输血相关急性肺损伤小鼠模型的建立

目的探索建立输血相关急性肺损伤(TRALI)小鼠模型。方法雄性Balb/c小鼠随机分为5组(分别命名为A、B、C、D及E组),前4组小鼠5只/组,E组15只/组。E组(TRALI模型组):每只小鼠腹腔注射1 mg/m L脂多糖(LPS)预处理,注射剂量为0.1 mg/(kg·只),24 h后尾静脉注射1 mg/m L H2Kd单克隆抗体,注射剂量为2.25mg/(kg·只),建立TRALI小鼠模型;其余均为对照组,其中A为空白对照组,B为注射LPS组,C为注射LPS及24 h后注射生理盐水(NS)组,D为注射H2Kd单克隆抗体组。分析各组小鼠肺组织病理、肺湿重/干重比、直肠温度、死亡率等指标,建立TRALI小鼠模型,并以此为基础,对阿司匹林(ASA)干预小鼠TRALI的效果做验证。结果与对照组相比,TRALI模型组小鼠2 h的直肠温度(31.060±0.472)℃,明显低于其他各对照组小鼠(P0.01),肺湿重/干重比为7.642±1.309,则较其他各组明显增加(P0.01);TRALI模型组小鼠肺组织出现肺泡间隔增厚,肺泡壁断裂,肺泡内纤维蛋白浸润等病理变化,符合TRALI急性肺损伤典型的症状及体征;在ASA干预后2 h,TRALI小鼠死亡率为0,肺水肿明显减轻(P0.01)。结论成功建立了TRALI小鼠模型,该模型能够模拟TRALI的临床表现,可重复性强,稳定性好,有助于解释TRALI病理过程、探索TRALI的救治措施。     

中和IL-17A对输血相关急性肺损伤小鼠的保护作用

目的观察IL-17A在输血相关急性肺损伤小鼠中的表达,探讨中和IL-17A对输血相关急性肺损伤小鼠的影响。方法采用"二次打击"(LPS+MHC-Ⅰm Ab)模型,8~10周BALB/C雄性小鼠32只,应用随机数据表完全随机分成4组:正常(normal)组、LPS+MHC-Ⅰm Ab组、LPS+isotype组、LPS+PBS组,每组8只。腹腔注射LPS 0.1 mg/kg,24 h后尾静脉分别给予MHC-Ⅰm Ab(1 mg/kg)或等体积的isotype和PBS,2 h后检测肺泡灌洗液和外周血中IL-17的表达。另选取32只BALB/C雄性小鼠,观察anti-IL-17A抗体预处理对肺损伤的影响,随机分为4组:normal组、LPS+MHC-Ⅰm Ab+anti-IL-17A组、LPS+MHC-Ⅰm Ab+isotype组、LPS+MHC-Ⅰm Ab+PBS组,提前1 h尾静脉注射anti-IL-17A(50μg/只)、isotype(50μg/只)或等体积的PBS,二次打击造模后2 h取材,测定肺泡灌洗液中蛋白浓度和肺干湿重比,检测肺泡灌洗液和外周血中细胞因子水平,计数肺脏中性粒细胞,评估各组小鼠肺损伤和炎症反应程度。数据采用Prism5.0(Graph Pad Software,USA)软件包进行统计学处理。结果与其他三种相比,二次打击模型(LPS+MHC-Ⅰm Ab)组小鼠肺泡灌洗液和外周血中IL-17A表达显著升高,且肺组织中性粒细胞数明显增多。anti-IL-17A预处理后,肺组织中性粒细胞浸润减少,肺干湿重比减小,肺泡灌洗液蛋白含量降低,外周血促炎因子水平显著下调。结论 IL-17A在输血相关急性肺损伤中显著升高,anti-IL-17A预处理后显著改善输血相关急性肺损伤小鼠炎症反应和肺组织损伤。     

内皮祖细胞移植在急性肺损伤治疗中的展望

内皮祖细胞是骨髓来源的祖细胞,可分化为成熟的内皮细胞,参与血管的修复和重建.广泛的毛细血管膜损伤、血管膜通透性增加是急性肺损伤的主要病理基础,调节修复损伤的肺血管将是减少高死亡率的新治疗靶向;研究发现,内皮祖细胞有助于损伤肺血管系统的修复,对ALI/ARDS预后具有重要作用.本文系统回顾内皮祖细胞的相关知识及介绍近年来在急性肺损伤研究中所取得的进展.     

