简易犬皮肤表皮细胞的体外培养

目的　探索犬皮肤表皮细胞简易培养方法 ,以此了解复合组织经体外保存后组织细胞的存活状况。方法　组织块培养法。结果　培养至第 5 d,倒置相差显微镜下可见表皮细胞从组织块周围长出 ,并向四周扩展。第 7d,组织块间长出的表皮细胞已相互汇合 ,交为一体 ,形成单层表皮细胞片。至第 1 1 d,扩增的表皮细胞片直径达 1 mm以上 ,在组织块周边可见乳白色、半透明的表皮细胞生长物。结论　犬表皮细胞在 RPMI1 64 0培养基中生长良好 ,增殖旺盛。组织块培养法简便、易行 ,适合犬表皮细胞培养。     

人大肠癌细胞体外分离与培养

目的:探讨人大肠癌细胞体外分离培养的方法.方法:采用组织块法和Ⅳ胶原酶消化法体外培养人大肠癌细胞,HE染色、免疫细胞化学判断细胞的组织来源、TEM观察细胞形态,MTT法绘制细胞生长曲线.结果:采用组织块法细胞培养成功,HE染色显示核大蓝染, 细胞角蛋白鉴定胞浆黄染,细胞角蛋白阳性;透射电镜下,见细胞内丰富的线粒体、表面微绒毛、细胞间连接复合体结构;细胞生长曲线为"S".结论:组织块法原代培养细胞成功率高,需注意在取材、分离操作过程中保持无菌,所培养的细胞进行初步鉴定证明为大肠癌细胞.     

组织块贴壁法行SD大鼠肺内动脉段平滑肌细胞的原代培养及其鉴定

目的研究采用组织块贴壁法进行SD大鼠肺内动脉段平滑肌细胞（PASMCs）原代培养的方法特点及其生物学特性。方法将SD大鼠消毒后剖开胸腹腔,无菌下取出心肺组织,然后分离出肺血管段,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态、普通免疫组织化学法（SP法）和免疫荧光法进行细胞鉴定。结果组织块贴壁法培养的SD大鼠PASMCs为典型的＂峰-谷＂样生长状态,细胞的胞核较大,免疫组织化学法和免疫荧光法检测α-actin均为强阳性表达,免疫荧光法检测传至三代以后的细胞纯度可达98%以上,传代细胞生长未见明显异常改变。结论在不使用显微技术情况下,用组织贴块法成功培养大鼠PASMCs,得到稳定生长、纯度高的PASMCs,且培养与纯化可以同时进行,可获得稳定传代的细胞。     

探讨年龄因素对人黄韧带细胞原代培养的影响

[摘要]目的 探讨从不同年龄的人获得黄韧带组织与原代培养细胞游出之间的关系, 以提高黄韧带细胞原代培养的成功率。方法 采用酶消化加组织块培养法,对21例来自不同年龄腰椎管狭窄和腰椎间盘突出症患者的黄韧带组织进行黄韧带细胞原代培养, 倒置相差显微镜下观察细胞从组织块迁出时间、形态和生长状态;采用细胞免疫荧光染色法对传第3代细胞进行I 型胶原和波形蛋白表达鉴定;对组织块内细胞游出率和年龄进行相关性分析。结果 倒置显微镜下见黄韧带细胞形态生长良好,培养细胞的波形蛋白和 I 型胶原免疫荧光化学染色均呈阳性。黄韧带组织块年龄与其原代培养时细胞游出率之间呈显著负相关关系(r=-0.618),年轻黄韧带组织细胞游出率高。结论 在人黄韧带细胞的原代培养时尽量采用年轻黄韧带组织。     

大鼠肺微血管内皮细胞的分离培养

目的探讨一种分离和培养大鼠肺微血管内皮细胞(LMVEC)的简单方法。方法组织贴块法培养大鼠LMVEC,倒置显微镜下观察细胞的形态和生长特性,并采用免疫组化方法进行鉴定。结果获得的LMVEC具有规律的铺路石镶嵌状排列,内皮细胞特异性抗体CD31免疫组化染色阳性。结论组织贴块法培养LMVEC是简单可行的。     

