姜黄素对非酒精性脂肪性肝炎肝细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨姜黄素对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）肝细胞凋亡的影响及其相关机制。 方法 将HL-7702细胞分为对照组、模型组和治疗组,其中对照组给予普通培养基培养,模型组培养基内加入1mmol/L的游离脂肪酸（FFA）诱导NASH模型,治疗组在加入FFA的同时给予20μmol/L的姜黄素干预。48小时后收集细胞,检测细胞凋亡率、活性氧（ROS）含量及线粒体膜电位水平。 结果 模型组肝细胞的早期凋亡率及总凋亡率均明显高于对照组[（10.34±0.13）% vs.（0.55±0.08）%,P<0.05; （13.30±0.10）% vs.（2.15±0.91）%,P<0.05],治疗组与模型组相比,肝细胞早期凋亡率及总凋亡率均明显降低[（0.83±0.35）% vs.（10.34±0.13）%,P<0.05;（3.11±1.06）% vs.（13.30±0.10）%;P<0.05];模型组肝细胞内ROS含量明显高于对照组（233.58±8.00 vs. 187.24±10.60,P<0.05）,而线粒体膜电位水平则明显低于对照组（1.08±0.03 vs. 1.25±0.04,P<0.05）;治疗组肝细胞内ROS含量较模型组显著降低（192.57±23.86 vs. 233.58±8.00,P<0.05）,而线粒体膜电位水平则显著升高（1.17±0.04 vs. 1.08±0.03,P<0.05）。 结论 姜黄素可调节NASH肝细胞凋亡,该作用可能与其线粒体保护作用相关。     

电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清TNF-α及IR的影响

目的应用电针刺激SD大鼠肝俞、足三里、丰隆、太冲穴,观察其对高脂饮食所致的NASH大鼠血清TNFα含量及IR水平的影响。方法40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组和西药组,每组10只大鼠,在16周后隔夜空腹以2％戊巴比妥钠（45mg／kg）麻醉,经下腔静脉采血,分离血清。采用Olympus Au560全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、TNFα、FBG等;采用放射免疫分析法测定空腹血清胰岛素,计算胰岛素抵抗指数。结果ALT、AST、TNFα模型组比正常组显著增高（t分别为4．4990、3．2929、-7．7330,P〈0．01）;模型组比电针组显著增高（t分别为3．9218、3．0284、-8．0031,P〈0．01）;电针组较之西药组有下降趋势,但二者比较无明显差异（t=1．1650、2．4512、0．3448,P〉0．05）。空腹血糖正常组与其他各组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;胰岛素抵抗指数水平模型组比正常组显著增高（t=-2．9310,P〈0．01）;模型组比电针组增高（t=-2．2161,P〈0．05）;电针组较之西药组有下降趋势,但二者比较无明显差异（t=0．4574,P〉0．05）。相关分析表明,在模型组、电针组和西药组IR与TNFα水平均呈正相关（r分别为0．9024、0．3464、0．5512）。结论非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清肿瘤坏死园子α（TNFα）过度表达,并且与IR的程度呈正相关,二者共同参与NASH的发生;电针可能通过抑制TNFα的高度表达而起到改善IR达到治疗NASH的目的。     

