三氧化二砷诱导人胃癌细胞株MGC—803细胞凋亡的研究

为探讨三氧化二砷对胃癌细胞的作用及可能的机制。用不同浓度的Ａｓ２Ｏ３作用于增减的胃癌细胞株ＭＧＣ－８０３细胞。噻唑蓝细胞活力测定显示Ａｓ２Ｏ３能明显抑制ＭＧＣ－８０３细胞生长；     

树舌合剂抗脂质过氧化及对冻融蟾蜍胃AKPase组化观察

本实验采用日本产显微镜和中国上海产７２２分光光度计分别观察测定了冻融蟾蜍胃组织ＡＫＰａｓｅ活力。全血ＧＳＨ－Ｐｘ活力，血浆ＬＰＯ和红细胞ＭＤＡ含量，及树舌合剂的保护效应。结果表明：药物复温组ＬＰＯ和ＭＤＡ含量显著低于对照组，ＧＳＨ－Ｐｘ和显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）。胃组织ＡＫＰａｓｅ活力显著高于对照组呈强阳性。结果提示：树舌合剂人有抗脂质过氧化，保护ＧＳＨ－Ｐｘ酶活力功能。对冻融胃组织能间接提     

慢性肺心病急性期患者红细胞膜Na~ -K~ -ATPase、Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase活性研究

应用酶学比色法测定３５例肺心病急性期患者及３０例健康人红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性，同时测定患者动脉血氧分压（ＰａＯ２）、动脉血二氧化碳分压（ＰａＣＯ２）。结果：患者红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性下降与对照组比差异十分显著（Ｐ＜０．０１）。患者组Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性与ＰａＯ２呈显著正相关；与ＰａＣＯ２呈显著负相关。表明：肺心病急性期红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性下降与严重缺氧、ＣＯ２潴留有关。Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性下降是引起肺心病急性期细胞内、外离子紊乱的重要因素。     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATPase活性改变及其影响因素

目的探讨非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ及Ｃａ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ活性改变的影响因素。方法测定７７例ＮＩＤＤＭ患者和５０例正常人血糖、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、糖化血红蛋白（ＨｂＡｌｃ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性。ｔ检验、直线相关分析和多元逐步回归分析。结果ＮＩＤＤＭ组血糖、ＨｂＡｌｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＬＰＯ显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＳＯＤ、ＧＳＨＰＸ、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性低于对照组（除ＧＳＨ的Ｐ＜０．０５外，其他Ｐ＜０．０１）；不同ＨｂＡｌｃ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＬＰＯ、ＴＣ组的红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性有显著性差别。红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１２．８０＋０．２７（ＧＳＨ）－０．１２（ＬＰＯ）－０．０９（ＴＣ／ＨＤＬＣ），红细胞胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１０８．２０＋１．     

细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原MG7Ag表达的调节

探讨细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达的调节作用。用基因重组干扰素α（ＩＦＮ－α），干扰素γ（ＩＦＮ－γ），白细胞介素２（ＩＬ－２）和肿瘤坏死因子γ（ＴＮＦ－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达。ＩＦＮ－α和ＩＦＮ－γ对胃癌细胞ＭＧ７Ａｇ有促表达作用。ＩＬ－２对三株细胞ＭＧ７Ａｇ无调节作用；ＴＦＮ－α对细胞ＭＧ７Ａｇ表达调节是随     

硫化砷诱导K562细胞凋亡

研究硫化砷（Ａｓ２Ｓ２）对Ｋ５６２细胞凋亡的诱导作用。采用Ｋ５６２细胞体外培养，应用流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期，鉴定凋亡细胞，检测线粒体膜蛋白Ａｐｏ２．７的表达。结果显示：Ａｓ２Ｓ２能够诱导Ｋ５６２细胞凋亡，使细胞周期中的Ｓ期细胞减少，Ｇ２／Ｍ期细胞升高，提示：Ａｓ２Ｓ２具有促凋亡效应。     

LAK细胞在单克隆抗体介导下的抗癌作用

探讨增强ＬＡＫ细胞抗肿瘤作用的新方法，用健康人外周血经密度梯度离心法分离出单个核细胞，再加入白细胞介素２（ＩＬ－２）后诱导的ＬＡＫ细胞为效应细胞，采用４－ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测了其对胃癌细胞ＫＡＴＯⅢ的杀伤作用及加入有癌单克隆抗体ＭＧｂ２后的影响。结论：利用单抗ＭＧｂ２和ＬＡＫ细胞产生的ＡＤＣＣ效应可以明显增强ＬＡＫ细胞的抗胃癌作用。     