内皮抑制素对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用

[目的]研究内皮抑制素(Endostatin,ES)对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用及其可能机制.[方法]雄性昆明小鼠(20~22g)150只随机分为假手术组、脓毒症模型组、内皮抑制素干预组,通过盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症模型.术后用内皮抑制素(2mg/kg,ip)干预,假手术组及模型组于同时间点给予等量生理盐水.在术后6h、12h留取标本,检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,同时行肺组织微血管渗漏实验、测肺湿干重比值(W/D),取部分肺组织进行组织病理学分析,并检测肺组织p38MAPK信号通路活化情况.[结果]与脓毒症模型组比较,内皮抑制素能提高脓毒症CLP模型存活率,降低血清TNF-α、IL-6、VEGFc水平,减轻肺组织的微血管渗漏、湿干重比和病理改变,同时抑制脓毒症CLP模型诱导的肺组织p38MAPK的磷酸化.[结论]内皮抑制素对脓毒症小鼠急性肺损伤具有保护作用,其机制可能与内皮抑制素能抑制过度的炎症反应、改善血管通透性及调节p38MAPK信号通路有关.     

内皮祖细胞移植对肺损伤炎症状态的影响研究

将30例同遗传背景SD大鼠随机分为正常对照组、肺损伤组以及细胞移植组,每组10只;对肺损伤组和细胞移植组中的大鼠采用尾静脉注射脂多糖的方式建立急性肺损伤模型,正常对照组则给予等量的磷酸盐缓冲溶液,对各组大鼠的肺损伤炎症状态进行对比分析。结果与肺损伤组对比,细胞移植组中肿瘤坏死因子α明显较低,但两组对比无统计学意义(P0.05);与对照组(15.22±3.34)ng/L相比较而言,肺损伤组和细胞移植组中的肿瘤坏死因子α明显较高,差异有统计学意义(P0.05);且细胞移植组当中的抗炎递质白细胞介素10为(62.83±5.31)ng/L,也要明显高于肺损伤组,差异有统计学意义(P0.05)。细胞移植对白细胞介素10的表达具有促进作用,下调肿瘤坏死因子α的表达,有利于改善损伤肺组织的炎症状态,在临床实践中值得实现进一步的推广。     

内皮祖细胞移植对急性肺损伤大鼠肺组织内皮素的影响

目的 观察内皮祖细胞(EPCs)移植对损伤肺组织内皮素(ET-1)表达的影响,从而进一步探讨干细胞移植对肺损伤的治疗作用.方法 将清洁级同遗传背景的SD大鼠24只,随机分为假损伤组、肺损伤组和细胞移植组,每组8只.采用密度梯度离心法分离、培养SD大鼠的骨髓EPCs.肺损伤组、细胞移植组大鼠经大鼠尾静脉注射脂多糖5 mg/kg建立肺损伤模型.造模后半小时,肺损伤组、细胞移植组大鼠经尾静脉注入内皮祖细胞悬液0.5 mL ,约2×106 个细胞;假损伤对照组大鼠同法注入等量的PBS溶液0.5 mL .分别于1周后处死动物取肺组织,采用RT-PCR、Western blot方法分析ET-1的表达情况.结果 与假损伤组相比,肺损伤组中的ET-1显著增加,细胞移植组中ET-1表达较肺损伤组显著减少,组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 内皮祖细胞移植可以下调急性损伤肺组织的ET-1的表达,对急性肺损伤具有治疗作用.     

内皮祖细胞移植对肺损伤炎症状态的影响

背景：内皮祖细胞在维持内皮系统功能及血管损伤后的修复中起重要作用,已广泛应用到心血管、下肢缺血、血管修复等多种疾病,但在炎症疾病及肺损伤中的研究较少。目的：观察内皮祖细胞移植对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征肿瘤坏死因子α及白细胞介素10的影响,探讨细胞移植能否改善急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的炎症状态。方法：同遗传背景SD大鼠30只随机均分为正常对照组、肺损伤组、细胞移植组。采用密度梯度离心法分离、培养SD大鼠的骨髓内皮祖细胞。肺损伤组、细胞移植组大鼠经尾静脉注射脂多糖建立急性肺损伤模型;正常对照组仅给予等量的磷酸盐缓冲溶液。造模半小时后,正常对照组、细胞移植组大鼠经尾静脉注入内皮祖细胞悬液;肺损伤组大鼠同法注入等量的磷酸盐缓冲溶液。结果与结论：与肺损伤组相比,细胞移植组中白细胞介素10的水平显著增加（P〈0.001）,肿瘤坏死因子α的表达下调,但差异无显著性意义（P〉0.05）。细胞移植促进白细胞介素10的表达,下调肿瘤坏死因子α的表达,能改善损伤肺组织的炎症状态。     

