抗淋球菌外膜蛋白单隆抗体的研制及应用研究

制备抗淋球菌外膜蛋白单克隆抗体，建立淋瘤快速诊断方法。方法：采用乙淋球菌外膜蛋白发杂交细胞。筛选出抗ＷＩ群外膜蛋白杂交瘤２株，分泌的单克隆抗体类别为ＩｇＧ１；抗ＷⅡ／ＷⅢ外膜蛋白杂交瘤２株，分泌的单克隆抗体类别为ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ２ｂ。     

抗淋球菌单克隆抗体的制备及其生物学特性研究

目的：研制抗淋球菌单克隆抗体,为建立新的淋病诊断方法奠定基础。方法：以淋球菌２９１０６－５株作抗原,按常规淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。并采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法研究单抗的特异性和敏感性。结果：建立了５个持续分泌抗淋球菌单抗的杂交瘤细胞株。他们所分泌的抗体效价可达１∶８１９２～１∶３２７８６。５株单抗均能与淋球菌发生特异性结合,但对脑膜炎球菌、葡萄球菌、大肠杆菌等１５种其他微生物不起反应。淋球菌的最小检测量为１×１０４个／ｍｌ。结论：本研究建立的单抗在检测淋球菌时有高度特异性和敏感性     

单克隆抗体协同凝集试验检测淋球菌抗原的研究

将抗淋球菌ＷＩ和ＷⅡ／ＷⅢ群外膜蛋白单克隆抗体与葡萄球蛋白Ａ结合后，制成淋病单克隆抗体协同凝集试剂盒，该试剂盒对淋球菌最小检出量为１＊１０＾６／ｍｌ，且与脑膜炎球菌等细菌无交叉反应。     

抗肺癌单克隆抗体的研制

采用新鲜肺癌组织制成的细胞悬液及肺腺癌细胞株做为免疫原,免疫Balb/c小鼠。取脾细胞与经活体增殖的无支原体污染的高活力SP2/O骨髓瘤细胞融合,联合应用酶联免疫吸附和多组织切片免疫组化染色法进行筛选,得到两株分泌对肺癌具高特异性的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体与被检测的大多数人体正常组织无交叉反应,可初步用于肺癌病理鉴别诊断。     

抗ENA单克隆抗体的研制

目的：制备与分析抗可提取性核抗原（ＥＮＡ）单克隆抗体;方法：以ＥＮＡ为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,建立能稳定分泌抗ＥＮＡ单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的杂交瘤细胞株;结果：共获得１１株能稳定分泌抗ＥＮＡ的杂交瘤细胞株。对其中的５种单克隆抗体（ＩＧ５,２Ｅ５,２Ｃ６,４Ｃ１０和４Ｅ６）进行了初步分析,结果如下：小鼠腹水抗体效价范围２×１０－５～３×１０－６;免疫球蛋白亚类鉴定,１株为ＩｇＧ２ａ,１株为ＩｇＧ２ｂ,其余３株均为ＩｇＧ１;结论：ＥＮＡ作为弱免疫原可用于制备单克隆抗体     

抗HCG单克隆抗体细胞系的建立及应用

以注射用HCG免疫BALb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经4次克隆化筛选,建立分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤株,命名为IC_(12),经鉴定,单克隆抗体(mcAb)属于鼠IgG_1亚类。效价为ELISA法1:64000,胶乳凝集法1:512。化学交联HCG、MCAb聚苯乙烯胶乳,直接凝集试验(抗原对抗体),检测100例早孕尿液,阳性率100％,与市售常规妊娠胶乳试验相比已显示出非凡的特异性。     

淋球菌多重耐药性与mtrR基因点突变的关系

目的探讨多传递耐药（mtr）外排系统中mtrN基因点突变与淋球菌流行株多重耐药性的关系。方法应用K-B法和琼脂稀释法分离出55株淋球菌流行株。利用小量细菌基因组DNA快速抽提试剂盒取淋球菌DNA，PCR扩增16株淋球菌mtrR基因．并对扩增产物测序．比较淋球菌敏感株与多重耐药株的差异。结果淋球菌多重耐药株占76．36％（42／55）。4株敏感株和2株耐青霉素淋球菌无mtrR基因突变，10株多重耐药株均有mtrR基因点突变，表现为3种点突变形式：6株发生了第45位Gly（GGC→GAC）Asp，3株发生了第14位His（CAC→CGC）Arg．1株发生了第51化Phe（TTC→GTC）Val。结论淋球菌mtrR基因第45位Gly（GGC→GAC）Asp,14位His（CAC→CGC）Arg和第51位Phe（TTC→GTC）Val突变与淋球菌流行株的多重耐药性密切相关。     

