甘草提取物(Gc34)对MDA-MB-231乳腺癌细胞体外促凋亡作用研究

目的观察甘草提取物Gc34对MDA-MB-231细胞的体外促凋亡作用。方法 MTT法检测不同时间(24、48、72h),不同浓度(25、50、75、100μg/ml)Gc34对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;采用AO/EB染色、透射电镜实验判断凋亡;流式细胞仪检测其凋亡率。结果 MTT结果显示,随着Gc34作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降,Gc34对MDA-MB-231细胞体外增殖抑制呈明显的剂量-时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为65.38μg/ml;AO/EB染色表明药物组细胞出现明显凋亡迹象,而阴性对照组中细胞形态完好;透射电镜结果显示,75μg/ml Gc34处理72h后细胞出现典型凋亡形态学改变;流式细胞仪分析结果显示,随Gc34剂量增加细胞凋亡率逐渐上升,呈明显的剂量依赖性。结论甘草提取物Gc34在体外能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡。     

氢醌致细胞凋亡及其机制的体外实验研究

目的了解氢醌(HQ)致细胞凋亡作用及其氧化损伤机制。方法用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双标记法观察HQ对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)的凋亡作用;用DCFH-DA法检测不同浓度HQ处理V79细胞0.5 h和1 h后活性氧(ROS)的含量。结果AO/EB双标记法显示氢醌对V79细胞有明显促凋亡作用,并呈浓度反应关系。DCFH-DA法检测结果显示,在设置的4个浓度范围内,活性氧含量随着浓度的增加而增加(P<0.01);染毒0.5 h组各浓度ROS含量均高于染毒1 h组各相应浓度(P<0.01),且呈浓度依赖关系。结论在体外培养条件下,低浓度HQ能致V79细胞凋亡,活性氧产生的高峰在0.5 h,表明HQ引起的细胞损伤是一种氧化损伤。     

城市大气PM10对HLF细胞增殖和细胞周期与凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

[目的]研究北京市大气可吸入颗粒物（PM10）对HLF细胞增殖、周期、凋亡以及细胞内钙离子浓度变化的影响.[方法]以人胚肺成纤维细胞（human lung fibroblast,HLF）为模型,PM10终浓度分别为25、50、100、200、400μg/ml,染毒20～24 h,用MTT法测试PM10对HLF增殖的影响,用流式细胞法测试细胞内钙离子浓度和细胞周期,以AnnexinV-FITC/PI双染用流式细胞仪检测细胞凋亡.[结果]PM10浓度＜25 μg/ml刺激HLF增殖,使S期缩短,但随着PM10浓度增加,抑制细胞增殖作用增强,S期、G2/M期细胞明显增多,当PM10浓度＞100μg/ml,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.随着PM10浓度增加细胞凋亡增加,存在剂量-反应关系.PM10作用于HLF 1 h可引起细胞内钙浓度明显增加,有剂量-反应关系,随着作用时间的延长细胞内钙浓度进一步升高,发生钙超载.[结论]PM10对HLF有一定毒性,具有低浓度刺激细胞增殖、高浓度抑制增值的双向作用;使细胞阻滞在S期和G2/M期,并可诱导细胞凋亡.其作用机制可能与影响细胞内钙离子浓度变化有关.     

无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。方法 采用细胞划痕染料标记示踪技术,以荧光染料在细胞间的扩散作为评价缝隙连接通讯的指标,观察亚砷酸和砷酸对原代培养的人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。结果 亚砷酸可显抑制人皮肤成纤维细胞间荧光黄染料的扩散,在0．005-5．0μmol／L浓度范围内有明显的剂量依赖关系。砷酸也可明显抑制荧光黄染料在人皮肤成纤维细胞间的扩散,但剂量依赖关系不明显。进一步的研究发现,亚砷酸可显增高人皮肤成纤维细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C的活性,其中对胞膜蛋白激酶C活性的作用更为明显。结论 无机砷可显抑制人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯,提示它们在癌症发生的促长阶段扮演重要角色。无机砷对细胞缝隙连接通讯的抑制可能与其引起细胞内蛋白激酶C的异常活化有关。     

