测细胞增殖,细胞爬片实验检测细胞迁移,Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平。结果PDGF处理后的hRPE细胞中AQP-1 mRNA和蛋白水平均升高,转染AQP-1 siRNA慢病毒载体后的hRPE细胞中AQP-1 mRNA和蛋白水平均降低。PDGF处理后的hRPE细胞增殖能力升高,细胞迁移能力也升高,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平升高。沉默AQP-1后的hRPE细胞经PDGF处理后,细胞增殖能力降低,细胞迁移能力也降低,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低。结论沉默AQP-1能够抑制PDGF诱导的视网膜色素上皮细胞增殖和迁移。     

激活Wnt信号通路阻滞沉默ZEB2对结直肠癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用

目的研究下调结直肠癌细胞中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)的表达对细胞增殖的影响。方法 ZEB2 shRNA组、ZEB2 shRNA+氯化锂(LiCl)组细胞用感染ZEB2 shRNA慢病毒之后的SW48细胞,shRNA-NC组细胞用感染shRNA-control慢病毒之后的SW48细胞,ZEB2 shRNA+Li Cl组细胞在实验开始时在细胞培养液中添加20 mmol/L的Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl。对照组细胞不作任何处理。以实时荧光PCR和Western blot检测结肠细胞中ZEB2的表达水平。用Western blot法测定下调ZEB2后的结直肠癌细胞中Wnt信号通路蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc表达水平。用Wnt信号通路激活剂处理下调ZEB2后的结直肠癌细胞,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白剪切型Caspase-9(c-caspase-9)、剪切型Caspase-3(ccaspase-3)水平。结果 ZEB2在结直肠癌细胞中的表达水平高于正常结肠细胞。ZEB2 shRNA慢病毒感染可以下调结直肠癌细胞中ZEB2的表达。沉默ZEB2后的结直肠癌细胞的增殖能力降低,细胞凋亡增多,细胞中c-caspase-9、c-caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白水平降低。Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默ZEB2后结直肠癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用。结论沉默ZEB2诱导结直肠癌细胞凋亡并抑制细胞增殖,而Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默ZEB2的这种作用。     

Prdx2基因表达情况对结直肠癌SW480细胞影响作用分析

目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶2(Prdx2)基因表达对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法采用慢病毒空载体(空白组)、干扰片段(Prdx2-shRNA)慢病毒载体转染结直肠癌SW480细胞(实验组),野生型结直肠癌SW480细胞作为对照组,分别于转染后培养24 h、48 h、72 h、96 h、120 h采用MTT法检测SW480细胞增殖情况,采用流式细胞仪技术检测培养120 h后细胞的凋亡率,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRt-PCR)及Westernblot法检测Prdx2、Survivin mRNA及蛋白的表达,采用Transwell侵袭实验检测SW480细胞的侵袭能力。结果实验组的W480细胞凋亡率显著高于空白组和对照组(P0.05),培养48 h、72 h、96 h、120 h,实验组的W480细胞增殖能力明显低于空白组和对照组(P0.05),实验组的SPrdx2、Survivin mRNA及蛋白相对表达水平显著低于空白组和对照组(P0.05);Transwell侵袭实验结果显示,实验组的转染结直肠癌SW480细胞侵袭能力强于空白组和对照组(P0.05)。结论 Prdx2基因沉默会抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、促进凋亡,但是会增强结直肠癌SW480细胞的侵袭能力。     

hTERT基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性及COX-2表达的影响

目的本研究探讨hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞生物学特性及环氧化酶-2(COX-2)的影响。方法设计合成特异性针对hTERT mRNA的siRNA,电转染入乳腺癌细胞,以致目的基因沉默。应用RT-PCR及Western blot法检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白的表达状况;应用流式细胞仪检测细胞周期;并通过CCK-8增殖实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力;经小室侵袭实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。利用免疫组织化学法检测COX-2蛋白的表达。结果 hTERT基因沉默48h后,hTERT转染组在沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白表达呈现明显降低(P0.05);细胞周期检测结果示乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,三组比较统计学差异明显(P0.05);CCK-8增殖实验结果表明乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞在hTERT转染组的增殖得到显著抑制(P0.05);小室侵袭实验结果表明,hTERT转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P0.05);免疫组织化学法检测结果显示,COX-2蛋白在hTERT转染组的表达明显降低,并与hTERT基因的表达相关联。结论 hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞的增值和迁移能力均有影响,并能降低COX-2蛋白的表达,从而改善乳腺癌患者预后。     

FBXO22对乳腺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的探究FBXO22基因沉默后对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭迁移能力的影响,并初步研究其相关分子机制。方法利用小干扰RNA(siRNA)技术制备FBXO22小片段干扰RNA转染乳腺癌MDAMB-231细胞,下调FBXO22基因表达,通过蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞转染效率,细胞划痕实验检测干扰FBXO22基因表达水平对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,Transwell小室迁移实验检测下调FBXO22基因表达水平对乳腺癌细胞迁移能力的影响,Western blot法检测下调FBXO22基因表达水平对乳腺癌细胞侵袭迁移相关蛋白表达的影响。结果 FBXO22-siRNA转染后乳腺癌MDA-MB-231细胞中FBXO22蛋白表达明显下降,迁移侵袭能力降低,E-cadherin蛋白水平升高,而波形蛋白的蛋白水平降低,基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9水平下降。结论下调FBXO22基因水平能抑制乳腺癌细胞的迁移侵袭能力。其潜在的机制可能为FBXO22基因表达下调抑制了MDA-MB-231上皮细胞-间充质转化进程,并使细胞转移相关重要蛋白--MMP-2和MMP-9表达减少。     

