淫羊藿苷的药理活性研究进展

淫羊藿苷是淫羊藿的主要活性成分之一,具有免疫调节、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等活性,可改善骨质疏松、阿尔兹海默病、帕金森、脑缺血、动脉粥样硬化、风湿病等多种疾病的症状。其药理活性包括:促进成骨细胞的生成和活化,抑制破骨细胞的形成和功能缓解骨质疏松;抑制β-淀粉样蛋白的产生、tau蛋白的过度磷酸化及多巴胺含量的降低以保护神经系统;通过保护心肌细胞、增加心肌细胞数量、改善内皮功能障碍保护心血管系统;促进生殖器官的功能;通过调节T细胞平衡调节免疫系统。目前,对于淫羊藿苷的研究仍有以下不足:其药理活性与多种信号通路有关,但如何调控这些信号分子、直接效应分子尚不明确;对其药理活性的研究多为单一靶点、单一途径,说服力不强;与他药配伍增效减毒的作用有待挖掘。今后的研究首先应借助激动剂、拮抗剂和基因编辑,明确淫羊藿苷调控信号通路与相应药理作用的关系,揭示通路变化的上游及下游效应分子;其次,联合采用表面等离子体共振、配体-受体结合实验、靶分子共定位、质谱等方法论证其多途径、多靶点作用,增加说服力;再次,结合中医药理论与现代分子生物学技术,对淫羊藿苷与他药配伍的药理作用进行深入探讨。     

淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的HPLC测定

淫羊藿药材为《中华人民共和国药典》2 0 0 0年版收载品种 ,淫羊藿苷为其中有效成分。为了控制其质量 ,本实验建立了 HPLC法测定淫羊藿提取物中淫羊藿苷的含量 ,并在方法学考察过程中 ,对文献 [1～ 6 ]报道的多种色谱条件进行了比较 ,建立了合适的测定方法。1　仪器与试剂Waters(2 690 -996)高效液相色谱仪 ,Sart-o-rius BP2 1 1 D型电子天平 ,CQ-2 5 0超声波清洗仪。淫羊藿提取物 (浸膏粉 )为本公司自制。淫羊藿苷对照品 (中国药品生物制品检定所提供 ,供含量测定用 ,批号 :0 73 7-2 0 0 1 1 1 )。乙腈为色谱纯 ,甲醇为分析纯 ,水为重…     

淫羊藿苷药理研究进展

淫羊藿苷(Ica)为药用植物淫羊藿的主要有效成分.Ica具有滋阴补阳、保护心血管系统、调节免疫、抗肿瘤和促进造骨细胞的增殖和发育等多种重要的药理作用,是一类很有应用前景的中药单体,本文对Ica药理作用研究概况作一综述.     

淫羊藿属9种淫羊藿叶中朝藿定C和淫羊藿苷量的考察

淫羊藿属Epimedium L．药用植物，在我国有29种，产于川陕者14种，具有多方面的药理活性。《中国药典》作为淫羊藿药材的有5种，分别为淫羊藿、朝鲜淫羊藿、箭叶淫羊藿、巫山淫羊藿和柔毛淫羊藿，笔者在进行淫羊藿成分系统分离研究的基础上，对采集的川陕豫产9种习惯人药的淫羊藿品种，将其叶中的主要成分朝藿定C和淫羊藿苷的量进行了考察，结果表明大部分品种朝藿定C量大于淫羊藿苷。     

淫羊藿苷对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞凋亡及炎症的影响

目的 研究淫羊藿苷(ICA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)凋亡及炎症的影响,进一步阐明ICA抗动脉粥样硬化(AS)的作用。方法 体外培养RAW264.7细胞,ox-LDL诱导RAW264.7细胞构建泡沫细胞模型,观察ICA低、中、高剂量对RAW264.7细胞活力、细胞凋亡、泡化沫、炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α分泌的影响,同时采用Western blot检测ICA对Bcl-2、Bax、Caspase-3、IκBα、NF-κB p65蛋白表达的影响。结果 ICA可以提高细胞活力,降低细胞的凋亡率;减少泡沫巨噬细胞的形成;降低炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌;下调Bcl-2、Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达,上调Bax、IκBα的蛋白表达。结论 ICA能够减轻泡沫巨噬细胞的凋亡,抑制炎症因子的表达,从而可能延缓动脉粥样硬化的发展进程。     