非酒精性脂肪性肝炎血浆MIF和TNF-α水平变化研究

目的 探讨MIF和TNF-α与非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的关系及MIF与TNF-α在NASH形成过程中的作用.方法 非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者58例,其中非酒精性单纯性脂肪肝(NASFL)组30例,NASH组28例.正常对照组(NC)30例,选自健康体检者.血清肿瘤坏死因子-α采用放射免疫法,MIF采用ELISA法检测.结果 ①NASH组患者ALT、AST、TG、TC、LDL、BMI水平均高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),HDL低于正常对照组(P<0.05);NASFL组患者TG、BMI水平均高于正常对照组(P<0.05),其它生化指标差异均无显著性(P>0.05);NASH组患者ALT、AST、TG、TC、LDL、BMI水平均高于NASFL组(P<0.01,P<0.05);②NASH组患者血浆MIF及TNF-α水平均高于NASFL组及正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);NASFL组患者血浆MIF及TNF-α水平与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);③血浆MIF与AlT、AST、TG、BMI、TNF-α呈正相关(P<0.05);血浆TNF-α与ALT、AST、TG、BMI、MIF呈正相关(P<0.05);④以全组血浆MIF和TNF-α为因变量进行逐步回归,BMI对血浆MIF影响最大,血浆MIF含量变异的37.5%可由BMI、TG的变化来解释(R2=0.375).BMI对血浆TNF-α影响最大,血浆TNF-α仅含量变异的41.7%可由BMI、TG、ALT的变化来解释(R2=0.417).结论 非酒精性脂肪性肝炎患者血浆MIF及TNF-α两者可能协同作用参与并促进了非酒精性脂肪性肝炎的发生、发展.     

己酮可可碱治疗非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

目的通过高脂饮食制备大鼠非酒精性脂肪肝模型,观察肝组织胶原的合成及相关细胞因子的变化。进一步观察及探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)所致肝纤维化的治疗作用及机制。方法30只SD大鼠随机分为模型组(n=10)、治疗组(n=10)和正常对照组(n=10)3组。模型组和治疗组大鼠以高脂饲料喂养,治疗组大鼠高脂饮食12周后每d同时予以己酮可可碱16mg/kg,及治疗4周。对照组大鼠以普通饲料饲养。实验16周处死3组大鼠。应用荧光定量PCR方法分别测定肝组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原(procollagenⅠ、Ⅲ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果大鼠肝组织中Ⅰ型前胶原mRNA的表达量模型组高于对照组,治疗组显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);大鼠肝组织中Ⅲ型前胶原mRNA的表达量,模型组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组与模型组表达量差异无统计学意义;大鼠肝组织中TGF-β1 mRNA的表达量模型组高于对照组,治疗组显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);大鼠肝组织中TNF-α mRNA的表达量模型组高于对照组,治疗组显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β及TNF-α可能参与非酒精性脂肪肝肝纤维化的发生、发展过程。己酮可可碱可能通过抑制细胞因子TGF-β1和TNF-α降低脂肪性肝炎肝脏细胞外基质Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,对NASH引起的肝纤维化起到一定的治疗作用。     

丹参注射液对大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝细胞NF-κB表达的影响

目的 研究肝细胞核因子-κB(NF-κB)在非酒精性脂肪性肝炎中的作用,并探讨丹参注射液对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的保护机制.方法 采用高脂饮食16周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,并用丹参注射液5 ml/(kg·d)进行干预治疗,观察其对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝细胞核因子-κB表达及病理变化的影响.结果 丹参治疗组血清ALT、AST分别为(87.6±13.4)、(160.7±32.5 )U/L,较模型组的(102.1±31.1)、(210.3±30.2) U/L明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).模型组肝组织出现重度脂肪变性,不同程度的炎细胞浸润及坏死,丹参治疗组肝组织炎症程度较模型组明显减轻,丹参组炎症计分(4.85±0.39),模型组炎症记分(6.30±0.51)(P＜0.05).丹参治疗组NF-κB表达为(1.77±1.07),较模型组的(5.63±1.45)显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝细胞核因子-κB表达增强与非酒精性脂肪性肝炎的发生密切相关,丹参注射液能抑制肝细胞核因子-κB表达而达到治疗非酒精性脂肪性肝炎的目的.     

