Am80通过促进KLF4与维甲酸受体α相互作用抑制血管内膜增生

目的:通过大鼠颈总动脉球囊损伤手术,探讨维甲酸受体α(RARα)激动剂Am80是否通过上调Krüppel样因子4(KLF4)与RARα相互作用而抑制血管新生内膜增生。方法:用球囊损伤大鼠颈总动脉,腹腔注射Am80 14 d后,HE染色观察血管新生内膜增生的情况;通过免疫组化方法检测KLF4和血管壁中cyclin D1的表达;用Western blotting方法检测血管壁中KLF4和RARα的表达,用免疫共沉淀法检测KLF4和RARα的相互作用。结果:与球囊损伤模型组比较,Am80腹腔注射组中,内膜与中膜厚度比率明显降低,KLF4和RARα表达水平升高;而且Am80可以促进损伤血管中KLF4和RARα的相互作用。结论:Am80促进KLF4与RARα的相互作用,从而抑制血管新生内膜的增生。     

低浓度脂多糖加速大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成

目的：探讨低浓度脂多糖（LPS）刺激机体免疫系统对血管损伤后加速血管新生内膜增生的影响。方法：选用健康Wistar大鼠，静脉注入LPS后，行颈动脉球囊损伤术，建立血管内膜损伤模型。采用免疫荧光或组织化学染色观察内膜增生变化。Western blot 分析损伤组织特异性平滑肌细胞标志物和细胞凋亡表达。用ELISA测定血清白介素-1β(IL-1β)含量和流式细胞术分析CD14阳性细胞表达水平。结果：每只鼠注入LPS(50 ng)后循环血中单核细胞和IL-1β水平显著升高。血管损伤7 d后中膜平滑肌细胞增殖, 转化为合成表型，新生内膜逐渐形成，随时间延长，内膜增生加速，内膜厚度由(151.2±14.5)μm2增至(173.9±15.3)μm2。免疫荧光染色观察到增殖细胞核抗原及核因子-κB分别定位于新生内膜和外膜。Western blot分析显示新生内膜形成早期LPS组平滑肌特异性标志蛋白α-肌动蛋白多于对照组，caspase-3表达持续上调，细胞凋亡多于对照组。结论：炎症介质LPS刺激全身免疫系统导致血管损伤后新生内膜暂时性增生，表明炎症介质可以加剧血管损伤后再狭窄的形成。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠颈动脉球囊损伤后再内皮化和内膜增生过程的影响

目的：探讨重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠颈总动脉球囊损伤后再内皮化和内膜增生过程的影响。方法:56只Wistar大鼠随机分为2组,重组人粒细胞集落刺激因子（商品名：瑞白）+损伤组（rhG-CSF预防组）(n=28):皮下注射瑞白30 μg/kg，每日1次，共7 d后，行左颈总动脉球囊拉伤,术后1 h（n=4）、3 d(n=4)、5 d(n=4)、7 d(n=5)、14 d(n=6)取材;生理盐水+损伤组(NS+损伤组)(n=28):皮下注射生理盐水0.5 mL,同上时点取材。应用扫描电镜、伊文氏蓝染色、HE染色、免疫组织化学的方法,观察颈总动脉损伤后再内皮化、新生内膜增厚及细胞增殖的情况。通过RT-PCR检测血管壁内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达。结果:重组人粒细胞集落刺激因子可明显增加损伤血管内皮的修复面积、抑制新生内膜形成，增加了血管壁eNOS mRNA表达 。结论：重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠颈总动脉球囊损伤血管再内皮化和内膜增生过程有血管重塑作用。     

全反式维甲酸对大鼠腹主动脉球囊损伤后内膜增生和血管重塑的影响

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）对球囊损伤大鼠腹主动脉内膜增生和血管重塑的影响。方法：复制球囊损伤的大鼠腹主动脉剥脱模型，12只Wistar大鼠随机分为①对照组：6只腹腔内注射intralipid（1 mL/d）；②ATRA组：6只腹腔内注射溶解于intralipid的ATRA（4 mg·kg^-1·d^-1）。球囊损伤14 d后，损伤区域的血管段用10%甲醛固定，然后染色，进行组织学观察。结果：ATRA组新生内膜面积（IA）明显小于对照组，管腔面积（LA）和外弹力膜包绕面积（EEL）则大于对照组。结论：ATRA具有抑制损伤血管的内膜增生和促进有益的血管重塑的作用。     