淫羊藿苷与淫羊藿次苷Ⅱ的体外抗氧化作用

的：检测淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的体外抗氧化活性,阐明淫羊藿黄酮类化合物的抗氧化机制。方法: 以抗坏血酸(Vc)、二丁基羟基甲苯(BHT)为阳性对照,测定淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和BHT对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH?)的清除率;铁氰化钾还原法测定其还原力;利用NADH-NBT-PMS系统测定其对超氧阴离子(O2－?)的清除率;2-脱氧-D-核糖降解法测定淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对羟自由基(OH?)的清除率,硫代巴比妥酸法测定其对脂质过氧化的抑制率,β-胡萝卜素-亚油酸自氧化体系测定其总抗氧化能力。结果:不同样品对DPPH?均有一定的清除作用,淫羊藿次苷Ⅱ清除DPPH?的能力较淫羊藿苷强(P<0.05)。淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在浓度梯度范围内对O2－?有一定的清除作用,均表现出一定的浓度依赖性,与同浓度的BHT比较,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对O2－?的清除率较低,且淫羊藿苷的清除能力略低于淫羊藿次苷Ⅱ。      淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在浓度为0.1～0.5 g.L^-1时对OH?清除率分别为(16.76±0.35)%~(40.56±1.46)%和(15.65±0.72)%~(28.51±0.91)%。当浓度为0.9 g.L^-1时,淫羊藿苷、Vc和淫羊藿次苷Ⅱ对脂质过氧化的抑制率为(58.79±1.56) %、(75.05±2.12)%和 (37.82±1.43)%。随着浓度的增加,抑制率不再有显著的增加。随着样品浓度的增加,淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和标准品Vc还原力均表现出浓度依赖性。30~120 min内淫羊藿次苷Ⅱ的抗氧化活性均低于淫羊藿苷和BHT（P<0.05或P<0.01）。淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在体外抗氧化的各项指标中表现出的抗氧化活性均弱于Vc和BHT。结论: 淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在清除DPPH?、O2－?、OH?和抑制脂质过氧化、总抗氧化能力和还原力方面,均具有明显的抗氧化能力。     

淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对内皮细胞eNOS表达和NOS活性的影响

目的：用过表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）的猪动脉内皮细胞（porcine aorta endothelial, PAE）作为研究对象,探讨淫羊藿苷(icariin)和淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ)对PAE中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS)表达和一氧化氮合酶(nitric oxide sythase, NOS)活性的影响及其可能机制。方法：利用PAE中转染EGFR并筛选稳定株, 分别用12.5 μmol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理PAE和PAE-EGFR细胞48 h,观察各组细胞eNOS的表达变化;另在淫羊藿苷或淫羊藿次苷Ⅱ处理PAE和PAE-EGFR细胞时,分别加入表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）共同处理细胞,观察各组细胞eNOS的表达变化;检测淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理前后PAE和PAE-EGFR细胞NOS的酶活性改变,并以西地那非作为对照。结果：Western blot显示PAE-EGFR细胞表达eNOS的基础值要比PAE细胞高,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理时PAE和PAE-EGFR细胞株中都能引起eNOS表达增加,并且在PAE-EGFR稳定株中eNOS的表达量比PAE细胞明显提高(P<0.01);在表达EGFR的PAE-EGFR细胞中,当淫羊藿次苷Ⅱ的浓度达到10^-8 mol/L时,NOS活性增加到(15.37±1.49) u/mg ,比PAE细胞高4.66 u/mg。在药物浓度达到10^-7,10^-6和10^-5 mol/L时,淫羊藿次苷Ⅱ对PAE-EGFR细胞NOS活性的影响较PAE细胞显著增加(P<0.01);淫羊藿苷也能增加PAE和PAE-EGFR细胞的NOS酶活性,但是其效果比较淫羊藿次苷Ⅱ组平均低20%,而西地那非没有显著影响NOS酶活性。 结论：淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ可上调PAE和PAE-EGFR细胞eNOS的表达和提高NOS活性,对血管内皮细胞功能可能具有改善作用,而且淫羊藿次苷Ⅱ的效果优于淫羊藿苷,其作用机制可能与激活PAE细胞的EGF-EGFR信号通路有关。     

淫羊藿苷及衍生物药理作用研究进展

淫羊藿是祖国医学中传统的补益中药,具有补肾阳,强筋骨,祛风湿等多种功效.淫羊藿苷(ICA)是主要的活性单体成分,对各种疾病都表现出生理活性.淫羊藿素(ICT)作为淫羊藿苷的衍生物,近年来对其研究越来越多,研究发现ICA和ICT对神经系统、内分泌系统、心血管系统、免疫系统等都发挥药理作用.     