低分子肝素对高脂饮食大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型的影响

目的 观察低分子量肝素对长期摄入高脂饮食所致大鼠非酒精性脂肪性肝炎的干预作用,探讨其机制。方法 雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组（n=10）及模型组（n=10）,模型组喂以高脂饮食共8周;其余20只在高脂饮食8周后分为低分子肝素低剂量治疗组（n=10）,在继续高脂饲料喂养的基础上,加用低分子量肝素治疗［50IU/(kg·d）］;低分子肝素高剂量治疗组（n=10）,在继续高脂饲料喂养基础上,加用低分子量肝素治疗［200IU/(kg·d）］,共治疗2周。结果 低分子肝素高剂量组［200IU/(kg·d）］在抑制肝脏慢性炎症、防止肝脏脂质堆积方面较模型组有统计学差异,而低剂量组［50IU/(kg·d）］作用不如高剂量组作用明显。结论 低分子量肝素能够抑制肝脏慢性炎症的发生,调节脂质在肝脏中的堆积,有治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用,且其作用效果与剂量相关。其作用机制可能是调节血脂,降低血清中TNF-α的水平。     

黄芩苷治疗非酒精性脂肪性肝炎大鼠抗炎的疗效

目的 观察黄芩苷对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗效果及其抗炎疗效。 方法 采用高脂饮食诱导建立大鼠NASH模型,给予不同剂量的黄芩苷(15 、30、60 mg/kg·d)治疗后,测定大鼠肝质量及体质量变化,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化,并测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,比色法测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)酶活性及丙二醛(MDA)含量变化,酶联免疫吸附(ELASA)测定肝组织肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)含量变化。 结果 经黄芩苷治疗后,NASH大鼠的体质量及肝质量减轻(F=1609.79, P<0.001;F=155.17, P<0.001),二指标随剂量增加而下降。经不同剂量黄芩苷治疗后,病理学可见肝细胞脂肪变性逐渐减轻,小叶间炎性细胞浸润逐渐减少。治疗后,血清ALT和AST减少(F=177.16,P<0.001;F=2 998.11,P<0.001),随剂量增加而减少。而肝脏GSH、SOD酶活性经黄芩苷治疗后增加(F=398.47,P<0.001;F=256.07,P<0.001),随治疗浓度增加而增加。肝组织MDA的变化则相反(F=237.98,P<0.001),随治疗浓度增加而下降。肝组织TNFα、IL-1β、IL-6含量经黄芩苷治疗后均降低(F=399.15,P<0.001;F=314.76,P<0.001;F=108.38,P<0.001),三者随治疗浓度增加而下降。 结论 黄芩苷能减轻NASH大鼠的脂肪变性程度,通过增加GSH、SOD酶的活性,减少TNFα、IL-1β、IL-6炎性因子的产生,缓解肝脏的炎症,发挥其抗炎作用。     

细胞凋亡与非酒精性脂肪性肝炎相关的研究进展

非酒精性脂肪肝(NAFLD)被认为是隐源性肝硬化的主要原因之一,主要包括单纯性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)以及NASH相关性肝硬化(FLC)三种类型.流行病学研究提示我国脂肪肝的发病率正逐年升高,某些大城市的发病率已超过20％,重庆市5 782例体检人群中代谢综合征(MS)、脂肪肝的患病率分别为9.58％、25.9％[1].NASH是一种可能进展为终末期肝病(包括肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌)的非酒精源性脂肪性肝炎,也是无症状血清转氨酶升高的重要病因(约占40％～90％)[2].目前研究者对于NASH通过何种方式进展为终末期肝病的具体机制还知之甚少,多数学者认为细胞的死亡、炎症和纤维化多由过剩的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和大量有害细胞因子引起[3].     