抗骨桥蛋白抗体抑制血管内膜增生的实验研究

目的：探讨抗骨桥蛋白（OPN）抗体对大鼠血管内皮剥脱术后内膜增生的抑制效果及其机制。 方法： 利用球囊导管建立大鼠颈总动脉-主动脉血管内皮剥脱模型，通过尾静脉注射兔抗鼠OPN多克隆抗体后，利用明胶酶图分析、Western blotting、免疫组织化学等方法观察血管内膜厚度、基质转换酶类和粘附分子表达活性。 结果： 血管内膜剥脱大鼠给予抗OPN抗体后，血管内膜的增生受到明显抑制，内膜与中膜面积之比（I/M）降低（P<0.05），管腔狭窄程度减轻。血管壁 MMP-2和TIMP-2的表达量无明显变化但MMP-2活性显著下降（P<0.05）。而且，抗OPN抗体对血管新生内膜的OPN表达水平也无明显影响。 结论： 抗OPN抗体通过阻断骨桥蛋白功能，减缓细胞外基质降解而有效抑制血管内膜增生。     

动脉粥样硬化大鼠血管损伤后局部组织学结构的变化

目的建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型，了解血管成形术后再狭窄的发生规律及病理机制。方法在大鼠动脉粥样硬化病变的基础上，使用2F球囊导管损伤大鼠左侧颈总动脉，观察术后不同时期内膜、中膜增生的动态改变；对血管壁增殖的细胞进行鉴定；观察血管壁平滑肌细胞表型标志物SMα—actin表达的变化。结果损伤后7天薪生内膜开始形成，至3月时内膜增厚达最大，管腔明显狭窄，损伤动脉壁可见细胞大量增殖，大部分为平滑肌细胞。损伤早期血管壁表达SMα—actin减少，至损伤后期逐渐恢复至原有水平。结论应用球囊导管可以成功建立大鼠血管损伤动物模型，损伤后新生内膜增生导致管腔狭窄，平滑肌细胞的表型改变、迁移及增殖是内膜过度增生的病理基础。     

小鼠血管内皮损伤/再生伴内膜增生模型的建立

目的： 探讨如何建立稳定的小鼠血管内皮损伤/再生及内膜增生模型。方法： 用改良的空气干燥法造成小鼠颈总动脉内皮剥脱损伤模型。术后活体灌注Evans蓝染料以评估受损内皮再生情况，并取受损部分动脉作纵向切片，行CD31内皮细胞标志抗原检测。术后4周常规组织学检测内膜增生肥厚情况。结果： 内皮损伤术后内皮完全剥脱，Evans蓝染色完全，未见CD31抗原表达，随着术后时间延长，Evans蓝染色部分从损伤边缘开始，逐渐向中心区缩小，CD31抗原表达逐渐增多。术后7 d仍可见部分损伤血管未再内皮化。术后4周可见明显新生内膜增生。结论： 用改良的空气干燥法可以建立稳定的小鼠动脉内皮损伤/再生模型，并且伴有明显的新生内膜增生。     

自体内皮细胞移植在损伤动脉再内皮化及抑制新生内膜增生中的作用

目的:观察自体内皮细胞移植在损伤动脉血管再内皮化及抑制新生内膜增生中的作用。方法: 30只健康雄性纯种新西兰兔行双侧髂股动脉球囊损伤,一侧于损伤后立即经球囊导管行自体静脉内皮细胞移植,另一侧行培养基对照。其中10只动物分别于术后4 h、4 d处死,行扫描电镜检查;5只动物,先将细胞用荧光标记物标记后,再移植入体内,4 d后进行荧光示踪检查;5只动物于术后4 d行Evans blue染色,观察内皮损伤血管段再内皮化情况;其余动物于术后28 d处死,行病理学分析。结果:细胞移植术后4 h,对照组见整个内皮层剥脱,暴露出内皮下弹力膜及平滑肌,细胞移植组则见部分移植内皮已粘附在内皮剥脱血管壁,细胞呈圆形,但尚未铺展;细胞移植术后4 d,移植的内皮已变形,在内皮剥脱血管壁铺展成单层,大量荧光标记内皮细胞被覆在损伤动脉血管内膜;对照组损伤血管几乎完全被Evans blue染成蓝色,细胞移植组损伤血管则60%不被Evans blue着染;病理学分析发现细胞移植组新生内膜面积、最大动脉内膜厚度均显著少于对照组。结论: 自体内皮细胞能有效地经球囊导管移植到内皮损伤血管段,并有减轻新生内膜增生的作用。     

