不同剂量左旋多巴对帕金森病大鼠的行为学影响及相应形态学研究和分子机制探讨

目的　研究不同剂量左旋多巴对帕金森病大鼠及黑质形态学作用 ,探讨左旋多巴合理的方法。方法　通过 6- OHDA脑立体定向注射术建立大鼠帕金森病模型 ,采用行为学、TUNEL、原位杂交的方法观察左旋多巴不同剂量 (1 0 mg/ kg/ d、50 mg/ kg/ d、1 0 0 mg/ kg/ d)、不同的作用时间 (× 1 d、× 3 d、× 5 d、× 7d)对帕金森病大鼠黑质细胞的毒性作用 ,并观察治疗后 7d各项指标的变化。结果　 PD大鼠旋转行为、黑质细胞凋亡数及 bcl- 2 m RNA随着左旋多巴治疗的时间、剂量增加而增加。除小剂量组外 ,中、大剂量组各项指标均高于对照组 (P<0 .0 5) ,停止治疗后 7d,左旋多巴治疗各组指标均得到改善。结论　左旋多巴能加速 PD大鼠黑质细胞凋亡 ,这种作用受到 bcl- 2 m RNA调控 ,小剂量、间隔使用左旋多巴能有效减少黑质细胞凋亡。     

绿茶多酚对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用及机制

目的探讨绿茶多酚对偏侧帕金森病（PD）大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用及机制,为其临床应用提供依据。方法将SD大鼠随机分为对照组、6-羟多巴胺（6-OHDA）组和绿茶多酚组各12只,后两组于纹状体内立体定向注射6-OHDA制作PD模型,绿茶多酚组在造模前5d予绿茶多酚（400mg／kg）灌胃,共2周。造模4周后免疫组化法观察黑质多巴胺能神经元数量,比色法观察中脑氧化应激水平。结果绿茶多酚组、6-OHDA组损毁侧黑质致密部多巴胺能神经元数量显著减少,但绿茶多酚组显著高于6-OHDA组（P〈0．01）;6-OHDA组损毁侧氧化应激水平明显高于绿茶多酚组（P〈0．01）。结论绿茶多酚对偏侧PD大鼠模型的多巴胺神经元损伤有明显保护作用,其机制可能为抑制氧化应激反应。     

不同剂量左旋多巴治疗大鼠帕金森病及其神经毒性实验研究

目的：研究不同剂量左旋多巴治疗帕金森病效果及不同疗效与其神经毒性作用关系,探讨合理左旋多巴治疗帕金森病的方法。方法：通过6－OHFA脑立体定向注射术建立大鼠帕金森病模型,采用行为学,TUNEL,原位杂交的方法观察左旋多巴小,中,大三种不同剂量（10mg/kg/d,50mg/kg/d,100mg/kg/d),不同的作用时间（1d,3d,5d,7d)对帕金森病大鼠黑质细胞的毒性作用,并观察治疗7d项指标的变化,结果：PD大鼠旋转行为,黑质细胞凋亡数及Bcl-2mRNA随着左旋多巴治疗的时间,剂量增加而增加,除小剂量组外,中,大剂量组各项指标均高于对照组（P＜0．05）,停止治疗后7d左旋多巴治疗各组指标均得到改善,结论：我们应尽可能小剂量,间隔使用左旋多巴治疗帕金森病。     

电针与锌合用对帕金森病模型大鼠DA能神经元恢复的调节

目的 探讨电针与小剂量锌合用对帕金森病(PD)模型大鼠DA能神经元结构和功能恢复的调节作用.方法 选取SD大鼠100只,将6-羟基多巴胺注入中脑右侧黑质制备单侧黑质损毁的PD大鼠模型,将模型大鼠随机分成模型组、0Hz组和120 Hz电针组、120 Hz+锌组和锌组,另设有假手术组,共6组.治疗或观察6个星期,观察治疗前后PD模型大鼠行为学变化,黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的形态、数量以及黑质多巴胺能神经元凋亡的情况.结果 与模型组比较,锌组、120 Hz组以及120 Hz+锌组大鼠行为学明显改善(P＜0.05或0.01),大鼠损毁侧TH阳性神经元数明显增加,DA能神经元凋亡数显著减少(P＜0.05或0.01).与120 Hz组比较,120 Hz+锌组大鼠损毁侧黑质TH阳性神经元数的增加及凋亡细胞百分比的减少也有统计学意义(P＜0.05).结论 电针与小剂量锌合用治疗PD模型大鼠在使DA能神经元结构和功能恢复方面具有较好的神经保护作用.     

