人骨髓基质干细胞构建组织工程心脏瓣膜的研究

目的探讨人骨髓基质干细胞种植在去细胞猪主动脉瓣叶上体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。方法经1%TritonX100、0.01%胰酶0.02%EDTA、DNaseI及RNaseI处理制备去细胞猪主动脉瓣叶支架,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性;人骨髓基质干细胞体外分离、培养、扩增后种植在去细胞瓣叶表面,观察细胞生长情况。结果猪主动脉瓣叶去细胞后获得完整无细胞的纤维网状支架,瓣叶去细胞前、后的断裂强度和断裂伸长率差异无统计学意义(P>0.05);体外培养的人骨髓基质干细胞(MSCs)在去细胞瓣叶表面形成一层基本连续的细胞层。结论去除细胞成分的猪主动脉瓣叶组织是一种良好的纤维支架,可以用于构建组织工程心脏瓣膜;人骨髓基质干细胞种植在去细胞猪主动脉瓣叶上构建组织工程心脏瓣膜是可行的。     

去细胞猪主动脉瓣支架及兔骨髓干细胞构建组织工程心脏瓣膜的初步研究

目的探讨应用去细胞猪主动脉瓣支架(ace llu larized porc ine aortic va lve scaffo ld,APAV S)与兔骨髓干细胞(bone m arrow strom a l ce lls,BM SC s)体外构建组织工程瓣膜的可行性。方法采用去垢剂+核酸酶消化法处理,去除猪主动脉瓣细胞成分,并作去细胞前后的形态学检查和生物力学测定;在去细胞支架上种植兔BM SC s,行形态学检查和免疫组织化学染色观察。结果光学显微镜、扫描及透射电子显微镜下可见猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全被去除,获得完整无细胞的纤维网状支架。瓣叶去细胞前后的断裂强度(642±102g/mm2vs.636±127g/mm2)和断裂伸长率(62.2%±18.1%vs.54.4%±16.0%)差别无统计学意义(P>0.05)。种植的兔BM SC s在APAV S表面形成一层连续的细胞层。免疫组织化学检查α-平滑肌动蛋白抗体(+),CD 31(-)。结论种植兔BM SC s于APAV S上,可在体外构建组织工程心脏瓣膜。     

组织工程心脏瓣膜的初步构建

目的探讨用体外培养的犬骨髓基质干细胞（MSC）和由聚4-羟基丁酸酯（P4HB）制作的心脏瓣膜支架构建组织工程心脏瓣膜（TEHv）的可行性。方法取年轻健康犬髂前上嵴的骨髓，分离培养出骨髓基质干细胞，通过苏木素-伊红（HE）染色、Mallory染色、Masson染色及免疫组织化学鉴定细胞，取第3代细胞种植在P4HB构建的心脏瓣膜支架上，培养2周后，用扫描电镜观察。结果MSCs经20～25d的培养后，梭形细胞已达到90％以上融合；经HE染色、Mallory染色、Masson染色及免疫组织化学证实培养出来的细胞为MSCs。扫描电镜下，未种植细胞的瓣膜呈蜂窝状，孔径在89～150btm之间，适宜MSCs的爬行；种植细胞后，瓣膜表面有大量MSCs黏附，且爬行长入蜂窝状孔径内。结论MSCs和以P4HB为材料的瓣膜支架构建TEHV具有可行性。     

应用猪主动脉去细胞瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜

目的　探讨应用猪去细胞瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。　方法　采用去垢剂、渗透压改变和核酸酶消化的方法制备猪主动脉瓣去细胞瓣膜支架 (实验组 ) ,用去内皮细胞主动脉瓣作对照 (对照组 ) ,并对两组含水量、可溶性蛋白含量、热皱缩温度、力学性能和组织相容性进行测定。培养犬主动脉壁间质细胞和内皮细胞 ,将其种植于实验组去细胞支架上 ,观察细胞生长情况 ,并测定内皮细胞合成前列环素的功能。　结果　实验组瓣膜细胞成分完全从瓣膜中去除 ,与对照组新鲜瓣膜相比 ,含水量增高 (P<0 .0 5 ) ,可溶性蛋白含量减少 (P<0 .0 5 ) ,热皱缩温度和抗张强度无明显变化。实验组瓣膜组织相容性试验显示 ,材料组织相容性好 ,体内降解时间为 10周 ;犬主动脉壁间质细胞和内皮细胞在瓣膜表面生长良好 ,内皮细胞具有合成分泌前列环素的功能。　结论　采用去垢剂、渗透压改变和核酸酶消化的方法制备猪主动脉瓣去细胞瓣膜支架 ,在去除细胞和可溶性蛋白质的同时保持了瓣叶的基本结构和力学性能 ;以其为支架体外构建组织工程心脏瓣膜的细胞不仅能在材料表面生长 ,还能合成、分泌血管活性物质 ,是具有生理功能的组织工程心脏瓣膜。     

