1,25(OH)2D3对糖尿病大鼠胰腺移植后急性排斥反应的免疫调控研究

目的:探讨1,25(OH)2D3对大鼠胰腺移植急性排斥反应的免疫调控作用.方法:以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,分A组(急性排斥对照组);B组(雷帕霉素治疗组);C组[1,25(OH)2D3治疗组],每组15例;观察术后各组血糖变化,移植物存活以及组织病理学改变;流式细胞检测受体血、脾以及移植物CD4 T细胞、CD8 T细胞、CD4 CD25 T细胞表达水平;ELISA检测受体血清IL-2、4、10、12表达水平;在诱导Lewis大鼠骨髓细胞定向分化为树突状细胞(DC)时加入1,25(OH)2D3,流式细胞仪检测CD80,CD86及MHCⅡ类分子表达情况.结果:预防性使用1,25(OH)2D3、保护移植物功能(血糖5.12±0.89 VS 12.41±1.16),延长移植后受体平均存活时间;CD8 T细胞计数C、B与A组相比均有减少,差异有统计学意义(P＜0.01).CD4 T细胞C、B与A组的差异有统计学意义.CD4 CD25 调节性T细胞A、B、C组逐渐升高,有统计学意义(P＜0.01),且以C组较为明显(C组VSA组P＜0.01);血清Th1类细胞因子浓度明显降低,Th2类细胞因子浓度明显增高;在体外实验中,1,25(OH)2D3显著抑制了DC的成熟过程及其表面共刺激分子的表达.结论:1,25(OH)2D3可抑制DC发育成熟,诱导产生基因耐受性树突细胞,促进调节性T淋巴细胞的增生,抑制致病性T淋巴细胞,抑制急性排斥反应,延长受体存活时间.     

维生素D诱导调节性T细胞分化及其在自身免疫性肝炎发病中的作用

目的分析自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血调节性T细胞(Treg)比例、白细胞介素-10(IL-10)水平与维生素D的相关性,探讨维生素D对Treg细胞分化的影响。方法选取平顶山市第一人民医院2015年2月至2016年12月收治的AIH患者30例为观察组,另选取同期体检健康者18例为对照组,对照组于体检当日、观察组于入院次日抽取晨起空腹肘静脉血10 m L,以肝素锂抗凝,分离血浆冻存,并采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),分别采用全自动生物化学分析仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆25-羟维生素D[25-(OH)-D3]和IL-10水平,采用多色荧光抗体结合流式细胞术分析样本中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例,分析三者之间的相关性。在体外条件下分离观察组患者的PBMC,在有或无活化形式的维生素D[1,25-(OH)2-D3]的条件下给予佛波酯(PMA)刺激16 h,再用流式细胞术检测刺激后PBMC中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例,同时采用ELISA法检测刺激后上清液中IL-10水平。结果观察组患者血浆25-(OH)-D3、IL-10水平显著低于对照组(P<0.05,P<0.01)。观察组患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例显著低于对照组(P<0.05)。观察组患者外周血25-(OH)-D3水平与IL-10水平及CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例均呈正相关(R2=0.379,P=0.000 3;R2=0.151,P=0.034 1)。在有1,25-(OH)2-D3的条件下给予PMA刺激,观察组患者的CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例和上清液中IL-10水平均显著高于无1,25-(OH)2-D3的条件下给予PMA刺激后(P<0.05)。结论维生素D可直接诱导Treg细胞增殖分化,AIH患者体内Treg细胞减少在某种程度上与维生素D缺乏有关。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的 探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4+ CD25+ Foxp3+ T 细胞)及气道炎症的影响.方法 28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7).治疗组 1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组).分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL．10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达.以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7).结果 哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异.与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加.各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异.结论 哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平.提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用.     