半胱胺对帕金森病小鼠模型多巴胺能神经元的影响

目的 观察半胱胺对MPTP所致C57BL小鼠帕金森病(PD)模型多巴胺能神经元的影响.方法 取78只SPF级C57BL小鼠,随机分为6组:对照组,MPTP模型组,半胱胺预防性给药组(半胱胺20、75 mg/kg+ MPTP组),半胱胺治疗组(MPTP+半胱胺20、75 mg/kg组).半胱胺预防性给药组(20、75 mg/kg),2次/d×4 d,皮下注射,再给以MPTP;半胱胺治疗性给药与MPTP同天给药;总疗程均为14 d.高效液相谱检测纹状体多巴胺(DA)的含量;免疫组化检测黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞.结果 半胱胺(20 mg/kg)预防组有效地减少MPTP导致的黑质DA能神经元和纹状体DA含量的降低(P＜0.01).结论 半胱胺(20 mg/kg)有效地预防MPTP引起的多巴胺能神经元损害,保护作用与剂量有关.     

铁剂诱发黑质多巴胺能神经元变性

目的 探讨铁剂对黑质多巴胺（DA）能神经元的毒性作用，为阐明帕金森病（PD）发病机制提供资料。方法 将铁剂定向注射至大鼠一侧黑质，6周后通过酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化染色观察黑质DA能神经元的损伤情况，高压液相色谱－电化学法（HPLC－ECD）检测DA及其代谢产物含量，化学分光比色法检测中脑自由基代谢变化。结果 大剂量铁剂（40μg)可诱发大鼠黑质TH阳性细胞显著变性、丢失，纹状体DA及其代谢产物含量显著降低，中脑脂质过氧化产物丙二醛（MDA）升高、谷胱甘肽（GSH)含量降低。小剂量铁剂（4μg）无明显致TH阳性细胞丢失作用，但也可使中脑MDA升高。结论 铁剂可造成中脑黑质DA能神经元变性丢失，铁介导的自由基生成增加在PD发病过程中起重要作用。     

帕金森病大鼠模型的炎性发病机制

目的探讨帕金森病(Parkinsons disease,PD)大鼠模型的炎性发病机制。方法采用立体定向术将神经毒素6-羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)双靶点注入大鼠右侧纹状体内,制备经典的帕金森病动物模型。观察黑质致密带(SNc)内多巴胺(dopamine,DA)能神经元的缺失、胶质细胞的增生,并检测纹状体内炎症因子—肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果模型组右侧黑质DA能神经元的数目明显减少,胶质细胞大量激活、增生,TNF-α在模型组右侧黑质和纹状体内表达水平明显升高,且主要分布在激活的小胶质细胞上。结论6-OHDA导致黑质致密带多巴胺能神经元变性死亡的过程中有神经胶质细胞和炎症因子的参与,炎性发病机制与氧化应激可能密切相关。     

6-羟基多巴胺所致帕金森病大鼠模型稳定性的研究

目的 探讨立体定向注射6-羟基多巴(6-OHDA)建立帕金森病(PD)大鼠模型的方法及其稳定性.方法 利用脑立体定向技术将6-OHDA 注入大鼠右侧黑质致密部(SNc)及中脑腹侧被盖(VTA),经阿朴吗啡(APO)诱导表现为恒定左侧旋转且旋转圈数大于210 r/30 min,视为成功PD大鼠模型.免疫组化方法观察黑质、纹状体区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的形态及数量变化,以及高效液相法检测黑质纹状体多巴胺(DA)含量的变化.结果 ①旋转实验检测:80只大鼠中32只旋转圈数大于210 r/30 min,成功率为40%,并且至少可以维持12 w.②免疫组化结果:大鼠模型毁损侧黑质区和纹状体区TH阳性的神经元较对侧及对照组减少(P＜0.01).③高效液相法检测结果:4和12 w模型鼠右侧黑质纹状体中DA 含量均较对照组减少(P＜0.05).结论 6-OHDA 毁损法可有效建立模拟人类PD中晚期的大鼠模型,并且至少可以维持12 w,为研究PD治疗提供稳定的模型.     

