应用FⅧ基因RFLP对甲型血友病的连锁分析

甲型血友病(hemophiliaA)是先天性凝血障碍中最常见的一种出血性疾病,由凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所导致的X—连锁隐性遗传病。临床上对甲型血友病的治疗,携带者检测和产前诊断尚无满意方法。现已知FⅧ基因定位于Xq28,国     

应用PCR技术对甲型血友病携带者诊断的研究

应用多聚酶链反应(PCR)技术,通过两对外物分别扩增FVⅢ基因内含限制性内切酶BclⅠ和XbaⅠ多态位点的特异DNA片段,扩增长度分别为142bp和96bp,经相应内切酶酶解后,12％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,分析本地区人 BcⅠ/FVⅢ el8及XbaⅠ/FVⅢi22,显示为142/99bp和96/68bp,频率分别为0.24/0.76及 0.44/0.56,PIC为 0.36和 0.49,联合应用的PIC为0.67。对30名女性检测其杂合频率分别为     

凝血因子Ⅷ基因内Bcl Ⅰ多态性的研究及其在甲型血友病产前基因诊断中的应用

甲型血友病是一种最为常见的遗传性凝血疾病,是由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所致。以克隆的 FⅧ DNA片段为探针对中国人FⅧ基因内的Bcl Ⅰ多态性及其在甲型血友病基因探测中的应用进行研究。利用这一多态性为遗传标志,成功地进行了1例甲型血友病高危胎儿的产前基因诊断。     

中国人FⅧ基因内XbaI多态性研究与甲型血友病基因诊断

本文研究了中国人FⅧ基因22内含子中限制酶XbaⅠ的多态性。在83个中国人的79条无遗传关系的X染色体中,该多态性位点出现的频率为0.56,提供的多态性信息量为0.49。利用RFLP法,分析了17个甲型血友病家系,其中14个家系可以用此RFLPs进行基因诊断。认为核RFLPs作为FⅧ基因内的多态性遗传标志,在甲型血友病基因携带者检出和胎儿出生前诊断中具有重要的应用价值。     

甲型血友病携带者的PCR-RFLP检测

①目的　探讨甲型血友病携带者的基因诊断方法。②方法　应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）结合限制性酶切片段长度多态（ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ）分析技术,对５ 个甲型血友病家系的 ２９ 名成员进行了 ＦⅧ基因外显子 １８ 和内含子 ２２ 两个多态位点的扩增片段限制酶切长度多态性连锁分析。并对其中的１ 个家系进行了产前基因诊断。③结果　５ 个家系中有 ５ 名女性被确定为携带者,１ 个家系的男性胎儿被确定为病人。④结论　 Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ方法可对多数甲型血友病进行基因诊断。     

四个血友病乙家系携带者基因检测及产前诊断

应用凝血因子Ⅸ（FⅨ）PⅧ／Xmn IPⅧ/Taq I探针对四个血友病乙家系21人进行限制性片面多态性（RFLP）基因连锁分析。确定携带者5例，非携带者5例，对其中1例携带者的高危胎儿进行了基因产前诊断，经PCR性别鉴定及RFLP分析确定为女性携带者。     

安徽人FⅧ基因内及其旁侧RFLPs的研究

研究若干不相关安徽个人体的四个凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）基因内限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）（ＢｃｌⅠ、ＨⅢ、ＸｂａⅠ、ＭｓｐⅠ）及四个基因旁侧的ＲＦＬＰｓ（ＢｓｔｘⅠ、ＰｓｔⅠ、ＭｓｐⅠ、和ＡｃｃⅠ）。ＢｃｌⅠ／ＨｉｎｄⅢ、ＸｂａⅠ、ＭｓｐⅠ基因内多态位点的杂合子频率分别为０．２３、０．４２、０．４９６。在接近内含子２２处，发现了两个额外的ＸｂａⅠ多态位点。在基因旁侧，应用ＢｓｔｘⅠ和ＰｓｔⅠ发现安     