1,25二羟基维生素D_3对大鼠脾CD4~+CD25~+调节性T细胞及Foxp3基因表达的影响

目的:探究1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠脾CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)及其特异性转录因子Foxp3基因表达的影响.方法:近交系雄性Lewis大鼠,随机分成对照组和3个剂量的VitD3组: 0.125 μg组,0.25 μg组和1 μg组,每组30只;灌胃给药,3次/周,共2周后对照组给予赋形剂;各组随机抽取20只大鼠,于第15 d腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg),随机选择其中10只于6 h后切取脾,其余10只观察注射LPS后96 h大鼠的病死率,同时留取未注射LPS大鼠的脾;流式细胞仪检测脾CD4 CD25 Treg数量变化,RT-PCR检测脾Foxp3 mRNA表达.结果:1,25(OH)2D3明显上调大鼠脾CD4 CD25 Treg的数量及特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达;1,25(OH)2D3能保护大鼠抵抗LPS的攻击.结论:1,25(OH)2D3对大鼠脾CD4 CD25 调节性T细胞及特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达有显著影响.1,25(OH)2D3保护大鼠抵抗LPS攻击可能与其促进CD4 CD25 Treg的发育和功能有关.     

1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4 CD25 Foxp3 T细胞)及气道炎症的影响。方法28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7)。治疗组1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组)。分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL-10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达。以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7)。结果哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异。与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加。各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异。结论哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平。提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用。     

1,25-二羟基维生素D3对鼠宫颈癌免疫作用的研究

目的探讨1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)对裸鼠宫颈癌移植瘤生长的抑制作用。方法制备BALC/c裸鼠皮下宫颈癌模型20只,随机分为4组:1,25-(OH)2D3组、单纯放疗组、1,25-(OH)2D3+放疗组及对照组,每组5只。观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况,测量肿瘤直径并计算瘤体积。断颈处死裸鼠,天平称量肿瘤的重量。测定引流淋巴结中单个核细胞中CD4+、CD4+CD25+含量。结果 1,25-(OH)2D3组及单纯放疗组对肿瘤生长均有抑制作用,二者联合作用抑制更显著。1,25-(OH)2D3组、单纯放疗组及1,25-(OH)2D3+放疗组抑瘤率分别为34.8%、52.1%、54.1%。1,25-(OH)2D3干预后CD4+、CD4+CD25+含量与对照组及放疗组差异无统计学意义,而CD4+CD25+/CD4+在1,25-(OH)2D3组与对照组相比差异显著(P<0.05),1,25-(OH)2D3+放疗组与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论 1,25-(OH)2D3+放疗对对裸鼠移植瘤宫颈癌生长有显著免疫抑制作用,为宫颈癌的综合治疗提供了实验依据。     

屋尘螨过敏症母亲脐血中调节性T细胞数量上存在的缺陷

目的:探讨屋尘螨过敏症母亲脐血中CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T(Treg)细胞和CD4+ IL-10+调节性T(Treg)细胞是否存在数量上的缺陷.方法:收集7例患屋尘螨过敏症及14例无过敏症母亲的脐血,分离脐血单个核细胞(CBMC)后体外培养,分别用及不用天然屋尘螨抗原1(nDer pl)刺激,用流式细胞术检测刺激及不刺激时CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞及CD4+ IL-10+ Treg细胞占CD4+T细胞的比率.结果:不刺激时,过敏症母亲组CBMC中的CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞占CD4+T细胞的比率为(1.13±0.36)％,显著低于无过敏症母亲组的比率(3.11±1.13)％(P＜0.01).尘螨抗原刺激后,两组CD4+ CD25+ Foxp3Treg细胞比率均较不刺激时升高(P＜0.01),过敏症母亲组增加的比率为(0.67±0.25)％,低于无过敏症母亲组增加的比率(1.50±0.40)％(P＜0.01);不刺激时,过敏症母亲组CD4+IL-10+ Treg细胞比率的中位数为0.41％,显著低于无过敏症母亲组的1.04％(P＜0.01);尘螨刺激后,无过敏症组CD4+ IL-10+ Treg细胞比率2.26％较该组不刺激时比率1.04％升高(P＜0.05),显著高于过敏症母亲组的比率0.61％ (P＜0.01),但两组提高的幅度未见统计学差异(P＞0.05).结论:过敏症母亲脐血中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞及CD4+ IL-10+ Treg细胞在数量上存在缺陷.     