富含单不饱和脂肪酸饮食对非酒精性脂肪性肝炎大鼠胰岛素敏感性的影响

目的通过观察富含单不饱和脂肪酸（MUFA）和富含饱和脂肪酸（SFA）髙脂饮食（HFD）诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠血清和TNF-α、IL-6、瘦素（LP）和脂联素（APN）水平的变化,探讨MUFA对NASH大鼠胰岛素敏感性的影响及可能的分子机制。方法随机将30只雄性SD大鼠分为3组,分别予正常饲料（C组）、富含MUFA的橄榄油（M组）和富含SFA的猪油（S组）成分的高脂饲料喂养12周,测定体重、肝脏脂质含量、血清转氨酶、血脂、空腹血糖（FBG）和胰岛素（INS）水平,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,光镜下观察肝组织病理并计算NAFLD活动度积分（NAS）,应用Western-blot半定量胰岛素受体底物-1（IRS-1）蛋白表达,ELISA法检测血清和肝脏TNF-α、IL-6、LP及APN水平。结果高脂饮食12周成功建立大鼠NASH模型。与S组相比,M组体重增长较少（P＜0.05）,肝脏TG含量减少（P＜0.05）,HOMA-IR和NAS均下降（P＜0.05）,肝脏IRS-1蛋白表达上调约60%（P＜0.05）。与C组比较,S组血清LP、TNF-α水平升高,且高于M组（P＜0.05）,血清和肝脏APN水平均下降（P＜0.05）,但肝脏APN水平与M组差异无统计学意义（P＞0.05）。结论长期过量摄入等热量MUFA和SFA均可诱发胰岛素抵抗（IR）,导致NASH发生。MUFA对血糖、血脂、肝脂肪含量及IR程度的影响均明显轻于SFA,其机制可能是通过调节脂肪因子分泌,减轻肝脏IR与炎症浸润。     

非酒精性脂肪性肝炎患者血清L-FABP和TNF-α水平测定及其意义

目的检测非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者血清中肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,探讨二者在NASH发生及发展过程中的相关性及意义。方法收集肝功能异常的NASH患者50例(NASH组),经B超检查符合弥漫性脂肪肝的诊断标准,对照组为健康体检者32例。所有受试者测量身高、体质量、腰围及臀围,并计算体质量指数(BMI)和腰臀比(WHR),晨起空腹抽取静脉血液检测L-FABP、TNF-α及相关临床指标。结果 NASH组患者的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、BMI、WHR、TNF-α、高敏C反应蛋白(hs-CRP)和L-FABP水平均显著高于对照组(P<0.05),Spearman相关分析提示,NASH组血清L-FABP水平与TNF-α、TC、LDL-C、ALT、血尿酸(UA)、hs-CRP呈正相关(P<0.05),TNF-α水平与ALT、UA、hs-CRP显著正相关(P<0.05)。结论 L-FABP和TNF-α可能在NASH患者肝功能损伤与炎症反应中发挥重要作用。     

蔗糖在促进大鼠非酒精性脂肪性肝炎形成及发展中的作用

目的 探讨蔗糖在促进大鼠非酒精性脂肪性肝炎发生发展中的作用. 方法 Wistar大鼠随机分为三组:正常对照组、高饱和脂肪酸组(HF组)及高糖(蔗糖)高脂组(HGF组).检测空腹血糖(FBG),游离脂肪酸(FFA),丙氨酸氨基转移酶(ALT),丙二醛(MDA),肝组织匀浆甘油三酯(TG);测定血清及肝组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及血清空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI);观察肝组织学改变;Western blotting检测肝细胞中解偶联蛋白2(UCP-2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达. 结果 FFA,ALT,MDA,TG,IRI,TNF-α水平HF组和HGF组与正常对照组间的差异有统计学意义,且HGF组均高于HF组.模型组肝组织出现炎细胞浸润.UCP-2表达HF组强于HGF组,磷酸化P38MAPK表达HGF组强于断组,正常对照组仅微量表达.FBG三组比较差异无统计学意义,且均在正常范围之内. 结论 高蔗糖能够促进大鼠非酒精性脂肪性肝炎的形成和发展.其中糖毒性、胰岛素抵抗与TNF-α等在肝脏脂肪变及炎性变的发生中起到重要作用.     