黄芩苷抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖和新生内膜肥厚

目的 探讨黄芩苷对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和内皮损伤诱导的新生内膜形成的影响及其机制。方法 采用细胞培养、MTT分析、Western blot及免疫组织化学等方法研究黄芩苷的作用机制。结果 黄芩苷可呈浓度依赖性地抑制血小板源生长因子（PDGF）诱导的VSMC增殖,降低增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,阻断PDGF受体的激活和MEK/ERK信号通路的活化。整体实验显示,黄芩苷可预防球囊损伤诱导的血管新生内膜肥厚,明显降低内膜/中膜面积（I/M）比值（P<0.01）;PCNA、细胞间黏附分子（ICAM-1）和血管黏附分子（VCAM-1）蛋白的表达也明显减少（P<0.01）。结论 黄芩苷通过抑制VSMC增殖而阻止球囊损伤诱导的大鼠血管内膜增生。     

纤维蛋白沉积与大鼠主动脉球囊损伤后肌内膜增殖的关系

目的：利用大鼠胸主动脉球囊内皮剥脱术模型，探讨纤维蛋白（原）与肌内膜增殖的关系。方法：将６４只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为正常组、假手术组和剥脱组。剥脱组大鼠又分别在术后１０ｍｉｎ、１、３、７、１４、２１天处死取材。结果：大鼠胸主动脉免疫组织化学研究发现，正常组和假手术组大鼠血管壁无纤维蛋白（原）沉积，术后１０ｍｉｎ在血管腔表面即有一层致密的纤维蛋白（原）沉积，然后随着术后时间的延长，纤维蛋白（原）逐渐渗入到增殖的新生内膜中，中膜中未见有纤维蛋白（原）的沉积。结论：纤维蛋白（原）可能在内皮剥脱后的血管平滑肌细胞增殖中起一定作用。     

强力霉素影响基质金属蛋白酶活性和血管重构的实验研究

目的：观察强力霉素对损伤动脉组织中基质金属蛋白酶（MMP）活性的抑制作用，并探讨强力霉素对血管平滑肌细胞增殖、动脉内膜增生、管腔重构的影响。方法:球囊导管扩张动脉的方法建立大鼠颈总动脉损伤模型。治疗组用强力霉素30 mg·kg^-1·d^-1干预。明胶酶谱法测定损伤动脉组织中MMPs的活性。用HE染色、VVG染色、免疫组化标记α-actin和增殖细胞核抗原的方法观察损伤动脉内膜厚度、管腔重构及平滑肌细胞增殖的情况。结果:①强力霉素治疗组MMP-9活性在术后24 h、3 d分别比对照组低26.3％、34.5％（P<0.01）；MMP-2活性在术后7 d比对照组低40.0％（P<0.01）。②强力霉素治疗使术后7 d内膜平滑肌细胞增殖率（43.23％±1.06％）显著低于对照组（62.76％±1.02％）（P<0.01）；使术后14 d、28 d新生内膜厚度比对照组分别少32.0％、38.8％（P<0.01），而管腔面积比对照组多58.0％、90.4％（P<0.01） 。结论：强力霉素可以显著降低血管损伤后MMPs活性，抑制内膜平滑肌细胞的增殖、新生内膜增生以及管腔重构，提示它可能具有防治PTCA术后再狭窄的作用。     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对血管损伤后新生内膜增生的影响