哮喘患者外周血调节性T细胞和Th17细胞数量及其转录因子的变化

[摘要] 目的： 观察哮喘患者外周血CD4+CD25+Foxp3+、CD4+IL-17+细胞的百分比和Foxp3、白介素-17(IL-17)、RORγt mRNA的表达水平的变化与哮喘发病的关系。方法： 分别取23例哮喘缓解期患者、25例哮喘急性发作期患者和20例健康人（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,免疫磁珠阴选CD4+T细胞,采用Foxp3、IL-17胞内染色的方法,通过流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+以及CD4+IL-17+细胞的百分比,应用RT-PCR检测Foxp3、IL-17、RORγt mRNA水平。结果： 免疫磁珠阴选CD4+T细胞纯度达90％以上。急性发作组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞百分比以及Foxp3 mRNA水平较对照组和缓解组明显降低（P＜0.01）,而缓解组和对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;急性发作组CD4+IL-17+细胞比例以及IL-17、RORγt mRNA表达较对照组和缓解组明显增高（P＜0.01）,而缓解组亦明显高于对照组（P＜0.05）。结论： Treg/Th17失衡可能和哮喘发病密切相关。     

从Th17和CD4+CD25+Foxp3+T细胞功能变化探讨肺结核的耐药机制

目的 分析耐药肺结核患者外周血Th17细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例及细胞因子的变化,从免疫学角度探讨其耐药机制。 方法 分别选取33例耐药肺结核(耐药组)、49例普通肺结核(普通组)及51例健康志愿者(对照组)展开对比研究。检测Th17细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例;采用RT-PCR检测其特异性转录因子RORγt与Foxp3的mRNA表达水平;采用ELISA实验检测IL-17A、IL-17F、TGF-β1及IL-10的血清水平。 结果 普通组Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平低于对照组,耐药组低于普通组;普通组CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例和Foxp3 mRNA表达水平高于对照组,耐药组高于普通组;普通组Th17/CD4+CD25+Foxp3+T和RORγt/Foxp3低于对照组,耐药组低于普通组(P＜0.05)。普通组IL-17A、IL-17F水平低于对照组,耐药组低于普通组;普通组TGF-β1、IL-10水平高于对照组,耐药组高于普通组;其组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论 Th17/CD4+CD25+Foxp3+T平衡向CD4+CD25+Foxp3+T偏移、免疫系统功能抑制,可能是结核病慢性化和产生耐药的重要机制之一。      

川崎病急性期患儿外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平的改变及其临床意义

目的 探讨T调节细胞在川崎病临床过程中的作用以及免疫失调与川崎病发病机制的关系.方法 分别于急性期与亚急性期采集18例KD患者外周静脉血,流式细胞技术检测T细胞中CD4、CD25与Foxp3的表达情况.结果 亚急性期CD4+ CD25high Foxp3+ T细胞的百分比较急性期明显升高(1.11±1.21)％ vs (0.54±0.55)％,P＜0.05,尽管CD4+ CD25low Foxp3+ T细胞与CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的水平变化轻微,但是CD4+ CD25+ Foxp3-T细胞在亚急性期的水平明显低于急性期(2.86±1.85)％vs(5.74±5.79)％,P＜0.05.因此CD25high Foxp3+ T细胞与CD25+ Foxp3-T细胞的比率在亚急性期的水平明显高于急性期(0.46±0.55)％vs (0.12±0.12)％,P＜0.05.结论 CD4+ CD25high Foxp3+ T细胞的减少和/或CD25high Foxp3+ T细胞与CD25+ Foxp3-T细胞的比率失衡在KD的发病过程中扮演重要角色,由于所有患者均接受了丙种球蛋白的治疗,CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的恢复可能是IVIG治疗KD的作用靶点.     