兔VX2肺癌模型的建立及MSCT观察

目的：探讨肺内注入组织块悬液建立兔VX2肺癌模型的方法。方法：将VX2肿瘤组织块悬液注入12只中国大耳白兔右肺下叶内。利用CT扫描观察肿瘤生长和胸腔内转移情况,同时观察动物的一般情况。结果：建立的兔VX2肺癌模型组织学表现与荷瘤种兔相同。接种成功率为100%,胸壁种植率为8.3%,实验动物自接种到CT扫描发现肿瘤生长的时间为（7±1.5）d,从发现肿瘤生长到出现右侧胸腔积液间隔（8±1.6）d。12只中国大耳白兔自然存活时间为（27±4.7）d。结论：采用组织块悬液肺内注入法建立兔VX2肺癌模型方法简便,接种成功率高,是建立兔VX2肺癌模型的理想方法。     

改良组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞

目的通过改良组织块细胞培养法,建立一种简单,可行的兔成纤维样滑膜细胞体外培养方法。方法无菌条件下取正常兔膝关节滑膜组织,剔净后剪成碎块,用灭菌滤纸吸掉组织上附着的水分,碎片接种于培养皿,观察细胞生长状况及形态特征。取第3代对数期细胞,用CCK-8法绘制其生长曲线,并用免疫荧光法检测波形蛋白的表达情况。结果体外培养的兔成纤维样滑膜细胞形态为长梭形纤维样,细胞生长力较旺盛,生长曲线为典型的"S"型,免疫荧光检测显示第3代细胞强表达波形蛋白。结论改良组织块法可以分离培养出兔成纤样维滑膜细胞,方法简便,成功率高,满足实验要求。     

人早孕绒毛膜与蜕膜组织体外培养方法的研究

目的：探讨体外培养人绒毛膜组织和蜕膜组织的方法，并对其体外生长规律进行研究，方法：分别采取组织切割和胰酶消化处理两种人流组织，置RPMI－1640培养液，组织细胞可存活四周以上。结果：正常人流组织可在体外分离出绒毛膜组织和蜕膜组织，并能生长出单层组织，结论：分离培养的两种组织细胞可供体外基础与临床的实验研究。     

鼠牙髓组织细胞培养的生长特性及形态特征研究

应用组织块培养法，对大白鼠牙髓组织细胞进行了原代和传代培养，同时对培养细胞来源、生长特性进行了初步观察和鉴定。结果证实，培养的鼠牙髓细胞为来自中胚层的成纤维细胞，该细胞的细胞器发达，４～５代后的细胞生长稳定，增殖速度快，提示培养的鼠牙髓细胞适合体外实验并以选择４～５代后的细胞进行实验为宜。     

两种人鼻咽癌活检组织上皮细胞原代培养方法比较

目的 比较两种人鼻咽癌活检组织上皮细胞原代培养方法,并初步探讨鼻咽癌原代培养细胞的生长特性.方法 收集未经放、化疗的鼻咽痛初诊病人鼻咽部肿瘤活检组织33例,其中17例采用组织块培养法.16例采用组织块预消化培养法,用含2%胎牛血清的Keratinocyte-SFM培养基培养.比较两种方法干贴壁时间、成功率及细胞长出所需平均天数,并通过倒置显微镜、抗人角蛋白单克隆抗体免疫细胞化学染色、生长曲线、生存分析来观察原代培养细胞的特性.结果 组织块培养法成功率为23.5%(4/17),干贴壁时间为4.47±0.48h,细胞长出所需时间为13.75±1.5d;组织块预消化培养法成功率为62.5%(10/16),干贴壁时间为7.88±1.01 h,细胞长出所需时间为8.3±4.55d,差异有统计学意义(P<0.05).组织块培养法,细胞多层重叠排列,结构不清,始终没有继续繁殖生长;组织块预消化培养法,细胞呈梭形,核大居中,多个核仁,抗人角蛋自单克隆抗体免疫细胞化学染色阳性,生存时间均数为62.72d.结论 组织块预消化培养法较组织块法成功率高,细胞长出所需平均天数短,干贴壁时间长;低浓度血清的Keratinocyte-SFM培养基适合鼻咽癌原代上皮细胞体外培养.     

