大鼠提睾肌神经损伤后血管内皮细胞的凋亡

目的：研究大鼠提睾肌神经损伤后血管内皮细胞的凋亡。方法：以免疫组织化学SP法,对大鼠提睾肌神经损伤后的血管内皮细胞Bcl-2,Bax和p53表达进行研究。结果：支配提睾肌的神经损伤后,Bcl-2,Bax和p53的表达均有增强,但Bax和p53的表达明显强于Bcl-2(P＜0.01和P＜0.05)。神经损伤1wk后凋亡水平最高（与24h组比较P＜0.01)。结论：大鼠提睾肌血管内皮细胞失去神经支配后可产生过度凋亡,并可能对微循环产生不利影响。     

大白鼠提睾肌缺血再灌注后血管内皮细胞的凋亡基因表达

目的 研究大白鼠提睾肌缺血再灌后血管内皮细胞的凋亡基因表达。方法 以免疫组织化学SP法对大白鼠提睾肌缺血再灌注后血管内皮细胞Bcl-2,Bax及p53的表达进行观察。结果 大白鼠提睾肌缺血再灌注的血管内皮细胞Bax及p53阳性细胞率（分别为83％和87％）明显高于Bcl-2和对照组（分别为34％和7％），（P＜0．01），再灌注6h阳性细胞最多。结论 大白鼠提睾肌缺血再灌注可引起血管内皮细胞凋亡，并可能在微循环障碍中起重要作用。     

大鼠提睾肌神经损伤后Bcl-2、Bax和P53在血管平滑肌细胞和内皮细胞的表达

目的 研究大鼠提睾肌神经损伤后血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax及P53表达和意义。方法 以免疫组织化学SP法,对大鼠提睾肌神经损伤后的血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax及P53表达进行研究。结果 支配提睾肌的神经损伤后,Bcl-2、Bax和P53均有表达。在平滑肌细胞中,Bcl-2的表达明显强于Bax和P53,而在内皮细胞Bax和P53的表达强于Bel-2。结论 大鼠提睾肌损伤后平滑肌细胞有增殖现象,而内皮细胞则可能出现过度凋亡,上述改变可能对微循环产生不利影响。     

支配大鼠提睾肌的运动神经元和分布于提睾肌血管的交感节后神经元(CB—HRP逆行追踪法的观察)

于五只Sprague-Dawley种系雄性大鼠(350g左右)提睾肌肌层间分九点注射CB-HRP(酶标霍乱原B亚单位,2.8％HRP浓度)30μl/只。存活72小时左右,按Mesulam·Rosen程序灌注固定,取材后切成厚40μm的切片,TMB组化反应显色。注射侧的交感干神经节及脊髓前角内均见有标记细胞。交感干神经节的标记细胞主要见于T_(11-12)。其大小:长径37.5±13.4μm,宽径15.9±3.0μm;形态以梭形、椭圆形多见。脊髓前角处的标记细胞主要见于L_(1-2)节段,大小:长径49.9±7.2μm,宽径29.7±8.4μm;形态为多极细胞。切断生殖股神经后,上述部位不再有标记细胞出现,证实提睾肌血管的交感节后纤维是随支配该肌的生殖股神经而分布的。     

大鼠提睾肌血管肽类免疫反应阳性神经纤维的分布

目的 研究大白鼠提睾肌动脉微循环的神经调节。方法 以免疫组织化学ABC法对大白鼠提睾肌动脉各级分支的CGRP,NPY,SP,5-HT及M-ENK免疫反应阳性纤维的分布进行研究和观察。结果 肽类免疫阳性纤维在提睾肌动脉各级分支均有大量分布,但随着动脉的分支而逐渐减少,阳性纤维和终末呈密集颗粒状、网状和涡旋状排列,在毛细血管性纤维和终末呈密集颗粒状、网状和涡旋状排列,在毛细血管上也能见到阳必纤维和终末的分布,在其分叉处更为显。结论 肽类神经递质可能对提睾肌微循环的生理调节起重要作用。阳性纤维和终末在毛细血管的分布提示神经纤维可直接作用于血管内皮细胞而产生生理效应,肽类神经递质在提睾肌动脉的分布研究为完善和利用大白鼠提睾肌微循环实验动物模型和微循环的神经调节研究打下了一定基础。     

