深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的基因分型

目的分析深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的主要基因型。方法对50株产ESBLs大肠埃希菌分别用TEM、SHV、CTX-M和OXA-1群基因引物进行PCR扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果 92%菌株检出CTX-M型ESBLs,测序结果显示,以CTX-M-14型ESBLs为主,其次为CTX-M-55型。结论 CTX-M-14型和CTX-M-55型是深圳地区大肠埃希菌ESBLs的主要基因型。     

产ESBLs革兰阴性菌的TEM、SHV、CTX-M基因分型研究

目的:检测本院临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性菌的TEM、SHV、CTX-M基因型特征。方法:双纸片法确定产ESBLs的临床分离菌,提取质粒DNA,PCR法扩增ESBLs的TEM、SHV、CTX-M基因片段,对临床分离的12株肺炎克雷伯菌,17株大肠埃希氏菌和16株铜绿假单胞菌,共45株革兰阴性菌进行TEM、SHV、CTX-M基因分型研究。结果:本院临床分离出的45株产ESBLs临床分离菌的质粒中,有36株扩增出TEM基因片段,33株扩增出SHV基因片段,31株扩增出CTX-M基因片段,TEM、SHV、CTX-M基因片段的检出率分别为80%、74%和68%。结论:TEM、SHV、CTX-M已成为本院临床分离产ESBLs菌的主要耐药基因型,有必要进一步加强临床耐药基因的监测,为临床用药和医院感染监控提供参考。     

病毒性肝炎后肝硬化住院患者血液感染大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶基因型调查CSCD

目的研究病毒性肝炎后肝硬化住院患者血液感染的大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶基因型。方法连续收集2011年1月至12月分离自病毒性肝炎后肝硬化住院患者血培养阳性的大肠埃希菌,VITEK-II鉴定细菌,K-β药敏试验检测细菌的药敏,多重PCR、PCR、测序及比对等对大肠埃希菌超广谱β内酰胺酶基因型进行分析。结果肝硬化主要原因为病毒感染,共收集79株大肠埃希菌,PCR扩增产物测序、比对：20株大肠埃希菌产TEM-1型β-内酰胺酶;仅有的-株产SHV-1型β-内酰胺酶,未检测出TEM型和SHV型超广谱β-内酰胺酶;40株产CTX-M型超广谱B-内酰胺酶,CTX-M-1群20株,CTX-M-9群26株,其中有6株菌同时产两群CTX-M型超广谱β-内酰胺酶,测序比对出CTX-M-3、CTX-M-15、CTX-M-14等八种基因型。结论病毒性肝硬化患者血液感染的大肠埃希菌超广谱B内酰胺酶最常见为CTX-M型,CTX-M-14是最常见的基因型。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌药物敏感性和基因型研究

【摘要】 目的 研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌基因型和药敏特征。方法 对2003年12月～2004年12月哈尔滨地区临床分离的74株产ESBLs肺炎克雷伯菌，测定菌株对常用β-内酰胺类和非β-内酰胺类抗菌药物的敏感性，并采用SHV型和TEM型特异性引物检测ESBLs的基因型别。结果 产ESBLs细菌对头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率依次71.6%、20.3%、54.1%、31.1%，对头孢哌酮/舒巴坦的敏感率为54.1%，69株（93.2%）对亚氨培南敏感。74株产ESBLs细菌中携带blaSHV和blaTEM基因的阳性例数分别是45（60.8%）和23（31.1%）。结论 本地区产ESBLs肺炎克雷伯菌对常用β-内酰胺类和非β-内酰胺类抗菌药物的敏感性降低，临床上需慎用酶抑制剂复合物及第四代头孢菌素，亚氨培南仍是治疗产ESBLs菌感染的首选药物。产ESBLs肺炎克雷伯菌blaSHV的流行频率高于blaTEM。     