组织工程心脏瓣膜:去细胞瓣膜支架及其应用

在过去的十余年中,组织工程心脏瓣膜(TEHV)成为是瓣膜外科的研究热点之一。TEHV理论上能克服现有机械瓣和生物瓣的不足,具有生长性、不需抗凝、不易退行性变和钙化等优点,因而有广阔的临床应用前景。用于构建TEHV     

骨髓干细胞诱导分化构建组织工程神经

[目的]探讨组织工程化神经修复周围神经缺损的作用。[方法]以DMEM为培养基体外诱导人骨髓基质干细胞分化为雪旺细胞，与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经；建立坐骨神经缺损10mm的Wistar大鼠动物模型，A组：经诱导骨髓基质干细胞分化雪旺细胞与天然细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）凝胶及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经桥接神经缺损；B组：单纯将ECM凝胶注入可降解聚乳酸导管桥接神经缺损；C组：自体神经移植组。术后12周进行神经电生理检测、新生神经组织学观察和轴突计数等检测坐骨神经功能恢复情况。[结果]1．诱导后骨髓基质干细胞呈梭形、胞核大、周围有光晕、突起细长呈纵形排列，GAFP及S-100免疫组织化学染色阳性。动物模型各组经移植术后12周，再生神经已通过缺损区长至神经远端。A组、C组组织学及电生理检测指标均优于B组（PAB=0．021，PBC=0．001），A组与C组无显著性差异（PAC=0．065）；A、B组聚乳酸导管降解吸收明显。[结论]骨髓基质干细胞在体外可诱导分化为雪旺氏细胞，利用其与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经可以修复周围神经缺损。     

自体内皮细胞化组织工程同种心脏瓣膜的初步构建

同种心脏瓣膜以优良的生理特性及组织结构特点广泛应用于瓣膜替换手术及婴幼儿复杂先心病矫治术中，取得良好的临床疗效，但远期易出现钙化、毁损，因而再次移植率较高。2002年3月至2003年12月本研究应用组织工程学方法改良同种心脏瓣膜，构建新型的自体内皮细胞化的组织工程同种心脏瓣膜，以减轻移植后免疫排斥反应，延长瓣膜使用寿命。     

组织工程化血管构建中胚胎干细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究进展

血管组织工程学是将体外培养扩增的血管壁细胞(包括内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细饱),种植于天然或人工合成的细胞外基质上,经体外培养后,再移植到体内,以替代病损     

去细胞组织工程心脏瓣膜

组织工程心脏瓣膜的研究是心脏外科领域的研究热点之一 ,近年来这方面的研究正在不断拓展。在去细胞同种、异种瓣膜支架的基础上构建的组织工程瓣膜 ,具有低免疫原性、无细胞毒性、植入体内后宿主细胞再细胞化程度高、有较好的仿生性、耐久性和机械强度等多方面的优势 ,而成为未来组织工程心脏瓣膜研究发展的一个重要方向。现将去细胞组织工程瓣近年来的研究进展进行综述。     

组织工程心脏瓣膜实验研究新进展

器官功能衰竭和组织丧失的修复一直是医学领域中一个难题。 2 0世纪 ,游离组织和脏器移植技术应运而生 ,并获得重大进步。但由于供体缺乏 ,使这一技术在临床应用中大大受到限制 ,这刺激了细胞移植和组织工程技术的发展。1995年Ｓｈｉｎｏｋａ等〔1〕应用生物可降解聚合物支架构建组织工程心脏瓣膜 (简称组织工程瓣 ) ,经实验研究取得可喜结果 ,为心脏瓣膜研制开辟了新途径。现仅就近期进展作概要综述。支架材料选择和构建1.人工合成支架材料　组织工程瓣支架材料即细胞外基质代用品 ,它是瓣膜构形、细胞附着、生长分化和代谢的场所。Ｔｅｒ…     

