钩端螺旋体冷冻蚀刻复型的超微结构研究

作者应用冷冻蚀刻复型技术研究3株钩用螺旋体的超微结构,发现:①钩体在冷冻蚀刻复型下的形态与超薄切片及负染的观察结果基本一致,不同种属与毒力的钩体其冷冻蚀刻复型的超微结构无明显差异;②钩体外膜蛋白颗粒呈球形,其分布明显不对称。在外膜的EF面,蛋白颗粒密集分布,其密度为776～2303个/μm~2,直径为14.25±2.25nm,而PF面则甚少,呈平滑状;③轴丝位于圆柱形菌体与外膜之间,直径20nm,外周有一7nm鞘状结构包绕;④钩体细胞质中有核糖体、核质及包涵体等亚细胞结构存在。本研究结果表明:冷冻蚀刻复型技术较其他方法能更清晰地显示接近生活状态的钩体的超微结构。     

钩端螺旋体冷冻蚀刻复型的超微结构研究

The ultrastructure of three strains of leptospires, i.e. L. interrogans serovar Lai strain 017, L. biflexa serovar patoc strain Patoc I and L. illini strain 3055, were studied with the technique of freeze-etching replica. The results showed that (1) the ultrastructure of leptospires after freeze-etching are similar to that observed by means of negative staining and ultrasectioning. There are no dramatic differences among strains of leptospires studied. (2) Globular particles exposed on the resulting two inner membrane faces are asymmetrically distributed. Large areas on EF face studied with numerous globular particles, whereas the PF face had few of them. The density of globular particles varies in different parts of leptospires, from 776/microns2 to 2303/microns2. The globular particles, 14.25 +/- 2.25 nm in diameter, represent membrane proteins in outer envelope of leptospires. (3) Axial filament, 20 nm in diameter, were seen closely surrounded by a 7 nm sheath-like structure. (4) There are subcellular structures in cytoplasm of leptospires. They appear to be ribosomes, chromatins and inclusions.     

钩端螺旋体病后发症与L型

目的:了解钩端螺旋体(以下简称钩体)L型与钩体病眼、神经后发症的关系.方法:对临床疑诊为钩体病后发症患者血、脑脊液作钩体及L型培养和显微镜凝集试验.用青霉素在患者体内诱导钩体L型和分离的钩体L型分别二次对豚鼠进行实验性感染 ,以了解引起的病理变化与临床后发症的关系.通过对L型的生物特性研究,了解其长期在体内存活的原因.结果:从186例患者血与脑脊液的检测表明钩体L型分离阳性率为28.6%,远高于钩体原型10.2%(P＜0.005).从感染动物病变见有血管壁增厚、管腔狭窄、脊髓前角神经元变性、眼葡萄膜与视网膜炎以及肾曲小管中见有L型存在.病变出现于L型感染动物多于原型感染动物.经微区图谱证明钩体L型的细胞膜比原型增厚3倍.结论:钩体L型细胞膜的增厚使其能延长在体内存活的时间.引起的病变证明与后发症有关.在肾曲小管中出现说明钩体L型可经尿排出,应予重视.     

钩端螺旋体毒力与粘附现象关系的探讨

作者采用扫描和透射电镜观察了三株不同毒力钩端螺旋体对人胚肺成纤维细胞的粘附,发现不同毒力的钩端螺旋体粘附于细胞表面的数量有显著性差异,并且粘附的数量与细胞的超微病变密切相关。     

钩端螺旋体与宿主细胞相互作用的研究现状

钩端螺旋体病是一种由致病性钩端螺旋体感染引起的人兽共患病。致病性钩端螺旋体在宿主体内播散过程中与遇到的各种宿主细胞相互作用,这在钩体病的发生发展过程中起到重要作用。本文阐述了近年来国内外有关钩端螺旋体和宿主细胞相互作用,并探讨钩端螺旋体致病机制的研究趋势。     

钩端螺旋体病肺出血型诊治体会

钩端螺旋体病肺出血型是构端螺旋体病常见的临床类型，肺弥慢性出血是本病死亡的主要原因。现将我院收治的64例钩端螺旋体病肺出血型的诊断、治疗体会报告如下：临床资料一、一般资料：男性56例，女性8例，年龄12—61岁，平均43岁。普通型41例，肺弥漫性出血型23例。先兆期9例，极期8例，重危期6例。二、临床症状及体征：本组病例100％有发热，＞96％有头痛、身痛、眼结膜充血、腓肠肌压痛和淋巴结肿大等钩端螺旋体病的典型症状及体征。咯血55例（85.94％）。其中痰中带血23例，多数病人小量咯血，咯血量一次超过300毫升5例，口鼻涌血4例。9例病程中始终无咯血。     