产质粒介导AmpC酶和ESBLs细菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型研究

目的　了解我院同时产质粒介导AmpC酶和超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的耐药性及其 β 内酰胺酶的基因型特征。方法　 110株临床分离无重复肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药株 ,采用酶提取物三维实验检测AmpC酶 ,美国临床实验室标准委员会 (NCCLS)表型筛选和确认实验检测ESBLs ;琼脂二倍稀释法测定抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的最低抑菌浓度 (MICs) ;等电聚焦实验测定 β 内酰胺酶等电点 (pIs) ;质粒接合实验定位耐药基因 ;PCR通用引物扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型。结果　同时产AmpC酶和ESBLs菌株在肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌中的检出率分别为 7.7% (5 6 5 )、8.9% (4 4 5 )。该类产酶菌株产 2～ 3种pI5 .4～ 9.0 β 内酰胺酶 ,对第三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑和含酶抑制剂复合制剂的敏感性极低 ,但对亚胺培南均敏感。 9株质粒中均检出AmpC酶基因DHA 1亚型 ,其中 1株同时检出ACT 1亚型 ;ESBLs基因亚型分别为CTX M 14、CTX M 3、CTX M 9,各有 4、3、2株 ;有 3株还携带广谱酶TEM 1基因。结论　我院存在同时产质粒介导DHA 1、ACT 1型AmpC酶和CTX M型ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌流行株 ,药敏检测结果显示对大多数新型广谱 β 内酰胺类抗生     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌临床分离株药敏分析

目的了解郑州地区临床分离大肠埃希氏菌产超广谱β-内酰胺酶情况和耐药特征。方法双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),琼脂二倍稀释法对大肠埃希氏菌进行MIC检测。结果产ESBLs大肠埃希氏菌检出率为57.4%,产ESBLs菌株多数呈多重耐药,仅亚胺培南的耐药率在10%以下。结论本地区临床分离大肠埃希氏菌具有较高的产ESBLs流行率,对于产ESBLs大肠埃希氏菌应以亚胺培南为首选药物。     

检测产超广谱β-内酰胺酶菌株方法的探讨

目的 寻找一种敏感、特异、简单和经济的检测超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）方法。方法 采用抑制剂增强的肉汤稀释法（IPBDT）检测68株临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和10株标准产酶大肠埃希菌,并以此检测结果为标准,比较双纸片法（DDT）、浓度梯度法（E－test）和Vitek法的检测结果。对DDT和IPBDT检测结果不符合细菌进行β－内酰胺酶基因分型。结果 与IPBDT结果相比,DDT、E－test、Vitek法的特异度均较高,而灵敏度分别为96.4%、70.4%和75.9%。5株不符合细菌中,3株产TEM－1型β－内酰胺酶,另2株细菌产非TEM、SHV型β－内酰胺酶。结论 双纸片法是一种较好的超广谱β－内酰胺酶检测方法,可在临床实验室中推广使用。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌遗传标记和耐药基因的研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum beta-lactamases,ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的遗传标记基因（整合子qacE△1、转座子tnpU）、氨基糖苷类修饰酶编码aac（6′）-Ib基因和喹诺酮类药物耐药qnrA基因分布状况,为临床使用药物治疗感染和消毒灭菌工作提供参考。方法收集本院的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共60株,采用PCR方法检测这些菌株中qacE△1、tnpU、aac（6′）-Ib和qnrA基因,MIC法药物敏感试验分析菌株的耐药性。结果 60株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中qacEΔ1基因检出率61.7%,tnpU基因检出率7.6%,aac（6′）-Ib检出率为11.7%,qnrA基因检出率3.3%。60株菌中有38株含1种或以上基因,其药敏敏感度最高的是亚胺培南、厄它培南、哌拉西林/他唑巴坦,敏感率均为97.4%,而对氨苄西林和头孢唑啉完全耐药。结论产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药与耐药基因传递机制整合子和转座子系统密切相关,分离株携带qacE△1、tnpU、aac（6′）-Ib和qnrA基因是细菌呈多重耐药的主要原因,提示临床应慎重用药。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的研究

目的 :了解四川大学华西医院产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中CTX M基因的检出情况及产CTX M酶大肠埃希菌的耐药性和同源性。方法 :对 2 0 0 1年 1 0月～ 2 0 0 2年 5月我院临床分离的 30株产ESBLs大肠埃希菌采用琼脂平皿对倍稀释法和PCR方法进行耐药表型和 β 内酰胺酶基因型分析 ;对扩增的CTX M基因进行DNA序列分析 ;用脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分型技术了解产CTX M酶大肠埃希菌同源性。结果 :1 3株菌携带CTX M基因 ,CTX M酶亚型为CTX M 3和CTX M 1 4。产CTX M酶菌株对第三代头孢菌素耐药率高 ,对头孢噻肟…     

