香烟尘粒对人脐静脉内皮EA.hy926细胞的损伤作用

目的:选用人脐静脉内皮EA.hy926细胞株作为研究对象,观察二甲基亚砜溶解的香烟尘粒(DSP)对人脐静脉内皮EA.hy926细胞生长的影响。方法:以(1、2、4、8)mL/L剂量DSP作量效实验,小剂量DSP(2mL/L)作时效实验,采用MTT比色法和96孔板细胞蛋白测定方法来评价DSP对该细胞株增殖和活性的影响。透射电镜(TEM)观察不同处理因素作用后细胞超微结构变化。结果:DSP能抑制人脐静脉内皮EA.hy926细胞增殖(P<0.05),且对该细胞株具有明显毒性,它能减少细胞蛋白合成(P<0.05)、增加细胞死亡(主要为坏死),作用呈剂量和时间依赖。结论:DSP能损伤血管内皮细胞(VEC)。     

miR-126对EA.hy926细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

 目的：探讨miR-126对EA.hy926细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：选用EA.hy926细胞株作为研究对象,采用阳离子介导的转染方式,将miR-126 inhibitor 和miR-126 mimics 进行细胞转染,分析miR-126对血管内皮细胞功能的影响。采用转染negative control作为阴性对照,转染36 h后提取细胞总RNA,利用 real-time PCR和Western blotting分别检测EA.hy926细胞 VEGF  mRNA 和蛋白水平的表达。结果：转染miR-126 inhibitor 50 nmol/L 36 h后,EA.hy926细胞的VEGF mRNA及蛋白水平各组间差异有统计学意义（P<001）,与阴性对照组相比,miR-126 inhibitor 使EA.hy926细胞的VEGF mRNA及蛋白水平显著上调（P<001）;转染miR-126 mimics 50 nmol/L 36 h后,EA.hy926细胞的VEGF mRNA及蛋白水平各组间有显著差异（P<001）,与阴性对照组相比,miR-126 mimics 使EA.hy926细胞的VEGF 在mRNA及蛋白水平显著下调（P<001）。结论：miR-126 能够抑制VEGF的表达,VEGF有可能是其调节的靶基因之一。     

人巨细胞病毒感染对脐静脉内皮细胞粘附分子和核转录因子表达的影响

目的　研究人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,HCMV)体外感染对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)表面细胞间粘附分子 1(ICAM 1)mRNA和核转录因子kappaB(NF κB)表达的影响 ,探讨NF κB活化与ICAM 1mRNA表达的关系。方法　用RT PCR方法检测ICAM 1mRNA的表达 ,用凝胶电泳迁移率改变试验 (EMSA)检测NF κB活性。结果　HUVEC感染HCMV后 1h ,NF κB活性增加 (P <0 .0 5 ) ,感染后 2h ,ICAM 1mRNA表达增加 (P <0 .0 5 ) ,二者均于 8h达高峰 ,至 2 4h时仍维持较高表达(P <0 .0 1) ;加入NF κB活性抑制剂四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯 (PDTC)后 ,NF κB活性明显减弱 ,同时ICAM 1mRNA的表达也明显降低 (P <0 .0 1)。结论　HCMV感染可激活NF κB ,使ICAM 1mRNA的表达增加 ,从而引导炎症反应至感染部位 ,并有利于病毒感染在细胞间扩散。NF κB参与ICAM 1转录的调控 ,其活性变化影响ICAM 1mRNA的表达。     

重组人钙调素对人脐静脉内皮细胞增殖作用的影响

本文探讨外源性重组人钙调素(recombinant human calmodulin,rhCaM)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响。采用基因重组技术在大肠杆菌DH5α中高效表达并纯化rhCaM。将HUVEC接种于96孔培养板,加入不同浓度rhCaM,用MTT比色法检测rhCaM对HUEVC细胞增殖作用的影响。结果表明rhCaM在0.04～0.4μg/ml浓度范围内可促进HUEVC的增殖,促增殖作用随细胞培养密度的增加而减弱,也与培养基中新生小牛血清的含量密切相关。故rhCaM对HUEVC增殖具有促进作用。     