变应性鼻炎辅助性T细胞免疫球蛋白功能区和黏液素样功能区-1的表达

目的 探讨人辅助性T细胞(helperT lymphocyte,Th)表达T细胞免疫球蛋白功能区和黏液素样功能区-1(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-1,TIM-1)在变应性鼻炎(allergicrhinitis,AR)中的作用.方法 密度梯度离心分离20名健康人和20例AR患者外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,PBMC),免疫磁珠分选CD4+T细胞,CD4+CD45RA+T细胞,免疫荧光和流式细胞仪检测TIM-1阳性细胞.对比植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA,20μg/ml)非特异性刺激上述细胞后表达TIM-1阳性细胞的差异.标准变应原(屋尘螨,50000 SOU/ml)和内毒素(脂多糖,lipopolysaccharide,LPS,20ng/ml)特异性刺激树突状细胞(dendritic cells,DC),观察DC提呈抗原并诱导初始Th细胞表达TIM-1的特点.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中IL-4、IFN-γ的分泌.结果 AR患者组CD4+T细胞中TIM-1阳性CD4+T细胞9.48%4±1.51%,高于健康组3.12%±0.32%(P＜0.05);PHA刺激后两组表达TIM-1的CD4+T细胞均高于刺激前(P值均<0.05).DC提呈抗原刺激健康组初始Th细胞后,检测混合细胞液中表达TIM-1的细胞,标准变应原组10.81%±1.48%,高于LPS组6.07%±1.45%(P＜0.05).ELISA检测相应IL-4、IFN-γ的分泌,标准变应原组IL-4为(74.61±13.82)pg/ml、(25.31±7.23)pg/ml;LPS组分别为(28.57±3.36)pg/ml、(163.41±82.37)Pg/ml.结论 AR患者中表达TIM-1的Th细胞高于健康者,DC提呈抗原后可以促进其表达;TIM-1的表达有利于初始Th细胞向Th2分化,由此诱发以Th2细胞因子为主的免疫反应.     

1,25-Dihydroxyvitamin D3 pretreatment enhances the efficacy of allergen immunotherapy in a mouse allergic asthma model

Background  Allergen-specific immunotherapy can induce immune tolerance to specific allergens by regulating immune status of individuals. However, its clinical application is limited due to individual differences in efficacy among patients and un-confirmed safety. 1,25 Dihydroxyvitamin D₃ (1,25(OH)₂D₃) has been shown to be involved in a variety of physiological processes, including immune response regulation. In the present study we explored the role of 1,25(OH)₂D₃ pretreatment for immunotherapy.

Methods  Seventy-five BALB/c mice were randomly divided into five groups (15 mice per group). The mouse allergic asthma model was established by intra-peritoneal injection of ovalbumin (OVA, 10 μg) and aluminium hydroxide (2 mg) as an adjuvant. Intra-peritoneal injection of 50 ng of 1,25(OH)₂D₃ served as a pretreatment, subcutaneous injection of OVA (100 μg) as an immunotherapy, and 1% OVA inhalation as a challenge. Histopathological analysis was performed on four mice per group. The number of cells and their classification in bronchoalvolar lavage (BAL) fluid were assayed. Levels of serum OVA-specific immunoglobulin E (sIgE) and IFN-γ, IL-4, IL-5 and IL-10 in BAL fluid were measured by ELISA.

Results  After 1,25(OH)₂D₃ pretreatment, immunotherapy could significantly inhibit the infiltration of inflammatory cells into lung tissues and BAL fluid of mice with allergic asthma when compared with un-treated animals (eosinophils: (7.46±1.34)×10⁴/ml vs. (13.41±1.67)×10⁴/ml, P <0.05). In addition, levels of IL-4 ((36.91±7.87) pg/ml vs. (43.70±6.42) pg/ml, P >0.05) and IL-5 ((41.97±7.93) pg/ml vs. (60.14±8.35) pg/ml, P <0.05) in BAL fluid and serum sIgE ((0.42±0.05) vs. (0.75±0.06) OD units, P <0.05) were profoundly reduced. However, the IL-10 level in BAL fluid was significantly increased ((67.74±6.57) pg/ml vs. (44.62±8.81) pg/ml, P <0.05).

Conclusions  These results indicated that 1,25(OH)₂D₃ pretreatment enhanced the inhibitory effects of immunotherapy on allergic airway inflammation. In the treatment of allergic diseases, 1,25(OH)₂D₃ pretreatment may be beneficial for improving the efficacy of immunotherapy. 