建立大鼠提睾肌微动脉血栓模型的一种新方法

目的 通过光化学法建立一种新的和临床病理机制相似的大鼠提睾肌微动脉血栓模型.方法 15只SD雄性大鼠,分为5组,以提睾肌微动脉为靶血管,分别通过股静脉注入0.2～0.6mL的异硫氰酸荧光素-右旋糖苷(FITC-dextran),以落射荧光显微镜100W汞灯经蓝光照射靶位置,同时在显微摄像系统观察血栓形成的情况和测量不同时间点血管的狭窄程度.结果 在照射时间为3、6、9min时,0.4～0.6mL组比0.2mL、0.3 mL组的血管狭窄程度更严重(P<0.05);除0.2 mL组外其他组均可形成血管闭塞,0.4～0.6 mL组的血管完全闭塞时间明显少于0.3mL组(P<0.01).结论 静脉注射FITC-dextran经光化学法建立大鼠提睾肌微动脉血栓模型是一种简单、可靠的方法 ,为微循环实验提供了一个新的方法 .     

聚环氧乙烷对大鼠提睾肌微循环红细胞流速的影响

目的 应用大鼠在体提睾肌模型,研究长链高分子化合物聚环氧乙烷(PEO)对微循环血流速度的影响,初步探讨减阻剂改善微循环的可能机制.方法 Wistar雄性大鼠6只,于术前1天,采集自体红细胞用异硫氰酸荧光素标记后备用.成功建立在体提睾肌模型后经颈静脉注入荧光素标记的自体红细胞,通过荧光显微镜观察提睾肌微循环并全程录像.全部大鼠经静脉给药2次(10 ppm PEO及生理盐水各1次,注射顺序根据随机化表决定),速度均为3.5 ml/h.两种药物的注射时间及停药后观察时间均为20 min.试验全程监测心率和动脉血压.红细胞流速用IPP6.0专业图像分析软.件测定.结果 与注入生理盐水相似,注射PEO对大鼠心率、血压均无明显影响(P>0.05);注射生理盐水前、后大鼠微循环红细胞流速无明显改变(496.44±170.91 μm/s vs 515.22±172.77 μm/s,P=0.648),但注射PEO后可见大鼠微循环血流中红细胞流速显著增加(498.7±182.89 μm/s vs 773.54±308.27μm/s,P=0.012).结论 PEO在不影响大鼠心率、血压情况下,可明显增强大鼠提睾肌微循环红细胞流速,提示PEO可能通过增加局部血流速度的途径改善组织灌注.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血神经元细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的：研究不同时程的亚低温治疗对鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型的神经元细胞凋亡及Bcl-2,Bax基因表达的影响，方法：采用Longa线栓法制作MCAO模型，缺血3h后再灌注，缺血后即刻分别进行不同时程（1／2h,1h,3h)的亚低温治疗，再灌注后24h断头取脑，连续切片作TUNEL染色及Bcl-2,Bax免疫组化染色。结果：（1）与对照组的Bcl-2细胞阳性率相比，亚低湿3h组增加。（2）与对照组的Bax细胞阳性率相比，亚低温1h,3h组均降低。（3）凋亡细胞阳性率与Bcl-2／Bax的比值呈负相关关系。结论：（1）亚低温1h以上有抑制细胞凋亡作用。（2）Bcl-2/Bax的比值能影响细胞凋亡的发生。     

胃癌组织中p53、Bcl-2和Bax蛋白表达及相互关系的研究

目的　研究 p53、Bcl 2和Bax蛋白在胃癌组织中的表达及相互关系。方法　p53应用免疫组织化学SP法 ;Bcl 2 ,Bax应用SABC法。结果　p53、Bcl 2、Bax在胃癌中的表达分别为 4 9 3%、37 3%和57 3%。在正常胃粘膜表达分别为 0 (P <0 0 1)、16 7% (P >0 0 5)和 91 7% (P <0 0 5)。p53蛋白的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、临床分期、远处转移有关。Bcl 2蛋白表达在低分腺癌的表达率 51 5% ,显著高于高中分化腺癌 ( 2 6 2 % ,P <0 0 5)。Bax在高中分化腺癌表达率 ( 69% ) ,显著高于低分化腺癌 ( 4 2 4 % ,P <0 0 5)。Bcl 2、Bax和其它临床病理参数无关。应用Spearman等级相关分析未发现突变 p53蛋白和Bcl 2及Bax蛋白表达有相关性。结论　①p53基因突变可能主要作用于胃癌的进展期阶段 ,参与胃癌的浸润转移 ,p53有可能成为胃癌预后参数之一。②Bcl 2、Bax表达异常提示凋亡调控机制的异常在胃癌发病中可能起重要作用。Bcl 2、Bax可能参与胃癌的发生并和胃癌分化有关 ,但可能与预后无关。③ p53基因突变可能因失去对Bcl 2、Bax的调节作用 ,致Bcl 2过表达 ,Bax表达减弱。     

