乙肝病毒核心抗原DNA疫苗诱导小鼠抗原特异性CD8+T细胞动态变化和动态分布

目的：研究乙肝病毒核心抗原(HBcAg)DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法：用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100ug免疫C57BL／6小鼠，用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8^ T细胞的动态变化。结果：pHBc144免疫后抗原特异性CD8^ T细胞逐渐增多，在初次免疫的第14天出现第一个免疫应答高峰，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降进入免疫记忆期并在1年内维持在稳定水平。加强免疫后在第10天抗原特异性CD8^ T细胞数量达到高峰，约是初次免疫应答高峰的2倍，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降，但下降的速度比初次免疫应答减缓。结论：pHBc144DNA疫苗可诱导有效的细胞免疫应答。     

重组IL-12对乙肝疫苗在小鼠诱导免疫应答的作用

目的:观察重组IL-12对乙肝疫苗在小鼠诱导应答的强度与性质的作用,探讨将重组IL-12用作乙肝治疗性疫苗分子佐剂的可能性.方法:将乙肝疫苗联合重组IL-12肌注免疫小鼠,检测小鼠产生的抗乙肝表面抗原特异性体液和细胞免疫应答.结果:乙肝疫苗联合重组IL-12能明显增强小鼠T淋巴细胞的增殖活性、促进分泌细胞因子IFN-γ和IL-2并提高IgG2a抗体水平.结论:重组IL-12可显著增强乙肝疫苗诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型.     

CpG ODN佐剂对乙肝疫苗抗原免疫原性的影响

目的探究CpG ODN佐剂对不同抗原含量乙肝疫苗免疫效果的影响。方法在体液免疫方面不同抗原浓度的CpG ODN与Al(OH)3佐剂乙肝疫苗免疫Balb/c小鼠,于免疫后第2、4、6、8、10周收集血清,检测小鼠体内相对效力ED50和血清中的anti-HBs抗体水平;在细胞免疫方面测定诱导产生IFN-γ水平及IgG2a应答水平。结果 CpG ODN与Al(OH)3佐剂可以有效协同HBs Ag诱导机体产生的抗体滴度达49 427 mIU/ml,抗体效价随时间延长而增加。乙肝抗原减半后双佐剂乙肝疫苗诱导机体产生的特异性抗体滴度可达41 225 mIU/ml,高于无CpG ODN佐剂的铝佐剂疫苗。在诱导细胞分泌方面,对照组诱导产生IFN-γ水平及IgG2a应答水平明显低于所有双佐剂疫苗组。结论 CpG ODN对HBsAg具有良好佐剂活性,并与铝佐剂有协同作用,二者联合应用可以降低乙肝抗原用量并提高疫苗免疫原性。     

质粒DNA促进HBsAg-抗HBs复合型疫苗诱生的免疫应答的研究

目的　研究HBsAg 抗HBs 质粒DNA复合型疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的类型。方法　分别以HBsAg、HBsAg 抗 HBs(IC)、pI/AmpHBs、IC pI/AmpHBs及IC pI/Amp免疫小鼠 ,检测抗 HBs的效价 ,分析抗 HBsIgG亚类 (ELISA) ;取免疫小鼠脾细胞 ,体外抗原刺激 ,用竞争性RT PCR方法检测IFN γ及IL 4mRNA转录水平。结果　IC pI/AmpHBs诱生的抗 HBs效价明显高于IC或pI/AmpHBs单独免疫组 ,其IgG2a/IgG1比值高于IC免疫组 ,而低于pI/AmpHBs免疫组。IC pI/AmpHBs免疫小鼠脾细胞在HBsAg刺激下 ,IFN γmRNA转录水平明显高于其他免疫组 ,其IFN γmRNA的T/C(目的片段Target/竞争片段Competitor)比值为IC免疫小鼠脾细胞的 10倍 ;IC pI/AmpHBs免疫小鼠脾细胞IL 4mRNA转录水平亦高于其他免疫组 ,其IL 4mRNA的T/C比值为IC免疫小鼠脾细胞的 2倍。结论　HBsAg 抗HBs 质粒DNA复合型疫苗在增强体液免疫应答的同时可诱导脾细胞IFN γ的表达水平增高。     

弗氏佐剂与氢氧化铝佐剂对诱导小鼠获得性免疫应答作用的比较

为研究、比较不同佐剂对诱导小鼠产生获得性免疫应答的不同作用,以卵清白蛋白(OVA)为抗原,分别混合完全弗氏佐剂(CFA)或Al(OH)3佐剂,对C57BL/6小鼠进行常规免疫,采用流式细胞技术对细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4进行检测;ELISA方法对特异性抗OVA抗体滴度及抗体亚型进行了检测。结果显示在免疫后CFA组产生以IFN-γ为主的细胞因子而Al(OH)3组产生以IL-4为主的细胞因子;两组中均产生特异性抗OVA IgG抗体,但CFA组以IgG2a亚型为主,而Al(OH)3组则以IgG1亚型为主,不产生IgG2a亚型抗体。实验表明,经CFA加抗原免疫后机体产生的免疫应答以Th1型细胞免疫为主,抗体类型为IgG2a;而Al(OH)3佐剂则诱导机体产生Th2型细胞免疫应答,抗体类型为IgG1。     