小干扰RNA抑制PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的研究P1TG基因沉默对胰腺癌细胞侵袭力的影响,探讨其与胰腺癌细胞侵袭性的关系及调控机制。方法阳离子脂质体转染PITG siRNA对PANC-1中的PITG基因进行干扰;利用RT-PCR和Western blot技术检测其基因沉默效应;通过Transwell小室法测定PANC-1细胞侵袭能力的改变。结果转染PTTG siRNA后,PANC-1细胞中PTTG的mRNA转录和蛋白表达受抑,显著低于未经处理的PANC-1细胞（P〈0．01）。利用PITGsiRNA对PITG进行RNA干扰后,PANC-1细胞的侵袭能力下降。结论设计的PITGsiRNA能有效抑制体外培养PANC-1细胞中PTIG的mRNA转录和蛋白表达水平,实现其基因沉默效应。P1TG与人胰腺癌的侵袭能力密切相关,其表达水平下降导致细胞侵袭能力降低。     

RhoA基因转染对QZG肝细胞生物学行为的影响及其机制的研究

目的探讨RhoA基因转染QZG肝细胞系后细胞骨架和体外侵袭能力的变化。方法构建持续激活型的RhoA真核表达载体,以脂质体介导转染肝细胞系QZG,用RT-PCR检测RhoA mRNA表达水平,观察细胞骨架的变化和体外侵袭能力。结果RT-PCR表明稳定转染细胞株中有RhoA mRNA高表达,而且在荧光显微镜下可见到细胞株绿色荧光,细胞形态和骨架发生变化。Boyden小室体外侵袭试验中实验组比空白对照组侵袭能力增加41.4%（P=0.006）。结论RhoA影响细胞的骨架变化和侵袭能力,在肝癌发生和发展中发挥重要作用。     

PDCD4对高糖诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的研究程序性细胞死亡4 (PDCD4)对高糖诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制。方法胰岛β细胞感染PDCD4 siRNA重组慢病毒,给予高糖处理,Realtime PCR和Western blot检测PDCD4表达水平。CCK8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot方法检测细胞中活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平,用黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测细胞分泌胰岛素水平。结果PDCD4 siRNA重组慢病毒能够有效下调高糖条件下胰岛β细胞中PDCD4的表达水平。高糖处理后的胰岛β细胞的增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,SOD活性降低,MDA含量升高,细胞分泌的胰岛素水平下调。敲低PDCD4可以明显提高高糖环境下胰岛β细胞增殖能力,减少细胞凋亡和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平,提高细胞中SOD活性,降低细胞中MDA水平,促进细胞分泌胰岛素。结论敲低PDCD4能够通过减轻高糖诱导的胰岛β细胞氧化损伤减少细胞凋亡,促进胰岛β细胞分泌胰岛素。     

PDGF-D稳定沉默后对乳腺癌细胞SK-BR-3生物学功能的影响

目的通过慢病毒载体沉默乳腺癌细胞系SK-BR-3中血小板衍生生长因子D(PDGF-D)基因的表达,探讨PDGF-D基因沉默后对乳腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用RT-PCR及蛋白质印迹方法检测5种乳腺癌细胞系中PDGF-D的表达状况;设计人PDGF-D基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染PDGF-D高表达的乳腺癌细胞系,运用蛋白质免疫印迹的方法鉴定其对PDGF-D基因的沉默效果;PDGF-D基因沉默后通过细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 PDGF-D在5种细胞系中存在差异性表达,其中具有低转移潜能的HT-29和SK-BR-3细胞与具有高转移潜能的LOVO、RKO和SW620细胞相比,具有更高的PDGFD表达水平(t=3.880,P0.05)。选取低转移细胞株中PDGF-D表达相对较高的SK-BR-3作为研究对象,构建PDGF-D shRNA慢病毒载体沉默SK-BR-3细胞中PDGF-D的表达,蛋白质免疫印迹结果提示,PDGF-D稳定沉默的SK-BR-3细胞系构建成功;在稳定沉默PDGF-D基因后,MTT细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验表明SK-BR-3细胞增殖能力增强(F=75.23,P0.001);流式细胞技术检测显示PDGF-D基因沉默后可抑制SK-BR-3细胞凋亡(F=84.44,P0.001);细胞小室实验结果显示,PDGF-D沉默后SK-BR-3迁移能力增强(F=155.9,P0.001)。结论 PDGF-D基因可能与乳腺癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了乳腺癌的发生、发展。     

circPRMT5在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞生物学性质的影响

目的探讨环状蛋白精氨酸甲基转移酶5(circPRMT5)在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞生物学性质的影响。方法选择2018年10月至2019年10月该院收治的93例结肠癌患者为研究对象,收集手术切除的结肠癌组织及癌旁正常组织,采用免疫印迹法(Western blot)检测结肠癌组织及癌旁正常组织中circPRMT5蛋白表达量。将人结肠癌SW480细胞分为空白对照组、阴性对照组、试验组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染10μg pEGFP-N1质粒,试验组转染10μg pEGFP-N1-circPRMT5质粒,采用CCK-8法检测各组SW480细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭试验检测各组SW480细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率,采用Western blot检测各组SW480细胞中circPRMT5蛋白表达量。结果结肠癌组织中circPRMT5蛋白表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05);试验组SW480细胞增殖率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量显著高于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);试验组SW480细胞凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);阴性对照组SW480细胞增殖率、凋亡率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论circPRMT5在结肠癌患者中呈高表达,circPRMT5高表达能够促进结肠癌细胞增殖、侵袭,抑制结肠癌细胞凋亡。