姜黄素对放射性血管内皮损伤的保护作用

目的 探讨姜黄素对放射性血管内皮损伤的保护作用及其机制.方法 对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离培养后分组,以2、4、6和8Gy4种不同剂量进行β线照射,并设未照射组为对照.分别通过光学显微镜及电子显微镜观察细胞形态和超微结构改变;流式细胞仪法观察各组的凋亡率和坏死率以及细胞内活性氧(ROS)生成;检测细胞照射前后乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 细胞经照射后,形态及超微结构改变均显示为典型的凋亡改变,而姜黄素预处理组的细胞凋亡率和坏死率均明显轻于其他实验组,差别有统计学意义(P＜0.05).LDH活力和MDA含量在各照射组均高于姜黄素预处理组(P＜0.05),照射后各组ROS含量明显升高,呈剂量依赖性改变,明显高于姜黄素预处理组,差别均有统计学意义(P＜0.05).结论 放射线照射可导致HUVEC凋亡和坏死,细胞内LDH活力和MDA含量增高,且呈剂量依赖性.姜黄素对受照射后的HUVEC凋亡和坏死有保护作用.     

无机砷对人皮肤成纤维细胞增殖毒性的实验观察

目的观察亚砷酸钠诱导体外培养的人皮肤成纤维细胞的作用，探讨砷性皮肤损伤的分子机制。方法通过直接细胞计数法和噻唑蓝（MTT）还原法检测亚砷酸钠对皮肤成纤维细胞生长的影响。结果与对照组比较，皮肤成纤维细胞经不同剂量的亚砷酸钠诱导后，吸光度值均有改变，存在剂量效应关系（P〈0.01）。0．5～5．0μmol／L浓度的亚砷酸钠对皮肤成纤维细胞有明显的增殖作用，而10μmol／L浓度的亚砷酸钠产生明显的毒性作用。结论低浓度NaAsO2、NaAsO2刺激人皮肤成纤维细胞增殖，高浓度具有细胞毒性。     

氢醌对体外培养鼠角质形成细胞毒性作用

目的 研究氢醌(Hydroquinone,HQ)对体外培养正常鼠表皮角质形成细胞的毒性作用.方法 用0,1,2.5,5,10和25μg/ml的氢醌处理鼠角质形成细胞,检测氢醌对角质形成细胞的增殖抑制率、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞中活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量,并对超氧化物歧化酶(SOD)和还原性谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活力进行测定.结果 氢醌可引起角质形成细胞活力剂量-时间依赖性降低;角质形成细胞用0,1,2.5,5,10和25 μg/ml氢醌处理4,8,12,24 h后,LDH释放率呈明显的时间-剂量-反应关系;同样剂量的氢醌处理角质形成细胞,12 h后可引起ROS、MDA含量呈浓度依赖性增加(最低浓度为5μg/ml),而SOD及GSH-Px活力呈浓度依赖性抑制(最低浓度为2.5μg/ml),与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 在体外培养条件下,氢醌可通过脂质过氧化和氧化应激对鼠角质形成细胞产生明显的毒性作用.     

低剂量脉冲超声波的细胞生物学作用

目的研究低剂量脉冲超声波(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对体外培养细胞的生物学作用。方法以LIPUS作用于人皮肤成纤维细胞0~40 min,采用MTT比色法、酶谱法和Western blot法观察细胞增殖效应。以LIPUS作用于人皮肤成纤维细胞和人胰腺癌细胞(Mia Pa Ca-2)0~100 min,用Annexin V法检测凋亡效应。结果在0~40 min LIPUS刺激下,细胞活性、细胞所分泌的活性介质等增加,细胞内蛋白磷酸化水平升高;LIPUS刺激超过60 min后,凋亡细胞数增加,且LIPUS刺激达100 min时,凋亡细胞数增加更加明显。结论短时间LIPUS刺激能促进细胞增殖,超过一定时间则会抑制细胞生长,甚至引起细胞凋亡。     

樟脑磺哑嗪诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制的研究

目的测定不同浓度的樟脑磺哑嗪对宫颈癌HeLa促凋亡作用的影响,并进一步探讨其促凋亡的机制。方法以不同浓度的樟脑磺哑嗪(0.5～10μmol/L)处理HeLa细胞24 h后,倒置显微镜检测细胞形态变化,MTT方法检测细胞生长抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT试验及细胞形态学结果显示,不同浓度的樟脑磺哑嗪对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,并可导致细胞形态改变,且具有剂量依赖性,其IC50为2.6μmol/L;FCM检测表明不同浓度的樟脑磺哑嗪可使细胞早期凋亡比率增加。Western blot法检测结果显示,不同浓度樟脑磺哑嗪可使HeLa细胞p53、Cleaved-Caspase-3蛋白、89-kDa PRPP蛋白表达增加且呈剂量依赖性。结论樟脑磺哑嗪可以诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制可能为激活Caspase依赖途径,并活化作用底物PARP来实现。     