甘肃不同产地淫羊藿中总黄酮和淫羊藿苷含量测定

目的比较甘肃榆中、阿甘镇、武山、徽县4个产地淫羊藿中主要活性成分总黄酮和淫羊藿苷的含量。方法采用回流提取法提取,以紫外分光光度（UV）法测定总黄酮含量,高效液相色谱（HPLC）法比较各产地图谱,并测定淫羊藿苷的含量。结果不同产地的HPLC图谱相似,榆中淫羊藿中总黄酮的含量最高（8．07％）,徽县淫羊藿中淫羊藿苷的含量最高（1．11％）,建立的总黄酮和淫羊藿苷含量测定方法的精密度、稳定性、重复性、加样回收率均良好。结论该方法为淫羊藿药材的质量研究和商品规格提供了参考依据。     

HPLC法测定粗毛淫羊藿及不同炮制品中淫羊藿苷的含量

目的:探讨和分析不同炮制方法对淫羊藿苷含量的影响。方法:HPLC ,色谱柱:迪马柱2 5 0×4 .6mm5 μm流动相以A :乙腈B :水-3 6%乙酸(1 0 0 :4)梯度洗脱流速1 0ml/min ;柱温:3 0℃检测波长:2 72nm。结果:淫羊藿苷含量由高到低的顺序为:生品>盐炒>酥油制>酒制>羊脂炙>炒制品>烘制;平均回收率:99 ,5 3 % ,RSD 1 ,9% (n =5 )。结论:不同炮制方法淫羊藿苷的含量较生品有显著降低。(p <0 .0 0 1或p <0 .0 1或p<0 . 0 5 )     

紫杉醇诱导食管癌细胞凋亡

目的：研究紫杉醇对食管细胞生长抑制及诱导凋亡的作用。方法：应用ＭＴＴ分析法，形态学观察，琼脂糖凝胶电泳，流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Ｅｃａ１０９进行了检测和观察。     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

凋亡及凋亡相关基因表达在食管鳞癌发生发展中的意义

目的　探讨食管鳞癌发生发展过程中凋亡及凋亡相关基因表达的变化规律及意义。方法　采用免疫组化染色 (s- p法 )和细胞凋亡原位检测技术 (TUNEL染色 )检测食管鳞癌、非典型增生和正常食管粘膜各 72例中bcl- 2、P5 3的表达及细胞凋亡的变化。结果　bcl- 2和P5 3在非典型增生和浸润癌中的表达显著高于正常粘膜上皮 (P <0 .0 1) ,并与食管鳞癌的淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 ) ,P5 3还与食管鳞癌浸润深度和患者年龄密切相关 (P分别 <0 .0 1和 0 .0 5 )。TUNEL染色结果显示 :凋亡指数在非典型增生和浸润癌中显著增高(P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;bcl- 2、P5 3阳性组凋亡指数分别低于同一阶段其阴性组凋亡指数(P <0 .0 5 )。结论　凋亡及凋亡相关基因 (bcl- 2 ,P5 3 )表达与食管鳞癌的发生发展和恶性表型密切相关。应用免疫组化方法联合检测的上述指标及TUNEL方法同步原位检测的细胞凋亡可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的重要分子指标     

hTR反义寡核苷酸对食管癌细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子表达的影响

目的:探讨封闭端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(hTR ASODN)对食管癌EC9706细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响.方法:应用hTR ASODN 1次/d、连续7 d转染EC9706细胞,以未加ASODN的脂质体对照组为空白对照,分别于转染后1 d、3 d、5 d、7 d采用TRAP-银染法检测EC9706细胞的端粒酶活性,原位末端转移酶标记法及吖啶橙荧光染色法检测EC9706细胞的凋亡及免疫细胞化学法检测AIF蛋白的表达.结果:与空白对照比较,hTR ASODN转染后EC9706细胞端粒酶活性受到抑制,细胞凋亡率及凋亡指数明显升高,AIF蛋白阳性表达率升高(P＜0.05).结论:hTR ASODN可有效抑制EC9706细胞的端粒酶活性,诱导肿瘤细胞凋亡,在此凋亡过程中,AIF可能发挥着重要作用.     

Up-regulated manganese superoxide dismutase expression increases apoptosis resistance in human esophageal squamous cell carcinomas

Background Esophageal cancer is one of the most common malignancies in the world. In order to identify the proteins associated with esophageal squamous cell carcinomas （ESCC）, we analyzed the protein profiles of ESCC cases with tumor and matched adjacent normal tissues. Methods Two-dimensional electrophoresis （2-DE） was carried out to analyze the protein profiles. Dysregulated protein spots were identified by Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight （MALDI-TOF） and verified by liquid chromatography/electrospray ionization ion trap-mass spectrometry/mass spectrometry （LC-ESI-IT MS）. RT-PCR and immunohistochemistry on tissue microarray were performed to confirm the gene dysregulation in esophageal cancerous tissues. RNA interference （RNAi） was used to knock down the gene expression in ESCC cell lines. Apoptosis assay with annexin V-FITC/PI staining was conducted and cells were analyzed by flow cytometry. Results 2-DE showed that two protein spots with approximate molecular weights and different pl were elevated in 12 out of 18 ESCCs as compared to the corresponding normal tissues. Both the two spots were identified as MnSOD by MALDI-TOF and were verified by LC-ESI-IT MS. MnSOD overexpression was detected in 14 tumors out of 24 cases by RT-PCR and 52 tumors out of 116 cases by immunohistochemistry comparing to normal epithelia, siRNA-mediated silencing of MnSOD in KYSE450 and KYSE150 cell lines revealed that MnSOD protected ESCC cells from apoptosis induced by ultraviolet （UV） and doxorubicin （DOX）. Conclusions These findings suggest that there existed two isoforms of MnSOD protein in normal and tumor esophageal tissues. MnSOD was overexpressed in ESCC and its up-regulation in esophageal cancer cells was associated with apoptosis resistance.     