甲型血友病基因携带者检测与产前基因诊断的研究进展

近年来，分子生物学技术的应用，使因子Ⅶ以及血友病甲的研究有了很大进展。本文将对甲型血友病基因携带者及产前基因诊断的研究作一综述性介绍。     

应用凝血因子Ⅷ基因多态性产前诊断血友病甲

以凝血因子Ⅷ重组基因克隆 FⅧ_(E18—st14)为探针,用限制性内切酶 Taq I 酶解后所产生的限制性片段长度多态性(RFLP)连锁分析,成功地对1例血友病甲高危胎儿进行了产前基因诊断,排除了血友病甲的可能,使妊娠得以继续进行。另外,对该家系的血友病发病机制进行了分析与探讨。     

St14/BclⅠ限制性片段长度多态性基因频率

St14-1(DXS52)是位于人X染色体长臂远端的一段DNA顺序,与第Ⅷ凝血因子(FⅧ:C)基因紧密连锁.用其作探针,BcII酶切,对人基因组DNA进行Southern印迹杂交分析,可检测到一限制性片段长度多态性(RFLP).我们分析广东地区汉族人群中st14/BcII RFLP,等位基因片段长度分别为17.4kb和16·6kb(见附图).15条无遗传关系的X染     

基因重组人凝血因子Ⅷ在中国人血友病A患者中使用的研究

目的 探讨第二代rFⅧ（Kogenate FS）在中国人血友病A患者中使用的安全性和有效性。方法 采用第二代rFⅧ（Kogenate FS）治疗14例血友病A志愿者患者，用药前进行FⅧ抗体、FⅧ：C活性、血清病毒学（HBV、HCV和HIV）、血常规、尿常规、大便常规以及肝肾功能检查，于第一次用药后10min和60min进行FⅧ：C测定，治疗结束后进行FⅧ抗体和肝肾功能检测。结果 ①采用KogenateFS治疗的14例血友病A志愿者患者中，KogenateFS用量12．99～25．00u／kg（平均18．74u／kg），总用量3000～11000u（平均6570u），自治疗至出血停止或出血症状改善所需的时间为1．5～5．5d（平均3．29d），除1例FⅧ抗体滴度较高者外，其余13例患者第一次用药后10min和60minFⅧ：C活性均明显升高，用药前后FⅧ：C活性比较差异具有显著性（P〈0．01）。显效13例（占92．86％），好转1例（占7．14％），总有效率为100％。②14例血友病A志愿者患者中，用药前FⅧ抗体阳性2例，其中1例FⅧ抗体〉5Bu，第一次用药后10min和60minFⅧ：C活性无明显升高，治疗结束后FⅧ抗体仍然〉5Bu，但出血症状改善；另1例FⅧ抗体为4Bu，第一次用药后10min和60minFⅧ：C活性显著升高，治疗结束后FⅧ抗体转为阴性。③14例血友病A志愿者患者在应用KogenateFS治疗期间和治疗结束后均表现出良好的耐受性，无不良事件或药物不良反应发生。结论 第二代rFⅧ（KogenateFS）治疗中国人血友病A患者耐受性好，安全有效。     

血友病家系调查和携带者的初步研究

报告了血友病6个家系的调查,共作40人KPTT、Ⅷ:C及VWF:Ag测定,36人DNA限制性片段长度多态性(RFLP)基因连锁分析及2名携带者孕妇进行产前诊断。     

FⅧ基因内5个SNPs位点多态性对血友病A基因诊断的意义

目的 通过对FⅧ基因内5个单核苷酸多态性(SNP)位点的杂合度进行分析,以寻找新的可用于血友病A(HA)家系基因诊断的多态位点.方法 50例汉族正常女性血样用于5个SNP位点的多态性分析;收集16个无血缘关系的HA家系成员血样,将具有多态性的SNP位点用于家系连锁分析,评价其对HA基因诊断的意义.结果 5个FⅧ基因内SNP位点在所研究的人群中有3个位点具有多态性,即rs1509787、rs3861554和rs1470586,多态信息量分别为0.106 4、0.344 4和0.310 8.利用这3个SNP位点对16个家系中的7个家系可作出诊断,诊断率为43.75％,其中rs3861554对HA的诊断率最高(31.5％).结论 在所选人群中有3个SNP位点具有多态性,对HA家系具有一定的诊断意义;rs3861554可作本地人群HA诊断的常用多态位点.     