钩端螺旋体糖脂蛋白对培养血管内皮细胞的粘附导致细胞内吞与病损

The Glycolipoprotein (GLP) of various virulent leptospires was extracted, purified and identified. The GLP was combined with fluorescence rhodamine B and the colloidal gold as the probe. Meanwhile, the bovine aortic endothelial cell (EN) was isolated and cultured in the medium 199 "Nissui". The GLP-rhodamine B and GLP-colloidal gold probe were added to cultured EN and incubated at 4 degrees C for 2 h then at 37 degrees C for 2 h. The interaction between GLP-rhodamine B, GLP-CG probe and EN were observed and photography by fluorescence microscopy (Leitz) and scanning electronmicroscopy. The releasing rate of lactic acid dehydrogenase (LDH), acid phosphatase (AcP) and protein from the EN were detected. The results indicated that the GLP of Leptospira interrogans serovar Lai, strain 017 attached to EN and a endocytosis was happened subsequently. The LDH and AcP releasing rate were significantly higher than control and the cell protein was much less than control. The results showed that the GLP of L. interrogans strain 017 had the cytotoxin effect through a specific attachment, endocytosis in EN. The endocytosis probably is a receptor-mediated endocytosis.     

钩端螺旋体膜蛋白研究进展

问号钩端螺旋体（Leptospira interrogans）在全球分布广泛，危害极大，已发现25个血清群，273个血清型。钩体病是世界上流行最广的人兽共患病之一，人体感染后，轻者似感冒，重者可有明显的肝、肾、肺及中枢神经系统损害，甚至死亡。至少已发现200多种动物为问号钩端螺旋体携带者，动物大多呈隐性感染，钩体在感染动物中可长期存在，持续随尿排出，污染水源和土壤。目前的疫苗通常采用灭活的全菌，而血清学诊断通常采用活菌，主要抗原成分是菌体表面的脂多糖（LPS），不幸的是不同血清型钩体LPS的抗原性不一样。象沙门菌一样，LPS的不同反映出钩体对宿主的不同适应性，每一动物宿主都与特定的钩体血清型相联系。如大鼠与Ietemhemorchagiae，小鼠与Ballum，牛与Hardio，猪与Pomona、Bratislava，而狗倾向于Canicola。LPS的宿主特异性可能是钩体免疫逃避的机制，允许钩体长期呆在动物的肾脏中而不引起炎症反应。     

我国钩端螺旋体血清型及其更迭

钩端螺旋体病(简称钩体病)储存宿主广泛、流行形式多样、临床表现繁杂、抗原结构复杂、血清群型繁多。及时掌握血清群型动态，对钩体病监测防治及科研均具十分重要意义。我国是世界上钩体血清学群型最多的国家，到目前为止，至少已经有18个血清群75个血清型被发现，其中包括我国特有的新菌群曼耗群和38个新菌型。菌群的地理分布广大，全国31个省、市、自治区(未包括台湾省在内)均已分离出钩体菌株。从全国角度看，我国两大流行菌群是黄疸出血群和波摩那群。它们的流行面广，危害严重，分别为我国稻田型和洪水型、雨水型的钩体病主要病原体。流行菌群除在不同地区有差异外，在同一地区不同年代同时发生主要流行菌群的更迭。一个地区主要菌群的更迭，它可以提示：(1)主要由传染源动物的改变而引起；(2)由不同的流行形式所引起；(3)由预防接种所导致；(4)由接种以外其他有效预防措施的影响；(5)由大规模的土地改造和地理状况的变迁所造成。     

钩端螺旋体糖脂蛋白对培养血管内皮细胞的粘附导致细胞内吞与病损

作者提取不同群、型和毒力的构端螺旋体糖脂蛋白,以Rhodamine B荧光素和胶体金标记制备成探针,与体外培养的牛主动脉内皮细胞作用,以荧光显微镜和扫描电镜观察记录其过程,并以内皮细胞LDH、AcP漏出率和蛋白含量及细胞形态学作为细胞毒指标。结果表明,钧端螺旋体糖脂蛋白通过对培养血管内皮细胞的粘附,导致细胞内吞与病损。该过程可能属于一种特殊的受体介导内吞过程。     

氨茶碱控释片体内外试验相关性的研究

本文研究了两种类型的氨茶碱控释片体内外试验的相关性。体外溶出试验表明骨架控释片和膜包衣控释片的溶出均属于表观一级释放过程,释放速度常数分别为0.1529h~(-1)和0.1510h~(-1)。体内试验表明,以单室模型拟合测得的血药浓度,其吸收速度常数分别为1.84h~(-1)和0.97h~(-1),二者有显著性差异,但其它动力学参数无显著性差异。体内外相关性研究表明,膜包衣控释片存在有一定相关性,而骨架片未见类似相关性。     

