MALDI-TOF质谱仪在临床常见细菌鉴定中的应用

目的 探讨两种质谱仪Biotyper MS和Vitek-MS系统在临床常规分离细菌鉴定中的应用价值。方法 收集沈阳军区总医院2012年3月至2013年1月分离自血液、尿液、脑脊液、分泌物和痰液等标本的临床常见菌细菌149株(包括14个菌属和30个菌种)。同时采用两种MALDI-TOF-MS系统对上述菌株进行鉴定,结果与Vitek2compact常规生化鉴定进行比较,对3种方法检测结果不一致菌株用16Sr RNA测序进行确认。结果 在149株常见细菌中,Bruker Biotype属和种的正确鉴定率分别为98%和96%,Vitek-MS属和种的正确鉴定率分别为97%和95%。两者均无错误鉴定菌株。结论 对该组常见细菌,两种质谱仪鉴定结果比较差异无统计学意义(P>0.05),均呈现出优异的鉴定水平,适合用于临床微生物的常规鉴定。     

MALDI-TOF 质谱仪在临床常见细菌鉴定中的应用

目的：探讨两种质谱仪 Biotyper MS 和 Vitek-MS 系统在临床常规分离细菌鉴定中的应用价值。方法收集沈阳军区总医院2012年3月至2013年1月分离自血液、尿液、脑脊液、分泌物和痰液等标本的临床常见菌细菌149株（包括14个菌属和30个菌种）。同时采用两种 MALDI-TOF-MS 系统对上述菌株进行鉴定,结果与 Vitek2 compact 常规生化鉴定进行比较,对3种方法检测结果不一致菌株用16S rRNA 测序进行确认。结果在149株常见细菌中,Bruker Biotype 属和种的正确鉴定率分别为98％和96％,Vitek-MS 属和种的正确鉴定率分别为97％和95％。两者均无错误鉴定菌株。结论对该组常见细菌,两种质谱仪鉴定结果比较差异无统计学意义（P ＞0．05）,均呈现出优异的鉴定水平,适合用于临床微生物的常规鉴定。     

酵母菌快速鉴定技术的临床应用评价

近年来,随着广谱抗生素、免疫抑制剂等药物的广泛应用,酵母菌、酵母样菌所致的真菌感染性疾病不断增多,而其菌种鉴定结果在临床诊断、治疗中起着重要指导作用.为了提高其诊断率和治愈率,临床上急需一种方便、简捷的新技术代替传统的鉴定方法,为此,我们于2003年2月至2004年7月,采用由美国Remel公司生产的RapID Yeast Plus系统对44株酵母菌、酵母样菌进行鉴定,并与传统的鉴定方法和显色培养基鉴定结果相比较,现报告如下.     

酵母菌快速鉴定技术的临床应用评价

近年来，随着广谱抗生素、免疫抑制剂等药物的广泛应用，酵母菌、酵母样菌所致的真菌感染性疾病不断增多，而其菌种鉴定结果在临床诊断、治疗中起着重要指导作用。为了提高其诊断牢和治愈率，临床上急需一种方便、简捷的新技术代替传统的鉴定方法。为此．我们于2003年2月至2004年7月，采用山美国Remel公司生产的RaplD Yeast Plus系统对44株酵母菌、酵母样菌进行鉴定．并与传统的鉴定方法和显色培养基鉴定结果相比较．现报告如下。     

用微生物鉴定系统鉴定临床已分离的-酵母菌的评价

用气液相色谱法进行细胞脂肪酸分析已被用于来自环境和临床标本的细菌、分校杆菌、真菌的鉴定。特别是，数个调查者对一个商品化地、有效地借助于计算机的微生物鉴定系统（MIS）鉴定来自临床标本中的革兰氏阴性厌氧杆菌、革兰氏阴性非发酵菌和分校杆菌的能力已做过评价。最近，制造商发行了一个专门鉴定临床标本中的酵母菌计算机数据库。本次研究的目的是评价MIS鉴定常见已分离酵母菌的能力，这次研究分析了550林酵母备，这些酵母菌是作者实验室使用常规方法鉴定出来的新的临床分离备：包括白色念珠菌（n—294）、平滑老林菌（n一145）、…     

分离胶辅助VITEK-MS质谱仪快速鉴定血培养阳性菌的方法学研究

目的探讨用分离胶采血管联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱系统(VITEK-MS)快速鉴定血培养阳性菌的方法。方法收集2015年3~10月广州医科大学附属第一医院BacT/ALERT3D血培养仪报阳性,且直接涂片染色为革兰阴性菌的血培养标本50例,通过分离胶采血管直接从血培养瓶中提取细菌,采用VITEK-MS对细菌进行快速鉴定;同时用常规方法对细菌进行转种培养及鉴定,比较该方法的鉴定符合率。结果 50例血培养阳性的革兰阴性菌中,21例鉴定不出细菌名,29例鉴定出细菌名,阳性率58.0%,与常规鉴定方法阳性正确率为96.6%;分离胶联合VITEK-MS较常规法提前近24h。结论采用分离胶集菌联合VITKE-MS鉴定细菌的方法,对血培养阳性革兰阴性菌的鉴定符合率高,可以大大缩短鉴定的时间,方法快速、简便。     