过氯酸铵及碘化钾联合作用对人甲状腺细胞凋亡及氧化应激的影响

目的研究过氯酸铵(AP)及碘化钾(KI)联合作用对人甲状腺细胞(nthy-ori3-1)氧化应激及诱导凋亡的影响。方法体外培养nthy-ori3-1细胞,不同浓度AP(0、5、10、20、40mmol/L)及KI(5mmol/L)联合染毒后培养24h,CCK8法检测nthy-ori3-1细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞内活性氧(ROS)产生情况,同时测定氧化损伤指标丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)活力。结果AP抑制nthy-ori3-1细胞增殖具有明显的剂量依赖性。与对照组比较,各组细胞内ROS生成量随着染毒剂量的增加出现降低趋势,除5mmol/L AP剂量组外,差异均有统计学意义(P0.05),且AP与KI联合染毒剂量组细胞内ROS生成量比单纯高剂量AP染毒(40mmol/L)细胞内ROS生成量有所降低,差异有统计学意义(P0.05);较高剂量AP染毒(40mmol/L)甲状腺细胞,MDA生成量比对照组有明显升高,差异有统计学意义(P0.01);各染毒剂量组细胞内CAT活力比对照组有升高的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 AP和KI联合作用可致nthy-ori3-1细胞出现氧化应激,且二者之间存在明显的剂量-反应关系,碘在一定程度上可缓解AP对甲状腺细胞的氧化应激反应。     

硫酸铟对L929细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨硫酸铟对小鼠成纤维细胞(L929)细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用四氮唑蓝比色法(MTT),检测L929的存活情况;采用流式细胞仪检测硫酸铟对L929细胞周期、细胞凋亡(染毒浓度分别为1.5、3.0、4.5mmol/L,染毒时间为24h)的影响。结果硫酸铟可改变L929细胞周期及细胞凋亡率。细胞周期表现为S期细胞增多,而处于G1期的细胞减少,提示硫酸铟可能具有影响L929细胞周期的作用,进而抑制细胞增殖;硫酸铟可增加细胞凋亡率。结论硫酸铟可引起L929细胞毒性,细胞存活率呈浓度-时间依赖性下降;硫酸铟可影响细胞周期和诱导细胞凋亡。     

PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用

目的：探讨大气中的PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用。方法：采用0,30,60,120和200 μg/mL 5个浓度的PM2.5对HTR8-SVneo细胞染毒24 h,以0 μg/mL浓度为对照组,其余浓度为不同剂量PM2.5染毒组,通过CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒测定细胞存活率;激光全息细胞分析及成像系统观察细胞3D形态及动态监测24 h内各组细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞生长周期;彗星试验检测细胞DNA损伤水平;活性氧簇（ROS）检测试剂盒测定细胞内ROS水平。结果：60,120和200 μg/mL浓度组细胞存活率及增殖能力低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;PM2.5可使HTR8-SVneo细胞的生长周期阻滞在G2/M期（P＜0.05或P＜0.01）;不同浓度PM2.5染毒组彗尾DNA百分比均高于对照组（P＜0.01）,且呈剂量依赖性。各浓度染毒组细胞中ROS的产生均高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。结论：PM2.5对 HTR8-SVneo细胞有一定毒性作用,造成DNA的损伤,阻碍细胞生长周期,这种毒性作用可能与氧自由基的产生增多有关。     

氯化镉的体外毒性及锌的拮抗作用

目的观察镉与锌体外对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)增殖的影响,初步探讨镉毒性机制。方法采用MTT法及3H-TdR掺入法,研究不同浓度氯化镉(CdCl2)单独或与生理浓度氯化锌(ZnCl2,10 μmol/L)同时染毒对V79细胞增殖的影响,并采用等离子体光谱仪测定细胞内Cd2 、Zn2 含量。结果 CdCl2对于V79细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性.采用MTT法和3H-TdR掺入法所得CdCl2染毒24 h后50%抑制浓度(IC50)分别为13.73 μmol/L和13.60 μmol/L.随着CdCl2染毒浓度的增加,细胞内Cd2 含量也增加.而同时给予锌则对镉的增殖抑制效应在一定程度上具有明显的拮抗作用,锌可使细胞内Cd2 含量降低。结论在本实验条件下,CdCl2对V79细胞增殖具有抑制作用,锌对镉的毒性有拮抗作用。     