背景：一氧化氮能够抑制血管平滑肌细胞的迁移和增殖,而一氧化氮合酶是其合成的关键酶,有关一氧化氮合酶基因体内转染对平滑肌细胞及动脉粥样硬化血管损伤后内膜增生影响少有报道。 目的：观察内皮型一氧化氮合酶 (endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因体内局部转染对动脉粥样硬化大鼠血管损伤后新生内膜增生的抑制作用。 方法：建立动脉粥样硬化Wistar大鼠颈动脉球囊损伤模型,建模后随机分成空白对照组、AdCMV-lacz对照组和AdCMV-eNOS组,分别将PBS,AdCMV-lacz和AdCMV-eNOS体内转染至以上3组大鼠的损伤血管壁。转染2周后培养并鉴定损伤局部平滑肌细胞,并用RT-PCR法检测各组损伤及转染后血管平滑肌细胞eNOS mRNA的表达,同时观察转染后不同时期新生内膜增生的影响。 结果与结论：AdCMV-eNOS组的颈总动脉血管平滑肌细胞可表达eNOS mRNA。3组大鼠转染后1和3个月,AdCMV-eNOS组内膜/中膜面积比值低于空白对照组和AdCMV-lacz对照组(P < 0.01)。结果显示,eNOS基因体内转染损伤后血管可以抑制血管新生内膜增生,减少再狭窄发生率。     

Urinary trypsin inhibitor reduced neointimal hyperplasia induced by systemic inflammation after balloon injury in rabbits

Objectives

The aims of this study were to evaluate the effect of urinary trypsin inhibitor (UTI) on the regulation of inflammatory cytokines induced by lipopolysaccharide (LPS) and the reduction of neointimal formation in rabbits.

Methods and results

Rabbits subjected to iliac artery balloon injury were randomly divided into three groups: control group (balloon injury), LPS group (LPS + balloon injury) and UTI group (UTI + LPS + balloon injury). Systemic markers of inflammation (serum IL-1β and TNF-α levels measured by ELISA) were increased after LPS administration. Arterial nuclear factor-κB (NF-κB/p65) at 28 days after injury was 31.50 ± 7.08 % of total cells in controls and 73.50 ± 6.90 % in LPS group (P < 0.05). Morphometric analysis of the injured arteries at 28 days revealed significantly increased luminal stenosis (45.81 ± 5.31 vs 27.93 ± 2.85 %, P < 0.05) and neointima-to-media ratio (1.40 ± 0.15 vs 0.68 ± 0.12, P < 0.05) in LPS-treated animals compared with controls. This effect was reduced by UTI administration. Serum IL-1β and TNF-α levels and NF-κB/p65 expression were significantly increased in correlation with the severity of intimal hyperplasia and inhibited by UTI.

Conclusions

Systemic inflammatory response concurrently with arterial vascular injury facilitated neointimal formation. UTI reduced neointimal hyperplasia by regulating inflammatory response and could be considered as a potential anti-restenosis supplement.     

罗格列酮抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生和基质金属蛋白酶-2的表达

目的探讨PPARγ配体罗格列酮对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生及MMP-2和TIMP-2表达的影响。方法实验分为给药组(罗格列酮3 mg/kg.d)和对照组(0.9%氯化钠注射液),每组n=5。用球囊血管内膜剥脱法建立大鼠颈动脉再狭窄模型。HE染色检测血管内膜与中膜的厚度比和面积比。RT-PCR和Western blot法检测血管组织中MMP-2和TIMP-2的mRNA和蛋白质的表达。结果罗格列酮明显抑制球囊损伤后血管新生内膜增生,与对照组相比,术后所有时间点上内膜与中膜的厚度比及面积比均显著减少(P<0.001)。罗格列酮组与对照组比较显著抑制球囊损伤后各时间点血管中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的mRNA和蛋白的表达,术后1、7、14、28 d蛋白表达由对照组的0.605±0.007、1.000±0.002、0.890±0.014和0.290±0.028降至0.310±0.014、0.525±0.021、0.405±0.007和0.081±0.004(P<0.001)。但罗格列酮对MMP-2抑制剂TIMP-2的mRNA和蛋白表达无影响。结论罗格列酮抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生,其机制可能与MMP-2的表达下调及MMP-2/TIMP-2表达失衡有关。     