丹参对小鼠急性肺损伤的保护作用研究

目的:探讨丹参对内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)保护作用及其机制。方法:通过腹腔注射大肠杆菌LPS(5ml/kg)诱导小鼠ALI。30只雄性C57小鼠随机均分为正常组、模型组和丹参组,每组各10只。丹参组于LPS注射前1h腹腔注射丹参(10mg/kg),模型组和正常组注射等量生理盐水。LPS注射后6h,观察各组血气、肺组织病理形态、肺湿/干比(W/D),支气管肺泡灌洗液、肺组织和血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的表达,以及IκB-α、TLR-4、MyD88、p-p65和p65蛋白表达。结果:丹参能有效降低LPS所致肺组织血气和病理学改变,减少肺W/D以及TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR-4、MyD88和p-p65的表达,增加IκB-α的表达。结论:丹参对ALI小鼠有保护作用,其作用机制与抑制TLR-4/NF-κB介导的炎症相关。     

血管内皮祖细胞介导的急性肺损伤的保护机制的研究

目的探讨体外培养的血管内皮祖细胞(EPCs)对急性肺损伤的保护作用。方法体外培养被荧光标记的EPCs,取80只BALB/C小鼠,平均分成4组,对照组(control组),急性肺损伤组(ALI组),急性肺损伤后注射EPCs组(ALI+EPCs组),无急性肺损伤注射EPCs组(EPCs组),四组分别在实验3d后同时处死后测肺水含量(EVLW)、肺通透指数(PPI),分别对其相关性进行观察和分析,并观察其肺组织冰冻切片的荧光表达。结果 ALI+EPCs组肺组织冰冻切片荧光表达EPCs量较EPCs组多,ALI组的术后肺组织EV-LW、PPI与control组和EPCs组相比有显著差异(P<0.05),ALI+EPCs组的术后EVLW、PPI与control组、ALI组和EPCs组均有显著差异(P<0.05),而control组和EPCs组的术后EVLW、PPI之间无显著差异(P>0.05)。结论体外培养的EPCs对损伤的肺血管内皮细胞有显著地趋化修复作用,因而对急性肺损伤有显著保护作用。     

脂联素基因修饰内皮祖细胞移植对缺血性脑卒中小鼠神经保护作用的研究

目的：观察脂联素(adiponectin,APN)修饰的内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)对缺血性脑卒中模型小鼠脑组织修复和神经功能恢复的作用。方法：构建表达APN基因的慢病毒并转染EPC,将过表达APN的EPC移植至短暂性大脑中动脉缺血(transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO)模型小鼠脑内,即为EPC-APN组,另设EPC组[移植EPC-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)]及空白对照组(磷酸盐缓冲液处理)。在tMCAO术后1、7、14 d,用焦油紫染色测量梗死面积,并对小鼠进行神经行为学评分;观察tMCAO术后14 d在梗死周边区检测血管新生情况;采用TUNEL检测内源性细胞的凋亡情况。采用蛋白印迹法检测小鼠血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)。结果：成功制备过表达APN的EPC。EPC-APN组小鼠在脑缺血后第14天的脑萎缩体积百分比,较EPC组和空白对照组相比显著减少(7.2%...     

小鼠内皮祖细胞的培养和移植

背景:内皮祖细胞移植在缺血性心脑血管疾病、创伤愈合等血管类疾病的治疗中展现出广泛的应用前景,目前内皮祖细胞在肺部疾病的研究还比较少.目的:分离和诱导培养骨髓来源的内皮祖细胞,并进行鉴定;经气管移植,观察内皮祖细胞的定位.设计、时间及地点:细胞体外培养和体内移植实验,于2008-05/2009-04在中南大学湘雅二医院中心实验室完成.材料:6周龄C57BL/6J小鼠17只,随机数字表法分为5只供体,10只受体,2只供细胞双荧光染色、免疫细胞化学实验.方法:冲洗小鼠长骨骨髓,用密度梯度离心法收集单个核细胞层,内皮细胞培养液EGM-2MV培养,观察细胞形态,将培养第7天内皮祖细胞与Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白37℃孵育4 h,以检测内皮祖细胞对Dil-乙酰化低密度脂蛋白的摄取,再用20 g/L多聚甲醛固定细胞10 min,固定后用PBS浸洗,将FITC标记的凝集素Ⅰ加入上述标本,37℃孵育1 h,PBS浸洗,通过激光共聚焦显微镜鉴定FITC-凝集素Ⅰ和Dil-乙酰化低密度脂蛋白.主要观察指标:将标记CM-Dil的内皮祖细胞经气管注入小鼠体内,10 d后观察其在体内的定位.免疫组织化学方法检测细胞血管性血友病因子阳性率.移植后内皮祖细胞在体内的定位.结果:贴壁细胞呈现类圆形、纺锤形或多边形,7～14 d可见部分贴壁细胞生长呈"铺路石"样外观.胞浆摄取Dil-乙酰化低密度脂蛋白,显示红色,胞膜结合FITC-凝集素Ⅰ,显示绿色,双染色阳性细胞为黄色,为正在分化的内皮祖细胞,双阳性细胞达90%以上,血管性血友病因子阳性率90%以上.经气管移植后标记CM-Dil的内皮祖细胞可定位至肺内气管、血管及肾、脾血管.结论:用密度梯度离心法在EGM-2MV培养体系下可以获得较高纯度的内皮祖细胞,该细胞气管移植后可定位至肺内气管、血管及肾、脾血管.     