脂联素在LPS预处理减轻高糖高脂膳食诱导NASH中的表达

目的 研究脂多糖(lipopalysaccharide,LPS)预处理对高糖商脂膳食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steato-hepatitis,NASH)的影响及血浆脂联素(adiponectin,APN)表达的变化.方法 24只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、LPS预处理组和肝损伤组.肝损伤组饲以高糖高脂饲料;LPS预处理组饲料同肝损伤组,隔日皮下注射LPS 0.5 mg/kg;正常对照组饲以普通饲料;所有大鼠自由进食与饮水.于实验第9周末处死动物.制备肝组织切片,计数浸润肝组织的淋巴细胞;测定血浆内毒素(endotoxin,ET)水平和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、APN含量.结果 肝损伤组血浆ET水平与正常对照组相比显著升高;LPS预处理组血浆ALT水平、肝组织淋巴细胞计数与肝损伤组比较均显著降低;血浆TNF-α水平LPS预处理组与肝损伤组比较明显降低,而血浆APN则相反,经统计学分析差异均有统计学意义(P<0.05).肝组织切片HE染色结果显示,LPS预处理组与肝损伤组相比,肝细胞内脂肪空泡小、数量少,脂肪变性明显减轻.结论 LPS预处理可以减轻高糖高脂膳食诱导的NASH,其机制可能与高水平的脂联素抑制TNF-α的产生,从而降低TNF-α介导的肝细胞损害有关.     

Fas/FasL信号传导通路对NAFLD大鼠肝细胞凋亡的影响

目的 通过研究肝细胞凋亡及死亡受体信号转导通路在大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)形成中的作用,探讨NAFLD的发病机制.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为对照组和高脂饲料(4、8、12周)组;HE染色观察肝组织光镜下的病理改变;电镜观察肝细胞超微结构变化;流式细胞仪检测肝细胞凋亡百分数;免疫组化法检测Fas、FasL在肝组织中的蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测半胱天冬酶-8(Caspase-8)mRNA表达.结果 HE染色结果显示,对照组大鼠肝脏无异常发现,高脂组大鼠肝脏4周出现脂肪变,8周出现轻度脂肪肝,12周出现中、重度脂肪肝;电镜下观察高脂组大鼠肝细胞线粒体肿胀,嵴变短、减少甚至消失,粗面内质网减少,核型欠规则;流式细胞仪检测显示,与对照组比较,高脂组大鼠肝细胞凋亡百分数增加,随造模时间延长凋亡率增加更明显;免疫组化染色显示随着肝脏脂肪变加重,Fas、FasL蛋白染色加深,阳性细胞数增加;实时荧光定量PCR法显示Caspase-8 mRNA表达量在高脂组中显著高于对照组,且随肝脏脂肪变及炎症加重呈进行性上升.结论 NAFLD大鼠模型中,肝细胞凋亡促进NAFLD大鼠病情进展;肝细胞凋亡以及Fas、FasL、Caspase-8 mRNA相关调控蛋白的活化是引起NAFLD脂肪变性、炎症及纤维化的重要因素.     

褪黑素对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏蛋白激酶B表达的影响

目的探讨褪黑素对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏蛋白激酶B(PKB)表达的影响。方法将50只雄性W istar大鼠随机分成5组,每组10只:正常对照组给予普通饮食、模型组和低、中、高3个剂量褪黑素组给予高脂饮食。褪黑素组分别给予褪黑素2.5、5.0 mg、10.0 mg/(kg·d)剂量腹腔注射。12周后处死,观察肝脏指数、肝脏病理形态学改变。生化法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及肝匀浆中总胆固醇(Tch)、甘油三酯(TG)。免疫组织化学检测PKB肝细胞中的表达。结果与模型组相比,高剂量褪黑素组血清AST水平明显下降(P<0.05),各褪黑素组肝指数、肝内Tch和TG明显降低(P<0.05,P<0.01),肝细胞脂肪变性、肝小叶内炎症细胞浸润明显减轻(P<0.01),以中高剂量组明显。模型组PKB的表达较正常对照组显著降低(P<0.01),各褪黑素组PKB的表达较模型组显著增高(P<0.01)。结论非酒精性脂肪性肝炎大鼠存在PKB表达异常。褪黑素能减轻非酒精性脂肪性肝炎并上调大鼠肝内PKB的表达。     