外源性基因在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

分别构建了带有标记基因ＬａｃＺ和人的全长尿激酶原（ＰｒｏＵＫ）或纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）基因的逆转录病毒载体，通过磷酸钙共沉淀法或假病毒感染法，转染血管平滑肌细胞，经Ｇ４ｌ８筛选得到抗性集落。分析证明，外源性基因可以整合到细胞染色体上，并可表达出相应的具有生物活性的蛋白质。提示血管平滑肌细胞可以作为心血管疾病基因治疗的靶细胞。     

补脾益气中药对脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、bcl-2、bax表达的影响

目的：探究脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、bcl-2、bax表达的变化及补脾益气方药对这种变化的调节作用。方法：将实验动物分成空白组、模型组、四君子汤组、六君子汤组、归脾汤组,用免疫组化法检测血管平滑肌细胞内PDGF、bcl-2、bax的表达。结果：与空白组比较,其他各组PDGF、bax的灰度值低,表达增强,bcl-2灰度值高,表达减弱（P〈0.05）。与模型组比较,其他各组的PDGF、bax灰度值高,表达减弱,bcl-2灰度值低,表达增强,（P〈0.05）。结论：脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、bax表达增强,bcl-2表达减弱,而补脾益气中药能改善这种情况,从而为补脾益气中药防治心血管系统疾病提供实验室依据。     

补脾益气中药对脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、bcl-2、bax表达的影响

目的:探究脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、bcl-2、bax表达的变化及补脾益气方药对这种变化的调节作用。方法:将实验动物分成空白组、模型组、四君子汤组、六君子汤组、归脾汤组,用免疫组化法检测血管平滑肌细胞内PDGF、bcl-2、bax的表达。结果:与空白组比较,其他各组PDGF、bax的灰度值低,表达增强,bcl-2灰度值高,表达减弱(P<0.05)。与模型组比较,其他各组的PDGF、bax灰度值高,表达减弱,bcl-2灰度值低,表达增强,(P<0.05)。结论:脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、bax表达增强,bcl-2表达减弱,而补脾益气中药能改善这种情况,从而为补脾益气中药防治心血管系统疾病提供实验室依据。     

血管内皮和平滑肌细胞联合培养构建组织工程化血管的方法

目的：探讨组织工程血管种子细胞原代培养、传代扩增、鉴定的方法，为组织工程血管的构建提供理想的种子细胞。方法：无菌条件下取正常产妇分娩的脐带动静脉，ROSS法（即组织贴块法）原代培养混合血管细胞。倒置相差显微镜、免疫组化法对细胞进行鉴定。结果：倒置显微镜显示原代细胞及经传代培养后的细胞，呈现内皮样细胞、平滑肌样细胞混合生长的特征。免疫组化法检测示内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白呈阳性反应。细胞经3次～5次传代，数量可增殖达到8×10^6—10×10^6。结论：使用组织贴块法原代培养可获得内皮细胞、平滑肌细胞混合体，细胞经体外联合培养、传代可以达到组织工程血管种子细胞所需的数量。     

阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞Cyr61的表达

目的 探讨阿托伐他汀对增殖的血管平滑肌细胞Cyr61的作用.方法 贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,将培养的平滑肌细胞分为正常对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组和阿托伐他汀组.AngⅡ组将1μmol/L AngⅡ加入平滑肌细胞培养基,共培养180 min;阿托伐他汀组在AngⅡ刺激细胞前1h加入10 μmol/L阿托伐他汀到培养基中.采用RT-PCR及Western blot检测各组中各时点Cyr61 mRNA和蛋白表达.结果 AngⅡ组与正常对照组相比上调增殖的平滑肌细胞Cyr61mRNA和蛋白表达,阿托伐他汀组与AngⅡ组相比抑制AngⅡ刺激的Cyr61蛋白表达,尤其在30 min时点更加明显(P＜0.01).结论 阿托伐他汀抑制增殖的平滑肌细胞Cyr61的表达,为阿托伐他汀降脂外的抗动脉硬化作用增加新的理论依据.     

