骨髓间质干细胞对大鼠移植物抗宿主效应和脾脏结构的影响

【目的】探讨骨髓间质干细胞（MSC）对同种大鼠骨髓移植后移植物抗宿主反应（GVHD）的影响，尤其是MSC对脾脏结构重建的作用。【方法】建立Fischer344（RT-1A1）大鼠至Wistar（RT-1Au）大鼠的同种异体骨髓移植模型，观察移植后大鼠的基本生活情况，病理学分析靶器官皮肤、肝脏、肠道和脾脏的组织学改变，尤其注意MSC对同种骨髓移植后脾脏结构重建的影响。【结果】①在移植后30d的观察期内，共移植组显示较高的生存率。②组织学分析显示：在共移植组，靶器官皮肤、肝脏、肠道的损伤相对较轻。③脾脏组织学分析显示：在骨髓与MSC共移植组，受体脾脏结构接近正常；在单纯骨髓移植组，受体脾脏白髓萎缩，动脉周围淋巴鞘只有少量T细胞，无典型脾小结形成。【结论】MSC与骨髓共移植对GVHD有抑制作用，并显著促进脾脏结构重建。     

单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病模型的建立及移植物抗宿主病靶器官T细胞受体克隆检测

目的:建立单倍型骨髓移植小鼠模型,观察单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病(GVHD)靶器官的组织病理表现及器官特异性T细胞受体克隆表达.方法:建立单倍型异基因移植小鼠GVHD模型,进行移植前后GVHD靶器官的病理分析,同时应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、结肠、肾脏等组织移植前、后T细胞受体β链可变区(TCRBV)20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达和CDR3克隆的性质.结果:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14 d临床开始出现典型的GVHD表现.移植后24 d受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞,而肾脏等非GVHD靶器官中浸润的淋巴细胞为多克隆的T细胞增生.结论:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14 d出现典型的GVHD表现,GVHD靶器官出现的T细胞单克隆及寡克隆增生可能与GVHD的发生相关.     

CD8+T细胞依赖的急性移植物抗宿主病小鼠模型的建立

目的建CD8^＋T细胞依赖的急性移植物抗宿主病（GVHD）小鼠模型。方法分别以主要组织相容性抗原（MHC）相同,而次要组织相容性抗原（miHAs）不同的8～12周龄C3H.SW（H-2D^b,CD45．2^＋）和B6／SJL（H-2D^b,CD45．1^＋）雌性小鼠为供受体,从供体骨髓分离去除T细胞的骨髓细胞（T—BM）,与其脾脏和淋巴结来源的CD8^＋T细胞混合,经尾静脉输注给受致死剂量^137γ照射的受体鼠。观察移植后受体的体重、毛色、皮肤和生存率的变化,并用流式细胞术（FACS）和组织病理学进一步分析受鼠靶器官细胞浸润和损伤状况。结果移植后受体鼠出现体重明显减轻、毛发脱落、皮肤溃疡等表现,并在28d后出现死亡;FACS证实浸润受鼠骨髓、脾脏和肝脏的细胞主要为CD45．2^＋的供鼠细胞,实验组中还有大量CD45．2^＋CD8^＋T细胞浸润;组织病理学发现肝脏中大量淋巴细胞浸润,皮肤结构破坏,组织坏死。结论成功建立了miHAs不匹配的异基因骨髓移植诱导的CD8^＋T细胞依赖的GVHD动物模型,该模型模拟了目前临床病人采用的同种异基因骨髓移植配型方式,可为异基因骨髓移植GVHD发病机理及该病的防治研究提供良好的实验平台和工具。     