转促凋亡基因胃癌细胞的光动力学治疗实验研究

目的;评价转促凋亡基因胃癌细胞的光动力学治疗效果。方法：分析用携带野生型ｐ５３ｃＤｎＡ和我ｂｃｌ－１序列的逆转录志导胃腺癌细胞系ＭＧＣ８０３,稳定表达后加光敏剂并红光照射,检测细胞存活及凋亡。结果：在序列的逆转录病毒转导胃腺癌细胞系ＭＧＣ８０３,稳定表达后加光敏剂并红光照,检测细胞存活及凋亡。结果：在光敏剂及红光作用以生型Ｐ５３反义ｂｃｌ－２都能使转导细胞的存活率降低,凋亡增加。结论：野生型Ｐ５３     

心肌缺血再灌注Na~ K~ ATPase活性变化及鹿茸精的保护作用

目的：研究心肌缺血再灌注损伤 Ｎａ＋  Ｋ＋ Ａ Ｔ Ｐａｓｅ 活性变化,探讨鹿茸精对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机理。方法：采用大鼠离体心脏灌注模型,应用电镜酶细胞化学技术观察 Ｎａ＋  Ｋ＋ Ａ Ｔ Ｐａｓｅ 定位、分布及活性变化。结果：正常心肌 Ｎａ＋  Ｋ＋ Ａ Ｔ Ｐａｓｅ 主要位于肌膜上,缺血３０ ｍ ｉｎ,酶活性显著减弱,再灌注３０ ｍ ｉｎ 及６０ ｍ ｉｎ酶活性进一步减弱或缺失,而应用鹿茸精此酶活性减弱不明显。结论： Ｎａ＋  Ｋ＋ Ａ Ｔ Ｐａｓｅ 抑制是心肌缺血再灌注损伤的主要环节,是引起钙反常的直接原因。鹿茸精通过对此酶修饰起心肌保护作用。     

善得定对胃癌细胞生长增殖的抑制作用研究

本研究以体外培养胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）为研究对象，采用ＭＴＴ比色法检测了善得定对胃癌细胞生长增殖的抑制作用，扫描电镜观察了经善得定作用后胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）形态学变化特征。结果显示：善得定对胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）生长增殖有明显抑制作用，具有时效和量效关系。经善得定作用２４小时后，扫描电镜显示胃癌细胞胞膜起泡，表面纤毛消失，体积缩小。上述结果表明善得定对胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）生长增殖有明显抑制作用     

Caveolin-1基因转染对人胃腺癌细胞生长的影响

目的 探讨外源性Caveolin-1基因在人胃腺癌细胞中的表达作用.方法 将pcl-neo-caveolin-1人全长质粒转染入MGC803细胞中,用G418筛选得到细胞克隆并扩大培养,获得稳定表达caveolin-1的细胞系,通过Western-blot、细胞计数及流式细胞术等方法检测基因表达、细胞增殖分化等情况.结果 与对照组和pcl-neo空质粒转染组相比,转染caveolin-1基因后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显增高,而P-ERK1/2的表达却明显下降;细胞的群体倍增时间明显延长:由46.67或47.32小时延长至65.46小时,差异有显著性(P＜0.01); 细胞周期分布发生明显变化:G0/G1期细胞比例由35.02%增加到51.98%,S期比例由56.97%下降至39.80%,G2、M期无明显变化.结论 Caveolin-1通过抑制MGC803细胞的增殖而导致其发生G0/G1期阻滞,可为肿瘤基因治疗提供实验依据.     