揭膜法培养兔角膜内皮细胞的改进

目的探讨培养兔角膜内皮细胞的最佳方法。方法在手术显微镜下撕下兔角膜后弹力层及内皮细胞层并使之完整覆盖于盖玻片上,避免其卷曲和折叠并剪切成均匀小块,使内皮面向上置于培养瓶中进行培养。结果未加入任何促细胞分裂剂的情况下,细胞在体外生长良好,角膜内皮细胞很快自组织片迁移生长,1周后组织块周围长出细胞晕,2周内铺满瓶底,可以快速获取角膜内皮细胞。结论本法培养的内皮细胞不需用酶,具有组织片无折叠,贴壁更牢固,细胞更易移行、增殖等优点,可为角膜内皮的研究提供较多的纯内皮细胞。     

子宫内膜异位症原代细胞培养及纤维化相关蛋白检测

目的 检测在位子宫内膜组织、子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）异位病灶组织及正常人子宫内膜组织分离提纯子宫内膜间质细胞及相应间质细胞中纤维化相关蛋白表达水平及差异。方法 在严格无菌条件下,刮勺刮取新鲜子宫内膜组织,冰盒运输,采用改良EMs原代细胞培养方法分离培养。并通过细胞爬片免疫组织化学方法,对分离提纯的细胞进行鉴定。蛋白免疫印迹方法检测对比分离提纯的细胞与相应组织纤维化相关蛋白表达的差异。结果 EMs在位内膜组织间质细胞原代分离12例均成功,成功率100%（成功指标：指细胞在培养瓶中贴壁生长并稳定传代）。EMs异位组织分离培养12例成功11例,成功率为91.7%。正常人子宫内膜组织分离9例成功8例,成功率为88.9%。人子宫内膜异位症异位间质细胞（human ectopic endometrial stromal cells,HEcESCs）与人子宫内膜异位症在位间质细胞（human eutopic endometrial stromal cells,HEuESCs）及正常人在位子宫内膜间质细胞（human normal endometrial stromal cells,HEnESCs）普通光镜观察无明显差异。但免疫组织化学、蛋白免疫印迹结果表明：HEcESCs纤维化相关蛋白的表达水平明显高于HEuESCs及HEnESCs两者纤维化相关蛋白表达水平（P<0.01）,而HEuESCs与HEnESCs纤维化相关蛋白的表达差异无统计学意义（P>0.05）,各间质细胞纤维化相关蛋白的表达与其相应组织水平相一致。结论 采用改良EMs间质细胞原代培养方法,可以降低EMs子宫内膜间质细胞培养难度,并保持较高的细胞培养成功率。HEcESCs较HEuESCs及HEnESCs纤维化相关蛋白表达明显增高,即子宫内膜异位症患者,异位病灶在组织水平出现了明确的纤维化。     

ICR胎鼠原代神经元细胞培养及鉴定

目的 建立较理想的胎鼠神经元细胞体外原代培养方法。方法 取13.5 d ICR胎鼠的大脑皮层,经剪碎消化得到单细胞悬液进行培养,观察细胞形态并作PCR及Western blotting等进行神经元相关的基因及蛋白Tuj1和Map2的鉴定。结果 细胞生长状态良好,细胞胞体明显,周围有明亮光晕,细胞突触交错形成网络样,通过PCR及Western blotting验证证明所分离培养的细胞是神经元细胞。结论 本培养方法简单易行,可获得典型和纯度较高的ICR胎鼠大脑皮层神经元细胞。     