缺氧对大鼠血管平滑肌细胞表达巨噬细胞游走抑制因子的影响

目的 观察缺氧对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的影响,探讨缺氧在动脉粥样硬化等血管增生性疾病中引起动脉壁损伤的可能机制. 方法 将大鼠 VSMCs细胞株A7r5细胞分别在缺氧(37 ℃、5% CO2、1% O2)及常氧(37 ℃、5% CO2、20% O2)条件下培养不同的时间(2 h、4 h、12 h、24 h、48 h),在相应时间点收集细胞总RNA及培养上清液.用半定量RT-PCR及ELISA方法 分别检测MIF mRNA的表达及VSMCs MIF的蛋白水平变化. 结果 与常氧培养的对照组相比,缺氧不同时间的大鼠VSMCs的MIF mRNA表达均显著增加(P<0.05),并且合成MIF蛋白的水平也明显增加(P<0.05).结论 缺氧能诱导VSMCs MIF的表达,MIF的表达增加可能是缺氧参与动脉粥样硬化等血管增生性疾病发生的机制之一.     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖与细胞凋亡的影响

目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,将不同浓度Hcy与VSMCs孵育不同时间,应用MTT法检测VSMCs细胞增殖、流式细胞术(FCM)检测VSMCs细胞凋亡。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为500μmol/L Hcy的培养液中孵育0h、6h、12h、24h、48h后的A值分别为0．504±0．053、0．586±0．043、0．625±0．031、0．683±0．087、0．812±0．147,细胞凋亡率分别为2．39％±0．47％、2．45％±0．96％、7．58％±2．02％、13．37％±4．71％、17．69％±3．13％,表明Hcy呈时间依赖性诱导人VSMCs细胞增殖和细胞凋亡；在终浓度分别为0、100、200、500、1000μmol/L Hcy的培养液中孵育24h后的A值分别为0．549±0．067、0．616±0．121、0．644±0．095、0．685±0．139、0．846±0．142,细胞凋亡率分别为2．68％±0．23％、2．79％±0．89％、8．45％±2．41％、13．41％±4．98％、17．75％±5．56％,表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCs细胞增殖和细胞凋亡。结论Hcy可以诱导VSMCs增殖和细胞凋亡,这一双重作用可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的　观察同型半胱氨酸 (Hcy) 对人血管平滑肌细胞 (VSMCs) 凋亡以及bax、bcl-2表达的影响。方法　采用组织贴块法体外培养人VSMCs; 采用流式细胞仪检测细胞凋亡率; 逆转录 -聚合酶链反应法检测Bax、bcl-2mRNA的表达。结果　体外培养的人VSMCs在终浓度为 0 (对照组)、100、200、500、1 000μmol/LHcy的培养液中孵育 24h后的细胞凋亡率分别为 ( 2. 68±0. 23 )%、 ( 2. 79±0 .12 )%、( 8. 45±2. 41 )%、 ( 13. 37±4 .71 )%、(23. 75±5 .56)%, 表明Hcy诱导人VSMCs细胞凋亡呈浓度依赖性; baxmRNA相对表达量分别为 0 .86±0. 01、0 .92±0 .03、1. 51±0 .02、1. 82±0 .03、1 .91±0 .02, bcl-2mRNA相对表达量分别为 1. 38±0 .04、1. 32±0 .03、1. 28±0 .03、1 .21±0. 02、1 .09±0. 02, 表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCsbax基因表达显著上调, bcl-2基因表达轻度下调, bax/bcl-2比值升高。结论　Hcy诱导人VSMCs凋亡可能是通过上调bax基因表达来实现的, 诱导人VSMCs凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之一。     

输精管复通对生精细胞中Bcl-2及Bax基因蛋白表达的影响

为了解Bcl-2及Bax基因在输精管复通后大鼠生精细胞中的表达情况，作者建立了大鼠输精管结扎和复通模型，应用免疫组化法观察Bcl-2及Bax基因在大鼠输精管复通后生精细胞中的表达变化。结果显示：输精管复通组Bcl-2基因表达逐渐增强，复通后8周显著地强于输精管结扎组，到12周同假手术组；而输精管复通组的Bax基因表达无改变，与输精管结扎组无差异，都显著地强于假手术组。Bcl-2基因蛋白表达的变化说明在输精管结扎后，以及输精管复通后均发挥了抗凋亡的作用，而Bax基因蛋白表达在输精管复通前后的一致性，说明其对生精细胞凋亡作用有待进一步研究。     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

DDPH对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用氚－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）参入、电镜、原位杂交及Northern blot杂交方法，观察了 1－ （2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（DDPH）对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。结果发现：DDPH在降低SHR血压 的同时，能减少VSMC的线粒体、粗面内质网及3H－TdR参入量（P＜0．01），并能逆转c－fos、c－myc、c－sis 原癌基因mRNA表达增强（P＜0．05或＜0．01）以及P53抑癌基因mRNA表达减弱（P＜0．05）。表明： DDPH能抑制SHR的VSMC增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。