香烟烟气提取物对原代皮肤成纤维细胞生长与凋亡的影响

[目的 ]探讨香烟烟气提取物 (Cigarettesmokeextract ,CSE)对原代皮肤成纤维细胞生长周期动力学和凋亡的影响。 [方法 ]采用噻唑盐 (MTT)吞噬试验、乳酸脱氢酶 (LDH)释放及流式细胞仪等技术研究 0 2 %～ 10 %的CSE对成纤维细胞生长、毒性及细胞周期动力学和凋亡发生率的影响。 [结果 ]CSE抑制细胞生长 ,LDH释放增加 ,并具有剂量反应关系。细胞周期动力学 ,表现为G2 /M期细胞数增加 (近 4倍 ) ;S期细胞数从 15 7%减少到 8 5 %。同时凋亡发生率由2 1%增至 2 3 0 %。 [结论 ]CSE抑制皮肤成纤维细胞生长 ,促进凋亡发生 ,G2 /M期生长阻滞可能是CSE作用皮肤细胞的主要环节。     

二十二碳六烯酸联合氟尿嘧啶对胃癌细胞SGC7901的协同抑制作用

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）联合氟尿嘧啶（FU）对胃癌细胞SGC7901的作用和机制。方法采用MTT法和Transwell小室侵袭实验检测药物对细胞增殖和体外侵袭能力的影响,联合指数（CI）法判断药物合用效果,硫代巴比妥酸法测定细胞膜脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量,荧光探针DCF-DA检测细胞内活性氧（ROS）水平,并用Annexin V—FITC／PI双染法检测药物对细胞早期凋亡的影响。结果低浓度DHA对人胚肺成纤维细胞有促进增殖作用而对SGC7901细胞有抑制作用,与FU联合对SGC7901细胞有协同抑制作用（CI〈1）;DHA能提高MDA和ROS水平,而FU此作用较弱;二者合用时ROS水平较FU、DHA单用时显著升高,并且导致SGC7901细胞发生早期凋亡（P〈0．05）。结论FU联合DHA具有协同抑制SGC7901细胞增殖和侵袭的作用,联合用药能降低FU的使用量而不削弱其抑癌作用,协同作用的机制可能与DHA诱发脂质过氧化反应并与FU共同提升ROS水平导致细胞早期凋亡有关。     

绿原酸诱导肺癌细胞凋亡及其机制研究

目的研究绿原酸对人肺癌A549细胞凋亡的作用及其机制,为临床应用提供依据。方法四氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的绿原酸对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧水平的变化;分光光度法检测绿原酸对表皮生长因子受体酪氨酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase,EGFR-TPK)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和氨肽酶N(aminopeptidase,APN)活性的变化。结果MTT法检测显示,绿原酸在24 h、48 h和72 h时均可抑制A549细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性关系趋势;绿原酸作用48 h后,细胞凋亡率呈现明显增高的趋势,与对照组比较差异有显著性(P0.01);在100μg/ml质量浓度的绿原酸作用下使细胞内活性氧(ROS)百分率达到了(42.32±3.3)%,与对照组相比比较差异有显著性(P0.01);绿原酸对APN、EGFR-TPK和MMP-2半数抑制浓度(IC_(50))分别为(8.12±0.78)、(29.43±2.76)和(1.54±0.13)μg/ml,显示出了较好的抑制效果。结论绿原酸可以抑制A549的增殖和转移,促进细胞凋亡,其凋亡机制可能与细胞内活性氧组分的增多及APN、EGFR-TPK和MMP-2活性降低有关。     