优化贴壁法人皮肤成纤维细胞的原代培养

目的:优化贴壁法原代培养人皮肤成纤维细胞的条件,建立稳定?经济?高效可行的人皮肤成纤维细胞培养方法?方法:采用包皮环切术后皮肤组织,剪成均匀组织块后贴壁,皮肤边缘长出薄层致密细胞团后胰酶消化?传代,并对所培养的细胞进行形态学观察及细胞免疫荧光鉴定?此方法与酶消化法相对照?结果:优化贴壁法成功率100%,取得组织后2 d沿皮肤边缘均开始生长高密度类圆形细胞层,在1周内可获得高质量?高数量的细胞,传代贴壁后经镜下形态观察及细胞免疫荧光染色确定为皮肤成纤维细胞?结论:较之酶消化法,优化贴壁法细胞存活率高,活性及纯度好?该方法可稳定?经济地获得足够数量的细胞?     

大肠癌原代细胞培养方法的探索

目的：探讨肿块大体类型、分化程度、取材位置以及不同培养方法等因素对大肠癌原代细胞培养成功率的影响,寻求一种简便而高效的大肠癌原代细胞培养方法。方法：分别对选材不同的人大肠癌细胞进行胶原酶消化法、组织块法培养,并比较不同培养基、细胞培养方法和细胞纯化方法对大肠癌细胞原代培养结果的影响,倒置显微镜下观察原代细胞的生长情况,免疫细胞化学法检测细胞表面标记物的表达情况。结果：肿块增生型肿瘤标本污染较少,肿瘤中心部位取材的肿瘤细胞活性好（2例培养出满意细胞均为肿块增生型中央深部取材获得）。低分化级别肿瘤短期生长可表现出明显活力,细胞数多于中分化,但长期生长结果未发现细胞数明显增多。2例培养出肿瘤细胞并顺利传代,1例分化为Broder Ⅱ级,1例分化为Ⅲ级。采用RPMI1640培养基,培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被,加入适量生长激素,用组织块培养法进行原代培养,胰酶消化法纯化细胞,简便且效果好。免疫细胞化学检测培养的细胞来源于上皮组织。结论：肿块型肿瘤的中心部位、分化较差的肿瘤细胞活性好。大肠癌细胞原代培养,用组织块培养法和胰酶消化法纯化,采用RPMI 1640培养基,培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被并加入适量生长激素,效果较好。     

大鼠脂肪基质细胞分离培养探讨

目的探讨不同大鼠脂肪基质细胞的培养、增殖与纯化方法,初步研究其生物学特性。方法取大鼠皮下和肠系膜部位的脂肪组织,根据两种组织对胶原酶的敏感性不同,获取基质细胞,观察生长情况,并进行鉴定。结果不同品系大鼠脂肪含量不同,皮下和肠系膜脂肪基质干细胞产率不同,生物学特性相似,贴壁细胞分两类:第一类有明显油滴;第二类细胞内无明显油滴。第一类细胞经过传代,逐渐消失,第二类细胞所要获取的脂肪基质细胞,组化鉴定CD49d( )和CD106(-),为脂肪基质细胞表型。结论建立了一种大鼠脂肪基质细胞的培养、增殖与纯化方法,不同部位来源的脂肪组织酶消化时间和细胞产率不同,同时发现所获得细胞分两类,性质有所不同,为脂肪基质细胞的相关研究打下一定的细胞生物学基础。     