输血相关的急性肺损伤

输血是一种异体移植。除抢救生命外，尽可能不输血。输血可发生多种反应，除可传播疾病外，有2％～10％的病人可发生轻重不等的不良反应，世界上输血死亡率可达0．5％～1．0％。但对于输血相关的急性肺损伤很多人却知之甚少。输血相关的急性肺损伤（TRALI）是指输血过程中或输血后6h内发生的一种急性呼吸窘迫综合征。其病理生理、临床表现及治疗与其它原因所致的急性呼吸窘迫综合征相似，     

输血相关的急性肺损伤

TRALI是美国目前最常见的输血引起死亡的原因,超过ABO不相容和细菌污染。虽然仍不知道美国TRALI的实际发生率,但随着认识的提高,文献中TRALI病例报告数量自1985年以来显著增加。但对输血引起的许多类似的临床并发症仍然缺乏了解。2004年4月,在加拿大的多伦多召开了一次题为“关于TRALI的认识”的交流讨论会议。由加拿大血液机构和Hma-Qubec发起会议,得到了国际输血协会下属的BEST（Biomedical Excellence for Safer Transfusion）委员会的支持。许多专家提供了资料,大约240人出席了会议,包括会议专业组的11名成员。他们广泛代表了内科和其他学科的专家,如输血医学、流行病学、免疫学、麻醉学、急救医学、伦理学以及定期捐血者和长期受血者。完整的会议记录已经发表。     

内皮祖细胞对兔急性肺损伤血管通透性的影响

目的 观察并分析内皮祖细胞对急性肺损伤兔肺血管通透性的影响。方法 将96只雄性新西兰兔分为4组：空白对照组（BC组,16只）、空白对照＋内皮祖细胞治疗组（BC＋EPC组,16只）、急性肺损伤组（ALI组,32只）、急性肺损伤＋内皮祖细胞治疗组（ALI＋EPC组,32只）。ALI组和ALI＋EPC组兔注射乳化油酸建立模型,造模成功后0．5h,ALI-EPC组和BC＋EPC组各注射约10^6个内皮祖细胞的PBS液。所有实验动物予注射乳化油酸前（哪及建立急性肺损伤模型后0．5h（T。）、6h（T2）、12h（T3）、24h（T4）、48h（T5）分别监测氧分压（PaO2）。ALI组和ALI＋EPC组兔在T2至T5,BC组和BC＋EPC组在T4至T5时间点分别处死8只兔,比较各组兔的肺湿干重比值、肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量、肺毛细血管通透指数（LPI）、肺泡病理评分（DAD）及组织病理检查在实验前、后的变化。结果ALI＋EPC组BALF蛋白含量在T2至T5时均较ALI组显著降低,氧分压、肺湿干重比值与LPI在T3至T5时与ALI组比较差异有统计学意义,而DAD评分仅在T4和L时较ALI组显著降低（P均〈0．05）。而BC组与BC＋EPC组各指标在各时间段之间比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）。T5时,ALI＋EPC组病理图中炎症细胞及蛋白质渗出较Au组明显好转。结论 内皮祖细胞可以改善急性肺损伤兔肺的血管通透性。     