流体切应力对内皮细胞粘附分子表达的影响

在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)的发生发展中各种白细胞,包括单核细胞对内皮细胞的粘附可能起着较为重要的作用。在体内,血流切应力对内皮细胞的形态和功能有重要影响。为了阐明流体切应力对内皮细胞表面粘附分子表达的影响,本文研究了流体切应力(2.23～6.08dyne/cm     

终末糖基化产物对培养的人脐静脉内皮细胞粘附分子表达的影响

目的：探讨终末糖基化产物在糖尿病动脉粥样硬化（AS）形成中的作用机理。 方法： 分离正常人脐静脉内皮细胞（HUVECs），将终末糖基化终产物（AGE）修饰的人血清白蛋白（AGE-HSA）、人血清白蛋白（HSA）与HUVECs在体外共同培养，并用荧光单克隆抗体染色，流式细胞仪定量检测细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）的表达。 结果： 正常人HUVEC表达ICAM-1和VCAM-1。AGE-HSA能以时间和剂量依赖的方式上调ICAM-1、VCAM-1的表达（P<0.05），而HSA对HUVECs上述粘附分子的表达均无影响。 结论： AGE能上调HUVECs粘附分子的表达，从而促进AS时单核/巨噬细胞的浸润。     

脂联素抗人脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用研究

目的:研究脂联素（APN）对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs) 脂质过氧化的影响。方法：采用Annexin V-FITC标记后流式细胞检测方法观测H2O2引起的细胞凋亡情况。用硫代巴比妥酸微量法测定丙二醛(MDA),黄嘌呤氧化酶法测总超氧化物歧化酶(SOD),可见光法测过氧化氢酶(CAT）。体外自由基捕捉实验检测APN对超氧阴离子和羟自由基的清除率。结果：APN能明显抑制H2O2引起的细胞凋亡。APN预处理HUVECs后,H2O2（200 μmol/L,6 h）所致的细胞膜脂质过氧化反应明显减弱,MDA产生减少,CAT和SOD活性增加,但仅以APN孵育HUVECs对SOD和CAT活性没有明显的影响。结论：结果表明APN对超氧阴离子和羟自由基有明显的清除效果。APN通过抗脂质过氧化发挥抑制细胞凋亡,保护血管内皮细胞抵抗损伤的作用。     

梓醇抑制AGEs诱导的EA.hy926细胞炎症反应及RAGE表达

目的:研究梓醇对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导的EA.hy926内皮细胞炎症反应的抑制作用并探讨其可能机制。方法:将常规培养的EA.hy926细胞随机分为对照组、梓醇对照组、AGEs组以及梓醇高剂量(0.5 mmol/L)、中剂量(0.25 mmol/L)和低剂量(0.05 mmol/L)保护组。激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧簇(ROS)的生成;RT-PCR和Western blot检测细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及晚期糖基化终产物受体(RAGE)的mRNA及蛋白的表达。结果:梓醇保护组ROS生成均明显减少,MCP-1、TNF-α和VCAM-1的mRNA及蛋白表达均显著降低,RAGE蛋白表达明显受抑制,且呈剂量依赖性(P0.05)。结论:梓醇能够有效抑制AGEs诱导的EA.hy926细胞内氧化应激,减轻炎症反应,其机制可能与其降低RAGE表达有关。     

枸杞多糖减轻过氧化氢诱导的人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤

目的:研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤的作用及机制。方法:用H_2O_2建立EA.hy926细胞氧化损伤模型,细胞共分为5个组:正常对照(control)组、模型(damage)组(H_2O_2,50 mmol/L)、LBP(100 mg/L)组、抗损伤(anti-damage)组(50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L LBP+50 mmol/L H_2O_2)和LY294002(20μmol/L)组。采用CCK-8法检测细胞的活力;用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测不同处理后EA.hy926细胞的凋亡;吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)染色法观察细胞凋亡的形态特征;划痕法测定细胞的迁移能力;一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO的水平;用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)的水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、内皮型NO合酶(eNOS)、p-eNOS和p-Akt的蛋白水平。结果:量效结果显示浓度为100 mg/L的LBP预处理EA.hy926细胞1 h,然后加入H_2O_2(50 mmol/L)处理24 h对减轻H_2O_2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用最显著。与damage组比较,LBP预处理可提高EA.hy926细胞的活力(P0.05),减少细胞凋亡(P0.05),并促进细胞迁移;上清液中VEGF和NO水平升高;Bcl-2/Bax比率明显升高,下调cleaved caspase-3蛋白水平,并上调eNOS和p-eNOS蛋白水平。此外,加入PI3K抑制剂LY294002后,LBP对H_2O_2损伤的EA.hy926细胞的保护作用减弱,表现为NO水平和p-Akt蛋白水平降低。结论:LBP能减轻H_2O_2对EA.hy926细胞的损伤作用,缓解H_2O_2诱导的凋亡,其机制与激活PI3K/Akt/eNOS信号通路密切相关。     