Survivin反义寡核苷酸经线粒体途径诱导肺癌细胞凋亡研究

目的: 探讨survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASODN)诱导肺癌细胞凋亡的作用及survivin抗凋亡的分子机制。方法: 脂质体介导下,分别以100 nmol/L、300 nmol/L、500 nmol/L survivin ASODN作用于肺癌细胞株NCI-H446后,在不同时间用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测凋亡;Rh123染色法检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial potentialmembrane,△Ψm)变化,EL ISA法检测胞质细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)浓度,比色法检测胞质内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(cystenyl aspartate specific proteinase-9,caspase-9)活性变化;加入caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK后FCM检测细胞凋亡。结果: Survivin ASODN 500 nmol/L作用72 h效果最佳,细胞凋亡指数(AI)达48.35%,增殖指数(PI)为24.38%;Survivin ASODN导致细胞△Ψm逐渐下降,并相继引起Cyt C的释放和caspase-9的激活。三者变化具有时间依赖性和差异性;Z-LEHD-FM K显著抑制了survivin ASODN诱导的细胞凋亡。结论: Survivin主要通过调控线粒体凋亡途径发挥抗肺癌细胞凋亡作用;Survivin ASODN能够显著诱导肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

食管鳞癌△Np63基因的检测

目的:探讨△Np63基因作为食管鳞癌检测指标的可能性.方法:50例新鲜食管鳞癌组织,未经放疗或化疗,癌旁组织15例,用免疫组化和RT-PCR方法检测组织和外周血△ Np63表达情况.食管癌患者外周血标本21例,用RT-PCR方法检测了△Np63 mRNA表达情况,胃腺癌12例和10例健康人外周血作为对照.结果:食管鳞癌组织△Np63蛋白和mRNA表达明显高于癌旁组织,分别是96%和60%(P＜0.01).食管癌21例外周血检测中△Np63 mRNA阳性率38%,而胃腺癌和健康人外周血中未见表达.结论:食管鳞癌的发生和△Np63过度表达有关,△Np63 mRNA外周血检测可以作为一个食管鳞癌的肿瘤标志物.     

食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡与凋亡检测

目的 :探讨食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡与凋亡的存在及 2者间的关系。方法 :收集 30例食管鳞状细胞癌标本 ,利用透射电镜、TUNEL及免疫组织化学技术检测其中的胀亡、凋亡细胞及微血管密度 (MVD)。结果 :食管鳞状细胞癌组织中存在胀亡及凋亡细胞 ,凋亡指数 (AI)和胀亡指数 (OI)分别为 (1 .7± 1 .2 )和 (3.2± 1 .9)。与MVD低表达组比较 ,高表达组OI较低 ,而AI较高 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 0 1或P <0 .0 0 5 )。结论 :食管鳞状细胞癌存在凋亡和胀亡两种细胞死亡方式 ,2者的存在及分布与MVD有关。     

维生素E琥珀酸酯对前列腺癌PC-3细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对于激素非依赖前列腺癌PC-3细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用.方法:将VES溶解于无水乙醇,配制成VES溶液.取对数生长期的PC-3细胞,分别加入25、50、75、100、125 mg/L VES溶液,对照组加入1.25%浓度乙醇.培养24、48、72 h后,采用MTT法分析细胞的活力指数和抑制率,采用流式细胞术检测PC-3细胞的细胞凋亡率.结果:实验组的细胞活力明显低于对照组(P＜0.05),且与VES的作用浓度和作用时间呈负相关,而对照组的细胞活力与时间呈正相关.实验组的凋亡率较对照组有明显的升高,且与VES的浓度和作用时间呈正相关.并且,经VES作用48 h后,75 mg/L的VES浓度可以对PC-3细胞起到一个最佳的诱导凋亡作用,造成80%以上的PC-3细胞凋亡.结论:VES具有抑制PC-3细胞增殖及促进其凋亡的作用.提示其对于前列腺癌的化学预防和杀伤作用具有临床应用前景.