应用改进的GLC法研究扑尔敏控释微丸的体内外相关性

本文改进了扑尔敏血药浓度的气相测定法。选用安定为内标,在异辛烷一次提取全血后用N~(63)电子捕获器检测。结果表明,在0.5～12ng/ml范围内,扑尔敏及安定的色谱峰面积之比(Ac/Ad)与血液中两者浓度之比(Cc Cd)有良好的线性关系(r=0.996),回收率在90％以上(平均偏差4％)。应用此法测定了人口服扑尔敏微丸及速释微丸的血药浓度,并由此计算得出控释微丸的体内吸收百分数(Pi)与体外溶出百分数(Po)间的相关方程式为Po=0.9597Pi 3.3225(r=0.916)     

对年轻细胞诱导早衰前后凋亡敏感性的研究

目的探讨年轻细胞被诱导衰老后对凋亡的敏感性与年轻细胞的差异,并分析可能存在的机制。方法以人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)为研究对象,以H2O2诱导2BS细胞早衰后,再以H2O2分别诱导早衰2BS细胞和年轻细胞凋亡,DNA ladder分析和苔盼蓝排除法检测细胞死亡率。结果早衰细胞较年轻细胞不易被H202诱导凋亡。该因素是多方面的,不限于caspase-3的作用。结论早衰细胞与衰老细胞一样,对凋亡诱导因素的反应性降低。     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

鹤草酚介导caspase 3相关凋亡抑制前列腺癌细胞在体内外的增殖

目的 探讨鹤草酚对前列腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。 方法 通过细胞计数、菌落形成试验、细胞周期试验、细胞凋亡试验等检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化。通过蛋白印迹法（western blotting）检测细胞凋亡相关蛋白的表达。通过小鼠异种移植瘤模型研究了鹤草酚在体内对肿瘤发生的影响。 结果 鹤草酚抑制了DU145细胞和PC-3细胞的增殖,降低了细胞存活率。与对照组相比,经鹤草酚处理后,S期DU145细胞和PC-3细胞的比例增加,而G2/M期的细胞比例降低。鹤草酚通过激活caspase 3相关的线粒体依赖性凋亡通路,促进DU145细胞和PC-3细胞凋亡。体内实验证实,鹤草酚能减缓前列腺癌细胞的形成,延长移植瘤小鼠的生存时间。 结论 鹤草酚是一种潜在抗癌药物,它通过激活凋亡通路,来抑制前列腺癌细胞的增殖和细胞周期进展。     

骨髓间充质干细胞体外诱导为神经元及其死亡现象的研究

目的:探索大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)在体外定向分化为神经元样细胞的方法并研究其死亡的影响因素.方法:分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞并用2-巯基乙醇诱导分化为神经元样细胞,使用免疫组化方法鉴定其神经元特异性巢蛋白(Nestin)的表达,通过MTT、免疫组化及形态学方法观察丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(mitogen-activated protein kinase kinase 1/2,MEK1/2)阻断剂U0126及缩胆囊肽(cholecystokinin,CCK)对细胞转化及活性的影响.结果:诱导后MSCs分化为具有典型的神经元形态的细胞,免疫组化实验显示Nestin呈强阳性反应,同时免疫组化及MTT方法显示U0126可以显著提高细胞Nestin的表达强度和神经元样细胞的活性,CCK虽可轻度增强神经元样细胞的活性,且CCK可延长已分化神经元的存活时间,但其作用不具统计学意义.结论:大鼠MSCs在体外可定向诱导分化为神经元样细胞,且通过阻断MEK1/2信号通路可以提高其阳性分化率和细胞活性,提示大鼠MSCs诱导分化的神经元样细胞的死亡机制可能涉及MEK1/2信号通路.CCK可能具有对已分化神经元的保护作用.     

视网膜中Müller细胞分布的免疫组织化学研究

用抗非神经元烯醇化酶（ＮＮＥ）抗体研究６～３８周人胚胎、成人视网膜和视网膜母细胞瘤中Ｍüｌｌｌｅｒ细胞的分布。发现Ｍüｌｌｅｒ细胞呈放射状，胞体位于内核层，分支包绕神经元的胞体和突起。不同视网膜Ｍüｌｌｅｒ细胞的分支和ＮＮＥ含量有差异，提示与视网膜的功能状态有关。     

表皮生长因子对体外胃粘膜上皮细胞生长的影响

取胃体大弯的胃粘膜上皮细胞在RPMI164培养液中,加成年雄性猪颌下腺提取液(PEGF)及成年雄性小鼠颌下腺提取液(M60EGF),用I~(125)UdR掺入方法测定细胞DNA合成。结果:盐水对照组为4168±171.5cpm,PEGF组为21.980±997.8cpm(P<0.0001),M60 EGF组为6132±262.7cpm(P<0.01)。鼠EGF加热80℃对胃粘膜DNA合成无效应,提示鼠EGF不耐热。实验结果表明:ECF是胃十二指肠粘膜的营养因子,对胃粘膜上皮细胞的生长有促进作用。