安徽人群St14/Taq I RFLPs的研究

作者为寻找FⅧ基因的遗传标记,应用Southern印迹法对安徽人群的Stl4/Taq I RFLPs进行研究。结果表明:在59条无血缘关系的X染色体中,第1、2二个多态系统的等位基因频率分别为:1(5%),4(5%),5~6(15%),7(27%),8(47%),α(47%),β(53%)。总的杂合频率为82%。提示:此RFLPs对甲型血友病的连锁分析非常有用。     

原发性肝癌转化基因的RFLP研究(Ⅲ)

以原发性肝癌组织DNA以及作为对照的正常人白细胞DNA和人工流产胎儿绒毛DNA为材料,应用5′侧和3′侧两种N-ras探针以及c-sis探针,通过Southern吸印杂交探查其对特定限制酶的限制性片段长度多态性。结果未发现人癌基因N-ras对限制酶Bam HⅠ、PstⅠ、MspⅠ以及人癌基因c-sis对限制酶Eco RⅠ、HaeⅢ的限制性片段长度多态性;但发现人癌基因c-sis对限制酶Hind Ⅲ、SacⅠ、PstⅠ、PvuⅢ、MspⅠ等都有限制性片段长度多态性。这些等位片段可为进一步结合家系分析,探查致癌的家族素因以及肿瘤的遗传易感性研究中寻找遗传标记提供基础。     

中国人获得性血友病A患者中一个FⅧ基因多态性位点的发现

目的 研究8例中国人获得性血友病A患者的FⅧ基因变异,尝试寻找与疾病相关的潜在基因位点.方法对患者进行表型检测,包括APTT﹑FⅧ：C和FⅧ抑制物浓度的测定;采用LD-PCR和多重PCR分别检测FⅧ基因内含子22倒位和内含子1倒位,采用PCR产物直接测序的方法对FⅧ基因进行序列分析,寻找突变和多态性位点.结果 8例患者均表现为APTT延长,FⅧ：C降低,并且能够检测出浓度不等的FⅧ抑制物.在FⅧ基因3＇UTR区域内发现c.8899 G/A（rs1050705）的多态性位点,其等位基因＂A＂的频率远高于另一等位基因＂G＂的频率.结论 c.8899 G/A（rs1050705）多态性位点的等位基因频率可能与获得性血友病A患者中FⅧ抑制物的形成存在一定的联系,这对进一步研究该疾病的分子发病机制具有重要意义.     

应用PCR/RFLP法检测宫颈癌组织中P~(53)基因杂合性丢失

本文首次在国内建立了PCR/RFLP法检则宫颈癌组织中的P~(53)基因杂合性丢失,以P~(53)基因外显子4中72密码子两侧设计的一对引物进行PCR扩增,产物为162bp。在BSH12361限制性内切酶消化下,8％聚丙烯酰胺凝胶电泳,EB染色,PFLP分析,观察20例宫颈癌组织中有5例为杂合性丢失,1525％(5/20)。该法需微量的标本DNA和快速的特点。PCR/RFLP检则肿瘤组织中的P~(53)基因杂合性丢失方法的建立,将有利于宫颈癌癌变原理研究,并为肿瘤防治新手段的出现,提供新的线索和依据。     

甲型血友病产前诊断——应用DNA聚合酶链反应(PCR)进行家系RFLP连锁分析

应用PCR技术分析了7个甲型血友病家系,对其中4例做了产前基因诊断。基因诊断的方法选择应是:首先采用PCR法扩增所需的特异DNA片段,随之用Bcll的RFLPs分析;对BclI不能诊断的标本进一步用XbaI的RFLPs分析;对XbaI不能诊断的标本进行其他DNA探针的Southern印迹杂交分析,诊断率可达85％。