同种异体肢体移植特异性免疫耐受诱导方案的研究

目的探讨联合应用亚致死量放射线照射、氟达拉滨及骨髓腔内骨髓移植对诱导大鼠同种异体肢体移植产生特异性免疫耐受的影响。方法以纯系SD大鼠及Wistar大鼠为供受体，行同种异体右后肢移植。40只大鼠肢体移植后随机分为4组：A组：仅进行肢体移植；B组：在肢体移植前1d，受体给予亚致死量^60Co照射及腹腔内注射氟达拉滨；C组：肢体移植当天受体接受供体骨髓腔内骨髓移植；D组：受体联合应用亚致死量照射、注射氟达拉滨及骨髓腔内骨髓移植，用法及用量同B、C组。观察移植物排斥反应征象及存活情况，并对D组产生免疫耐受大鼠进行SD大鼠及DA大鼠皮肤移植以及脾细胞中细胞因子mRNA检测。结果与其他实验组相比，D组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长（P〈0．01）（〉120d）；D组大鼠仅对第3方DA大鼠的皮肤呈现强烈的免疫反应；与A组大鼠相比，D组大鼠Thl型细胞因子的表达明显降低，而Th2型细胞因子的表达明显增高。结论联合方案可以诱导大鼠同种异体肢体移植产生特异性免疫耐受。     

NK细胞对小鼠H-2单倍体相合骨髓移植后GVHD及造血重建的影响

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在单倍体相合骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)及造血重建的影响. 方法: 以近交系Balb/c(H-2d)×C57BL/6(H-2b)杂交F1代小鼠(H-2d/b)为供鼠、Balb/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行半相合骨髓移植,根据临床表现、病理检查及外周血白细胞(WBC)数,比较不同移植组GVHD发生及造血重建情况. 结果: 骨髓 T细胞组中90%的小鼠出现GVHD,外周血WBC平均在移植后4 wk恢复正常;而骨髓 T 低浓度NK细胞组中20%小鼠出现GVHD, 外周血WBC平均在移植后3 wk恢复正常;骨髓 T 高浓度NK细胞组中仅10%出现GVHD,外周血WBC也平均在移植后3 wk恢复正常. 后两组较骨髓 T细胞组GVHD发生率显著下降(P＜0.01),外周血WBC恢复时间显著提前(P＜0.01). 结论:在小鼠单倍体相合骨髓移植中,同种反应性NK细胞可降低GVHD发生率,促进造血重建.     

小剂量FK506作用下同种脾组织移植诱导大鼠原位肝移植术后免疫耐受的机制

目的:观察小剂量FK506作用下同种脾组织移植对大鼠肝移植术后免疫耐受的影响,探讨其可能的机制.方法:实验分5组(每组大鼠8只),同种肝移植组(A组)以纯系雄性Lewis大鼠为供体、雌性BN大鼠为受体进行同种原位肝移植;同种肝移植 小剂量FK506治疗组(B组)于肝移植术后口服途径给予小剂量FK506(0.25 mg/kg);同种肝脾联合移植组(C组)于肝移植同时移植供体脾脏;同种肝脾联合移植 小剂量FK506治疗组(D组)于肝脾联合移植后口服途径给予小剂量FK506;异体脾组织移植组(E组)于同种原位肝移植同时移植第三品系大鼠脾脏组织,术后进行小剂量FK506治疗.观察各组的存活期,并分析受体脾脏T淋巴细胞对同种抗原的反应性、嵌合体的形成情况以及肝脏病理变化.结果:与其他各组相比,C组大鼠的存活期明显延长;其受体T细胞同种抗原反应性明显降低;受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P＜0.01),且在60 d后受体脾脏中供体阳性细胞仍然较高;肝脏病理分析也未见明显排斥反应.结论:小剂量FK506作用下同种脾脏移植能明显诱导受体大鼠原位肝移植术后嵌合体的形成,降低受体T细胞对同种抗原的反应性,促进免疫耐受.     