飞燕草素葡萄糖苷抑制人血管内皮细胞凋亡的作用及机制研究

目的观察飞燕草素葡萄糖苷(Dp)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人血管内皮细胞株EA.hy926凋亡的影响,并探索相关分子机制。方法 CCK-8等试剂盒分别检测不同浓度的Dp(25、50、100、200μmol/L)对oxLDL诱导的细胞活力、MDA和LDH生成的影响;激光共聚焦显微镜检测Dp对oxLDL诱导的细胞内ROS生成、线粒体膜电位和线粒体膜通道孔开放状态的影响;流式细胞仪检测不同浓度的Dp对oxLDL诱导的细胞凋亡的影响;Western blot法检测Dp对oxLDL诱导的bcl-2及bax蛋白表达水平的影响。结果 Dp能明显抑制oxLDL诱导的EA.hy926细胞活力降低,及MDA和LDH生成增加,并呈浓度依赖关系;与oxLDL处理组比较,不同浓度的Dp预处理细胞2 h后,总凋亡细胞百分比显著降低(P<0.05);Dp能明显抑制oxLDL诱导的细胞内ROS生成、线粒体膜电位下降和线粒体膜通道孔开放,并能明显抑制oxLDL诱导的细胞内bcl-2蛋白表达水平降低及bax蛋白表达水平增高。结论 Dp可能通过线粒体途径抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡发生。     

电刺激对小鼠成纤维细胞L 929机械力损伤的保护作用

目的探讨电刺激(electrical stimulation,ES)对机械力诱导的小鼠成纤维细胞L 929氧化损伤的保护作用。方法将小鼠成纤维细胞L 929分为正常对照组、电刺激组、加力模型组和加力后电刺激组。采用CCK-8法检测细胞活性,间接化学荧光法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量变化,JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化,分光光度法测定Caspase-3酶活性变化。结果加力组细胞活性明显下降,细胞内ROS增加,线粒体膜电位下降,Caspase-3酶活性增强,差异均有统计学意义(P 0.05)。与加力组相比,加力后电刺激组细胞活性增强,线粒体膜电位水平上升,细胞内ROS含量减少,Caspase-3酶活性减弱,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论电刺激可通过维持细胞活性、减少细胞凋亡、减少细胞内ROS含量及Caspase-3酶活性,而对机械力诱导的细胞氧化损伤起到一定的保护作用。     

DNA聚合酶β对氢醌诱导的小鼠成纤维细胞遗传毒性的影响

目的探讨DNA聚合酶β(polβ)的表达水平在氢醌(HQ)遗传毒性中的作用。方法以polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-)及polβ高表达型(polβoe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色法检测HQ对3种细胞的毒性效应;2’,7’-二氯双氢荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)法检测不同浓度HQ染毒后细胞内活性氧(ROS)的含量;彗星试验分析HQ诱导的3种细胞的DNA损伤及修复效应的差异;体外微核试验检测3种细胞微核率。结果随着HQ浓度的增加,3种细胞的存活率均下降,IC50以polβoe细胞最高,polβ+/+细胞次之,polβ-/-细胞最低,差异有统计学意义(P<0.05);3种细胞内ROS水平随HQ浓度的增加而上升,相同HQ浓度下polβ-/-细胞内ROS水平显著高于polβ+/+细胞(P<0.05);彗星试验显示HQ作用后3种细胞均有不同程度DNA损伤,在相同HQ染毒剂量下polβ-/-细胞损伤较polβ+/+细胞和polβoe细胞严重,而polβoe细胞损伤最为轻微;损伤修复效应显示polβoe细胞修复最快,polβ-/-细胞更不易修复;HQ可诱导3种细胞微核率增加,在相同HQ作用剂量下polβ-/-细胞的微核率最高,polβ+/+细胞次之,polβoe细胞最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HQ可诱导细胞内ROS的产生,从而导致DNA和染色体水平的氧化损伤,表现出其遗传毒效应,polβ可以提高细胞应对氧化损伤的能力,从而对HQ的遗传毒性效应起到一定的保护作用。     

镉致HEK293细胞凋亡中氧化应激作用

目的探讨镉在诱导人胚胎肾细胞（HEK293）凋亡中氧化应激的作用。方法采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用流式细胞仪和激光共聚焦检测胞浆内的活性氧（ROS）水平,采用分光光度法检测细胞内丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量,蛋白印迹法检测Bcl-2蛋白、Caspase-3酶原表达量的变化。结果在一定浓度范围内随着镉浓度的升高,凋亡率升高。在60μmol/L氯化镉诱导细胞6h,凋亡率达到最高;细胞内ROS生成显著增多;MND含量明显增多（P〈0.01）,GSH含量大幅下降（P〈0.01）;Bcl-2表达量较镉处理3h时表达量有所下降;Cas-pase-3酶原蛋白表达下降。结论镉诱导HEK293细胞凋亡的机制与ROS上升及其导致的氧化损伤、Bcl-2蛋白表达下调和Caspase-3的激活有关。