焦油和尼古丁对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:观察焦油和尼古丁对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在表达的影响.方法:体外分离培养HUVECs,分别与不同浓度焦油(终浓度分别为1mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L和不同浓度尼古丁终浓度分别为(10-9 mol/L、10-7 mol/L、10-5 mol/L、10...     

肺炎衣原体对血管内皮细胞的感染及其对ICAM-1表达的影响

目的:观察肺炎衣原体对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的感染及其对细胞分泌和表达细胞间粘附分子1(ICAM-1)的影响,探讨C.pneumoniae感染在动脉粥样硬化形成中的作用及其可能机制。方法:用人喉表皮癌(HEP-2)细胞培养C.pneumoniae,以C.pneumoniae感染HUVE细胞,经透射电镜及PCR检测有无感染。用流式细胞仪检测感染前后HUVE细胞表面ICAM-1蛋白的表达的变化,用荧光定量RT-PCR检测ICAM-1mRNA的变化。结果:C.pneumoniae能感染体外培养的HUVE细胞;感染后12h,细胞表面ICAM-1蛋白的表达即增加,其峰值约在感染后24h;荧光定量RT-PCR结果显示其增加在mRNA水平。结论:C.pneumoniae能感染体外培养的人脐静脉内皮细胞并增加ICAM-1的表达,提示C.pneumoniae感染可能是动脉粥样硬化的始动因子之一,其致动脉粥样硬化机制可能与感染后血管内皮细胞粘附分子表达的增加有关。     

克拉屈滨对人脐静脉内皮细胞活力和代谢的影响

目的:研究克拉屈滨对人脐静脉内皮细胞EA.hy926生长及分泌活性的影响,探讨克拉屈滨通过抑制内皮细胞活力发挥抗肿瘤的作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度(0.4~1μmol/L)克拉屈滨对内皮细胞活力的影响;用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测细胞凋亡和周期相关蛋白的表达水平;用ELISA法检测上清液肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平;Gries法检测上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。结果:克拉屈滨作用48 h对细胞活力有明显的抑制作用,其半数抑制浓度约为3.644μmol/L,随药物浓度升高和作用时间的延长而抑制作用增强。克拉屈滨作用48 h后,细胞周期被明显阻滞在S期,0.4μmol/L时S期细胞约43.74%,1μmol/L时S期细胞约77.23%。克拉屈滨处理后,各组内皮细胞的凋亡率没有显著差异。克拉屈滨处理后,caspase-3与Bax蛋白水平无明显差异;p21水平随着药物浓度增加而增高,而p53水平随着药物浓度增加而降低(P0.05)。克拉屈滨处理后,上清液中TGF-β1和TNF-α水平升高,VEGF含量减少(P0.05)。克拉屈滨处理后,上清液中NO含量减少(P0.05)。结论:克拉屈滨能明显抑制内皮细胞EA.hy926的活力,其主要机制与细胞周期阻滞有关。同时克拉屈滨能促进内皮细胞EA.hy926分泌TNF-α和TGF-β1,抑制其分泌VEGF和NO。     

脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的:观察脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响。方法:培养的人脐静脉内皮细胞随机分为实验组和对照组。实验组与不同浓度联胺(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)作用8h, 对照组不加联胺。细胞原位杂交和细胞酶联免疫吸附法分别测定内皮细胞血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达。结果:细胞原位杂交结果图像分析表明, 实验组平均吸光度值分别为0.147±0.013、0.292±0.020和0.396±0.022, 是对照组(0.077±0.011)的1.91倍、3.79倍和5.14倍。方差分析表明, 各组间两两比较有显著差异(P<0.01)。细胞酶联免疫吸附测定结果, 实验组平均吸光度值分别是0.158±0.008、0.220±0.017和0.321±0.023, 为对照组(0.104±0.016)的1.53倍、2.12倍和3.09倍。各组间两两比较有显著差异(P＜0.01)。结论:人脐静脉内皮细胞脂质过氧化增加血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达, 这可能促进单核细胞粘附血管内皮, 在动脉粥样硬化发生发展中起重要作用。     