AT2R基因在体转染抑制大鼠颈动脉新生内膜增生

目的: 探讨AngⅡ 2型受体（AT2R）基因在体转染对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生的抑制作用。方法:大鼠颈动脉球囊损伤后，局部转染AT2R重组腺病毒载体（pAdCMV/AT2R）或空病毒载体（pAd-GFP），于术后7、14和21 d用RT-PCR、免疫组织化学及HE染色方法，进行AT2R、AngⅡ 1型受体(AT1R)、PCNA在颈动脉壁中表达的变化及定量组织形态学分析；免疫荧光双标染色和激光共聚焦技术检测血管中AT2R与PCNA表达的关系。结果: pAdCMV/AT2R转染后，大鼠颈动脉AT2R的表达水平显著高于未转染组和pAd-GFP组(P<0.01)，21 d时仍维持较强表达。在14 d时pAdCMV/AT2R组PCNA阳性表达率显著低于未转染组和pAd-GFP组［(27.29±5.81)% vs ( 72.25±4.47)%、(68.43±9.12)%，P<0.01］，在AT2R表达阳性的部位PCNA表达阴性。在21 d时，pAdCMV/AT2R组的内膜面积与中膜面积比显著低于未转染组和pAd-GFP组(0.78±0.06 vs 1.44±0.22、1.36±0.21, P<0.01)，pAd-GFP组和未转染组间无显著差异（P>0.05）；各组颈动脉AT1R表达水平无显著差异(P>0.05)。结论: AT2R基因在体转染可抑制球囊损伤后大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖和新生内膜增生，AT2R基因转染后表达并发挥其生物学作用时，AT1R和AT2R之间不存在表达量上此起彼伏的关系，可能是建立在信号转导基础上的功能调节关系。     

Total sleep deprivation augments balloon angioplasty-induced neointimal hyperplasia in rats

Sleep deprivation has been shown to be associated with an increase in inflammation that is also involved in the development of neointimal hyperplasia (or restenosis). The purpose of this study was to investigate whether total sleep deprivation (TSD) would worsen neointimal formation by balloon injury. Sixteen rats were randomly allocated into the following four groups: group 1, balloon angioplasty alone; group 2, TSD prior to angioplasty; group 3, angioplasty before TSD; and group 4, TSD before and after angioplasty. Total sleep deprivation was induced by the disc-over-water method, and balloon angioplasty was performed in the carotid artery. Histopathological analysis and assay of cytokines were applied to evaluate the effects of TSD in this study. Total sleep deprivation significantly increased the ratio of postinjury neointima-to-media area in groups 2, 3 and 4 (all P < 0.01) compared with group 1. Additionally, in all groups with TSD administration the serum level of interleukin 10 was also markedly decreased on day 3 after angioplasty injury (P < 0.05 or P < 0.01). Our findings suggest that perioperative TSD can significantly augment neointimal hyperplasia of the carotid artery in rats, which may be partly caused by a TSD-induced effect in suppressing the serum level of the anti-inflammatory cytokine, interleukin 10.     

Mechanisms of restenosis after coronary intervention: difference between plain old balloon angioplasty and stenting.

BACKGROUND: Restenosis after coronary intervention remains an unsolved and important clinical problem. We histologically examined the mechanism of restenosis after both balloon injury and stenting. METHODS: Coronary arteries of swine were subjected to balloon injury and stenting. Next, just after stenting or at 7, 14, or 28 days, the animals were sacrificed for the evaluation by morphometric analysis, histological observation, and immunostaining. RESULTS: The neointimal area peaked at 14 days in the balloon injury group (BG) and increased linearly up to 28 days in the stent group (SG). At 28 days, the total vascular area in the BG was reduced to 78% of the control values. In the SG, the total vascular area remained enlarged. According to the phenotypic analysis, the vascular smooth muscle cells (VSMCs) in the neointimal area at 28 days were the contractile type in the BG and the synthetic type in the SG. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and macrophage-positive cells were not observed in neointima in the BG at 28 days, whereas they were observed around the stent struts in the SG. In addition, numerous inflammatory cells, such as neutrophils and eosinophils, were also present in the SG. CONCLUSIONS: Restenosis after balloon injury consisted of arterial remodeling and neointimal hyperplasia, whereas that after stenting consisted mostly of neointimal hyperplasia. The neointimal area in the SG lasted longer than that in the BG. Continuous inflammation may be an important factor in the restenosis of stenting.