人骨髓源性MSCs移植新生大鼠的实验研究

目的研究移植人骨髓源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对新生大鼠的影响。方法采用贴壁选择法分离、培养、扩增人骨髓来源MSCs,并以BrdU标记;10日龄内清洁级SD大鼠24只,随机分为A(大剂量)组、B(小剂量)组、C(对照)组3组,分别给予腹腔注射MSCs 5×104,MSCs 1×104及磷酸盐缓冲液(PBS)。观察注射后GVHD的一般表现情况,3周后处死,ELASA法检测血清TNF-α;免疫组织化学检查肝脏、脾脏、肺等脏器BrdU积分情况,HE染色观察肝脏、结肠的病理GVHD分级。结果各组大鼠均未见腹泻,弓背,翘毛,精神萎靡及皮肤溃疡等表现。3组大鼠移植前后在体重、肝脏及结肠病理分级评分、血清TNF-α水平等方面差异均无显著性(均P>0.05),而免疫组化显示对照组各脏器中均未见BrdU阳性染色细胞,两个注射MSCs组在肺、肝脏、脾脏等中均可见BrdU阳性染色细胞。结论腹腔注射MSCs后肺、肝脏、脾脏等脏器均有MSCs定植,在肺部与注射的量相关;新生大鼠移植人骨髓源性间充质干细胞后未发生明显的GVHD。     

大容量骨髓深低温保存研究(摘要)

自身骨髓移植(ABMT)是利用病人自身的缓解期骨髓,因此,无骨髓来源问题,同时还可避免因同种异基因骨髓移植后,发生移植物抗宿主反应(GVHD)。在ABMT中骨髓保存是一个关键问题。由于病人移植前使用了骨髓致死量的化疗和/或全身放射治疗,因此,重建骨髓造     

大鼠间充质干细胞在小鼠肝损伤中的作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在四氯化碳(CCl4)导致小鼠肝损伤中的作用,为临床进行细胞移植治疗肝脏疾病提供新策略.方法 无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓,分离培养及流式细胞仪检测MSC;采用CCl4制作雌性BALB/c小鼠肝损伤模型,肝损伤小鼠随机分为MSC移植组和肝损伤对照组.MSC移植组在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSC,6周后处死小鼠,检测小鼠肝损伤程度和大鼠MSC植入情况.结果 流式细胞仪结果显示:第3代大鼠MSC CD45-/CD90 细胞为94.54%,CD45-/CD44 细胞为91.25%;肝组织学观察显示:MSC移植组肝损伤修复程度明显好于肝损伤对照组;PCR方法证实只有MSC移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在.结论 体外分离培养及扩增的大鼠MSC移植到CCl4肝损伤小鼠体内,可参与肝损伤修复,减轻CCl4导致的肝损伤.     

肝细胞与骨髓间质干细胞共移植提高移植效率

目的:探讨肝细胞与骨髓间质干细胞(MSC)共移植提高肝细胞移植效率的可行性。方法:分为共移植组、肝细胞移植组和移植对照组,分别将雄性小鼠肝细胞与雌性小鼠MSC(1∶1)、雄性小鼠肝细胞与雌性小鼠肝细胞(1∶1)、雄性小鼠肝细胞与雌性裸鼠肝细胞(1∶1)植入雌性裸鼠脾脏,14d后,应用实时荧光定量PCR技术检测受体肝脏中Y染色体性别决定区(sex-determining region Y,Sry)基因;并由标准曲线计算出移植细胞在受体肝脏中的比例。结果:共移植组Sry的含量明显比其他两组为高[(32.04±0.36)vs(36.97±0.66),P=0.030;(32.04±0.36)vs(35.50±0.62),P=0.045],肝细胞移植组与移植对照组无明显差异[(36.97±0.66)vs(35.50±0.62),P=0.837];共移植组整合的移植肝细胞仅占受体肝脏的(1.09±0.01)%。结论:肝细胞与骨髓间质干细胞共移植较单一移植可以提高肝细胞的移植效率。     

骨髓坏死

引起骨髓坏死的原因是多种多样的,但最主要的原因是由恶性赘生性疾病引起,该症诊断上有一定难度,常常尸解时才被发现;主要的症状有骨痛、发热;骨髓抽吸及活检有特征性改变,有时在骨髓检查中可发现癌细胞,该症主要的治疗是对原发病的治疗。     

自体骨髓移植中骨髓输注的观察与护理

自体骨髓移植是目前治疗恶性实体瘤、白血病、某些自身免疫性疾病的有效方法。骨髓输注在整个骨髓移植过程中是一个极其重要的环节,确保骨髓顺利的回输,预防和减少并发症,是骨髓移植成功的关键。我科对10例患者行自体骨髓移植均获得成功,现将移植过程中骨髓输注的方法及护理体会报告如下。     

