Hsp27在脂多糖预处理减轻肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨热休克蛋白27(Hsp27)在脂多糖(LPS)减轻小鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤中的作用及其机制。方法实验动物为雄性C57BL/6小鼠,将小鼠分为4组:对照假手术组,IR组,LPS预处理组和Hsp27干扰后LPS预处理组。小鼠肝脏IR损伤通过血清ALT和AST水平,肝脏组织病理情况和凋亡相关蛋白Bax的表达评价。小鼠肝脏内Hsp27的干扰通过门静脉内注射包装有干扰Hsp27表达的短发夹RNA的重组腺病毒100μl来靶向抑制Hsp27的表达。结果 1、与IR组相比,LPS预处理组小鼠ALT和AST水平明显下降(P0.05),肝组织损伤明显减轻。2、与IR组相比,LPS预处理组小鼠Hsp27蛋白显著增加,凋亡相关蛋白bax显著降低。3、LPS预处理肝脏IR后,肝脏Hsp27干扰小鼠ALT和AST水平较Hsp27未干扰组显著升高(P0.05),肝组织损伤明显加重,同时凋亡相关蛋白bax显著增加。结论 Hsp27在LPS预处理可减轻肝脏缺血再灌注损伤中具有重要作用,可能与Hsp27减少细胞Bax凋亡蛋白表达相关。     

肢体缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注致心肌损伤的影响

目的 探讨单侧后肢缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注致心肌损伤的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠72只,体重200～250 g,随机分为3组(n=24),假手术组(S组)仅暴露肝门;肝脏缺血再灌注组(IR组)肝脏缺血60min后恢复灌注;后肢缺血预处理组(LIP组)阻断右侧后肢动脉、静脉和肌间侧支血流10 min后恢复灌注,30 min后建立肝脏缺血再灌注模型.于肝脏再灌注即刻、1、6 h各处死8只大鼠,测定血清脑钠素(BNP)浓度和心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性,观察心肌超微结构.结果 与S组比较,IR组和LIP组心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性降低,血清BNP浓度升高(P＜0.05或0.01).与IR组比较,LIP组心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性升高(P＜0.05),心肌病理损伤程度减轻.结论 单侧后肢缺血预处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注致心肌损伤的程度.     

肢体缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨肢体缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法将32只Wistar大鼠随机分为假手术组(SO)、肝脏缺血再灌注组(IR)、肝脏缺血预处理组(IPC+IR)和肢体缺血预处理组(LIPC+IR)。观察术后各组大鼠血液中炎症因子(IL-6,TNF-α)及氧化应激水平的差异;同时观察各组大鼠术后生存率及肝脏酶学水平的差异。结果 LIPC组及IPC组大鼠术后血清AST、ALT均较IR组明显降低,术后第7天存活率较IR组明显提高,术后血清TNF-α、IL-6均较IR组明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。LIPC组与IPC组比较无统计学意义(P0.05)。LICP及ICP组大鼠术后体内MDA水平均较IR组降低,SOD水平均较IR组显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论肢体缺血预处理能减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,可能与减轻肝脏氧化应激水平有关。     

小肠远端缺血预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察小肠远端缺血预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用.方法 将40只Wistar大鼠被随机分为4组:假手术组(Sham)、单纯远端缺血预处理组(RJPC)、单纯缺血再灌注组(IR)和远端缺血预处理+缺血再灌注组(RIPC+IR).远端缺血预处理方式采用于小肠系膜根部游离动脉血管并夹闭5 min后开放5 min,反复3次.缺血再灌注模型采用于肝蒂阻断肝脏供血45 min,阻断范围占整个肝脏的70%,开放复流3 h.检测血液中谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)和内皮素(ET)、肝脏苏木素-伊红(HE)病理、心血管指标.结果 复流3 h后,RIPC+IR组的ALT、LDH、心血管指标[平均动脉血压(MAP)、外周血氧饱和度(SaO2)]为(434.26±133.42)U/L、(2536±181)U/L、(83.1±7.3)mm Hg(1 mm Hg＝0.133 kPa)和(97.4±0.5)%,明显好于IR组(953.64±114.12)U/L、(5734±296)U/L、(67.1±7.4)mm Hg和(93.1±0.6)%(P<0.05).RJPC+IR组肝脏HE病理改变程度比IR组小.门静脉中IR组血清NO浓度(15.54±2.34)μmoL/L低于RIPC+IR组(18.10±1.82)μmol/L(P<0.05),外周血中,IR组血浆ET浓度(672.4±63.1)ng/L高于RIPC+IR组(451.7±63.6)ng/L(P<0.05),门静脉中IR组血清ET浓度(612.5±48.2)ng/L高于RIPC+IR组(401.5±51.2)ng/L(P<0.05).结论 小肠RIPC可以减轻肝脏缺血再灌注损伤,具有简便、易操作的特点,NO及ET可能在其中发挥了重要作用.     