罗格列酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠脂质过氧化的影响

目的探讨罗格列酮对非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis,NASH）大鼠脂质过氧化的影响。方法 30只雄性SD大鼠均分为正常组、模型组和罗格列酮预防组,每组各10只。模型组和罗格列酮预防组高脂喂养12周制备NASH模型,罗格列酮预防组同时每天予4mg/kg罗格列酮灌胃。第12周末处死动物,并收集血清和肝组织,检测糖代谢、脂代谢、肝功能和脂质过氧化指标变化。结果与正常组相比,模型组空腹血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数（HOMA-IRI）升高,血清和肝匀浆脂代谢紊乱,ALT、AST和γ-谷氨酰转移酶（GGT）明显升高。与模型组相比,罗格列酮预防组糖脂代谢、ALT、AST等指标明显下降（P〈0.01）。模型组血清和肝匀浆总抗氧化能力（total anti-oxidation competence,T-AOC）、超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）较正常组变化明显,而罗格列酮预防组可显著改善上述脂质过氧化指标（P〈0.05）。结论罗格列酮可全面、有效地减轻NASH大鼠脂质过氧化紊乱,改善胰岛素抵抗。     

福辛普利对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝纤维化的作用

目的探讨福辛普利对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝纤维化的作用,以及对瘦素和脂联素血清水平和在白色脂肪组织中基因表达水平的影响。方法将40只健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠适应性饲养1周后,随机分为正常对照组(NC组,普通饮食+生理盐水灌胃)、模型组(HC组,高脂饮食+生理盐水灌胃)、药物对照组[NF组,普通饮食+福辛普利3.6 mg/(kg.d)灌胃]和药物干预组[HF组,高脂饮食+福辛普利3.6 mg/(kg.d)灌胃],每组10只。喂养24周后处死,检测各组大鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、瘦素和脂联素的血清水平,比较各组大鼠脂肪组织瘦素和脂联素mRNA水平以及肝组织的胶原蛋白(collagen)Ⅰ蛋白表达和病理改变。结果与HC组(ALT:91.30±30.71;TG:2.25±0.31;LDL:1.53±0.31;TGF-β:125.95±8.23;HA:165.72±29.13;瘦素:130.61±35.56;脂联素:5.97±2.19)相比,HF组血清ALT(50.20±12.13,P<0.05)、TG(1.09±0.34,P<0.01)、LDL(1.16±0.13,P<0.05)、TGF-β(72.55±23.2,P<0.01)、HA(90.13±27.42,P<0.01)和瘦素(31.74±36.35,P<0.05)水平显著降低,脂联素(21.60±8.43,P<0.01)水平显著升高;脂肪组织的脂酸素mRNA水平显著升高,而瘦素的mRNA水平变化无显著意义(P>0.05);肝组织collagenⅠ蛋白表达显著降低(P<0.05);福辛普利能减轻肝细胞脂肪变性、炎症浸润和纤维化程度。结论福辛普利可能通过下调血清瘦素水平,上调脂联素的血清水平和其在脂肪组织的基因表达,对非酒精性脂肪性肝炎大鼠具有保肝和抗肝纤维化作用。     