大葱提取液抗人胃癌作用的细胞周期特点

目的观察大葱提取液抗胃癌作用的细胞周期特点。方法将大葱提取液作用于体外培养的人胃癌细胞MGC803后,采用电镜观察MGC803细胞超微结构变化;应用流式细胞仪分析MGC803细胞DNA含量及周期分布,检测其分化与凋亡情况。结果(1)透射电镜下观察:大葱作用后的癌细胞细胞膜完整,出现分化和凋亡的形态学变化。(2)流式细胞仪检测:1.25%大葱提取液作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h,凋亡率分别为0.6%、1.6%、6.1%、13.5%,二倍体比例分别为0%、0.3%、35.8%、93.9%;1.25%、2.5%、5.0%、10.0%大葱提取液作用24h,凋亡率分别为0.6%、4.1%、6.2%、24.9%,二倍体比例分别为0%、10.6%、34.7%、72.2%。低浓度组以诱导分化作用为主,高浓度组同时可诱导细胞凋亡,呈剂量和时间依赖性。实验组细胞随大葱液浓度和作用时间增加,异倍体细胞比例逐渐减少,细胞凋亡率逐渐增加。DNA含量出现二倍体峰和亚二倍体峰~凋亡峰。大葱提取液抑制胃癌细胞可发生在G0/G1期、S期和G2/M期,无周期特异性。结论大葱提取液能明显抑制体外培养的胃癌细胞生长增殖,既可诱导胃癌细胞分化,又可诱导胃癌细胞凋亡,抗癌作用无周期特异性。     

SP-141抑制胃癌细胞增殖、迁移并促进凋亡

目的：探讨MDM2的新型小分子抑制剂SP-141对胃癌细胞株MGC803和BGC823增殖、凋亡以及迁移的影响。方法：胃癌细胞经SP-141处理后,采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术、Hoechst染色法和划痕实验分别检测细胞存活率、细胞增殖、周期分布、凋亡以及迁移能力改变。Western blot检测相关分子蛋白质表达水平。结果：TCGA数据库中32对胃癌组织中的MDM2 mRNA表达水平高于癌旁组织（P<0.01）;5种胃癌细胞株均检出MDM2,表达水平差异不大;SP-141抑制MGC803和BGC823的细胞存活率以及克隆形成,诱导其细胞周期阻滞在G2/M期;SP-141增加细胞凋亡发生率,并下调Bcl-2同时上调Bax、Caspase-3剪切体、PARP剪切体的蛋白表达;SP-141抑制细胞迁移并伴有FAK蛋白表达量的下降。结论：MDM2的新型小分子抑制剂SP-141可有效抑制胃癌细胞增殖、迁移并促进细胞凋亡。     

顺铂与白藜芦醇联合应用对人胃癌MGC803细胞作用的研究

目的研究顺铂（CDDP）联合白藜芦醇（RES）对人胃癌MGC803细胞株的影响。方法采用MTT法检测两种药物单用和联合应用对细胞的作用，联合应用判断两药舍用效果，流式细胞仪检测MGC803细胞周期分布。结果CDDP可抑制MGC803细胞的生长，且呈荆量及时间依赖性（P〈0．05）；CDDP对人胚肺成纤维细胞（HPF）生长起促进作用，且呈剂量依赖性（P〈0．05）；CDDP与RES联合应用对MGC803细胞生长的抑制具有协同作用（P〈0．05）；CDDP对G0／G1期有阻滞作用，RES有明显的S期阻滞作用，两者可从不同环节抑制细胞增殖。结论CDDP对胃癌MGC803细胞有抑制作用，相同剂量对正常细胞无抑制作用。CDDP与RES对胃癌细胞的抑制具有协同作用，与单用RES相比，CDDP与RES联合应用可减少RES的用药剂量。     

薯蓣皂苷元对人低分化胃腺癌细胞株生长的抑制作用

目的：观察薯蓣皂苷元（diosgenin, Dio）对人低分化胃腺癌细胞株（MGC-803）的细胞分裂和集落形成的影响,初步探讨其杀伤肿瘤细胞的机制。 方法：采用四唑蓝（MTT）比色法、平板集落形成实验以及［³H］-TdR掺入实验。结果：MTT法检测Dio作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC₅₀)为56.290、27.837、17.723 mg•L^-1;平板集落形成实验显示Dio半数集落形成抑制浓度为5.486 mg•L^-1;Dio在较低浓度（3.750和7.500 mg•L^-1）下,可直接抑制MGC-803细胞DNA的合成。结论：Dio能够明显抑制MGC-803的细胞分裂和集落形成。     

白藜芦醇纳米微粒对体外人胃肿瘤MGC803细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度白藜芦醇（RES）纳米微粒在不同时间段对人胃肿瘤MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTT法测定不同浓度的RES纳米微粒、RES、5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60 h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变,细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达,检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的RES纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖（60μg/ml作用60h的抑制率达64%）,并且与浓度和时间均呈正相关,流式细胞仪细胞周期分析提示RES纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于S期,细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,端粒酶活性水平下降。结论RES纳米微粒可诱导人胃肿瘤细胞MGC803发生凋亡,延长药物对胃肿瘤细胞的有效作用时间,载药纳米微球没有改变RES成分的生物学活性。     