产生超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌的药物敏感性及其基因型研究

目的研究产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的肺炎克雷伯菌基因型及其药敏特征。方法对2003年12月～2004年12月哈尔滨地区临床分离的74株产ESBLs肺炎克雷伯菌,测定菌株对常用β-内酰胺类和非β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,并采用SHV型和TEM型特异性引物检测ESBLs的基因型。结果产ESBLs细菌对头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率依次为71．6％、20．3％、54．1％、31．1％,对头孢哌酮／舒巴坦的敏感率为54．1％,69株（93．2％）对亚胺培南敏感。74株产ESBLs细菌中携带blaSHV和6kTEM基因的阳性例数分别是45例（60．8％）和23例（31．1％）。结论哈尔滨地区产ESBLs肺炎克雷伯菌对常用β-内酰胺类和非β-内酰胺类抗菌药物的敏感性降低,临床上需慎用酶抑制剂复合物及第4代头孢菌素,亚胺培南仍是治疗产ESBLs菌感染的首选药物。产ESBLs肺炎克雷伯菌blaSHV的流行频率高于blaTEM.     

北京发现同时产DHA-1质粒AmpC型及CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌

目的研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌同时产超广谱β内酰胺酶(ESBL)及质粒型Ampc酶菌株的比率及其基因型。方法收集北京两家教学医院2001--2002年产ESBL且对头孢西叮耐药的59株大肠埃希菌和21株肺炎克雷伯菌，采用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点；接合试验证实酶基因有无可转移性，并用碱裂解法提取质粒；采用多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction，MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。脉冲场凝胶电泳(pulsed field gelel ectrophoresis，PFGE)确定耐药菌株的亲缘关系。结果北京两家医院ESBL中质粒型AmCZ酶的发生率，大肠埃希菌分别为0和2％，肺炎克雷伯菌则分别为9．7％和17．1％。1株大肠埃希菌及9株肺炎克雷伯菌产生DHA-1型质粒AmpC酶，同时也产CTX-3型(6株)或CTX—M-14(1株)或SHV-12(3株)型ESBL。10株中，3株肺炎克雷伯菌可将头孢西叮耐药性传给受体菌。这10株菌均至少携带1个约33—36kb的大质粒，未发现质粒的传播。PFGE发现这10株菌来自不同的克隆株。结论北京地区发现同时产DHA-1质粒AmpC型及CTX—M型ESBL的肺炎克雷伯菌，它们来自不同的克隆。     

儿童产超广谱β-内酰胺酶细菌感染的检测与分析

目的了解儿童感染性疾病中肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染时产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特点.方法对202株肺炎克雷伯菌和134株大肠埃希菌应用双纸片协同试验进行ESBLs的测定,纸片扩散法进行常规药敏试验,按照NCCLS的标准判读结果.结果对336株儿童患者感染菌株试验,共检测出81株ESBLs菌株,ESBLs总产生率为24.1%;其中肺炎克雷伯菌产ESBLs率为29.7%,大肠埃希菌产ESBLs率为15.7%.产ESBLs菌株的耐药率显著高于不产ESBLs菌株(t＝6.603,p<0.01),对氨苄西林、氨曲南、头孢他定和头孢噻肟耐药,对复方新诺明、氨苄西林/舒巴坦的耐药率也较高(耐药率高于60%),且多为多重耐药株,对丁胺卡那霉素、诺氟沙星、头孢哌酮/舒巴坦敏感率较高(耐药率低于30%);所有被测菌株对亚胺培南的耐药率为0.结论儿童感染细菌ESBLs发生率相当高,产ESBLs菌株已成为引起医院感染的重要病原菌,耐药高且多重耐药情况严重,治疗较困难,需加强ESBLs检测,以合理使用抗生素,延缓和防止ESBLs的发生和播散.     