临床工作者进行循证医学研究的方法学探讨

循证医学 (evidence based medicine,EBM)已经成为临床医学发展的必然趋势。但是 EBM的兴起仅仅是近 30年来的事情 ,相对于现代医学 (经验医学 )的漫漫两千年历史 ,EBM还是一株幼苗。因此 ,推动 EBM的蓬勃发展还需要做大量的工作 :EBM的哲学基础问题还需要哲学家和医学史学家的广泛论证 ;可以作为EBM证据的各类临床研究数量明显不足 ,解决这一问题尚需要大量的临床流行病学研究工作 ;及时、有效地获取大量信息并进行数据处理是 EBM研究的重要手段 ,实现这一目标有赖于信息学、数理统计学和计算机技术的发展 ;为使 EBM深入人心 ,需…     

巴尔通体MALDI-TOF MS数据库的建立与鉴定方法的评价

目的 建立巴尔通体的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)数据库和质谱鉴定方法,利用野生菌株进行验证、评价.方法 应用MALDI-TOF MS采集巴尔通体ATCC标准菌株和国内流行菌株的质谱数据,每株菌采集24张的质谱图集,获得特定的蛋白指纹图谱,汇总成不同种巴尔通体的标准质谱图,建立巴尔通体MA...     

MALDI-TOF MS在临床微生物鉴定中的常见问题及对策

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDITOF MS)是目前临床实验室中应用最为广泛的质谱技术之一。然而,MALDI-TOF MS微生物鉴定的上机前准备、检测分析及结果判读等方面均易出现各种问题,严重时会影响鉴定结果。经文献查阅及实验室长期经验总结、验证,该文对目前MALDITOF MS鉴定中存在的问题进行分析,并提出相应对策。     

MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性病原的临床应用

目的 了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接快速检测血培养报阳样本的可行性.方法 收集同济大学附属同济医院报阳血培养样本682例,从血培养瓶直接抽取血液至分离胶采血管离心富集细菌后,采用MALDI-TOF MS进行直接鉴定(快速质谱法).同时对报阳血培养标本进行涂片镜检及转种培养后,分别采...     

用MALDI-TOF MS技术快速鉴定临床分离棒状杆菌属细菌

目的评价基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定临床分离的非白喉棒状杆菌的价值。方法收集本院58株非白喉棒状杆菌,用MALDI-TOF MS和16S rRNA基因测序两种方法进行鉴定和比较。用MALDI-Biotyper软件构建不同棒状杆菌MALDI-TOF MS蛋白系统发育树。结果 58株非白喉棒状杆菌中,54株MALDI-TOF MS与16S rRNA基因测序鉴定结果一致,包括34株纹带棒状杆菌(Corynebacterium straitum)、11株杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)、3株C.resistens、2株解葡萄糖苷棒状杆菌(C.glucuronolyticum)、2株黏金色棒状杆菌(C.aurimucosum)和2株无枝菌酸棒状杆菌(C.amycolatum)。4株16S rRNA基因测序无法鉴定到种的菌株中,MALDI-TOF MS鉴定为2株产黏棒状杆菌(C.mucifaciens)、1株C.singulare和1株假白喉棒状杆菌(C.commune)。结论 MALDI-TOF MS可将棒状杆菌属细菌快速、准确地鉴定到种。     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

MALDI-TOF MS直接涂靶法快速鉴定丝状真菌的临床应用

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱直接涂靶法（质谱直涂法）快速鉴定丝状真菌的临床应用价值。方法对2010年1月至2017年12月首都医科大学附属北京同仁医院临床标本中分离的133株丝状真菌分别进行形态学、基因序列分析及质谱直涂法鉴定，并将鉴定结果进行分析比较。 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验。结果以基因序列分析结合形态学鉴定的结果为标准，将133株丝状真菌鉴定到种、复合群和属的鉴定率:质谱直涂法分别为64.66%、79.70%和96.24%，基因序列分析则分别为69.17%、83.46%和99.25%，而形态学鉴定分别为68.42%、84.21%和93.23%。 质谱直涂法与另外两种方法的种、复合群和属的鉴定率的差异无统计学意义（χ2值分别为0.611、0.625、2.728和0.516、0.915、1.206，P值均＞0.05）。 质谱直涂法将77株曲霉属中61.04%、88.31%和98.70%的菌株分别鉴定到种、复合群和属，将14株青霉属中64.29%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属，还将42株其他丝状真菌中的71.43%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属；因数据库中真菌种类不足，致3.76%（5/133）的真菌无效鉴定。结论MALDI-TOF MS直接涂靶法鉴定丝状真菌的能力可与形态学鉴定和基因序列分析相媲美，因其快速且操作简便，临床应用值得推广。     