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响

目的：初步探讨CpC寡脱氧核苷酸(CpG ODN)与重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)联合免疫小鼠的Th1／Th2型免疫应答效应。方法：BALB／c小鼠经后腿胫骨前肌免疫2次，ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)IgG亚类IgG2a/IgG1的比值；生物活性法检测脾细胞诱生上清中的IFN-γ和IL-2含量；ABC-ELISA法检测小鼠血清中IL-4、IL-10及IL-12含量。结果：加CpG ODN组与单独注射rHBsAg组相比：抗-HBs IgG亚类IgG2a／IgG1比值明显高；Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的表达增强，抑制Th2型细胞因子IL-4和IL-10的产生。结论：CpCODN能够明显增强rHBsAg免疫小鼠Th1型抗体亚类IgG2a的产生，并且诱导Th1型细胞因子的表达，抑制Th2型细胞因子的表达。     

乙肝病毒表面抗原G145R变异单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的:研制抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的单克隆抗体(mAb).方法:将重组乙肝病毒G145R变异表面抗原以Al(OH)3佐剂化, 常规免疫BALB/c小鼠, 采用细胞融合技术制备抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的mAb.采用ELISA对制备物的效价与特异性进行鉴定, 将其用于部分临床标本的检测, 并与德国抗HBs mAb GL2.001进行比较.结果:获得1株稳定分泌抗G145R HBs mAb的杂交瘤细胞, 命名为4-E12.该细胞株染色体数目为90条, 所分泌mAb属IgG1亚类.其培养上清与腹水抗G145R HBs ELISA效价为(0.5～1)×103及(1～10)×106.经持续3月培养, 低血清适应以及反复冻存与复苏后, 其细胞增殖能力与上清抗G145R HBs效价与克隆化结束时大致相似.将其与德国抗G145R HBs mAb GL2.001相比, 二者对重组乙肝表面抗原G145R变异S蛋白的反应性大致相当, 灵敏度前者稍低于后者(分别为2.0 μg/L与1.0 μg/L).对野生株表面抗原的检测前者在实验浓度范围内未显示有意义的反应信号, 后者在与高浓度(1 mg/L及以上)抗原反应时S/N值达到或高于3.9.将二者用于对一组特定患者的临床检测, 其阳性率前者(17/200, 8.5%)较后者(11.5%)略低, 其差别经统计学比较无统计学意义(P>0.05).结论:成功地制备了1株抗乙肝表面抗原G145R变异体的mAb, 为乙肝G145R变异的基础、 临床与流行病学研究提供了进一步的物质基础.     

人工合成免疫刺激DNA联合HBsAg DNA疫苗在HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 :探讨免疫刺激DNA序列联合基因免疫在HBV转基因鼠的免疫应答。方法 :用人工合成硫代修饰的免疫刺激DNA寡核苷酸 (CpGODN)与HBVS区基因真核表达载体 (V HBs)联合免疫HBsAg转基因鼠 ,通过ELISA观察小鼠血清HBsAg及抗 HBs抗体水平 ,并用免疫组化 (SP法 )及病理HE染色观察小鼠肝组织HBsAg表达量的改变及肝组织炎症活动度。结果 :V HBs联合CpGODN组 6只免疫鼠中有 2只血清抗 HBs抗体阳性 ,其平均效价为 (5 6 2 1± 15 16 )mU ml,血清HBsAg浓度在免疫后第 8周时有 2只转阴 ,而单用V HBs组及V 10 12对照组小鼠血清抗 HBs抗体均阴性、HBsAg含量无明显降低。V HBs +CpGODN组肝组织HBsAg的表达量低于V HBs组及对照组 ,并可见大量炎细胞浸润 ,炎症组织活动度积分明显高于V HBs组及对照组。结论 :CpGODN联合V HBs可增强其免疫应答及抗病毒效应。     

多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb/c小鼠引起的免疫应答

目的：观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb／c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法：在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体(pQ-ELP)的基础上，以亲和层析法纯化重组蛋白，SDS-PAGE鉴定，Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白(A组)及ELP重组蛋白加弗氏佐剂(B组)免疫Balb／c小鼠(10只／组)，以生理盐水(NS组)作对照。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1，IgG2a和IgG2b水平。双抗体夹心ELISA试剂盒检测免疫鼠脾脏单个核细胞(PMNC)在受到特异抗原刺激后，产生IL-4、IL-12和IFN-γ的能力，^3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增殖能力。结果：本研究成功获得高纯度重组蛋白ELP。首次免疫后2周，A、B组小鼠均产生了大量的特异IgGl抗体，B组还产生了少量的特异IgG2b抗体。除B组小鼠脾PMNC产生了微量IFN-γ外，A组、NS组IFN-γ及各组IL-4和IL-12均未检出。A、B组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高，其淋巴细胞CPM值分别为NS组的2．8和10．8倍，受到多房棘球绦虫抗原或刀豆素刺激时，A、B组淋巴细胞增殖更明显。结论：多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗可引起很强的体液免疫应答和微弱的细胞免疫应答，如与弗氏佐剂联合应用引起的细胞免疫应答会进一步提高。     

CpG ODN增强乙型肝炎表面抗原免疫小鼠的抗体产生

目的：探讨合成含CpG基序的寡核苷酸（CpG ODN)对重组乙型肝炎表面抗原（rHBsAg)及乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应。方法：采用非纯系（Km)及纯系（Balb/c)小鼠作为免疫对象，经后腱胫骨前肌免疫2次，ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗体（抗－HBs)效价。结果：加CpG ODN组，其抗-HBs效价均较单独注射rHBsAg和疫苗组明显增高，持续时间长，且纯系鼠的抗体效价明显高于非纯系鼠。结论：CpG ODN对小鼠抗－HBs产生具有增强作用，具与疫苗中的铝佐剂有协同效应。