     

fas介导系统性红斑狼疮患者Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞凋亡的研究

目的 探讨fas凋亡信号传导途径在系统性红斑狼疮(SLE)患者Foxp3+CD4+CD25+Treg凋亡异常中的作用.方法 选取活动期SLE患者25例、缓解期SLE患者20例及健康对照25名为研究对象,检测所有研究对象外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg表面fas的表达,同时分析CD4+CD25+T细胞Foxp3表达.并分别将fas表达率及Foxp3表达率与病情活动性(SLEDAI评分)进行相关分析.结果 (1)外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg上fas的表达:活动期SLE组为(23.72±2.35)%,缓解期SLE组为(14.0±2.1)%,对照组为(10.1±1.2)%,在活动期SLE组明显高于缓解期SLE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01),而缓解期SLE组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),fas在Foxp3+CD4+CD25+Treg上的表达与SLEDAI评分呈正相关(r=0.336,P＜0.05).(2)外周血CD4+CD25+T细胞Foxp3的表达:活动期SLE组为(2.83±0.30)%,缓解期SLE组为(5.38±0.63)%,对照组为(8.12-±0.70)%.活动期SLE组外周血 CD4+CD25+T细胞Foxp3表达明显低于缓解期SLE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01);而缓解期SLE组亦低于对照组(P＜0.05).外周血Foxp3表达与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.581,P＜0.01).(3)Foxp3与fas的表达呈负相关(r=-0.349,P＜0.01).结论 SLE患者中存在由fas介导的Foxp3+CD4+CD25+Treg的过度凋亡,这可能是导致SLE病情活动的机制之一.

Abstract：

Objective To explore the role of fas apoptosis signal transduction pathway in the abnormal apoptosis of Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg in patients with systemic lupus erythematosus ( SLE ).Methods Twenty-five active SLE patients, 20 remission SLE patients and 25 controls were selected. The level of fas expression on peripheral blood Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg surface was detected in SLE patients.And analyzed the expression rate of Foxp3 on CD4 + CD25 + T cells was analyzed to explore the relationship between the expression rate and disease activity. Results ( 1 ) The expression rate of fas on Foxp3 + CD4 +CD25 + Treg was (23.72 ± 2. 35 )% , ( 14. 0 ± 2. 1 )% in active and remission SLE groups respectively versus ( 10. 1 ± 1.2)% in control group. The fas expression rate of active SLE group was significantly higher than those of remission SLE group( P ＜ 0. 01 ) and control group ( P ＜ 0. 01 ). And the remission SLE and control groups were not statistically significant ( P ＞0. 05 ). The expression rate of fas on the Foxp3 + CD4 +CD25 + Treg was positively correlated with the SLEDAI ( SLE disease activity index ) score ( r = 0. 336, P ＜0.05). (2) The expression rate of Foxp3 on CD4 +CD25 +T cells was (2.83 ±0.30)%, (5.38 ±0. 63 ) % in active and remission SLE groups respectively versus ( 8. 12 ± 0. 70 ) % in control group. The expression rate of Foxp3 was significantly lower in active SLE group than that in remission SLE group ( P ＜0. 01 )and control group( P ＜0. 01 ). And the Foxp3 expression rate of remission group was also lower than that of control group ( P ＜ 0.05 ). The expression rate of Foxp3 was negatively correlated with the SLEDAI score (r = -0. 581, P ＜ 0. 01 ). (3) The expression rate of Foxp3 was negatively correlated with fas (r=- 0. 349, P ＜ 0. 01 ). Conclusion The abnormal apoptosis of Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg mediated by the fas apoptosis signal transduction pathway may be one of the pathogenic mechanisms of disease activity in SLE patients.     

慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征患者外周血CD4+CD25+T调节细胞功能检测及意义

目的 探讨慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(chronic abacterial prostatitis/chronic pelvic pain syndrome,CAP/CPPS)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量和功能的变化及其临床意义.方法 对45例CAP/CPPS患者和18名正常人采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+,CD4+CD25highT淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率,RT-PCR检测Foxp3mRNA表达,ELISA法检测TGF-β1水平.结果 CAP/CPPS患者外周血CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);CAP/CPPSⅢA、ⅢB组患者外周血单个核细胞(PBMC)中Foxp3mRNA表达水平[(0.69±0.23)、(0.44±0.18)]较对照组(1.37±0.19)明显降低(P=0.035,P=0.014);CAP/CPPSⅢA、ⅢB组患者血清中TGF-β1水平[(18.09±10.45)pg/ml、(14.06±6.22)pg/ml]较对照组[(27.01±13.29)pg/ml]降低(P=0.041,P=0.024).结论 外周血CD44CD25+调节性T细胞数量与CAP/CPPS的发病无明显关联,CD4+CD25+调节性T细胞功能障碍可能参与CAP/CPPS发病机制;Foxp3基因与TGF-β1在CAP/CPPS的发病过程中起重要作用.     

Effect of 1,25-Dihydroxyvitamin D3 on Regulatory T Cells in Ovariectomized Mice

ObjectiveTo investigate thecorrelation betweenregulatory T(Treg) cellsand postmenopausal osteoporosis andthe antiosteoporotic effect of 1,25-dihydroxyvitamin D3[1,25(OH)2D3] in relation to Treg cells. ...     

大蒜新素抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导调节性T细胞扩增的体外研究

目的 在细胞水平研究大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染鼠胚肺成纤维细胞(MEF)诱导调节性T细胞(Treg)异常扩增的抑制作用.方法 建立MEF和T淋巴细胞的共培养体系,采用MEF对大蒜新素的最大耐受浓度(MTC)处理MCMV感染的MEF 3 d后,再用实时定量PCR检测T细胞中叉头蛋白3(Foxp3)mRNA表达水平,流式细胞术检测效应性T细胞哑群杀伤性T细胞Ⅰ型(Tc1)、杀伤性T细胞Ⅱ型(Tc2)、辅助性T细胞Ⅰ型(Th1)和辅助性T细胞Ⅱ型(Th2)的百分比,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测共培养体系中自细胞介素10(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β的蛋白表达,标准蚀斑法检测共培养体系中的病毒负荷量,并与安慰剂组进行统计学分析比较.结果 MEF对大蒜新素的MTC浓度为9.83μg/ml.MTC浓度的大蒜新素可部分拮抗MCMV诱导的Foxp3基因表达上调(87±5比114±8,P<0.01);分别上调Tc1、Tc2和Th1百分比至(12.42±1.23)%、(4.28±0.56)%、(13.25±0.68)%,与安慰剂组[(6.85±0.92)%、(2.34±0.42)%、(9.32±0.86)%]比较差异均有统计学意义(均P<0.01);使IL-10和TGF-β蛋白表达水平分别降至(29.98±3.15)pg/ml和(3.48±0.23)ng/ml,均显著低于安慰剂组水平[(38.21±4.02)pg/ml和(5.31±0.59)ng/ml,均P<0.05];同时将体系中的病毒负荷量由(6.79±0.39)降至(5.03±0.08)(均P<0.01).结论 大蒜新素在体外可通过抑制Treg途径来增强抗病毒免疫.     