输血相关急性肺损伤研究进展

输血相关急性肺损伤(transfusion related acute lung injury,TRALI)系指输入血液、血浆及相关制品6h内急性发作的临床综合症[1],主要表现为肺部受损的症状,是一种严重的非传染性的输血并发症,发作快,预后不佳,致死率可达6％～10％[2-4].TRALI目前已成为输血医学界关注和研究的焦点,但仍有诸多机制尚不明确.笔者从其发病机制、临床表现及诊断、治疗及预防等方面综述如下.1发病机制1.1抗原抗体学说抗原抗体学说的主要观点认为,献血者血液中存在有抗受体细胞的抗体,而受体血液中也可存在抗供体细胞的抗体,输血后双方抗原抗体相结合后发生一系列的反应从而导致肺损伤[3].临床上最常见的主要是供者血液成分中含有抗对受血者白细胞抗原的抗体,而受血者的白细胞抗体与供血者的白细胞抗原发生反应则较少见.抗原抗体发生反应后,抗体可直接黏附并损伤受血者肺部内皮细胞或肺泡上皮细胞,从而增加肺毛细血管的通透性,最终导致肺水肿的发生;此外,Nishimura等[5]证实抗原抗体反应还能激活补体,产生的补体片段可促使肺部毛细血管渗漏,迅速加重急性肺损伤.但并不是所有的TRALI患者都表现为抗原抗体阳性,说明TRALI还存在其他的发病机制.     

内皮祖细胞移植对百草枯中毒所致急性肺损伤MAPK通路蛋白表达的影响

目的观察百草枯(PQ)中毒导致的急性肺损伤后内皮祖细胞(EPCs)移植治疗对大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白表达的影响。方法36只SD雄性大鼠按随机数字表法平均分成三组:正常对照组、PQ损伤组和EPCs治疗组,每组12只。EPCs移植后24 h处死大鼠并收集大鼠肺组织和血清。分别采用比色法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,血气分析仪检测大鼠动脉血氧分压(PaO₂),肺组织切片后通过HE染色对肺损伤程度进行评估,Western blot方法测定肺组织中MAPK信号通路蛋白表达。结果与对照组比较,PQ损伤组大鼠血清IL-1β(μg/L:25.16±1.71 vs.34.94±1.68)和TNF-α(μg/L:51.17±2.33 vs.78.46±5.16)含量明显增加(P<0.05),PQ损伤组大鼠肺组织中MDA(nmol/m L:3.08±0.19 vs.6.89±0.44)含量明显增加(P<0.05),但是SOD(U/m L:249.11±4.71 vs.191.15±3.21)活性降低,且PaO₂(mm Hg:92.19±3.31 vs.40.18±5.54)下降(P<0.05);与PQ损伤组比较,EPCs治疗组大鼠SOD(U/m L:191.15±3.21 vs.216.64±2.39)活性升高(P<0.05),MDA(nmol/m L:6.89±0.44 vs.5.13±0.40)、IL-1β(μg/L:34.94±1.68 vs.26.11±1.43)和TNF-α(μg/L:78.46±5.16 vs.60.18±4.31)含量降低(P<0.05),PaO₂(mm Hg:40.18±5.54 vs.56.81±5.16)升高(P<0.05)。MAPK通路蛋白的磷酸化水平在对照组中仅有少量表达,而给予百草枯后表达量显著升高(P<0.05),使用EPCs治疗后各蛋白表达量又显著降低(P<0.05)。结论百草枯中毒可激活包含p38MAPK、C-JUN氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)在内的MAPK通路。EPCs可以改善PQ中毒大鼠症状,减少肺部损伤,改善供氧,其机制可能与抑制MAPK通路各蛋白磷酸化有关。     

输血相关急性肺损伤的研究进展

正临床输血可以引起输血相关急性肺损伤TRALI,临床表现以急性呼吸窘迫和非心源性肺水肿为主,是威胁生命的输血并发症之一[1]。TRALI作为目前导致输血相关死亡的主要因素之一,死亡率可达到5%～14%[2]。TRALI是美国导致输血相关性死亡的首要因素[3]。自美国食品与药品管理局(FDA)将TRALI明确列为目前美国输血导致死亡和出现     

输血相关急性肺损伤的研究进展

输血相关性急性肺损伤(transfusion-related acute lung injury,TRALI)是输血严重不良反应之一,其发病急,病情重,死亡率高。然而TRALI的病理生理学机制尚未完全阐明,公认的机制可能有:抗体介导的TRALI、非抗体介导的TRALI、二次打击模型和阈值模型。我们将从发病机制、预防措施等方面对TRALI最新研究进展作一综述,为TRALI的干预治疗提供新的思路。     

输血相关急性肺损伤的预防

输血相关的急性肺损伤(transfusion related acute lung in jury,TRALI)是输血并发症.美国食品药品管理局报告,最近几年TRALI引起的死亡率已位居输血不良反应首位,但仍有许多问题尚未弄清[1].2004年4月加拿大血液服务机构和Hémaentitled召开了主题为"关于TRALI认识"的研讨会,研讨的问题范围包括如何定义TRALI TRALI的病理机制、对具有潜在TRALI风险的献血者是否排除其献血或延缓其献血、是否有能够排除具有潜在TRALI风险献血者的实验室筛查试验.