纹带棒状杆菌的分离鉴定及方法学评价

棒状杆菌属是革兰阳性菌,除白喉棒状杆菌外,一般是人或动物鼻咽部的正常菌群。近年来,国外一些学者报道这些条件致病菌可致医院内感染,引起人类组织和血行感染。国内仅见个案报道。棒状杆菌的分离鉴定一直是国内外学者研究的热点,不同种的棒状杆菌的耐药性不尽相同,所以有必要将棒状杆菌属鉴定到种水平。为了解全自动微生物鉴定系统检测棒状杆菌的可靠性,我们采用VITEK-32、API系统、传统的生化特性分析鉴定临床分离的20株纹带棒状杆菌。     

百日咳鲍特菌MALDI-TOF MS谱库的扩展及鉴定效果评价

目的对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定百日咳鲍特菌谱库进行扩展。方法采用Microflex LT软件,用经全基因组测序确认的9株百日咳鲍特菌和1株副百日咳鲍特菌构建蛋白质指纹谱库,对布鲁克数据库进行扩展。对标准菌株ATCC 29213、ATCC 25922、ATCC 700603、ATCC 27853进行MALDI-TOF MS鉴定,评价扩展库的准确性。选取6株百日咳鲍特菌,每个菌株取3个菌落分别用MALDI-TOF MS鉴定,评价试验的精密度。采用36株临床分离株验证扩展谱库对百日咳鲍特菌的识别能力,并进行扩展库前后鉴定结果比较。结果成功构建9株百日咳鲍特菌和1株副百日咳鲍特菌参考谱库,并扩展现有布鲁克数据库Taxonomy(5989)数据库为Taxonomy(5989+)。扩展库准确鉴定4株标准菌株ATCC 29213、ATCC 25922、ATCC 700603、ATCC 27853,对鲍特菌鉴定无干扰;6株百日咳鲍特菌的重复鉴定符合率为100%,精密度良好。用于外部验证的36株菌经扩展后数据库鉴定,种水平鉴定率达86.1%。结论百日咳鲍特菌质谱库的扩展提升了地区性分离菌株鉴定能力。     

分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS快速直接鉴定法的建立与评价

目的建立并评价分枝杆菌液体培养基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定技术。方法收集2014年6月至2016年5月首都医科大学附属北京同仁医院1 466例呼吸科住院患者痰标本,进行BactecTMMGITTM960分枝杆菌快速液体培养(简称液体培养),以其中报警并经萋-尼抗酸染色确认为抗酸杆菌的105例(无重复病例)为研究对象,对比本实验室自行设计并改良的"同仁"分枝杆菌液体培养直接鉴定法(培养液经特殊前处理后直接进行MALDI-TOF MS鉴定)及传统鉴定法(培养液转种于L-J固体培养基,得到菌落后再进行MALDI-TOF MS鉴定),并通过16S rRNA基因及16S~23S rRNA基因间隔区测序验证。结果以基因测序鉴定为金标准,液体培养直接鉴定与传统鉴定法结果一致率为100%;二者鉴定至属的准确率均为100%(105/105),鉴定至种的准确率均为99.05%(104/105)。液体培养后直接鉴定与传统鉴定法MALDI-TOF MS鉴定分值≥2.000分的比例差异无统计学意义(χ~2=2.952,P=0.086)。4例分值1.700分的菌株谱图杂峰较多而有效峰较少。结论本实验室自行设计的"同仁"分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS直接鉴定法鉴定结果准确,缩短了分枝杆菌培养和鉴定的时间,且可保证生物安全,对分枝杆菌感染的快速诊断和及时治疗意义重大,适用于我国各级临床实验室。     

简单可靠消费低的临床酵母菌鉴定方案

从临床标本分离鉴定酵母菌到种级水平是困难的但又是必要的 ,用生化形态学研究鉴定酵母菌因费时费力常不能用于临床 ,试剂盒系统虽已被广泛使用但比较昂贵 ,数据库资料受限 ,自动系统也同样受限。随着深受好评的 Chorm念珠菌培养基 (CMA)问世 ,作者设计一个简单、迅速的方案 ,用于临床常规鉴定重要酵母菌 ,并研究 Chorm培养基扩大使用范围。作者将 Chorm培养基上菌落形态与玉米吐温80琼脂 (CTA)上形态结合 ,与 API2 0 c Aux或 API32 c系统获得的鉴定结果比较。共研究 35 2株酵母菌和 1株威克海母原藻 ,其中 11株酵母菌在CMA和 CTA…