缺血预处理对大鼠肝脏缺血/再灌注早期核因子κB活性及细胞凋亡的影响

目的 观察缺血预处理对大鼠肝脏缺血/再灌注早期核因子KB活性、促凋亡基因Fas和FasL蛋白表达以及肝细胞凋亡的影响,以进一步阐明肝脏缺血预处理的抗凋亡作用机制.方法 建立SD大鼠肝缺血(40min)再灌注(120 min)损伤及肝缺血预处理的模型.24只大鼠随机分成3组(n=8).①假手术对照组(C组),仅分离肝十二指肠韧带,不阻断肝门,不进行其他干预处理.②缺血再灌注组(IR组),在第一肝门用小血管夹阻断尾状叶及左肝叶血流40 min松开血管夹肝脏再灌注2 h,再灌注开始后关腹.③缺血预处理组(IP组),先行3个循环的缺血预处理,阻断第一肝门10 min,开放再灌注10 min为1个循环,随后操作同缺血/再灌注组.实验结束后全自动生化分析仪检测血清谷草转氨酶和血清谷丙转氨酶活性:TUNEL法检测肝组织的细胞凋亡指数(AI):EMSA法测定肝组织核因子κB的结合活性:Western blotting免疫印迹法检测Fas及FasL蛋白的表达水平.结果 IR组和IP组的ALT、AST及细胞凋亡指数(AI)均明显高于S组(P<0.01),但与IR相比,IP组则明显较低(P<0.01).与C组比较,IR组的核因子κB活性、促凋亡基因Fas和FasL蛋白表达水平明显增高,而IP组仅轻度增高.结论 缺血预处理可通过降低肝脏缺血/再灌注早期核因子κB的转录活性,并下调促凋亡基因Fas及FasL的表达,从而发挥抗细胞凋亡和损伤保护效应.     

缺血预处理对鼠肝细胞凋亡及调控基因（bcl—2,Fas）蛋白表达的影响

目的观察鼠肝缺血再灌注损伤对肝细胞凋亡,以及缺血预处理对缺血再灌注损伤引起的肝细胞凋亡以及对其调控基因(bcl-2,Fas)蛋白表达的影响.方法Wistar大鼠分为假手术(SO)组、缺血再灌注(IR)组、缺血预处理(IP)组,后2组中分为3个亚组(IR1,2,3,IP1,2,3).缺血均为30min.缺血预处理为缺血前采用5min缺血及5min再灌.分别于再灌注1.5,3,4.5h后处死动物采取肝脏标本,SO组于术后3.5h采取肝标本.检测细胞凋亡及bcl-2,Fas蛋白表达水平.结果IR2组和IP2组与SO组比较细胞凋亡指数(AI)显著性增加(P<0.01),IP组较IR组细胞AI显著性降低(P<0.05).电镜示凋亡细胞,但IP组较IR组的细胞器特别是线粒体损伤要轻.bcl-2蛋白表达IP组较IR组及SO组显著性增加(P<0.05),IR组与SO组无差异(P>0.05).Fas蛋白表达IR2组和IP2组较SO显著性增高(P<0.05),IP组与IR组比较无显著性差异(P>0.05).结论IR损伤可能通过激活Fas蛋白的表达而促发肝细胞凋亡;IP可能通过激活bcl-2蛋白的表达而抑制肝细胞凋亡.     