尼古丁抑制6-羟基多巴胺损伤诱导的纹状体炎症反应

目的 探讨尼古丁对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤诱导的纹状体炎症反应的抑制作用. 方法 雄性SD大鼠分别接受尼古丁(0.2 mg/kg或2.0 mg/kg)或生理盐水腹膜腔内注射.注射7 d后,尼古丁高剂量治疗组、低剂量治疗组和模型对照组大鼠右侧纹状体内分别接受6-OHDA20 μg注射.免疫组织化学定量分析黑质多巴胺能神经元和纹状体CD3、CD4、CD8阳性淋巴细胞数.免疫荧光定量分析纹状体小胶质细胞对6-OHDA损伤的反应. 结果 6-OHDA注射4周后,模型对照组注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞为相应对照侧的25.27%;而在尼古丁低剂量和高剂量组注射侧分别为相应对照侧的64.97%和67.24%.各组各时间点6-OHDA注射侧纹状体有明显的T淋巴细胞浸润,其中约80%为CD8阳性T淋巴细胞.尼古丁治疗组浸润的T淋巴细胞数较模型对照组明显减少,而CD3和CD4阳性细胞占总T淋巴细胞的比例在各组和各时间点基本一致,尼古丁治疗组和模型对照组比较,差异无统计学意义.纹状体小胶质细胞特异标记物IBA1免疫荧光定量结果显示,尼古丁处理可显著抑制6-OHDA损伤诱导的小胶质细胞激活. 结论 尼古丁可抑制6-OHDA损伤诱导的炎症反应.而尼古丁对炎症反应的抑制作用可能是其保护多巴胺能神经元的机制之一.     

转Nanog基因对6-羟基多巴胺帕金森病大鼠脑核因子-κB表达的影响

目的探讨转Nanog基因对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠A脑内核因子(NF)-κB表达的影响。方法取SD大鼠随机分成正常对照组、6-OHDA+磷酸盐缓冲液(PBS)组、6-OHDA+PNL组与6-OHDA+Nanog组,各组又分注射后1、14 d亚组。除正常对照组外,采用脑立体定向注射技术,6-OHDA+PBS组注入PBS,6-OHDA+PNL组注入空载体,6-OHDA+Nanog组注入转Nanog基因载体。各组动物注射阿朴吗啡(APO)后观察各时间点大鼠的旋转行为改变;行脑免疫组织化学染色,观察黑质多巴胺(DA)能神经元数量变化、纹状体NF-κBp65的表达改变;激光扫描共聚焦显微镜技术检测NF-κBp65表达的定位。结果注射后14 d,6-OHDA+Nanog组大鼠APO诱发的旋转效应明显低于6-OHDA+PNL组与6-OHDA+PBS组(P<0.05);除正常对照组外,其他各组大鼠注射后14 d黑质TH阳性细胞数普遍较注射后1 d减少(P<0.01),但6-OHDA+Nanog组损毁侧黑质存活的TH阳性细胞数明显高于6-OHDA+PNL组与6-OHDA+PBS组(P<0.01),且其注射侧纹状体NF-κBp65阳性细胞数低于注射后1 d组(P<0.05)、注射后14 d的6-OHDA+PNL与6-OHDA+PBS组(P<0.05)。除正常对照组外,注射后各组各时程均可见NF-κBp65的阳性表达,并呈现核内转移现象。结论转Nanog基因可抑制6-OHDA诱导的PD大鼠模型脑内NF-κB的活化,同时具有神经元保护作用。     

谷胱甘肽合中药对帕金森病动物模型抗氧化指标及细胞形态学的影响

目的 :观察还原型谷胱甘肽 (GSH)合中药抗震止痉胶囊对帕金森病 (PD )大鼠模型的异常形为、黑质抗氧化系统及细胞形态学的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :应用 6-羟基多巴胺立体定向注射制作PD大鼠模型。将2 4只大鼠随机分为 3组 (每组 8只 ) :模型组、治疗组 (GSH合抗震止痉胶囊组 )、假手术组 ,分别给予相应处理 ,共 45d ,给药前后均进行行为学测试 ,给药结束后每组随机选取 2只大鼠 ,分别行免疫组化和电镜观察 ,测定其余大鼠黑质区GSH -Px、MDA及活性氧水平。结果 :①治疗组可明显改善大鼠旋转行为 (P <0 .0 5 ) ;②治疗组能减轻黑质区氧化应激损伤 ;③免疫组化发现治疗组TH -IR神经元较模型组明显增多 (P <0 .0 0 1) ;④电镜下发现治疗组可部分延缓凋亡进程。结论 :GSH合抗震止痉胶囊能部分改善大鼠旋转行为 ,减轻PD模型大鼠黑质区氧化应激损伤 ,并对残存DA能神经元具有一定保护作用。     