梅毒血清固定患者外周血中Th17/Treg细胞、Foxp3和ROR-γt的表达水平及相关性研究

目的 通过检测梅毒血清固定患者外周血Th 17/Treg细胞比例及其特异性转录因子叉头状转录因子3(Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)的mRNA表达水平以及相关的细胞因子水平,探讨其与梅毒血清固定免疫机制的关系.方法 采集60例梅毒血清固定患者(观察组)和60例健康对照者(对照组)的外周血,分离单一核细胞(PBMCs),采用流式细胞仪检测Th17和Treg细胞比例;提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)法检测Foxp3和ROR-γt的mRNA表达水平;采用ELISA法测定PBMCs上清液中IL-17和转化生长因子-β(TGF-β)水平.结果 观察组外周血中的Treg细胞比例[(9.68±1.54)％]、Foxp3的mRNA[(2.85±0.16)％]和TGF-3[(275.15±20.89) pg/ml]的表达水平明显高于对照组[(5.96±1.27)％、(1.96±0.14)％、(156.33 ±41.49) pg/ml];观察组中的Thl7细胞比例[(1.13±0.31)％]、ROR-γt的mRNA[(0.98±0.16)％]和IL-17的表达水平[(12.21 ±4.73) pg/ml]明显低于对照组[(1.98±0.17)％、(1.85±0.15)％、(18.98±6.89) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血中Treg和Th17细胞比例的变化、Foxp3和ROR-γtmRNA表达水平的异常与梅毒血清固定的免疫机制相关,梅毒血清固定患者可能存在Treg/Th17的失衡,且向Treg细胞漂移.     

T-bet基因修饰树突细胞对哮喘模型小鼠气道炎症的阻抑和逆转作用

目的 探讨T-bet基因修饰树突细胞(DC)用作哮喘治疗策略的可行性和机制.方法 将从小鼠骨髓单个核细胞诱导培养获得的DC分2组,分别以腺病毒载体介导的方法 转染T-bet基因和β-半乳糖苷酶(LacZ)基因,另设空白对照组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组DC培养液中干扰素γ(IFN-γ)水平.以卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏(第1、15天)和雾化吸入激发(第29～31天)方法 制备哮喘小鼠模型和哮喘再激发模型(第45～47天雾化吸入OVA),分别用于气道炎症阻抑试验和气道炎症逆转试验,各设正常对照组、模型对照组、激发或再次激发前静脉注射T-bet基因修饰DC组(T-bet组)和静脉注射LacZ基因修饰DC组(LacZ组),每组8只小鼠.阻抑和逆转试验小鼠分别于建模第37和49天处死,ELISA检测血浆IFN-γ和白细胞介素4(IL-4)水平,取肺脏行常规组织病理学检查.结果 转染T-bet基因组DC培养液中IFN-γ水平(ng/m1)为15.24±4.75,明显高于转染LacZ组和空白对照组(分别为3.08±0.61、2.35±0.41,均P＜0.01).气道炎症阻抑和逆转试验中,T-bet组小鼠血浆IFN-γ水平(pg/ml)分别为130.2±10.5、145.7±16.7,均明显高于正常对照组(分别为25.0±6.5、24.6±5.9,均P＜0.01)、模型对照组(分别为20.7±4.5、16.5±7.0,均P＜0.01)和LacZ组(分别为17.6±7.0、24.2±9.0,均P＜0.01),而IL-4水平均低于模型对照组和LacZ组(均P＜0.01).组织病理学检查显示T-bet组小鼠气道炎症表现明显轻于模型对照组和LacZ组.结论 以T-bet基因修饰DC为基础的哮喘治疗策略是可行的,其机制可能与T-bet基因修饰可提高DC的IFN-γ表达水平从而在抗原呈递水平干预辅助性T细胞的分化有关.     

肾综合征出血热患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞检测及其意义

目的 研究CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在肾综合征出血热(HRFS)患者外周血中的比例改变并探讨其在疾病进程中的意义.方法 选取27例HRFS患者,外周血用细胞内染色的流式细胞术及荧光定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3+表达,并与肾活检结果及肾功能进行相关分析.同时取19名正常健康体检者作为正常对照组.结果 HRFS患者各期CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例明显均低于正常对照组(低血压休克期:5.0%±1.2%,少尿期:3.1%±0.8%,多尿期:4.2%±0.9%,恢复期:5.0%±1.1%,正常对照组:6.5%±2.1%,均P<0.01);各期间CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例差异亦有统计学意义,以少尿期为最少(P<0.01).CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例与肾组织损害指数显著相关(r=0.51,P<0.01),但与蛋白尿程度及肾功能损害无显著相关(r=0.11,0.18;均P>0.05).HRFS患者少尿期外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平(503±64)明显低于正常对照组(3102±409)和其他期(低血压休克期:1805±291;多尿期:1869±320;恢复期:2697±420,均P<0.01).结论 HRFS患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了HRFS的病理进程.