Solexa测序法研究肺炎克雷伯菌质粒基因组的耐药基因

目的 通过Solexa高通量测序法研究肺炎克雷伯菌的质粒与耐药性的关系.方法 菌株为7年临床分离的206株肺炎克雷伯菌.提取所有菌的全部质粒DNA,Solexa高通量测序获得大规模的短序列.SOAP软件对质粒基因进行分析拼接,分析结果与相关数据库进行比对.MAQ软件分析质粒基因组包含的超广谱β-内酰胺酶(ESBL)多样性及单核苷酸多态性(SNP)情况.结果 肺炎克雷伯菌质粒基因组中已知的直接与耐药相关的基因就有13种.质粒基因组中存在多个ABC主动外排转运系统.发现4种编码β-内酰胺酶的ORF,其中SHV型ESBLs分布最广.系统分析了206株肺炎克雷伯菌质粒基因组中SHV型ESBLs的SNPs位点,发现存在着大量的非同义替换SNPs位点.结论 发现质粒中SHV型ESBLs基因可能受到选择压力,存在着大量的非同义替换SNPs位点.肺炎克雷伯菌质粒存在外排药物耐药方式,从而形成低水平的非特异多重耐药.     

大肠埃希菌耐药性分析

目的了解大肠埃希茵产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况;比较产ESBLs菌与非产ESBLs菌时10种抗生素的耐药率.指导临床合理用药.方法收集2007年7月～2008年6月临床分离的大肠埃希菌36株,用双纸片增效试验法和K-B法,进行产ESBLs细菌的检测和药敏试验.结果 36株大肠埃希茵中,共检出产ESBLs菌27株,栓出率为75%,除亚胺培南外,产ESBLs菌对其它10种抗生素的耐药率均显著高于非产ESBLs菌,亚胺培南未发现耐药株.结论本院大肠埃希菌产ESBLs率高,亚胺培南是治疗我院产ESBLs菌引起感染的有效抗生素.     

广州地区产ESBL肺炎克雷伯菌SHV型质粒的分子流行病学调查

目的 运用变性高效液相色谱（DHPLC）技术调查广州地区产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌各种亚型的流行分布情况,试图建立一种方便快捷的分子诊断及其流行病学监测的新方法.方法 对73份产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）肺炎克雷伯菌进行SHV质粒基因扩增,分别采用变性高效液相色谱（DHPLC）和测序法对扩增产物进行分析,以明确基因类型,并建立各个已知SHV基因亚型的特征性DHPLC图谱库.结果 73株产ESBL的肺炎克雷伯菌中68株确定为SHV基因型,其中62株为已知基因型,分别为SHV-1225株,SHV-1a 14株,SHV-17株,SHV-2a 8株,SHV-28 5株,SHV-2 2株,SHV-26和SHV-33各1株;6株为新的SHV基因型,其中5株获得命名;非SHV型菌株5株,分别为LEN-4型1株,OKP型4株.经过DHPLC分析,全部样本均表现为异常的洗脱峰,各种亚型的异常洗脱峰的形态迥异,其敏感性达100%（68/68）,特异性为93.2%（68/73）.SHV型质粒基因的突变集中在nt92、nt324～nt402及nt703～nt786这3个区段.结论 SHV-12是广州地区产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌主要的基因亚型,高比例基因变异的检出预示本地区即将或已经面临肺炎克雷伯菌新耐药机制的抵抗和流行,因此必须加强对产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测,及时调整抗菌策略;DHPLC可作为一种快速敏感的筛查方法用于产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测.     

肠杆菌科产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性研究进展

肠杆菌科细菌是临床感染,尤其是医院内感染的常见致病菌,产生β-内酰胺酶是其耐β-内酰胺类抗菌药物的主要机制。近十余年该科细菌中不同种属、特别是克雷伯菌属,大肠埃希菌产生的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),能水解第三代头孢菌素及氨曲南,且常为多重耐药株,已引起临床注意。 根据ESBLs对β-内酰胺酶抑制剂的稳定性分为对β-内酰胺酶抑制剂敏感的ESBL和对其耐药的IRESB两大类,根据其衍生来源分为TEM、SHV型及非TEM、SHV型,ESBLs酶蛋白表型已近70种,几乎都由耐药质粒介导,耐药性极易传播。通过NCCLs推     