基因免疫制备抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体

目的通过基因免疫方法,制备抗SAILS病毒N蛋白的单克隆抗体并对单抗进行初步鉴定。方法将含有N蛋白的编码基因的真核重组质粒pSecTagB／N免疫BALB／c小鼠,然后取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用原核表达的SARS病毒N蛋白筛选阳性克隆。然后通过免疫印迹法进一步证明抗体对N蛋白的特异性,用ELISA方法检测抗体对灭活SARS全病毒的免疫反应。结果筛选得到10株抗N蛋白的单克隆抗体,ELISA和免疫印迹结果表明这些抗体特异性针对N蛋白上的抗原决定簇,且有7株抗体对SARS灭活病毒有阳性反应。结论所得的单克隆抗体特异针对N蛋白。     

荧光定量聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌

目的　评价荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)技术检测淋病奈瑟菌的临床应用。方法　采用FQ -PCR技术检测疑似淋病患者泌尿生殖道标本 80例 ,并同时进行淋病奈瑟菌培养 ,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果　测试 80例标本 ,FQ -PCR法 30例为阳性 ,DNA拷贝数从 3× 10 5/ml至 6× 10 10 /ml不等 ,阳性率为 37.5 %(30 / 80 ) ;培养法 2 4例阳性 ,阳性率 30 .0 % (2 4/ 80 ) ;FQ -PCR较培养法差异有显著性 (P <0 .0 0 5 )。结论　FQ -PCR技术可定量检测标本中的DNA拷贝数 ,较培养法简单、敏感、准确 ,对于淋病的早期确诊 ,治疗期间疗效的判断具有重要价值     

60株淋病奈瑟菌抗生素耐药性分析

目的分析淋病奈瑟菌抗生素耐药性。方法对本院就诊的淋病患者经细菌培养分离的60株淋病奈瑟菌进行6种抗生素敏感试验，采用纸片扩散法。结果6种抗生素中，诺氟沙星和青霉素耐药率分别为78％、51．6％，其次是四环素，耐药率为20％，敏感性较好的为壮观霉素、头孢曲松、阿奇霉素，敏感率分别为98％、90％、60％。结论合理有效地使用抗生素至关重要。     

多重耐药淋病奈瑟菌耐药基因研究

目的:探讨淋病奈瑟菌多重耐药表型与耐药基因型之间的关系。方法:应用K-B法检测临床分离到的40株淋病奈瑟菌对8种常用抗生素的敏感性。用煮沸法提取细菌的DNA,用PCR法检测随机抽取其中20株分离株的TEM、tetM、ermF和mefA基因。结果:淋病奈瑟菌的多重耐药现象明显,对氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均高达92.5%;TEM、tetM基因的检出率均为75.0%,ermF和mefA基因未检出;本组菌株对青霉素的耐药表型与TEM基因密切相关(Kappa=0.733,P<0.01)。结论:淋病奈瑟菌的多重耐药表型与耐药基因之间密切相关。     

649株淋球菌的营养学分型及其临床意义

对649株淋球菌进行了营养学分型及抗生索敏感试验。结果:Proto、Pro~-、Arg~-、(P)AH(U)~-、PA(U)~-、(Pro)Hyx~-、(Pro)Met~-营养型分别占52.9％、13.6％、13.1％、8.2％、10.9％、0.6％和0.8％。1985年到1990年间,Proto型和Arg~-型分别从51％下降到41％和从12％下降到3.7％,而PA(U)~-型从10％上升到26％,(P)AH(U)~-型从7％上升到15％。营养学分型与抗生素敏感性明显相关。     

184株淋球菌药敏试验结果分析

目的:了解淋球菌对抗生素的敏感性,为淋病的防治提供科学依据。方法:采用纸片扩散法进行药敏试验。结果:淋球菌对青霉素、氟哌酸、环丙沙星、头孢曲松、壮观霉素、阿奇霉素的敏感率分别为3.26%、7.07%、15.22%、96.20%、100.00%、100.00%。结论:青霉素、氟喹诺酮类抗生素已不宜作为乐业县治疗淋病的一线药物,壮观霉素、阿奇霉素和头孢曲松钠可作为治疗淋病的首选药物。     

男性淋病患者奈瑟球菌57株药敏分析

目的：了解男性淋病患者奈瑟球菌对抗生素的药敏情况。方法：纸片扩散法检测57株淋病奈瑟球菌对7种抗生素的药敏。用头孢硝噻吩纸片法检测产青霉素酶淋病奈瑟菌（PPNG）,以对四环素药敏纸片抑菌圈直径≤19 mm推测为高水平耐四环素淋病奈瑟球菌（TRNG）。结果：淋病奈瑟球菌对青霉素、四环素、环丙沙星敏感性分别为12.3%、17.5%、28.1%;对头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松耐药性分别为5.3%、3.5%、5.3%;无大观霉素耐药株。57株中检出14株PPNG菌株（24.6%）,16株（28.1%）疑为TRNG。结论：淋病奈瑟球菌对青霉素、四环素、环丙沙星耐药性严重,这些药物已不再适合用于淋病治疗;第三代头孢菌素和大观霉素仍是一线用药,但应重视中介株,否则导致严重耐药性。