50mg/kg剂量左旋多巴对帕金森病大鼠神经行为学和超微结构的影响

目的 观察50 mg/kg剂量左旋多巴(L-dopa)对帕金森病(PD)大鼠神经行为学和超微结构的影响.方法 采用脑部偏侧注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD模型,进一步腹腔注射50 mg/kg剂量L-dopa,连续4 w.每周观察2次行为学[异常不自主动作(AIM)评分、对侧旋转行为的评定],并进行阿扑吗啡(apomorphine,APO)诱导PD大鼠对侧旋转行为的评定.实验结束后行心脏灌注固定,分离双侧黑质、纹状体,进行透射电镜观察.结果 模型大鼠对APO诱导的旋转圈数、AIM评分、大鼠旋转启动时间,在2、3、4 w中,差异无统计学意义(P＞0.05).旋转持续时间、药效期平均旋转圈数、剂峰旋转圈数,虽有增加的趋势,但仅与第3天比较,差异有统计学意义(P<0.05).大鼠注射侧(右侧)黑质、纹状体出现细胞膜皱缩,细胞体积缩小,线粒体嵴部分溶解,细胞核皱缩或不规则,核膜部分不完整等.结论 50 mg/kg L-dopa对PD大鼠具有明显的神经毒性,有典型的神经行为学改变和超微结构改变.模型稳定,可用于后续研究.     

DARPP-32磷酸化与止颤汤改善大鼠帕金森病运动并发症的研究

目的观察纹状体多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)(Thr34)磷酸化与止颤汤对大鼠帕金森病运动并发症的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射于大鼠脑部黑质造成帕金森病(PD)模型,进一步予以左旋多巴/苄丝肼腹腔注射制作异动症(LID)模型。实验设立正常组,LID模型组,LID西药组及小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组,并采用免疫组化法观察各组大鼠DARPP-32(Thr34)磷酸化的表达情况。结果免疫组化显示,假手术组DARPP-32(Thr34)磷酸化表达明显低于模型组(P0.01)。中药小剂量组、中剂量组、大剂量组DARPP-32磷酸化表达与西药组表达比较,差异有统计学意义(P0.05);中剂量组磷酸化与小剂量组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论止颤汤可有效降低纹状体DARPP-32(Thr34)磷酸化的表达,可能是止颤汤治疗异动症的机制。     

长期应用不同剂量左旋多巴对帕金森病大鼠模型学习记忆能力和血浆同型半胱氨酸的影响

目的 观察长期应用不同剂量左旋多巴(L-dopa)对帕金森病(PD)模型大鼠的学习记忆能力和血浆同型半胱氨酸(Hcy)的影响.方法 应用6-羟多巴胺(6-OHDA)制作PD大鼠模型.将288只成功PD模型大鼠分为对照组及实验组.实验组再分为3个不同剂量组,分别用不同剂量的L-dopa腹腔注射(10 mg/kg/d,20 mg/kg/d,30 mg/ kg/d)连续28 d,分别于不同时点(1、3、5、7、14和28 d)作行为学测定,并抽血测定Hcy、叶酸;同时分离大鼠海马区制作冰冻切片,进行刚果红染色并测定海马区β淀粉样蛋白阳性斑块的积分吸光度.结果 随着应用L-dopa剂量的增大、时间的增加可使PD模型大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05);海马区β淀粉样蛋白阳性斑块增多(P<0.05).血浆Hcy浓度变化不一,随L-dopa剂量增大而升高,随L-dopa应用时间增长而波动,叶酸浓度降低(P<0.05).结论 长期大量使用L-dopa能使PD模型大鼠学习记忆能力明显下降,血浆Hcy浓度升高,引起β淀粉样蛋白阳性斑块增多,推测PD痴呆(PDD)可能与Hcy升高有关.     

左旋多巴对帕金森病大鼠模型的脑保护作用

目的 探讨左旋多巴对不同程度损伤巴金森病（PD）模型大鼠脑的影响。方法 采用左旋多巴与生理盐水处理不同程度损伤PD鼠及PD模型假手术鼠，观察各实验组鼠行为、纹状体区谷胱甘肽的含量、黑质区TH神经元和纹状体区TH神经纤维数的变化。结果 左旋多巴治疗诱发的旋转行为只见于重度损伤PD鼠。左旋多巴对中、重度损伤PD鼠纹状体区的谷胱甘肽水平有上调作用，分别达16．3％和19．6％（P＜0．05），而轻度损伤PD鼠谷胱甘肽变化不明显。左旋多巴增加中、轻度损伤PD鼠纹状体TH阳性神经纤维数分别达93．5％和40．8％（P＜0．05）。结论 左旋多巴对中、重度损伤PD大鼠纹状体区谷胱甘肽水平有上调作用；左旋多巴升高纹状体区谷胱甘肽水平，与PD大鼠的损伤程度不相关；左旋多巴可促进轻、中度损伤PD鼠纹状体区TH阳性神经纤维的恢复。     