组织工程心脏瓣膜研究进展

临床治疗心脏瓣膜病常用瓣膜替代物各有缺点 :机械瓣需终身抗凝 ,易致出血、栓塞及感染 ;异种生物瓣易退行性变 ,10～ 15年需再次手术 ;同种生物瓣易钙化 ,来源短缺。而非生长性是以上瓣膜共有缺陷。组织工程心脏瓣膜(TEHV)按照组织工程学方法 ,利用可降解材料构建瓣膜支架 ,种植的自体细胞在支架上生长并产生细胞外基质(ECM ) ,逐渐形成活的瓣膜组织。它有良好的组织相容性 ,可避免血栓栓塞、钙化等问题 ,有自我修复能力 ,随机体生长 ,因此被认为是较理想的新型瓣膜替代物。自 1995年Shinoka等[1] 首次将单叶TEHV羊肺动脉瓣自体移植 ,…     

成人骨髓基质干细胞的体外培养及初步诱导分化研究

目的:探讨体外培养人骨髓基质干细胞(BMSC)的方法和初步诱导BMSC向神经细胞方向分化的方法。方法:采用正常成人献髓者骨髓,分离扩增BMSC,原代培养后将传1～4代细胞按1×104/ml种于24孔板,绘制生长曲线、贴壁率,观察细胞生长及不同浓度的碱性成纤维生长因子(bFGF)对BMSC的作用。以全反式维甲酸(RA)和bFGF为诱导剂,观察诱导前后BMSC的变化。结果:原代BMSC生长状态良好,传至第5代仍保持干细胞特性,bFGF可明显促进BMSC增殖,且呈剂量依赖关系。RA和bFGF诱导12h,BMSC逐渐向神经样细胞转化,胞体收缩成锥形、三角形或不规则形,细胞伸出细长突起,免疫细胞化学鉴定呈Nestin阴性,NSE阳性,GFAP阳性,且NSE阳性细胞数较GFAP阳性为少。结论:BMSC可在体外稳定扩增,且能保持干细胞特性,RA和bFGF可诱导其分化为神经细胞。     

组织工程心脏瓣膜构建的研究

机械瓣、生物瓣是目前临床常用的二种瓣膜替换物 ,终身抗凝、瓣膜衰败为其最大不足[1] 。我们利用人主动脉肌成纤维细胞 (ＭＦ)及多聚乙醇酸 (ＰＧＡ )降解材料 ,构建组织工程心脏瓣膜(ＴＥＨＶ) ,并从构建ＴＥＨＶ方法学角度探讨其实施过程中的注意事项。一、材料与方法1.人主动脉ＭＦ细胞的分离与扩增 :取移植供心升主动脉 ,磷酸盐缓冲液(ＰＢＳ )冲洗 ,常温Ⅰ型胶原酶 (75～ 80ｍｇ/Ｌ ,美国Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ生化公司 )消化3 0ｍｉｎ ,细胞刷分离内皮细胞。裁剪主动脉壁 ,使之成为 2～ 3ｍｍ碎片 ,置于底面积 75ｃｍ2 培养瓶 (Ｆａ…     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养方法和向血管内皮细胞分化的能力.方法:利用淋巴细胞分离液分离出MSCs,体外扩增,流式细胞仪检测MSCs表面抗原表达,以含VEGF、bFGF的诱导分化培养液定向诱导传代使细胞向血管内皮细胞分化,流式细胞仪进行内皮细胞特异性标志物鉴定,测定内皮细胞NO的释放量,电镜观测W-P小体.结果:MSCs在体外传代扩增后流式细胞仪检测结果显示CD29表达阳性,CD34、CD45为阴性,分化后的细胞具有内皮细胞的形态学特征并具特异性W-P小体,可表达CD34,而不表达CD45,能释放NO.结论:骨髓间充质干细胞可在体外诱导向内皮细胞方向分化.     