Cdx2基因过表达对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响

目的 利用基因表达谱芯片技术筛选过表达Cdx2的胃癌MGC-803细胞与对照组间差异表达的免疫相关基因. 探讨Cdx2对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响。 方法 分别抽取Cdx2转染组和对照组的细胞总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子(Cy3/ Cy5)标记cDNA 探针,与含有21522条人类22k基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析。 结果 在21522条基因中,胃癌细胞间差异性表达基因为有551条,其中302条上调,249条下调。其中与免疫相关的基因共有7个,分别为HLA-E、RRAS、ULBP2、HLA-G、HLA-C、CTSB、CTSL,均表达上调。结论 Cdx2过表达上调了胃癌MGC803细胞免疫相关基因的表达,这可能与胃癌细胞生物学行为的改变有关。     

姜黄素纳米微粒对体外胃癌MGC803细胞凋亡机制的影响

目的观察姜黄素纳米微粒对人胃癌MGC803细胞凋亡机制的影响。方法 MTT法建立细胞剂量效应曲线,光镜和电镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪分析MGC803细胞周期改变,免疫组化法检测凋亡相关Bcl-2蛋白表达。结果 MTT法显示,姜黄素纳米微粒抑制胃癌MGC803细胞增殖,呈现剂量-时间依赖性;光镜观察姜黄素纳米微粒组细胞损伤较轻,电镜下核周隙清晰,突触小泡较多;流式细胞仪法显示,姜黄素纳米微粒使胃癌MGC803细胞阻滞于G2/M期;免疫组织化学法显示,姜黄素纳米微粒使凋亡相关Bcl-2蛋白表达下调。结论姜黄素纳米微粒诱导人胃癌细胞MGC803凋亡并且延长药物对胃癌MGC803细胞作用时间。     

人胃癌MGC803细胞紫杉醇耐药细胞系初步建立的实验研究

目的：探讨胃癌MGC803对紫杉醇的耐药机制,初步建立人胃癌MGC803紫杉醇耐药细胞系,研究耐药过程中的变化。方法：采用逐步递增紫杉醇浓度,间歇作用体外诱导法建立人胃癌MGC803紫杉醇耐药细胞系MGC803/PA,做相关检测;MTT法测定药物敏感性;光学显微镜、电子显微镜、MTT法等方法观察其生物学指标的改变。结果：经过4个月建成人胃癌MGC803紫杉醇耐药细胞系MGC803/PA,2、3、4个月的耐药指数分别为5.12、11.46、15.98,并且与其他多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性,MGC803/PA的细胞形态逐渐发生改变,生长曲线逐渐改变。结论：MGC803/PA细胞具有耐药表型,且耐药性能稳定,MGC803/PA的增殖能力逐渐下降,MTT法及其电镜可以较早地提示MGC803/PA的耐药特征。     

雪灵芝水提取物对人胃腺癌MGC-803细胞Bcl-2，Bax基因表达的影响

目的研究雪灵芝水提取物对人胃腺癌MGC-803细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法不同浓度的雪灵芝水提取物处理体外培养的MGC-803细胞,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MYr）法检测细胞存活水平;应用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平;采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白印迹法（Western Blot）测定人胃腺癌MGC-803细胞的Bcl-2和Bax基因表达情况。结果雪灵芝水提取物作用于人胃腺癌MGC～803细胞后,0．1～0．8mg／mL浓度组细胞存活水平随药物浓度的增大而减小（P〈0．05）;0．8mg／mL浓度组MGC-803细胞G．期比例为（61．23±6．45）％、S期细胞比例为（26．86±3．38）％、细胞凋亡率为（0．07±0,01）％,与对照组相比,P〈0．05;与对照组相比,0．8mg／mL浓度组Bcl-2 mRNA表达降低、Bax mRNA表达增加（P〈0．05）;0．2～0．8mg／mL浓度组Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增加。结论雪灵芝水提取物在一定浓度范围内可降低MGC-803细胞的存活水平,使细胞发生凋亡,其机制可能为通过下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达,促进细胞凋亡发生。