七氟醚预处理对肝脏缺血-再灌注损伤及PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨七氟醚预处理对肝脏缺血-再灌注损伤及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响.方法 48只成年SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、缺血-再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(SI组)和七氟醚Wortmannin组(SW组),每组12只.除SH组外,IR组、SI组和SW组建立70％肝脏缺血-再灌注模型.检测大鼠血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶( ALT)含量,并取再灌注的肝组织用ELISA法测IL-1β浓度,用Western Blot法测定肝组织的p-PI3K、p-Akt(ser473)、Akt等表达量;用HE染色进行病理学检查,观察肝细胞损伤及坏死情况.结果 与SW组比较,SI组ALT、AST和IL-1β浓度明显降低(P＜0.05),且p-PI3K、p-Akt(ser473)表达量明显增加(P＜0.05),肝组织损伤减轻.结论 七氟醚对肝脏缺血-再灌注损伤有保护作用,可能通过激活PI3K/Akt信号通路起作用.     

还原型谷胱甘肽对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后炎性细胞因子表达的影响

目的 探讨经门静脉注射还原型谷胱甘肽(GSH)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后TNF-α、IL-1β和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)表达的影响及意义.方法 72只雄性SD大鼠平均分为假手术组(SO组)、生理盐水预处理组(IR组)和GSH预处理组(GPC组).建立肝脏缺血再灌注损伤模型,检测再灌注30、60和180 min血清TNF-α、IL-1β含量,以及肝组织中TNF-α mRNA、IL-1β mRNA和MIP-2mRNA表达水平.两独立样本采用t检验,多组比较采用方差分析.结果 GPC组血清TNF-α含量于缺血再灌注180 min后显著低于IR组(t=2.512,P<0.05).而肝组织TNF-αmRNA表达水平于缺血再灌注30 min后即显著低于IR组(t=2.427,P<0.05).GPC组血清中IL-1β含量和肝组织中IL-1βmRNA表达水平于缺血再灌注后各时相点均显著低于IR组(t=2.731,3.825,4.372,3.371,3.972,4.685,P<0.05).GPC组MIP-2 mRNA表达于缺血再灌注60 min和180 min显著低于IR组(t=2.593,5.429,P<0.05).结论 TNF-α、IL-1β和MIP-2等炎性因子在肝脏缺血再灌注损伤中发挥重要作用.GSH能够抑制炎性细胞因子如TNF-α、IL-1β和MIP-2的生成,并发挥抗肝脏缺血再灌注损伤的作用.     

缺血预处理的保护作用及临床应用

缺血预处理(IP)是指各种器官,如心脏、肾脏、肝脏或脑等,在经历了短暂的缺血再灌注(IR)后,能增强其对随后长时间缺血的耐受性现象,是机体内在的一种保护作用。临床认为应用IP的主要目的是保护器官避免缺血再灌注损伤(IR I)。IP对器官或组织产生两种保护作用,一种为早期保护作用     

常温下缺血预处理对肝细胞凋亡调节基因表达影响的临床研究

目的探讨常温下肝脏缺血预处理后细胞凋亡调节基因C-jun和bcl-XL的表达及其临床意义.方法16例肝癌患者随机分成缺血再灌注组(IR组)和缺血预处理组(IP组),每组8例.在肝门阻断前和再灌30min时抽血查肝损害标记酶,同时取肝组织切片行肝细胞凋亡、C-jun和bcl-XL基因及PCNA表达检测,并行光镜和电镜检查.结果IR组和IP组ALT,AST,LDH及凋亡指数(AI值)在再灌注30min时均较阻断前明显升高(P<0.05或P<0.01),IR组升高更显著(P<0.01),且IR组再灌注30min时有肝细胞坏死和超微结构不可逆性改变;与IP组比较,IR组再灌注30min时凋亡诱导基因C-jun和PCNA表达明显增强(P>0.05或P<0.01);与IR组比较,IP组再灌注30min时凋亡抑制基因bcl-XL表达明显增强(P<0.01).结论(1)常温下缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过调节肝细胞凋亡调节基因C-jun和bcl-XL表达而实现的;(2)肝脏IR损伤可能与激活C-jun基因表达促发肝细胞凋亡发生有关;(3)IP可能通过激活bcl-XL基因表达而抑制肝细胞凋亡发生.