帕金森病异动症与黑质损伤程度关系的实验研究

目的探讨帕金森病(PD)异动症的产生与黑质损伤程度之间的关系。方法通过6-羟基多巴立体定向注射至大鼠前脑内侧束建立PD模型,左旋多巴甲酯腹腔注射治疗(25 mg·kg~(-1)·d~(-1),每天2次)21 d,评估异常不自主运动的情况；然后取中脑,行酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色,观察黑质多巴胺能神经元的损伤程度；异常不自主运动积分与黑质损伤程度之间的关系应用Excel软件的S方程分析进行评价。结果25只大鼠经阿朴吗啡诱导后有10只旋转频率＞7次/ min,被认为是成功PD模型；经左旋多巴治疗后,10只PD大鼠中有8只出现了异常不自主运动,包括刻板动作和对侧旋转行为,并且每只大鼠的异常不自主运动均不同；异常不自主运动在黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元的损伤达90%以上的PD大鼠中出现；黑质损伤程度和异常不自主运动的发生及程度呈正相关。结论黑质损伤严重程度在PD患者出现异动症中可能起重要作用。     

百草枯致小鼠帕金森病模型多巴胺能神经元损害作用的研究

目的 研究环境毒素百草枯(PQ)诱发帕金森病(PD)过程中多巴胺能神经元的损害和基质金属蛋白酶(MMP)-2、 MMP-9的表达规律.方法 C57BL小鼠按体重10 mg/kg经腹腔注射PQ,分别观察动物行为,高效液相法测定纹状体部多巴胺(DA)含量的变化.免疫组化染色法观察和计数黑质(SN)酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的数量,免疫组化法观察术后不同时间点MMP-2、MMP-9的动态变化.结果 与对照组比较,模型组SN致密部TH阳性神经元数明显减少(P＜0.01),纹状体DA含量明显低于对照组(P＜0.01),MMP-2、 MMP-9的表达增强.结论 大剂量的PQ可使小鼠产生类似于PD的行为和DA能神经元的损害,MMP-2、 MMP-9可能参与了DA能神经元的损害过程.     

束缚加悬吊应激大鼠脑组织单胺类神经递质的变化及异丙酚对其的影响

目的 研究麻醉剂异丙酚对束缚加悬吊应激大鼠脑组织不同脑区单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分成3组,束缚加悬吊应激对照组(S组),小剂量异丙酚(5mg/kg)组(p1组),大剂量异丙酚( 10 mg/kg)组(p2组),输液后6h,断头处死所有大鼠,取脑组织,荧光法测定不同脑区单胺类神经递质NE、DA、5-HT含量.结果 小剂量异丙酚组脑干、小脑组织中5 -HT明显降低,小脑组织中的NE明显升高;大剂量异丙酚组脑干、小脑组织中DA明显升高,小脑组织中的NE明显升高.结论 异丙酚对应激大鼠脑组织不同脑区单胺类神经递质含量有不同的影响,5-HT的降低,NE、DA的升高可能与高血压有关.     

c-Jun氨基端激酶对亚急性帕金森病小鼠黑质神经元凋亡的影响

目的 探讨c-Jun氨基端激酶(JNK)对帕金森病(PD)模型黑质多巴胺(DA)能神经元凋亡的影响.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,通过免疫组织化学和免疫蛋白印迹法,观察各组小鼠黑质区磷酸化p-c-Jun免疫阳性反应和蛋白表达水平的变化;观察给予JNK特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响.结果 与对照组相比,模型组小鼠黑质神经元p-c-Jun表达水平明显升高,TUNEL阳性细胞数量增加;JNK抑制剂组p-c-Jun表达水平明显下降,TUNEL阳性细胞数量显著减少.结论 JNK可能参与模型小鼠黑质DA能神经元凋亡过程;JNK抑制剂SP600125可在一定程度上阻抑黑质区JNK信号通路,减轻MPTP诱导的PD小鼠黑质DA能神经元凋亡.     

帕金森病模型大鼠内侧前额叶皮层中间神经元电活动的增强

目的 研究帕金森病(PD)模型大鼠内侧前额叶皮层(mPFC)中γ-氨基丁酸(GABA)能中间神经元放电频率和放电形式的变化.方法 应用在体细胞外电生理学记录的方法观察6-羟多巴胺(6-OHDA)损毁大鼠黑质致密部(SNc)后,mPFC中间神经元自发电活动的变化.结果 PD模型大鼠中间神经元的放电频率显著降低(P<0.001),使其从(11.95±0.81)Hz降至(7.28±0.78)Hz,放电形式趋向爆发(P<0.01).结论 单侧黑质-纹状体通路损毁对内侧前额叶皮层中间神经元的电活动有显著影响.