骨髓活检对非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润及骨髓转移癌的诊断作用分析

目的 观察骨髓活检和涂片在非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润(NHLBMI)及骨髓转移癌中的诊断价值.方法 对101例(62例非霍奇金淋巴瘤、39例非造血系统恶性肿瘤)骨髓活检切片及涂片进行组织学和细胞形态学分析.结果 (1) 62例非霍奇金淋巴瘤患者中骨髓活检有25例存在淋巴瘤浸润,阳性率为40.32％,骨髓涂片有11例检出淋巴瘤细胞,阳性率为17.74％,在非霍奇金淋巴瘤BMI的诊断中,骨髓活检阳性率高于涂片(P＜0.01);(2) 39例非造血系统恶性肿瘤患者中骨髓活检有32例阳性,阳性率为82.05％,涂片有14例阳性,阳性率为35.89％,骨髓活检骨髓转移癌阳性率高于涂片(P＜0.01).结论 骨髓活检可提高非霍奇金淋巴瘤和骨髓转移癌的检出率,对非霍奇金淋巴瘤BMI和骨髓转移癌的诊断有重要意义.     

骨髓活检和骨髓涂片在淋巴瘤骨髓浸润诊断中的价值

目的探讨骨髓活检和骨髓涂片在淋巴瘤骨髓浸润诊断中的价值。方法选择22例霍奇金淋巴瘤(HL)和97例非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者,抽吸患者的骨髓液常规涂片作瑞特染色,用塑料包埋法制作组织切片,常规HE染色。结果22例HL患者中6例(27.3%)骨髓活检显示存在骨髓浸润,1例(4.5%)骨髓涂片阳性;97例NHL患者中39例(40.2%)骨髓活检存在骨髓浸润,15例(15.5%)骨髓涂片阳性,骨髓活检阳性率高于骨髓涂片(P<0.05)。结论骨髓活检更能准确反映淋巴瘤骨髓浸润,将其与骨髓涂片相结合对淋巴瘤诊断和分期具有重要意义。     

红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响,并探讨其造血调控作用机制。方法 用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术（FCM）分别检测红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠外周血、骨髓有核细胞以及骨髓细胞周期的影响,同时用免疫组织化学方法检测各组骨髓细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。结果 低剂量和高剂量红景天苷能明显升高外周血白细胞（WBC）和骨髓有核细胞（BMC）数,低剂量红景天苷能明显升高外周血血小板（PLT）数,促进骨髓G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,而高剂量红景天苷具有明显促进S期细胞向G2／M期细胞转化的能力,从而导致高、低剂量组G2／M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。另外,高、低剂量红景天苷都能促进骨髓细胞中Bcl-2的表达。其中低剂量红景天苷的促进作用更为明显。同时,高、低剂量红景天苷也都能明显降低骨髓细胞中Bax的表达。结论 红景天苷可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞解除G0／G1期阻滞,加速骨髓G0／G1期细胞向S期细胞、S期细胞向G2／M期细胞的转化以及升高骨髓细胞Bcl-2的表达、降低Bax的表达来抑制骨髓细胞凋亡,促进骨髓造血功能的恢复。     

骨髓移植在骨折愈合中的应用进展

骨髓移植是促进骨折愈合的重要手段,骨髓的成骨特性不断在实验及临床应用中得到证实,骨髓的成骨特性主要基于骨髓基质干细胞、骨形态发生蛋白及骨祖细胞的存在,而目前对骨髓成骨特性的研究主要分体内实验和体外实验,并且体外细胞培养及特性研究是重中之重。     

骨髓间充质干细胞

骨髓间充质干细胞是一群均一的细胞，具有自身的增殖特征及组织化学特征．它在适宜的微环境中能分化为成骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞和星状神经细胞等，它易于分离、扩增，易于外源基因导入表达，有望成为细胞治疗和基因治疗的新型靶细胞，具有广阔的应用前景。