Inhibition of endothelial cell adhesion molecule expression with SJC13, an azaindolidine derivative,in vitro

Stimulation of cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) with lipopolysaccharide (LPS) induces adherences for human promyelocytic cell line HL60. Adherence of HL60 cells to HUVEC stimulated with LPS for 4h was completely inhibited by pretreatment with SJC13, an azaindolidine derivative. The mechanism whereby SJC13 inhibits the adhesiveness of HUVEC was investigated. Pretreatment of SJC13 inhibited LPS-induced expression of E-selectin and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), but not intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), in HUVEC, determined by flow cytometry and cellular enzyme-linked immunosorbent assay (cell-ELISA). The inhibitory activity was concentration dependent between 62.5 and 1,000 g/ml. SJC13 also selectively inhibited LPS-induced increases in E-selectin and VACM-1 mRNAs, indicating that the action of SJC13 is to inhibit synthesis of these molecules. These data demonstrate that SJC13 is capable of selectively inhibiting the expression of E-selectin and VCAM-1, but not ICAM-1, in endothelial cells.accepted by I. Ahnfelt-Rønne     

mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1表达的影响及其转录调控机制

目的:探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)PAI-1活性和mRNA表达的影响及其转录调控机制。方法:人脐静脉内皮细胞的培养和鉴定。用发色底物法测定PAI-1活性。Northern印迹分析法检测PAI-1mRNA的水平。采用基因重组技术构建含不同长度PAI-1 5'上游序列的荧光素酶报告基因质粒, 瞬时转染进入内皮细胞, 并检测荧光素酶的表达情况。 利用PCR和测序技术, 对构建质粒上AP-1元件进行定点突变。Western blot印迹杂交检测内皮细胞核内激活蛋白-1(AP-1)蛋白水平。结果:50 mg/L mmLDL诱导HUVECs PAI-1活性和mRNA表达量明显增高, 同时提高核内AP-1蛋白水平。mmLDL显著诱导构建质粒pGL3-PAI-1-1509/+90和pGL3-PAI-1-823/+90的荧光素酶活性, 但对质粒pGL3-PAI-1-553/+90和pGL3-PAI-1-47/+90诱导作用不明显。当PAI-1 5'上游序列的3个AP-1元件突变后, mmLDL的诱导作用明显降低。结论:(1)mmLDL增强血管内皮细胞 PAI-1活性与mRNA表达;(2)PAI-1活性提高与其mRNA表达增加呈正相关;(3) PAI－1 5'上游序列中3个AP-1元件在mmLDL对PAI－1诱导中具有重要调控作用。     

GSNO上调人血管内皮细胞系EA.hy926 PDK1和LDHA mRNA的表达

S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)是机体内源性S-硫醇,具有影响蛋白质活性、稳定性及核质分布的作用,参与血管性疾病发生[1]。在大鼠心肌缺血损伤模型中,GSNO可通过修饰三重基序蛋白TRIM72减轻缺血引起的心脏损伤和减少梗塞面积。     

MEK1/2在脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达中的作用

目的：探讨MEK1/2在脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）ICAM-1表达中的作用。 方法： 用不同浓度LPS或LPS加MEK1/2特异性抑制剂PD98059和HUVECs孵育不同时间后，分别采用RT-PCR和Western blotting检测ICAM-1 mRNA和蛋白的表达。 结果： LPS呈时间-浓度依赖性地上调HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白的表达。LPS预处理后2 h，HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白的表达即开始升高，LPS(100 μg·L-1)作用后6 h,ICAM-1 mRNA和蛋白的表达基本达到高峰；PD98059(10 μg·L-1)可显著抑制LPS(100 μg·L-1)诱导6 h的ICAM-1 mRNA和蛋白的表达，抑制率分别为54.4%和44.9%（P<0.01 vs LPS）。 结论： 调控MEK1/2通路可能为内毒素休克诱导血管内皮损伤的防治提供新的策略。