大肠埃希菌的耐药特性及其产超广谱β-内酰胺酶的分析

观察大肠埃希菌的耐药特性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况，为临床正确选择抗生素提供药敏依据。用微量稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)，用ESBLs表型确证试验检测出产ESBLs的大肠埃希菌。共检出314株大肠埃希菌。对其中298株大肠埃希菌进行了ESBLs检验，检出产ESBLs菌81株，检出率为27．2％；81株产ESBLs菌对多种药物耐药率较高，除亚胺培南、头孢哌酮，舒巴坦、庆大霉素和阿米卡星外，大肠埃希菌产ESBLs株对其他9种抗生素的耐药性明显高于非产ESBLs株。大肠埃希菌产ESBLs率高，应引起临床高度重视，对检测出的大肠埃希菌均应进行ESBLs检测，产ESBLs细菌有较高的交叉耐药性和多重耐药性，对亚胺培南和头孢哌酮，舒巴坦的敏感性好。     

73株大肠埃希菌耐药表型分析

目的分析临床分离的大肠埃希菌的耐药性、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性率及耐药性之间的关系。方法用微量肉汤稀释法检测2009年10月至2010年3月分离的73株大肠埃希菌的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株。结果 73株大肠埃希菌产ESBLs20株,阳性率为27.4%。产ESBLs菌株对青霉素类和第一、第二代头孢菌素耐药率〉95%,对第三代头孢菌素中头孢哌酮、头孢噻肟和头孢曲松耐药率均为95%,但头孢他定耐药率为20%。对酶抑制剂哌拉西林/三唑巴坦、替卡西林/克拉维酸和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率〈30%,耐药率低于30%的还有头孢西丁、阿米卡星,未检测到亚胺培南耐药株。非产ESBLs菌株耐药率明显低于产ESBLs菌株。结论本医院分离的产ESBLs大肠埃希菌的比例低于国内其他地区,具有显著的耐药性。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌感染及耐药率的分析

目的提高医务人员对超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）细菌感染的认识,指导临床合理使用抗菌用药。方法对本院2004～2006年间分离出的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和不动杆菌进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测,比较每年发生率并对其做药物敏感试验。结果产ESBLs大肠埃希菌每年发生率分别为18.2%、23.5%、27.7%,产ESBLs肺炎克雷伯菌每年发生率为15.8%、20.3%、26.9%,产ESBLs不动杆菌每年发生率为14.6%、20.1%、28.1%。三种细菌对氨苄西林、哌拉西林及头孢菌素类耐药率约为72～100%。结论产ESBLs菌的发生率与耐药率呈逐年上升趋势,这与临床大量使用三代头孢类抗生素及不合理使用抗菌药物有关,同时ESBLs细菌对一些抗菌药物耐药率也不断提高,应引起临床治疗方面的足够重视。     

儿童产超广谱β-内酰胺酶细菌感染的检测与分析

目的　了解儿童感染性疾病中肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染时产生超广谱 β -内酰胺酶 (ESBLs)的情况及其耐药特点 .方法　对 2 0 2株肺炎克雷伯菌和 134株大肠埃希菌应用双纸片协同试验进行ESBLs的测定 ,纸片扩散法进行常规药敏试验 ,按照NCCLS的标准判读结果 .结果　对 336株儿童患者感染菌株试验 ,共检测出 81株ES BLs菌株 ,ESBLs总产生率为 2 4 .1% ;其中肺炎克雷伯菌产ESBLs率为 2 9.7% ,大肠埃希菌产ESBLs率为 15 .7% .产ESBLs菌株的耐药率显著高于不产ESBLs菌株 (t=6 .6 0 3,p <0 .0 1) ,对氨苄西林、氨曲南、头孢他定和头孢噻肟耐药 ,对复方新诺明、氨苄西林 /舒巴坦的耐药率也较高 (耐药率高于 6 0 % ) ,且多为多重耐药株 ,对丁胺卡那霉素、诺氟沙星、头孢哌酮 /舒巴坦敏感率较高 (耐药率低于 30 % ) ;所有被测菌株对亚胺培南的耐药率为 0 .结论　儿童感染细菌ESBLs发生率相当高 ,产ESBLs菌株已成为引起医院感染的重要病原菌 ,耐药高且多重耐药情况严重 ,治疗较困难 ,需加强ESBLs检测 ,以合理使用抗生素 ,延缓和防止ESBLs的发生和播散