黄葵素对结核分枝杆菌的抑杀作用研究

目的评价黄葵素(huangkuisu,HKS)抗结核分枝杆菌的活性。方法①采用人型结核分枝杆菌标准菌株(H37RV)、多药耐药结核菌株,分别接种于含有不同浓度黄葵素、空白对照和阳性药物的结核菌培养基,观察结核分枝杆菌的生长情况,评价其体外抗菌活性。②尾静脉注射一定数量的结核分枝杆菌标准株H37Rv和耐药株菌液,建立小鼠结核分枝杆菌感染模型。随机将模型小鼠分成利福平治疗组、黄葵素治疗组,持续治疗6周,对照组给予生理盐水治疗。以各组小鼠的肺组织和脾组织病理变化、组织荷菌量,比较各组治疗效果,评价其体内抗菌活性。结果①模型组菌落生长情况正常,黄葵素(100 mg/mL)、利福平(5 mg/mL)组结核分枝杆菌(H37RV)培养终止期未见菌落生长;恢复培养40 d仍无结核菌生长。黄葵素在100 mg/mL时显示出对临床多耐药株的较好的抑杀作用,与利福平组比较,各时间点均显示出统计学意义(P<0.05)。②结核杆菌H37Rv感染小鼠,各治疗组肺组织和脾组织的病理变化较轻,肺和脾组织荷菌量明显降低,与模型对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结核杆菌耐药株感染小鼠黄葵素治疗组小鼠组织器官的病理变化较轻,肺组织和脾组织的荷菌量明显减少,与利福平组、模型对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论黄葵素在体内外对结核杆菌有抑杀作用,可以作为治疗耐药株感染的候选药物进一步研究。     

人工生物可降解支架聚乳酸-聚乙醇酸种植人食管上皮细胞的实验研究

目的研究人食管上皮细胞在聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)三维支架上的贴附和生长情况,利用组织工程技术培养工程化人工食管.方法制作PLGA三维细胞支架;分离培养成人食管上皮细胞,体外扩增后种植到PLGA支架上.在体外和裸鼠体内分别培养食管上皮细胞-支架复合物,分期终止培养,进行组织学染色、扫描电镜、细胞角蛋白免疫组织化学检测.结果体外培养发现,人食管上皮细胞在支架材料上贴附生长良好,长期培养仍保持食管上皮细胞特性,裸鼠体内培养4周后可形成食管黏膜样组织.结论 PLGA支架适合食管上皮细胞黏附生长,可作为食管组织工程的细胞载体.利用组织工程的方法可获得适于移植的工程化人工い食管.     

水通道蛋白１在肺腺癌组织中的表达和分布

目的:观察水通道蛋白1(AQP1)在肺腺癌组织中的表达并分析其临床意义.方法:取肺腺癌组织30例及正常肺组织30例,应用免疫组织化学,Western blot技术检测AQPl蛋白在肺腺癌和正常对照组织中的表达及分布,并收集临床资料,分析其与临床病理资料关系.结果:AQP1散在表达于正常肺组织的毛细血管内皮细胞,在肺腺癌组织中AQP1大量表达于肿瘤的血管内皮细胞以及肿瘤细胞膜、细胞浆;肺腺癌中AQP1蛋白表达水平较正常组织明显增多,二者之间差异有统计学意义;AQP1在肺腺癌组织中表达与肿瘤病理分级、淋巴结转移相关(P＜0.05),而与肺腺癌的TNM分期无明显相关性(P＞0.05).结论:AQP1在肺腺癌组织中表达增高,在正常组织中较低.提示AQP1可能与肺腺癌的发生和发展密切相关,具体机制有待深入研究.     

The fluorescent antibody technique in the diagnosis of equine rhinopneumonitis virus abortion

Using two known positive equine viral rhinopneumonitis (EVR) sera, conjugates were prepared with fluorescein isothiocyanate and tested for specificity using EVR infected tissue culture cells. The conjugate was then applied to selected tissues from 32 aborted fetuses and foals submitted during a natural outbreak of EVR. Antigen was detected in various tissues by immunofluorescence in 20 cases (62.5%). In 24 cases bovine fetal kidney cell monolayers were inoculated with a pool of lung and liver and EVR virus was isolated from 15 (62.5%). Histological examination of various tissues from 29 cases resulted in the diagnosis of EVR in 19 (65.5%), based upon the presence of focal areas of necrosis and intranuclear inclusion bodies. Correlation of results was not obtained in two cases. One was diagnosed positive histologically and negative on fluorescence, the other was negative histologically and by virus isolation but showed fluorescence. The distribution of fluorescence in various infected fetal tissues indicated that the combined examination of lung and thymus gland was most likely to provide a positive diagnosis.