牛心包组织工程心脏瓣膜支架脱细胞方法的比较

目的对比去污剂-酶消化法、胰蛋白酶消化法和去氧胆酸钠法去除新鲜牛心包组织上细胞的效果和保护基质的能力，为组织工程心脏瓣膜的构建提供较满意的平台。方法应用3种方法处理新鲜牛心包组织，用光学显微镜、扫描电镜观察脱细胞效果和胶原纤维、弹力纤维改变；用热皱缩实验、拉力测试观察基质的物理性能变化；用DNA抽提比较脱细胞前后细胞数量差异。结果3种方法均能完全去除细胞，与去污剂-酶消化法比较，另2种方法对基质破坏明显。结论去污剂-酶消化法脱细胞效果好，且有良好的保护基质的能力。     

犬骨髓单个核细胞构建组织工程骨的体外实验研究

目的 探索组织工程骨(Tissue Engineered Bone,TEB)的即刻构建方案,以符合临床骨缺损即刻修复的要求。方法 分离获取Beagle犬骨髓单个核细胞(Canine bone marrow mononuclear cells,cBMNCs)。将密度为30×10~6 cells/mL的cBMNCs复合部分脱钙骨(Partially demineralized bone matrix,pDBM)即刻构建TEB。对即刻构建的TEB进行体外培养和成骨检测。结果 在成骨诱导的体外培养环境下,即刻构建的TEB具有一定的细胞活性和成骨能力。结论 即刻构建的TEB可直接回植,以满足体内即刻骨缺损修复的要求。     

脉动应力预适应对组织工程心脏瓣膜内皮细胞黏附功能的影响

静态构建的组织工程心脏瓣膜（TEHV）未经过应力的预适应处理，植入体内时瓣叶上的内皮细胞黏附能力差、极易脱落。本研究旨在观察经脉动应力预适应的TEHV内皮细胞的黏附功能。     

组织工程瓣膜天然支架去细胞方法的比较

组织工程心脏瓣膜(TEHV)是瓣膜外科的发展方向。天然支架因解剖结构接近人体瓣膜，血流动力学良好，被越来越多地用于构建TEHV。低温、胰蛋白酶、去污剂等方法常用于制备天然支架，本实验旨在探讨天然支架较理想的制备方法。     

骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs)分化为肉芽组织中血管内皮细胞的可能性。及其参与创面修复的可能机制。方法：抽取小型香猪的骨髓，经密度梯度离心分离、纯化MSCs，体外培养扩增后，应用溴脱氧尿嘧啶（BrdU)标记技术标记细胞。于已抽取骨髓的小型香猪背部制作全层皮肤缺损创面，即刻以纤维蛋白胶为载体，将已标记的MSC回植到供体动物创面上。术后2、4、6、8、12周切取创面组织，行BrdU和因子Ⅷ（FⅧ）免疫组织化学染色，进行对比观察。结果：BrdU阳性的MSCs多聚集在创面肉芽组织中的小血管周围，且有个别血管内皮细胞也呈现BrdU 阳性。部分BrdU阳性的MSCs胞浆中亦有FⅧ表达。结论：创面愈合过程中，MSCs与肉芽组织中小血管的形成密切相关。在创面微环境下，MSCs可分化为血管内皮细胞，并参与创面修复。     

内皮祖细胞和去细胞猪主动脉瓣构建组织工程瓣膜的研究

目的将内皮祖细胞(EPCs)诱导分化为内皮细胞后种植在去细胞猪主动脉瓣膜(APV)上,以期为组织工程瓣膜(TEHV)的研制提供一个新的思路。方法采用去垢剂联合胰蛋白酶法去除猪主动脉瓣膜细胞。采用密度梯度离心法从羊骨髓中分离出EPCs,并诱导分化后,免疫组织化学染色鉴定。将诱导分化得到内皮细胞种植到APV上。采用光镜和电镜检测猪主动脉瓣膜的去细胞效果。对内皮细胞在APV上的生长效果进行观察。结果猪主动脉瓣内的细胞完全去除。EPCs经定向诱导后,具有表达CD-31,CD-34,von Willebrand因子等内皮细胞特征。诱导分化后的EPCs可以在APV表面黏附生长,并且表达CD-31和yon Willebrand因子。结论EPCs可以定向诱导分化为内皮细胞并可以在APV上种植生长。