清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠的干预作用

目的观察清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型大鼠的影响,并探讨其作用机制。方法雄性SD大鼠36只分为对照组6只、模型组10只、清肝化痰活血方干预组(清肝组)10只、胆宁片干预组(胆宁组)10只。对照组普通饲料喂养;其余3组均采用高脂饮食复制NASH动物模型,清肝组、胆宁组分别给予清肝化痰活血方药液和胆宁片混悬液灌胃,对照组和模型组同时予生理盐水灌胃。造模12周末处死各组大鼠,检测体质量、肝指数、炎症活动度计分、血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量和肝组织中TG、FFA、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果第12周时模型组和胆宁组大鼠体质量、肝指数、炎症活动度计分、血清AST、ALT、γ-GT、TG、TC、FFA水平、肝组织TG、MDA、FFA含量均高于对照组和清肝组(P<0.05),SOD活性均低于对照组和清肝组(P<0.05);胆宁组体质量、肝指数、炎症活动度计分及血清ALT、TG、TC和FFA水平、肝组织TG、FFA均较模型组降低(P<0.05);与对照组比较,清肝组炎症活动度计分、血清TG增高(P<0.05),肝组织SOD活性降低(P<0.05)。结论清肝化痰活血方对NASH模型大鼠有良好的防治作用,其作用机制可能是通过调节脂质代谢,减轻脂类在肝脏的积聚,抗脂质过氧化,缓解氧化应激。     

大鼠实验性非酒精性脂肪性肝炎模型的研究

目的建立非酒精性脂肪性肝炎实验动物模型。方法SD大鼠30只,随机分为对照组(n=10)和模型组(n=20)。对照组喂普通饲料,模型组喂普通饲料并给予脂肪乳剂灌胃(10ml／kg)。动态观察血清TG、TC、ALT、AST、MDA、SOD、FFA和肝脏TG、TC、MDA、SOD、FFA的变化,并行肝脏病理学检查。结果2周后,随机处死模型组中的10只,与正常组相比,发现血清TG、TC、ALT和肝脏MDA均明显升高,而肝脏SOD则明显降低,病理显示有2只轻度脂肪变性,尚无炎症病灶出现。第3周处死剩余动物,发现肝指数、血清脂质、ALT、AST、MDA、FFA和肝脏TG、MDA、FFA与对照组相比均显著升高,而SOD则明显降低;光镜下所见模型组出现弥漫性肝细胞脂肪变性,并有炎症病灶。结论通过3周脂肪乳剂的喂养,形成了非酒精性脂肪性肝炎。     

Intestinal immune barrier integrity in rats with nonalcoholic hepatic steatosis and steatohepatitis

Background  Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) has emerged as the major cause of chronic liver injury. Intestinal barrier plays an important role in the pathogenis of NAFLD. The aim of this article was to assess intestinal immune barrier function during the development of NAFLD.

Methods  Totally 60 male Sprague-Dawley (SD) rats were divided into 2 groups: normal diet (ND) group and high-fat diet (HFD) group. NAFLD rat model was established in the HFD rat group. Portal blood endotoxin level was assessed by limulus test. The percentage of CD4+ cells and CD8+ cells in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and lymphocytes in Peyer’s patches (PP) were analysed by flow cytometry. Intestinal secretory immunoglobulin A (SIgA) level was evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay. Paired Student’s t test was used for the statistic analysis.

Results  HFD rats presented with simple steatosis at the 4th and 8th week and progressed to nonalcoholic steatohepatitis at the 12th week. Elevated lipopolysaccharides (LPS) level in HFD rats was observed at the 8th week ((1.54±0.30) times of ND group, P <0.01). CD4/CD8 ratios in PBMC and PP of HFD rats were increased at the 4th week ((1.50±0.47) and (1.63±0.34) times of ND group, P <0.05) and decreased at the 8th week ((0.50±0.16) and (0.61±0.26) times of ND group, P <0.05). At the 12th week, CD4/CD8 ratio ((1.47±0.46) times, P <0.05) in PP increased to levels observed in the 4th week. Intestinal SIgA expression of HFD rats was remarkably up-regulated at 12th week ((2.70±1.65) times, P <0.05).

Conclusion  Liver-gut axis in rats with NAFLD may mediate and improve intestinal immune function by increased CD4/CD8 ratio in PP and increased production of SIgA.